PRÁCTICA NO.
1
BASES PARA EL RECONOCIMIENTO MACRO Y MICROSCOPICO
DE ESPECIES VEGETALES
INTRODUCCIÓN
Las plantas son parte fundamental del ecosistema planetario, ellas producen el oxígeno
que respiramos, alimentos, medicina, fibras textiles, papel, etc. Por lo que saber más
sobre ellas se hace una necesidad indispensable para el humano que pretende entrar a
una era de sustentabilidad, y no sólo para unos pocos expertos, sino que este
conocimiento debiese masificarse.
La identificación de un vegetal es indispensable en todo trabajo fitoquímico. Para esto se
le examina ordenadamente según sus características morfológicas más sobresalientes y,
a medida que se va descendiendo en la escala de clasificación, se observan detalles más
minuciosos, pasando a las características microscópicas.
En el sistema binominal de la clasificación taxonómica de un vegetal, género y especie
son vocablos latinizados que se citan juntos, escritos en cursiva o subrayados, primero el
género con mayúscula inicial y enseguida la especie con minúscula inicial, por ejemplo,
Papaver somniferum.
La identificación definitiva de un vegetal debe hacerla un botánico, de preferencia, un
especialista en taxonomía vegetal; sin embargo, el químico puede intentar hacer una
identificación preliminar si se considera minuciosamente todas las características de las
flores, hojas, tallo y raíces del vegetal y se consultan las claves botánicas.
PROPÓSITO
El alumno observará diferentes muestras vegetales y empleará la terminología
apropiada para la descripción botánica de un vegetal, con apoyo de los esquemas
empleados para tal propósito.
TIEMPO DE REALIZACIÓN
Dos horas
FUNDAMENTO TEÓRICO
Los vegetales más estudiados por los químicos y que han proporcionado principios
activos muy diversos, pertenecen a las angiospermas, las cuales se subdividen en
monocotiledóneas y dicotiledóneas, según las características de sus semillas.
Para la descripción botánica de un vegetal, se debe dar la descripción detallada de cada
uno de sus componentes:
• Tallo: diámetro, consistencia, estructura.
• Hojas: disposición respecto al tallo, arreglo (simples o compuestas), forma del limbo y
del ápice, peciolo, presencia o ausencia de estípulas, tipo de borde, disposición de la
nervadura.
• Flor: si es completa o incompleta, tipo de inflorescencia, presencia de brácteas, cáliz,
corola, androceo (estambres, filamento y antera), gineceo, pistilo (ovario, óvulos, estilo y
estigma); características de sépalos, pétalos.
• Raíz: Tipo y forma.
TERMINOLOGÍA BOTÁNICA
Las flores son un conjunto de hojas fértiles y/o estériles, agrupadas sobre ejes de
crecimiento limitado, formando verticilos.
Los verticilos florales estériles llamados en conjunto perianto son:
- Cáliz: formado por sépalos, generalmente verdes pero pueden ser de otro color,
protegen a la flor cerrada o a la yema floral.
- Corola: formada por pétalos, que atraen a los polinizadores.
Los verticilos florales fértiles son:
- Androceo formado por el conjunto de los estambres, cada estambre tiene filamento y
antera (contiene el polen).
- Gineceo formado por el conjunto de los carpelos o pistilos. (Estilo, estigma y ovario,
este último contiene los óvulos)
Una flor completa es aquella en la cual los cuatro verticilos están presentes (Cáliz,
Corola, Androceo y Gineceo), cuando cualquiera de estos verticilos está ausente se dice
que la flor es incompleta.
Una flor es perfecta cuando el androceo y el gineceo están presentes, por lo tanto
una flor imperfecta es una flor incompleta, pero no toda flor incompleta es imperfecta.
La sexualidad de una flor está determinada por la presencia de los verticilos florales
fértiles. Se dice que una flor es:
- Hermafrodita, cuando están presentes androceo y gineceo.
- Unisexual, cuando solo uno de los dos está presente.
De igual forma, debe establecerse si las partes que forman un verticilo son libres entre
sí o si están soldadas entre sí. Para describir esta situación se emplean varios
prefijos:
- Diali si las piezas de un verticilo están libres entre sí. Por ejemplo: cáliz dialisépalo,
corola dialipétalo.
- Gamo si las piezas de un verticilo están fusionadas entre sí. Por ejemplo: cáliz
gamosépalo, corola gamopétala.
Androceo o conjunto de estambres. Este término incluye a las estructuras masculinas
de la flor. Cada estambre está formado por una porción estéril muy delgada, el
filamento, y una parte fértil, la antera.
Gineceo o pistilo, este término incluye a las estructuras femeninas de la flor. El gineceo
tiene una parte ensanchada, el ovario, en cuyo interior están los óvulos o primordios
seminales. El ovario se continúa con el estilo, elevando el estigma o superficie receptora
de los granos de polen. Al hacer cortes transversales y longitudinales del ovario pueden
reconocerse las siguientes partes:
- Carpelos
- Óvulos
- Lóculos
La posición relativa del ovario y el tipo de flor se establecen en función de la ubicación
del ovario respecto a los otros verticilos:
Ovario súpero: Se ubica por arriba del perianto
Ovario ínfero: Se ubica por abajo del perianto
MATERIAL Y REACTIVOS
Material Reactivos
Tijeras Lugol
Bisturí
Pinzas
Porta objetos
Lupa
Microscopio
Esquemas de comparación de partes de
la hoja y de la flor
Material Biológico
Muestras veget ales indicadas por
el docente
PROCEDIMIENTO
1. Observar macroscópicamente la hoja de cada espécimen vegetal e indicar las
características de limbo, ápice, nervadura y borde, comparándolas con los esquemas
correspondientes.
2. En el caso de las flores, además realizar un corte sagital para identificar y observar
cada una de sus partes. En algunos casos, deberá usarse la lupa para tal propósito.
3. Realizar observación microscópica de los gránulos de polen y de los óvulos para cada
especie.
4. Realizar un corte horizontal del tallo, colocarlo en un portaobjetos y adicionar una gota
de lugol, observar la preparación al microscopio.
4. Hacer un reporte de lo observado en la bitácora en donde se incluya el dibujo de la
parte de la hoja o flor con todas las observaciones o acotaciones hechas en el desarrollo
de la práctica tanto macro como microscópicas.
DISPOSICIÓN DE RESIDUOS
Los residuos generados en esta práctica corresponden a las diferentes partes de los
vegetales estudiados, por lo que se pueden desechar directamente en el bote de basura
orgánica.
CUESTIONARIO
1. Para cada espécimen descrito en la práctica investigue los siguientes datos
a. Nombre científico
b. Nombre(s) común(es)
c. Indique si tiene algún uso farmacológico
d. Indique si tiene algún efecto tóxico
EJERCICIOS DE INTEGRACIÓN
a. Investigue e indique en un dibujo o imagen cada una de las partes de la flor
b. Investigue e indique en un dibujo o imagen las partes de la hoja
c. Investigue cuales son los tipos de tallo y sus características
PRÁCTICA NO. 2
ANÁLISIS FITOQUÍMICO PRELIMINAR PARA FLAVONOIDES
INTRODUCCIÓN
En el estudio de los componentes químicos de las plantas, son muy útiles las
pruebas químicas sencillas, sensibles, específicas, rápidas y que requieran
equipo mínimo, económico y fácil de transportar. Si se considera la gran cantidad
de material vegetal que se puede recibir en un laboratorio para investigación
química, así como el tiempo y costo requerido en cada estudio, resulta
conveniente efectuar pruebas preliminares que permitan dar preferencia a las
plantas de mayor provecho y sobre esto se ha escrito mucho. En estudios
preliminares se pueden utilizar muestras de 1 a 1000 g, y orientarse a localizar
cualitativa o cuantitativamente uno o varios principios activos ([Link]., flavonoides,
sapogeninas, sesquiterpenlactonas, etc). Los métodos pueden ser: Histológicos:o
sea, observación del comportamiento de cortes de tejidos frente a ciertos reactivos
que formen colores, den precipitados, etc.), Químicos: tratamiento de extractos
con agentes cromógenos, substancias que forman precipitados, etc.,
Fisicoquímicos: uso de cromatografía, localización de ciertas bandas de absorción
en IR, UV, Visible,etc., Biológicos: ver el efecto de extractos sobre cultivos de
microorganismos, grupos de ratones, embriones, órganos aislados, tejidos o
células.
En la práctica es ventajoso utilizar varios de estos métodos. Hay numerosas
investigaciones sobre las condiciones óptimas para estudios preliminares. En
todos los casos se recomienda verificar el comportamiento de los reactivos y la
reproductividad y limitaciones de las técnicas, mediante el empleo de substancias
y extractos testigos.
Se utiliza la cromatografía de capa fina (CCF) como técnica de análisis
fitoquímico preliminar, esta permite la detección visual de todos los componentes
de la mezcla con la consecuente determinación de las sustancias de interés un
tiempo mínimo y una economía de material. Haciendo uso de la serie eluotrópica de
disolventes, se elige una mezcla binaria formada por un disolvente poco polar y otro
polar que, utilizada como eluyente en una CCF de la mezcla, nos separe distintamente
los productos de interés.
Serie eluotrópica de disolventes por polaridad creciente
Hidrocarburos «Hidrocarburos ligeros» (éter de
petróleo, hexano, heptano. etc.)
Ciclohexano
Tetracloruro de carbono
Tricloroetileno
Tolueno
Benceno
Diclorometano
Cloroformo
Eter etílico
Acetato de etilo
Acetona
n-Propanol
Etanol
Metanol
Agua
PROPÓSITO
El alumno identificará Flavonoides, Antocianos y Betaninas a partir de extractos
vegetales mediante reacciones coloridas y CCF.
TIEMPO DE REALIZACIÓN
Cuatro horas
FUNDAMENTO TEÓRICO
Los flavonoides son metabolitos secundarios que están compuestos de dos anillos
fenilos (A y B), ligados mediante un anillo pirano (C) lo cual nos deja en un esqueleto de
difenilpiranos: C6-C3-C6
normalmente pigmentos de coloración amarilla de donde viene su nombre (del latín
flavus, "amarillo").
F u e n t e : [Link]/rfm/no52, 20 0 9
Al ser parte fundamental de la biología vegetal, los flavonoides responden a la luz
controlando los niveles de las auxinas (hormonas vegetales) reguladoras del
crecimiento; intervienen en la diferenciación de las plantas y potencian la polinización al
conferir coloración. Por ende, se encuentran en numerosos frutos, plantas y semillas;
logrando más de 5,000 distintos flavonoides. Estos compuestos fueron descubiertos por
el premio Nobel Szent-György, quien en 1930 aisló de la cáscara del limón una
sustancia, la citrina, que regulaba la permeabilidad de los capilares. Podemos
encontrarlos en los siguientes grupos:
1) Ácido elágico: se encuentra en frutas como la uva y las verduras. 2) Antocianidinas:
pigmentos responsables de los colores rojo-azulado y rojo de las cerezas. 3) Catequina:
se encuentra en el té negro y verde. 4) Citroflavonoides: como la quercetina, limoneno,
hes peridina, rutina y naranjina. El sabor amargo de la naranja, del limón y el de la toronja
lo otorga la naranjina; y el limoneno se ha aislado de la lima y el limón. 5) Isoflavonoides:
tales como la genisteína y la daidzeína, presentes en los alimentos de soya como tofu,
leche, porotos, proteína vegetal, tempeh, miso y harina. 6) Kaemferol: encontrándose
en brócoles, puerros, endibias, remolacha roja y rábanos. 7) Proantocianidinas: que
aparecen en las semillas de las uvas, en el extracto de corteza de pino marino y en el
vino tinto.
Merecen ser incorporados al grupo de los nutrientes esenciales. El valor medio de la
ingesta de flavonoides es de 23 mg al día. Y el principal flavonoide consumido es la
quercetina, siendo el té su principal fuente.
Los compuestos relacionados como lo son los antocianos y betaninas están
ampliamente distribuidos en la naturaleza, más frecuentemente en las plantas
superiores, son pigmentos contenidos en la savia, por lo que se les puede encontrar en
diferentes partes del vegetal, cuyo color dependerá del pH de la savia.
En un principio, fueron consideradas sustancias sin acción beneficiosa para la salud
humana, pero más tarde se demostraron múltiples efectos positivos debido a su acción
antioxidante y eliminadora de radicales libres, entre otras.
Los flavonoides se disuelven en álcalis, dando soluciones amarillas. Los
antocianos se encuentran más ampliamente distribuidos que las betaninas en los
vegetales. Los compuestos a los que se hace mención, se pueden identificar fácil y
rápidamente mediante reacciones coloridas
.
MATERIAL Y REACTIVOS
MATERIAL REACTIVOS
Pinzas de disección Hidróxido de amonio
10 Frascos de vidrio pequeños Etanol
6 Pipetas Pasteur Ácido clorhídrico al10%
3 Pipetas de 2 o 5 ml Hidróxido de sodio al 10%
14 Tubos de ensaye Acetato de etilo
Mortero con pistilo Ácido fórmico
Embudo Agua destilada
Papel filtro Metanol
Cromatoplacas de gel de sílice Solución de FeCl3 al 10%
Cámara para cromatografía Limadura de Magnesio
Lámpara de luz UV HCl concentrado
Vaso de precipitados de 50 ml Reactivo de vainillina: Vainillina
Mechero de bunsen al 10 % en etanol más HCl conc.
Tripié (7:3)
Baño maría
Gasa
Guantes de látex
Espátula
Agitador de vidrio
Algodón
Muestras vegetales de: betabel, col morada, uvas rojas, hortensia, capulín, fresa,
rosas de varios colores, rábano, bugambilea, cepillo, gladiola, tuna roja, clavel
de diferentes colores, margarita.
PROCEDIMIENTO
PARTE I: REACCIONES COLORIDAS
1. Quitar los pétalos a cada una de las diferentes flores.
2. Colocar 20 ml de amoniaco en un vaso de precipitados de 50 ml. Con unas pinzas
pequeñas tomar los pétalos de uno en uno y exponerlos a vapores de amoniaco
teniendo cuidado de no contaminar el reactivo. Observar y anotar el vire de color.
2. Triturar en el mortero cada una de las muestras de material vegetal, agregar etanol
para preparar la muestra para su análisis. Lavar el mortero entre muestra y muestra de
los diferentes especímenes vegetales para asegurarse de evitar la contaminación.
3. Macerar cada una de las muestras trituradas con 25 ml de etanol durante 2 horas,
utilizar un frasco pequeño de vidrio para cada una, rotulado y con tapa.
4. Una vez transcurridas las 2 horas filtrar cada una de las muestras, primero con gasa
presionando el sólido con la espátula y después con papel filtro.
5. Tomar 2 ml. de los extractos etanólicos y colocar cada uno en un tubo de ensaye
rotulado y adicionar 4 gotas de HCl al 10%, agitar. Enseguida adicionar gota a gota
NaOH al 10 % hasta el vire de color.
• Interpretación de resultadios.- Exposición a vapores de amoniaco o reacción con
NaOH)
Compuesto Vire de color
Betaninas Amarillo a un color ámbar o verdoso
Antocianos Azul a verde
Flavonoides Blanco a Amarillo, Amarillo a amarillo, amarillo a naranja.
Chalconas/Auronas Amarillo a Rojo
Antocianos Rojo, rosa, salmón, morado,lila, fucsia a Azul o Verde
Betaninas Naranja, fucsia, rojo,rosa a Amarillo
6. Reacción de Shinoda: Colocar dos virutas de magnesio en un tubo de ensayo.
Añadir 1 ml del filtrado y por la pared del tubo, gota a gota dejar caer 3 a 5 gotas de
HCl concentrado. La aparición de colores amarillo, naranja, rosado, rojo o violeta es
prueba positiva para la existencia de flavonoides en la muestra.
7. Ensayo para Leucoantocianidinas: Colocar 1 ml del filtrado en un tubo de ensayo.
Añadir 1 ml de ácido clorhídrico concentrado. Calentar en baño maría a ebullición
durante 15 minutos. La aparición de coloraciones rojas es prueba positiva de la
existencia de leucoantocianidinas en la muestra.
PARTE II: IDENTIFICACIÓN POR TLC
1. Concentrar los filtrados etanólicos en baño maría.
2. Aplicar cada una de las muestras perfectamente identificadas en la placa para
cromatografía. Se correrán dos placas con las mismas muestras, pues se
utilizarán 2 reveladores diferentes.
3. Correr los cromatogramas utilizando acetato de etilo- ácido fórmico- agua-
metanol en proporción [Link] como fase móvil.
4. Secar las placas.
5. Observar una serie de cromatogramas bajo la luz UV que puede mostrar:
Manchas cafés para Flavonas y Antocianinas
Fluorescencia amarilla para flavonas y glicósidos flavonólicos
o naranja para Chalconas
Fluorescencia azul claro para Catequinas
Fluorescencia amarillo-verdosa para Flavonoles
6. Revelar con la solución de Cloruro Férrico que evidencía:
Manchas azul-grisáceo para Antocianinas
Manchas morado o violeta para Betaninas
7. Revelar la segunda serie de cromatogramas con el reactivo de vainillina ácida que
mostrará
Manchas rosas para Flavandioles y Catequinas
Manchas naranja-rojo para Chalconas y Auronas
Manchas amarillas para Flavonoides
DISPOSICIÓN DE RESIDUOS
1. Colocar en una charola el residuo sólido que queda después de filtrar
los extractos, llevarla a la campana y cuando el etanol se haya evaporado
desechar en la basur a.
[Link] extractos etanólicos sobrantes se disponen en recipiente A
3. Neutralizar con lentejas de hidróxido de sodio el contenido de los tubos a lo que se
les realizó la reacción de Shinoda y la de Leucoantocianidinas y disponer en recipiente
D
CUESTIONARIO
1. Investigar cual es la diferencia entre antocianos y antocianidinas.
2. ¿Cual es la antocianidina más común?
3. Investigar el fundamento de cada una de las reacciones realizadas en esta práctica.
4. Investigar 2 reacciones coloridas para flavonoides diferentes a los de la práctica.
EJERCICIOS DE INTEGRACIÓN
Realizar un esquema de los diferentes tipos de flaonoides (con estructura) y las
reacciones mediante las cuales se interconvierten.
