[08/ 10 /2021] DETERMINACIÓN DE

ALCOHOL ETILICO
EN MUESTRAS
BIOLOGICAS

PROCEDIMIENTOS
CUANTITATIVOS

ISABEL CRISTINA SEPULVEDA PIEDRAHITA

Facultad de Derecho y Ciencias Forense

TECNOLÓGICO DE ANTIOQUIA
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TOXICOLOGIA
FORENSE
MANUALES ACADÉMICOS- MANEJO DEL DOCUMENTO
DETERMINACIÓN DE ALCOHOL ETILICO EN MUESTRAS BIOLOGICAS

El alcohol etílico o etanol, de fórmula C 2H5OH, es un líquido transparente e

incoloro, volátil, con sabor a quemado y un olor agradable característico. Procede
de la fermentación de carbohidratos (azúcares) por las levaduras o por
destilación. Es obtenido como “alcohol absoluto” al 94%, o diluido, como licor de
consumo popular en bebidas como la cerveza, el vino y el brandy, entre otras.
Aunque existe la creencia popular de que es una sustancia usada para producir
estimulación nerviosa manifestada como alegría o desinhibiciones, es el típico
prototipo de Depresor del Sistema Nervioso Central.

Los ingresos de su venta generan rubros económicos para educación y salud de

países como Colombia, razón por la cual su comercialización posee amplia
difusión a través de los medios de comunicación induciendo el consumo.

Existe tras su ingestión una gran asociación a delitos como el homicidio y otros
eventos violentos y una estrecha relación con el suicidio. Lo anterior hace
suponer que la alcoholemia, definida como la cantidad de alcohol contenida en
sangre periférica y la embriaguez, definida como la alteración o el estado en que
se encuentra la persona producto del consumo de una sustancia psicoactiva,
deben ser estudiadas y comprendidas a fondo por el estudiante para afianzar sus
conocimientos en el campo toxicológico y legal.
 
OBJETIVO:

Determinar mediante métodos cualitativos y cuantitativos el alcohol etílico

presente en materiales biológicos (sangre, orina, humor vítreo) y establecer así los
diversos grados de embriaguez consignados en el artículo 2, Resolución 414 del
27 de agosto de 2002 de Medicina Legal

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2.1 METODO DE WINNICK:

FUNDAMENTO: El alcohol etílico que se difunde de la muestra a analizar

reacciona con la mezcla sulfocrómica y el exceso de oxidante se titula por
yodometría.

EQUIPO: Celdas de Conway para microdifusión.

Pipetas graduadas de 1ml

REACTIVOS: Dicromato de potasio 0.4 N

Ácido sulfúrico 10 N
Bicarbonato de sodio (solución saturada al 20%p/v)

PROCEDIMIENTO:

En el compartimiento central de la celda de Conway, colocar 0.5 ml. exactamente

medidos de solución 0.4 N de dicromato de potasio en ácido sulfúrico 10N (mezcla
sulfocrómica).
En el compartimiento medio poner 1 ml de la muestra (sangre, orina, humor vítreo,
tejido, líquido sospechoso, etc..) y 1 ml de solución saturada de bicarbonato de
sodio.

En el compartimiento externo poner 1 ml de agua, tapar la celda rotando la tapa y

agitar suavemente con movimientos circulares la celda para que la muestra se
mezcle con el bicarbonato de sodio.

El cambio de color en el punto final es brusco y rápido.

(Cambia de color violeta oscuro a azul o verde).

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 Resultados menores a 40 mg de etanol sobre 100 ml de sangre total: se

interpretan como estado de embriaguez negativo
 Resultados entre 40 y 99 mg%: Primer grado de embriaguez
 Resultados entre 100 y 149 mg%: Segundo grado de embriaguez
 Resultados mayores o iguales a 150 mg%: Tercer grado de embriaguez
Preguntas:

1. Cuáles son las muestras de elección y las muestras alternativas para el

análisis de etanol en personas vivas y en cadáveres?
2. Expliqué lo que ocurre tras el consumo simultáneo de un depresor como el
etanol con un estimulante como la cocaína.
3. Por qué la medición de alcohol en orina (alcoholuria) no es
cuantitativamente un resultado tan válido como cuando se hacen sangre?
Qué dato importante indicaría la presencia de alcohol en la orina?
4. La cromatografía de Gases es el método más importante de cuantificación
para la medición de la alcoholemia. Expliqué de forma breve y sencilla en
qué consiste dicha técnica.
5. Describa el proceso preanalítico, analítico y postanalítico para la toma de
alcoholemia indirecta por medición de alcohol en aire espirado.
6. De qué color deben ser las tapas de los tubos de ensayos para recolectar
alcoholemia de manera directa
7. Mencione los tres casos en los que se debe realizar la medición de
alcoholemia directa
8. Describa las condiciones que se deben tener en cuenta para la realización
del examen clínico para determinar embriaguez

BIBLIOGRAFIA

BROWN, Lester R. Un mundo sustentable. Planeta, Argentina 1994.

Instituto de Seguros Sociales, Manual de Bioseguridad VIH y Hepatitis B. 1998.

CASCIO, J.&
ELABORADO WOODSIDE
POR: G. GUIA ISO 14 000, Mc Graw Hill, U.S.A., 1997.
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1. Cuáles son las muestras de elección y las muestras alternativas para el

análisis de etanol en personas vivas y en cadáveres.

Para cadáveres y personas vivas se pueden tomar muestras para determinar el

etanol:

- Sistema vascular: En la fase de absorción se pueden producir grandes

diferencias entre la sangre arterial y la sangre venosa.
En el cadáver la sangre que se suele tomar para análisis es la del corazón, que
tiene gran cantidad de sangre procedente de la vena porta, muy rica en alcohol.
- Orina vesical: Fluido filtrado por los riñones, que se acumula en la vejiga, una
muestra biológica que es resistente a la contaminación post-mortem por
microorganismos debido a que se halla en la vejiga.
La estimación de alcohol en orina es una medida útil.
- Humor vitreo: A partir de los trabajos realizados por Sturner y Coe, el humor
vítreo se emplea como fluido en el que se puede analizar muchas drogas.
- Liquido encéfalo raquídeo: El agua es muy abundante en este, por lo que explica
porque se tiene más alcohol que la misma sangre.
- Bilis: La bilis es un líquido excretado por el hígado que contiene enzimas que
ayudan a la digestión, al igual que cualquier otro fluido corporal, puede contener
alcohol después de la ingestión de etanol, pero la correlación con los niveles de
sangre es generalmente pobre y depende de muchas variables.
La bilis está sujeta a la contaminación por difusión post mortem y la contaminación
por bacterias, con la posible producción endógena de alcohol.
-Órganos sólidos: Uno de los principales problemas asociados con la medición del
contenido de alcohol de órganos sólidos tales como el hígado, el cerebro, el
músculo es la correlación significativa con las concentraciones de alcohol en la
sangre.
Aunque estos órganos tienen un alto contenido de agua, que también contienen
cantidades variables de lípidos (grasa) que deben ser medidos y tenidos en cuenta
al comparar los niveles de alcohol con los de sangre.
El tejido cerebral y otros órganos se implementa la muestra en las primeras 6
horas exceptuando la muestra en el hígado que es de 48 a 72 horas por medio de
la bilis.
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- El cabello: es un método de muestreo para definir el consumo crónico.

- Contenido gástrico: No es una muestra fiable para ayudar a la estimación de los
niveles de etanol en sangre.
Se tiene algún valor, en la que un alto contenido de etanol gástrico es casi seguro
indicativo de alcohol ingerido recientemente.
- Médula ósea: Este método no se utiliza generalmente, pero tiene potencial para
el desarrollo futuro.

En seres vivos la muestra de elección es orina y la alternativa es en sangre y en

cadáveres es sangre como muestra de elección y la alternativa es la orina; llegado
el caso de que el cadáver este en un estado de descomposición muy avanzado es
humor vitreo como muestra de elección y bilis como alternativa.

2 Expliqué lo que ocurre tras el consumo simultáneo de un depresor como el

etanol con un estimulante como la cocaína.

El consumo simultáneo de etanol el cual es un depresor y cocaína es un

estimulante; el etanol inhibe la hidrólisis de la cocaína y es por esto que se
llega a la formación de un nuevo metabolito llamado cocaetileno, el cual es
conocido como un agente neurotóxico y cardiotóxico, este metabolito
aumenta el efecto tóxico de la cocaína y puede provocar muerte súbita.
El cocaetileno tiene una vida media más larga que la cocaína y posee
potentes efectos psicoestimulantes y tóxicos.

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3. Por qué la medición de alcohol en orina (alcoholuria) no es

cuantitativamente un resultado tan válido como cuando se hacen sangre
Qué dato importante indicaría la presencia de alcohol en la orina.

La medición de alcohol en sangre es mucho más certera, debido a que la

concentración de etanol en sangre es mayor; la orina es mucho más acuosa
haciendo que la concentración de etanol sea menor.
Cuando una bebida alcohólica es absorbida por el torrente sanguíneo y procesada
por el hígado, este tiene la capacidad de procesar alrededor de una bebida
alcohólica por hora.
La concentración de alcohol en el aliento es tan confiable como la concentración
de alcohol en sangre, posee una relación de 2100ml de aire en los alveolos
contendrían la misma cantidad de alcohol que 1ml en sangre.
Las pruebas cualitativas únicamente proporcionan datos analíticos preliminares.

El dato importante que indicaría la presencia de alcohol en la orina es la presencia

del metabolito llamado etil glucurónido (EtG), este metabolito aparece tanto en
sangre como en orina después de la ingesta de alcohol se haya metabolizado en
el cuerpo.

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4 La cromatografía de Gases es el método más importante de cuantificación

para la medición de la alcoholemia. Expliqué de forma breve y sencilla en
qué consiste dicha técnica.

La cromatografía en gases es el método analítico mundialmente aceptado y

utilizado en nuestro país para la medición cualitativa y cuantitativa de
alcohol en fluidos corporales. Es un método rápido, preciso y sensible.
Separa compuestos que permiten la identificación, purificación y cuantificación de
los componentes fundamentado en las diferencias de volatilidad y solubilidad de la
mezcla de los solutos a separar; este método incluye tiempos de retención muy
estables y la selectividad del método demostrado por la ausencia de sustancias
interferentes en el análisis; la linealidad a bajos niveles con un coeficiente de
determinación de R2 = 0.996.
La cromatografía de gas con detector de ionización de flama, ya sea utilizando una
técnica de inyección directa o por muestreo al vacío.

Cuando los valores son bajos de concentración de alcohol en sangre (menor de 30

mg/100 ml o 0.3 mg/ml) proveniente de una autopsia es debatible, para
confirmarlo se necesitaría del análisis del humor vítreo y de orina confirmatorios.
En los estudios de toxicología post mortem, se ha determinado que un valor menor
a 10 mg/100 ml (0.1 mg/ml) debe ser reportado como negativo, ya que de todas
formas representa el límite más bajo de detección de la mayoría de los sistemas
cromatográficos.

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Está técnica ofrece mejor poder de resolución para compuestos orgánicos volátiles
siendo considerada como una de las técnicas más sensibles.
Su principal limitación se encuentra en labilidad térmica de los analitos, los cuales
deben ser estables a la temperatura requerida para su volatilización (Varcarcel &
Gómez, 1988).
En la cromatografía de gases la fase móvil es un gas, mientras que la fase
estacionaria puede ser un sólido adsorbente o un líquido retenido en un soporte
solido (columna empaquetada) o en las paredes de un capilar (columna capilar).

5. Consultar el principio de las técnicas (Método de Newman – Bogen y

Método Enzimático), para la determinación de Etanol.

Método de Newman:
Es un micrométodo rápido, no precisa de ningún aparato especial y se practica en
1 ml del líquido, el alcohol es destilado en un erlenmeyer, una ligera corriente 9 de
aire lleva los vapores etílicos a una mezcla sulfocrómica, la oxidación del etanol es
llevada hasta el estado de ácido acético.
Se emplea para identificar y cuantificar sustancias volátiles reductoras tales como
el etanol o alcohol etílico.
El fundamento se basa en la destilación directa o por medio de corriente de vapor
del alcohol cuyos vapores se reciben en una mezcla sulfocrómica, la cual oxida el
alcohol transformándolo en acido acético y el exceso se valora por Yodometría.
Las muestras pueden ser sangre u orina.

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