ESCUELA SUPERIOR POLITÉCNICA DE CHIMBORAZO

FACULTAD DE CIENCIAS
ECSUELA DE INGENIERÍA QUÍMICA

“VALORACIÓN DE SUSTRATOS VEGETALES, NITRATOS Y

PLOMO PARA MAXIMIZAR LA PRODUCCIÓN DE

BIOELECTRICIDAD EN CELDAS DE COMBUSTIBLE

MICROBIANO"

Trabajo de titulación
Tipo: proyecto de investigación
Presentado para optar el grado académico de:

INGENIERO QUÍMICO

AUTOR: JHONNY HERNÁN BONILLA DEL POZO

TUTORA: ING. CRISTINA CALDERÓN T.

Riobamba – Ecuador
2018
©2018, Jhonny Hernán Bonilla Del Pozo
Se autoriza la reproducción total o parcial, con fines académicos, por cualquier medio o
procedimiento, incluyendo la cita bibliográfica del documento, siempre y cuando se reconozca el
Derecho de Autor.

i
 ESCUELA SUPERIOR POLITÉCNICA DE CHIMBORAZO
FACULTAD DE CIENCIAS
ESCUELA DE INGENIERÍA QUÍMICA

El Tribunal del trabajo de titulación certifica que: el trabajo de investigación “Valoración de

sustratos vegetales, nitratos y plomo para maximizar la producción de bioelectricidad en celdas
de combustible microbiano”, de responsabilidad del señor JHONNY HERNÁN BONILLA DEL
POZO, ha sido minuciosamente revisado por los Miembros del Tribunal del trabajo de titulación,
quedando autorizada su presentación.

FIRMA FECHA

Ing. Cristina Calderón T.

DIRECTORA DEL TRABAJO
DE TITULACIÓN

Dr. Marcelo Ramos F.

MIEMBRO DEL TRIBUNAL

ii
 DECLARACIÓN DE AUTENTICIDAD

Yo, Jhonny Hernán Bonilla Del Pozo, C.I. 060355324-9, declaro que el presente trabajo de Titulación
es de mi autoría y que los resultados del mismo son auténticos y originales. Los textos constantes en
el documento que provienen de otra fuente están debidamente citados y referenciados.

Como autora, asumo la responsabilidad legal y académica de los contenidos de este trabajo de
titulación.

Riobamba 29 de noviembre del 2018

Jhonny Hernán Bonilla Del Pozo

C.I. 060355324-9

iii
Yo, Jhonny Hernán Bonilla Del Pozo, soy responsable de las ideas, doctrinas y resultados expuestas
en esta Tesis y en el patrimonio intelectual de la Tesis de Grado pertenece a la Escuela Superior
Politécnica de Chimborazo.

Jhonny Hernán Bonilla Del Pozo

iv
 DEDICATORIA

A mi familia por haberme apoyado incondicionalmente durante toda mi formación académica, y que
aportaron con sus conocimientos y realce moral para poder cumplir con mi meta tan anhelada.

Jhonny

v
 AGRADECIMIENTO

Hago mi formal y sincero agradecimiento a las unidades educativas de mi primaria y secundaria

donde fue mi formación como ser humano de bien, conjuntamente a la Escuela Superior Politécnica
de Chimborazo por ayudarme a obtener mi profesión deseada de toda mi vida y pertenecer a la
sociedad de conocimientos sabios.

Jhonny

vi
 ÍNDICE DE CONTENIDO

RESUMEN.................................................................................................................................... xviii

ABSTRACT .................................................................................................................................... xix

INTRODUCCIÓN ............................................................................................................................ 1

CAPÍTULO Ⅰ ..................................................................................................................................... 5

1. MARCO TEÓRICO .......................................................................................................... 5

1.1. Antecedentes de la investigación ...................................................................................... 5

1.1. Sustrato .............................................................................................................................. 6

1.2. Microorganismos Electrogénicos ..................................................................................... 7

1.3. Bioelectricidad ................................................................................................................... 8

1.4. Vegetales y Frutas ............................................................................................................. 9

1.5.1. Frutas .............................................................................................................................. 11

1.5.2. Vegetales .......................................................................................................................... 12

1.5. Aguas residuales como sustratos en CCMs................................................................... 13

1.6.1. Nitratos en agua residual .................................................................................................. 13

1.6. Metales Pesados ............................................................................................................... 14

1.7. Suelos de paramo ............................................................................................................ 16

1.8. Celdas de Combustible Microbiano .............................................................................. 18

1.9.1. Estructura de una CCM .................................................................................................... 19

1.9.2. Sección Anódica ................................................................................................................ 20

1.9.3. Sección Catódica ............................................................................................................... 21

1.9. Aplicaciones de la CCM.................................................................................................. 22

CAPÍTULO Ⅱ ................................................................................................................................. 24

2. METODOLOGÍA ............................................................................................................ 24

vii
2.1. Parte experimental .......................................................................................................... 24

2.1.1. Localización del suelo de paramo para el estudio ........................................................... 24

2.1.2. Arquitectura y ensamblaje de carcasas para las CCMs .................................................. 26

2.2. Métodos ............................................................................................................................ 29

2.2.1. Muestreo del suelo de páramo ......................................................................................... 29

2.2.2. Ensayo para la selección de material de electrodos en configuración simple de CCMs . 32

2.2.3. Preparación de sustratos para la selección de electrodos en CCMs ............................... 33

2.2.4. Construcción y configuración de las CCMs para la selección de electrodos .................. 37

2.2.5. Selección de electrodos o MIC para la utilización en la CCMs, por reactivar ............... 39

2.2.6. Monitoreo de CCMs utilizando vegetales para selección de electrodos .......................... 41

2.2.7. Activación de las CCMs con la utilización de vegetales, nitratos y plomo como sustratos
................................................................................................................................................... 42

2.2.8. Ensamblaje y activación de la CCM como grupo control................................................ 42

2.2.9. Ensamblaje y activación de la CCM con vegetales como sustrato .................................. 44

2.2.10. Ensamblaje y activación de la CCM con nitratos como sustrato..................................... 47

2.2.11. Ensamblaje y activación de la CCM con plomo como sustrato ....................................... 49

2.2.12. Monitoreo y adquisición de datos para las CCMs reactivadas ....................................... 53

2.2.13. Evaluación de voltaje producido por las CCMs, con la utilización de vegetales, nitratos y

plomo como sustratos ..................................................................................................... 54

2.2.14. Propuesta de la mejor configuración de CCM................................................................. 55

2.2.15. Ensamblaje de la CCM propuesta, utilizando vegetales como sustrato .......................... 56

2.2.16. Monitoreo y evaluación de producción de bioelectricidad de la CCM de mejor

configuración ............................................................................................................................ 59

2.3. Técnicas ............................................................................................................................ 60

2.3.1. Análisis del suelo .............................................................................................................. 60

2.3.2. Análisis de pH .................................................................................................................. 61

2.3.3. Análisis de temperatura.................................................................................................... 61

2.3.4. Análisis de conductividad ................................................................................................. 62

viii
2.4. Lugar de investigación .................................................................................................... 63

2.4.1. Equipos y materiales experimentales ............................................................................... 64

2.4.2. Equipos y materiales de laboratorio ................................................................................ 68

2.5. Diseño técnico de la investigación .................................................................................. 69

2.6. Planteamiento de la hipótesis ......................................................................................... 70

CAPÍTULO Ⅲ ................................................................................................................................ 72

3. RESULTADOS Y DISCUSIÓN ..................................................................................... 72

3.1. Resultados de los análisis del suelo de páramo ............................................................. 72

3.2. Resultados de las CCMs para la Selección de electrodos o MIC ................................ 74

3.3. Resultados de las CCMs para valoración de sustratos ................................................ 76

3.4. Comprobación de hipótesis ............................................................................................ 79

3.4.1. Resultados de la comparación de medias o promedios .................................................... 79

3.4.2. Comprobación de hipótesis textual .................................................................................. 85

3.5. Resultados de la mejor configuración de CCM propuesta en la investigación.......... 87

3.6. Discusión de resultados ................................................................................................... 89

CONCLUSIONES ........................................................................................................................... 91

RECOMENDACIONES ................................................................................................................. 91

BIBLIOGRAFÍA

ANEXOS

ix
 ÍNDICE DE TABLAS

Tabla 1-1: Sustratos utilizados en CCMS de cámara simple ............................................................. 7

Tabla 1-2: Sustancias para las CCMs de selección de electrodos .................................................... 34
Tabla 2-2: Sustratos de CCMs para la selección de electrodos de 1000 ppm .................................. 34
Tabla 3-2: Sustratos de CCMs para la selección de electrodos de 500 ppm .................................... 35
Tabla 4-2: Cálculos de concentración para los sustratos, en la determinación de electrodos. ......... 38
Tabla 5-2: Composición de la disolución del suelo de páramo, en la determinación de electrodos. 38
Tabla 6-2: Constitución para las 4 CCMs en la selección de electrodos ......................................... 39
Tabla 7-2: Sustancias para la CCM sin sustrato............................................................................... 42
Tabla 8-2: Conformación del sustrato en la CCM de frutas y vegetales.......................................... 44
Tabla 9-2: Cálculo para la composición de sustrato frutas y vegetales de concentración. .............. 45
Tabla 10-2: Composición para la disolución bacteriana en la CCM de vegetales. .......................... 46
Tabla 11-2: Composición de la cámara anódica en la CCM de vegetales. ...................................... 46
Tabla 12-2: Cálculo para la concentración de nitratos. .................................................................... 47
Tabla 13-2: Composición para la disolución bacteriana en la CCM en nitratos. ............................. 48
Tabla 14-2: Contenido de la cámara anódica en la CCM de nitratos. .............................................. 49
Tabla 15-2: Cálculo para la concentración de plomo....................................................................... 50
Tabla 16-2: Composición para la disolución bacteriana en la CCM de plomo como sustrato. ....... 51
Tabla 17-2: Contenido de la cámara anódica en la CCM de plomo como sustrato. ........................ 52
Tabla 18-2: Conformación del sustrato para mejor propuesta de CCM. ......................................... 56
Tabla 19-2: Cálculo para la composición de sustrato en la mejor propuesta de CCM. ................... 57
Tabla 20-2: Composición para la disolución bacteriana en la mejor propuesta de CCM. ............... 57
Tabla 21-2: Composición de la cámara anódica en la mejor propuesta de CCM. ........................... 58
Tabla 22-2: Materiales y equipos experimentales ............................................................................ 64
Tabla 23-2: Materiales y equipos para medición de pH .................................................................. 68
Tabla 1-3: Resultados de los análisis del suelo de páramo. ............................................................. 72
Tabla 2-3: Resultados para la selección de tipo de electrodo. ......................................................... 74
Tabla 3-3: Resultados para la valoración de sustratos utilizados. .................................................... 76
Tabla 4-3: Datos para la obtención de p-valor. ................................................................................ 79
Tabla 5-3: Homogeneidad de varianzas. .......................................................................................... 80
Tabla 6-3: Rangos para la comparación de medias. ......................................................................... 82
Tabla 7-3: Datos estadísticos para la comparación de medias. ........................................................ 82

x
Tabla 8-3: Comparaciones múltiples de medias o promedios.......................................................... 83
Tabla 9-3: Determinación de subgrupos homogéneos. .................................................................... 84
Tabla 10-3: Resultados de bioelectricidad para la CCM propuesta. ................................................ 87

xi
 ÍNDICE DE FIGURAS

Figura 1-1. Obtención de bioelectricidad electroquímica. ................................................................. 9

Figura 2-1. Vegetales y Frutas. ........................................................................................................ 11
Figura 3-1. Composición de Frutas. ................................................................................................. 12
Figura 4-1. Composición de Vegetales. ........................................................................................... 12
Figura 5-1. Representación de una Celda de Combustible Microbiano. .......................................... 18
Figura 6-1. Arquitectura y Funcionamiento de las CCMs. .............................................................. 20
Figura 1-2. Esquematización de los materiales que se utilizó en la formación de las CCMs. ......... 29
Figura 2-2. Electrodos de fibra de carbono en CCM con materia orgánica. .................................... 33

xii
 ÍNDICE DE GRÁFICOS

Gráfico 1-3. Conductividad del suelo de páramo. ............................................................................ 73

Gráfico 2-3. Temperatura del suelo de páramo en °C. ..................................................................... 73
Gráfico 3-3. PH de las muestras del suelo de páramo. ..................................................................... 74
Gráfico 4-3. Resultados de bioelectricidad para la selección de electrodos en voltaje. ................... 75
Gráfico 5-3. Tendencia polinómica para la selección de electrodos. ............................................... 76
Gráfico 6-3. Resultados de datos finales para la determinación de sustrato. ................................... 78
Gráfico 7-3. Líneas de tendencia polinómica finales para la determinación de sustrato. ................ 79
Gráfico 8-3. Probabilidad de bioelectricidad normal. ...................................................................... 80
Gráfico 9-3. Prueba de varianzas para resultados de bioelectricidad respecto a la concentración. .. 81
Gráfico 10-3. Producción de bioelectricidad en base a la comparación de promedios. ................... 85
Gráfico 11-3. Resultados de bioelectricidad de la CCM propuesta. ................................................ 88
Gráfico 12-3. Línea de tendencia polinómica de bioelectricidad de la CCM propuesta. ................. 89

xiii
 ÍNDICE DE FOTOGRAFÍAS

Fotografía 1-1. Páramo Andino – Chimborazo, Pajonal.................................................................. 17

Fotografía 1-2. Lugar de estudio – Páramo, superficie Pajonal. ...................................................... 25
Fotografía 2-2. Altímetro – ft sobre el nivel del mar. ...................................................................... 26
Fotografía 3-2. Diseño de piezas para las CCMs. ............................................................................ 27
Fotografía 4-2. Ubicación de estacas en el cuadrante. ..................................................................... 30
Fotografía 5-2. Inserción del barreno en el punto fijado. ................................................................ 31
Fotografía 6-2. Medición de 20cm a 40cm de profundidad............................................................. 31
Fotografía 7-2. Obtención de la muestra. ........................................................................................ 32
Fotografía 8-2. Multímetro digital MT 15. ...................................................................................... 34
Fotografía 9-2. Pesaje de vegetales.................................................................................................. 36
Fotografía 10-2. Ensamblaje de las CCMs. ..................................................................................... 37
Fotografía 11-2. Coctel de microorganismos provenientes de suelo de paramo para las CCMs..... 39
Fotografía 12-2. Apreciación de las CCMs con cobre como electrodos. ........................................ 40
Fotografía 13-2. Apreciación de las CCMs con tejido de fibra de carbono como electrodos. ........ 40
Fotografía 14-2. Toma de datos utilizando el multímetro digital. ................................................... 41
Fotografía 15-2. Preparación de la disolución de suelo. .................................................................. 43
Fotografía 16-2. Sustratos para la CCM de frutas y vegetales......................................................... 46
Fotografía 17-2. Pesaje de nitratos para la CCM correspondiente. ................................................. 48
Fotografía 18-2. Solución de 1000 ppm para nitratos...................................................................... 49
Fotografía 19-2. Solución de 1000 ppm para plomo. ...................................................................... 51
Fotografía 20-2. Introducción de sustrato plomo a la CCM. ........................................................... 52
Fotografía 21-2. Toma de datos para las CCMs activadas. ............................................................. 54
Fotografía 22-2. Selección del mejor sustrato. ................................................................................ 55
Fotografía 23-2. Electrodo de cobre. ............................................................................................... 56
Fotografía 24-2. Introducción bacteriana a la CCM propuesta. ....................................................... 59
Fotografía 25-2. Aspecto de la CCM propuesta de la investigación. .............................................. 60
Fotografía 26-2. Muestras listas para análisis. ................................................................................. 60
Fotografía 27-2. Panel de lectura, pH metro. ................................................................................... 61
Fotografía 28-2. Dosificación de muestra 1:2 suelo agua................................................................ 62
Fotografía 29-2. Lectura de conductividad a la muestra.................................................................. 63
Fotografía 30-2. CCMs y multímetro digital. .................................................................................. 70

xiv
 ÍNDICE DE ANEXOS

ANEXO A. Registro de trabajo en el laboratorio de protección ambiental 1 de 3.

ANEXO B. registro de trabajo en el laboratorio de protección ambiental 2 de 3.
ANEXO C. Registro de trabajo en el laboratorio de protección ambiental 3 de 3.
ANEXO D. Equipo de monitoreo de voltaje próximo a la medida.
ANEXO E. Suelo de para intervenido por el ser humano.
ANEXO F. Presencia de humedad en el suelo de paramo por la presencia de microorganismos.
ANEXO G. Medición del barreno hasta el máximo de profundidad permitida en el trabajo de
investigación.

xv
 ÍNDICE DE ABREVIATURAS

ESPOCH Escuela Superior Politécnica de Chimborazo

CCMS Celdas de Combustible Microbiano

MFC Microbial fuel cell

DQO Demanda Química de Oxigeno

MEC Celda microbiológica electrolítica

CCM Celda microbiológica combustible

NO-3 Nitratos

H2O Agua

NO-2 Nitritos

Pb Plomo

UE Comunidad Europea

pH Potencial de Hidrógeno

g Gramos

Kg Kilogramos

KNO3 Nitrato de Potasio

Pb(NO3)2 Nitrato de Plomo

M.O. Materia Orgánica

V Diferencia de Potencial

mV Mili voltios

m Metro

cm Centímetro

% Porcentaje

xvi
mL Mililitros

L Litros

cm3 Centímetros cúbicos

EEC Directiva Europea

m. s. n. m. metros sobre el nivel del mar

PEM membrana de intercambio de protones

PPM partes por millón

MIC Membrana de Intercambio Catiónico

MIP Membrana de Intercambio Protónico

Ha Hectárea

CO2 Dióxido de Carbono

BUGs Benthic Unattended Genarators

Km/ h Velocidad de kilómetros por hora

Ft Longitud en pies

atm Atmosferas de presión

°C Grados centígrados de temperatura

µS Micro Siemens

xvii
RESUMEN

Esta investigación se basó en la valoración de sustratos vegetales con frutas, nitratos y plomo para
maximizar la producción de bioelectricidad provenientes de la reactivación de celdas de combustible
microbiano de configuración simple, con el objetivo de evaluar el voltaje producido y proponer la
mejor configuración de las mismas, para lo cual se utilizó suelo de páramo proveniente de la reserva
de producción de fauna Chimborazo, ubicado a 4000 msnm con un muestreo de 5 puntos en forma
de zigzag, a una profundidad de 20cm a 40cm en la superficie vegetal de Pajonal. Se realizó análisis
de suelo, como el pH, conductividad y temperatura; se probó electrodos de cobre y electrodos de
tejido de fibra de carbono para la utilización final y el monitoreo, donde el mejor productor y
conductor de electrones fueron los electrodos de cobre. Mediante este preámbulo se procedió a la
reactivación de las celdas de combustible microbiano, con la utilización de 3 diferentes sustratos,
acompañado de un blanco testigo o sin sustrato, determinándose así la influencia de los sustratos
sobre los microorganismos electrogénicos, los sustratos utilizados fueron vegetales con frutas,
nitratos y plomo que aseguran una mejor eficiencia con respecto al blanco o Celda microbiológica
combustible (CCM) sin sustratos, se monitoreó durante 15 días, a una misma concentración de 1000
ppm. Mediante este proceso se pudo realizar la valoración de los 3 sustratos utilizados en esta
investigación, el sustrato con el que se generó una mayor cantidad de bioelectricidad es vegetales y
frutas con un valor de 0.42V, luego el plomo con un valor de 0.34V y finalmente el sustrato de nitratos
con un valor de 0.14V. Finalmente se propone la mejor configuración de celda de combustible
microbiano para la máxima producción de bioelectricidad, reactivando la celda con los sustratos de
frutas y vegetales, utilizando los electrodos de cobre como ánodo y cátodo. Consiguiendo así que se
maximice la obtención de bioelectricidad con un nuevo monitoreo de 7 días, produciendo 0.51V valor
mayor que los ensayos anteriores.

Palabras claves: ˂BIOELECTRICIDAD˃ ˂SUSTRATOS˃ ˂CELDAS DE COMBUSTIBLE

MICROBIANO (CCM)˃ ˂VALORACIÓN˃ ˂INGENIERÍA QUÍMICA˃

xviii
ABSTRACT

This research was based on vegetable substrates with fruits, nitrates and lead valuation in order to
maximize the production of bioelectricity from the reactivation of microbial fuel cells (MFC) of
simple configuration. The objective was to assess the voltage produced and propose the best
configuration by using moorland soil from Chimborazo fauna production reserve fauna, located at
4000 m above sea level with a sampling of 5 points, a depth of 20 cm to 40 cm on the grassy brush
plant cover. The analysis of soil, pH, conductivity and temperature was carried out as well as copper
electrodes and fiberglass fabric of carbon electrodes were tested for monitoring, where the best
producer and conductor of electrons were the copper electrodes. Based on this preamble, the microbial
fuel cells (MFCs) were reactivated by using 3 substrates, with a control blank or without substrate,
determining the influence of the substrates on the electrogenic microorganisms. The substrates were
vegetables with fruits, nitrates and lead with a greater efficiency with respect to the control blank or
MFC without substrates, it was monitored for 15 days in a concentration of 1000 parts per million
(ppm). Through this process, the 3 substrates used in this research were evaluated, the substrate which
generated a greater amount of bioelectricity was vegetables and fruits with a value of 0.42 V, then the
lead with a value of 0.34 V and finally the nitrate substrate with a value of 0.14V. Finally, the best
microbial fuel cell configuration is proposed for the maximum bioelectricity production, reactivating
the cell with the fruit and vegetable substrates, using the copper electrodes as anode and cathode.
Achieving that the bioelectricity production is maximized with a new monitoring of 7 days, producing
0.51V, a higher value than the previous trials.

KEYWORDS: <CHEMISTRY>, <BIOELECTRICITY>, <SUBSTRATES>, <MICROBIAL

FUEL CELLS>, <BIOELECTRICITY VALUATION>.

xix
INTRODUCCIÓN

IDENTIFICACIÓN DEL PROBLEMA

En el Ecuador existen microorganismos con aplicaciones variadas, como para la producción de

alimentos, biorremediación de ambiente y microorganismos productores de bioelectricidad, dando
prioridad a estudios recientes en universidades y centros tecnológicos pertenecientes al país como la
ESPOCH, donde se busca sustituir las fuentes de energía tradicionales como el uso de combustibles
no renovables, estos combustibles provocan la contaminación de la atmosfera, en lo que respecta a
estos estudios actuales se utilizan celdas de combustible microbiano (CCMs), donde utilizan
microorganismos electrogénicamente activos (Logan, 2009). Que pueden ser una fuente de energía
eléctrica, y un posible alivio para la contaminación.

Al tratar el tema de la energía eléctrica en el país, ya no existe tanto apremio como en décadas
anteriores como en los años 80 y 90, pero al momento las grandes hidroeléctricas construidas
recientemente cubren solo una parte de la demanda del país en energía eléctrica, por esta razón hace
falta subsistemas que permitan que toda la población tenga electricidad, como por ejemplo las celdas
de combustible microbiano (Revelo, et al., 2013), (actualmente 2.8% del país no tienen energía), la
mayoría de este porcentaje pertenece a la zona rural. Lo mismo pasa con diferentes países que buscan
innovación y producción de energía eléctrica a partir de sustratos, sean estos orgánicos o inorgánicos
con microorganismos electrogénicos. (ElComercio, 2016)

Se requiere el desarrollo de investigaciones que busquen aprovechar sustratos óptimos, frente a

microorganismos que produzcan energía, para obtener mejores resultados en la producción de
bioelectricidad.

En la actualidad, el desarrollo de tecnologías eficientes, baratas y amigables con el ambiente como

por ejemplo la utilización de paneles solares o molinos de viento, son opciones viables para cumplir
estas características y satisfacer los intereses de todas las partes involucradas, en base a esto existe la
investigación y desarrollo de nuevas tecnologías, que se basan en microorganismos capaces de
aprovechar metabólicamente ciertos sustratos, como son los desperdicios de alimentos y residuos de
fábricas, como aguas contaminadas con metales pesados que son compuestos de interés ambiental,
ya que la presencia en gran cantidad, puede generar problemas de impacto ambiental en lugares
urbanos y rurales (Hernández Gómez & Sánchez Olvera, 2017).

1
Los problemas de energía a nivel mundial en zonas desérticas o páramos, muestran las necesidades
de promover el desarrollo de nuevas tecnologías para reutilizar residuos de origen orgánico e
inorgánico y generar energía sustentable y renovable para el desarrollo de países tercermundistas.

Existen sustratos óptimos para bacterias electrógenas, sean estos de origen orgánico o inorgánico,
este estudio se basa particularmente en la investigación de sustratos óptimos para la producción de
microorganismos obtenidos de la zona andina del Ecuador.

JUSTIFICACIÓN DE LA INVESTIGACIÓN

La humanidad alcanza niveles de población cada vez más altos, lo cual conlleva una demanda
constante de energía, esto significa que generarla, llegará a ser demasiado costosa en un futuro no
muy lejano (Logroño, 2014), entonces estas investigaciones son claves para el progreso de la
sociedad, es necesario buscar otras alternativas como fuente de energía renovable, un ejemplo
prometedor son las CCMs. Puesto que son una alternativa de auto sustentabilidad para la generación
de energía eléctrica,

Es necesario optimizar la composición del sustrato y el diseño utilizado en las celdas de combustible
microbiano para obtener una mayor producción de energía, y realizar diferentes configuraciones,
como el intercambio entre sustratos y bacterias electrogénicas, así también como diferentes pruebas
de sustratos y sus composiciones, ya sea en su proporcionalidad, concentración o peso. Cada celda
debe ir acorde con el sustrato que debe ser consumido, para obtener mejores resultados, caso contrario
cuando no está acorde estos dos elementos sería un retroceso, mas no un avance.

Las celdas de combustible microbiana son creadas para ayudar a erradicar la contaminación, las
acciones de estos equipos, sistemas o llamadas también matrices ayudan en gran parte a aprovechar
los residuos domésticos e industriales (Guambo Galarza & Allauca Caisaguano, 2015), en estas
fuentes de carbono, elementos o compuestos inorgánicos llegan a participar del alimento o sustratos
para los microorganismos electrogénicos, donde estas bacterias generan bioelectricidad mediante
reacciones electroquímicas de óxido-reducción frente a sustratos óptimos para estas bacterias. Con el
fortalecimiento de esta investigación de suma importancia para la reducción de los desechos
mencionados anteriormente lo que permite obtener energía limpia (Armas Chugcho & Ramirez
Yambombo, 2014).

Un justificativo muy importante es la reducción de la huella de carbono en la generación y consumo

de energía más aun en países desarrollados y súper poblados como es el caso de China, uno de los

2
países que pone en marcha la utilización de nuevas tecnologías como es la energía eólica y la energía
solar (Pardo, 2015).

El Ecuador es un país muy diverso y pequeño en donde se puede encontrar una gran variedad de
microorganismos a fin de desarrollar estos tipos de investigación y sus determinados sustratos
óptimos para su mejor eficiencia de producción de energía (Armas Chugcho & Ramirez Yambombo,
2014).

El desarrollo económico de los países, su correlación directa con el crecimiento de la demanda de

energía eléctrica y la típica asociación con el incremento de la afectación del medio ambiente
mediante la creciente emisión de gases de efecto invernadero son una cadena que, si no se toman
acciones estratégicas, va a seguir mostrando un impacto devastador de la Variabilidad Climática
(Camargo, et al., s.f.).

Cada país con sus diferentes comunidades tiene varias necesidades que cubrir y en teoría no hay que
depender de tercero para vivir de manera satisfactoria, por estas razones, las universidades e institutos
tecnológicos deben brindar facilidad e incentivos para que se realicen estos tipos de investigación ya
que son un gran aporte para la seguridad energética de cada país, región y comunidad, y
justificativamente son estudios que favorecen a la universidad que apoyan y auspician este tipo de
indagación favoreciendo su respectiva región.

3
OBJETIVOS DE LA INVESTIGACIÓN

OBJETIVO GENERAL

 Valorar los sustratos de vegetales, nitratos y plomo para maximizar la producción de

bioelectricidad en celdas de combustible microbiano.

OBJETIVOS ESPECÍFICOS

 Reactivar las celdas de combustible microbiano de configuración simple.

 Evaluar el voltaje producido en las celdas de combustible microbiano, con los sustratos
vegetales, nitratos y plomo.
 Proponer el método de configuración con su medio específico para una maximización en la
obtención de energía.

4
 CAPÍTULO Ⅰ

1. MARCO TEÓRICO

1.1. Antecedentes de la investigación

Desde el principio del desarrollo de la humanidad, se ha presentado varias necesidades de enfrentar

diferentes problemas como la alimentación y la vestimenta, entonces a partir del nacimiento de la
energía eléctrica se registran cambios, como la industria y el transporte, consecuencia de ello es el
cambio climático. Elevándose así la emisión de gases de efecto invernadero, por estas razones los
investigadores de grandes universidades del país como es la ESPOCH y la Politécnica Nacional, han
empezado investigaciones y estudios utilizando celdas de combustible microbiano (CCMs).

Se tiene varios y relevantes casos de estas investigaciones efectuadas en Latinoamérica en forma de

tesis de investigación “producción de bioelectricidad microbiana utilizando residuos orgánicos como
sustrato, para dos casos de estudio: andes y amazonia, Ecuador” (Logroño, 2014), o también con
artículos publicados de universidades colombianas “Pilas de combustible y su desarrollo” (Corredor
Rojas, 2011),que buscan sobrellevar la remoción de materia orgánica, donde varios años atrás se
hablaba de aplicaciones que dependen esencialmente del metabolismo microbiano sobre el cual el
conocimiento aun es limitado, requiriéndose una mejor comprensión de la compleja ecología
microbiana (Logroño, 2014).

En países de desarrollo es importante estudiar otras fuentes de microorganismos y sustratos con

variada composición química que pueden ser potenciales combustibles al momento de hacer varias
pruebas y combinaciones.

En México se han realizado investigaciones utilizando bacterias extraídas de lodos activos, donde los
sistemas de operación fueron de tipo batch y en intervalos de temperatura mesofílica, utilizando agua
residual sintética, en celdas de combustible microbiano siempre se crea un par de celdas, para así
realizar una comparabilidad de efecto competitivo donde fueron observados durante 120 días y con
varios aspectos de medición como DQO y carga orgánica (Alzate, et al., 2009).

En Ecuador y particularmente en la Escuela Superior Politécnica de Chimborazo se viene

desarrollando investigaciones de CCMs. En los laboratorios pertenecientes a esta institución
académica se ha venido desarrollando de una forma consecutiva y ordenada, entonces se plantea esta
investigación con la finalidad de conectar este trabajo a otros, efectuados anteriormente.
5
El inicio de las investigaciones con CCMs de la ESPOCH, parten con la utilización de bacterias
pertenecientes a suelos de las regiones en la amazonia y la sierra central del Ecuador (Logroño, 2014).

Entre varias formas para obtener energía a partir de biomasa utilizando microorganismos esta la
generación de electricidad mediante el uso de celdas de combustible microbiano (MFC) Microbial
fuel cell por su siglas en inglés, es un dispositivo, generalmente compuesto por dos cámaras, capaz
de convertir la materia orgánica en electricidad (Rosales Colunga, 2016). En la cámara anódica se
degrada la materia orgánica y se libera al medio electrones y protones, los electrones fluyen a través
de un circuito externo produciendo electricidad y reaccionan en el cátodo con los protones
generándose H2O como subproducto, adicionalmente se ha reportado la disminución de la Demanda
Química de Oxigeno (DQO) presente en desechos orgánicos utilizados como sustratos, los cuales si
no son tratados son considerados contaminantes (Rosales Colunga, 2016).

1.1. Sustrato

La selección de sustratos es importante para obtener el máximo beneficio para bacterias

electrogénicos pertenecientes a suelos de paramo andino, y de acuerdo al experimento o la
investigación que se propone en este trabajo, principalmente con el resultado directamente
proporcional a la producción de bioelectricidad (Gonzáles Chávez, et al., 2001).

En sistemas de CCMS con el fin de producir bioelectricidad, el sustrato constituye un factor esencial
para la vitalidad de microorganismos que utilizan la reacción redox, teniendo como objetivo la
demanda de energía (Armas Chugcho & Ramirez Yambombo, 2014), alrededor del mundo de obtiene
una alta variedad de productos utilizados o desechados, así también como alimentos en
descomposición proveniente de fuentes industriales con potencial para la generación de energía
eléctrica o bioelectricidad, en los que se encuentra el suero de leche, uno de varios ejemplos que se
obtiene a partir de la fabricación de quesos como subproducto principal, el cual es potencialmente
contaminante debido a su alta carga orgánica (Rosales Colunga, 2016).

Se emplea una extensa variedad de sustratos desde sustancias puras como por ejemplo la glucosa o
acetato hasta mezclas complejas como lixiviados, suero de leche y residuos orgánicos e inorgánicos
(Armas Chugcho & Ramirez Yambombo, 2014), a continuación se puede verificar varios sustratos
utilizados para producir bioelectricidad en celdas de combustible microbiana de cámara simple con
su correspondiente referencia (Ver tabla 1-1).

6
Tabla 1-1: Sustratos utilizados en CCMS de cámara simple

Sustrato P max (mW/𝒎𝟐 ) Referencia

Desperdicio de alimentos 207.2** Kannaiah and Venkata (2011)
Aguas residuales de lácteos 5.7 Ayyaru and Dharmalingam (2011)
Lixiviados 20.9 Vázquez-Larios et al. (2011)
Basura compuesta de alimentos 107.89 Goud et al. (2011)
Farmacéuticas agua residuales 177.36 Velvizhi and Venkata
Aguas residuales penicilina sintético 101.2* Wen et al. (2011)
con glucosa
Aguas residuales de papel 125*** Velásquez et al. (2011)
Aguas residuales lácteos 25*** -
Aguas residuales de cervecería y 10*** -
panadería
Aguas residuales de destilerías 245.34 Mohanakrishna et al. (2012)
Efluentes del clarificador primario 13 Ishii et al. (2012)
Aguas residuales de agricultura 13 Nimje et al. (2012)
Aguas residuales domesticas 42 -
Aguas residuales de papel 8 -
Aguas residuales de alimentos / de 15 -
leche
*W𝑚−3
**Calculado a partir de la energía y las densidades de corriente.
***mA/𝑚−2
Fuente: (Armas Chugcho & Ramirez Yambombo, 2014)

Realizado por: Bonilla Jhonny, 2018

1.2. Microorganismos Electrogénicos

Los microorganismos electrogénicos son originarios de distintos sedimentos anaeróbicos, los

microorganismos son electrogénicos cuando son capaces de realizar el intercambio de electrones con
superficies conductoras, que pueden ser metales o fibras tratadas para el trasporte de electrones, las
superficies de intercambio de electrones son conocidos como electrodos, y al mismo tiempo producir
una corriente eléctrica a partir de la degradación de la materia orgánica o inorgánica presente si fuese
el caso. (Busalmen, 2010).

7
El primer ejemplo de actividad eléctrica con microorganismos fue mostrado por Potter en 1910, lo
cual en uno de sus experimentos que realizo fue que a los cultivos de E. coli y conjuntamente con la
ayuda de electrodos de platino con el fin de generar corrientes eléctricas que por su pequeña magnitud
pasaron desapercibidas para la comunidad científica. Este tipo de sucesos no fue tomado en cuenta
sino hasta la década de los ochenta, donde en esos periodos de estudio y de nuevas investigaciones,
con la ayuda de medidores redox en diferentes pruebas de soluciones fue el detonante para el
incremento de la producción de corriente y la potencia de estos sistemas. Estos indicadores redox no
son nada más que compuestos solubles que actúan transportando los electrones desde la bacteria
pasando por la solución disuelta hasta llegar al electrodo donde este último se convierte en el
propulsor para el inicio de circuito eléctrico, re oxidándose y quedando disponible de nuevo para ser
reducidos por los microorganismos electrogénicos (Paña, 2017).
Al efectuarse todas estas acciones se constituye así un catalizador ideal para la limpieza de aguas
residuales, lixiviados, contaminantes urbanos o también en sitios contaminantes por hidrocarburos,
con el beneficio adicional de la recuperación de energía (Busalmen, 2010).

1.3. Bioelectricidad

Actualmente no se ha dado mucho interés en utilizar esta técnica de generar bioelectricidad a partir
de microorganismos electrogénicos, pero, si no vemos de punto ambiental, es difícil llegar a la
utilización de esta tecnología. Este tema está muy ligado a la electrorremendiación ya que es un
tratamiento electroquímico que involucra a las aguas residuales y está directamente relacionada con
la aplicación de corriente directa o generalmente como un gradiente de potencial bajo de electrones.
Cuando se produce este proceso se genera un resultado de trasporte de iones o electroósmosis;
conjuntamente con el arrastre mecánico de coloides, bacterias y contaminantes orgánicos e
inorgánicos, el resultado es la electroósmosis. Gracias a los sustratos ayudan a que sea de mejor
provecho para los microorganismos la generación de bioelectricidad (Valdivieso Valdivieso, 2017).

8
 Figura 1-1. Obtención de bioelectricidad electroquímica.
Fuente: Agencia iberoamericana para la difusión de la ciencia y la tecnología

Una parte de esta investigación concierne a temas con metales pesados ya que se utiliza
microorganismos para remediar efluentes contaminadas de metales pesados, uno de los estudios
publicados anteriormente desde el año 2001, reporta un trabajo denominado, producción de
bioelectricidad y biorremediación de Metales Pesados por Geobacter Sulfurreducens, pertenecientes
a investigaciones de ecología molecular han dado resultados demostrando que Geobacteraceae
pertenece a un grupo predominante ubicado en el subsuelo y que realiza un papel muy importante en
procesos para generar bioelectricidad a partir de biorremediación, utilizando procesos
biogeoquímicos de reducción disimilaría de Fe(III) y Mn(IV) (Sepúlveda Asprilla, 2015).

Esta utilización de métodos de remediación se ha caracterizado por un empleo exitoso en acuíferos

generalmente subterráneos y suelos contaminados por metales pesados tales como uranio, tecnecio,
vanadio y cromo, por lo tanto al ser reducidos a un estado redox más bajo, se precipitan para facilitar
su remoción (Sepúlveda Asprilla, 2015).

1.4. Vegetales y Frutas

Los vegetales y las frutas constituyen, con otros grupos de alimentos, la parte esencial de lo que
comúnmente se conoce como la dieta mediterránea, (Montaña , et al., 2008), por cual es la gran
necesidad que requiere el ser humano de depender de estos alimentos rico en minerales y nutrientes,
a la par se obtiene un desperdicio considerable de alimentos por la falta de razón que tienen las

9
personas en adquirir los alimentos, enfocando la investigación a este tipo de problemas para
aprovechar este tipo de residuos con la generación de bioelectricidad.

El hombre como viene haciéndolo durante el inicio de su existencia consume productos alimenticios
para obtener energía para realizar sus diferentes actividades, los nutrientes necesarios para subsistir.
En cuanto a las vegetales y las frutas utilizadas en esta investigación de bioelectricidad han sido
seleccionados de acuerdo a su influencia nutritiva, además de los nutrientes que aportan, los atractivos
sabores y colores que presentan (Montaña , et al., 2008).

El ser humano fue adquiriendo y tomando permanencia de control en costumbres alimentarias a las
que comúnmente se denomina hábitos alimenticios. De acuerdo con informaciones publicadas existen
costumbres que dependen de normas culturales y de la disponibilidad de los frutos o productos
alimenticios que estén al alcance de la mano, producidos también por otros factores, en los
mencionados hábitos mencionado anteriormente en relación con los alimentos debemos incluir, no
solo la elección de los productos alimenticios en sí mismo, sino se puede recalcar la forma de
prepararlos, sin despreciar los métodos de conservación y finalmente los métodos en los que son
desechados y producen una acumulación inevitable (Montaña , et al., 2008).

Los alimentos de origen vegetal incluyen semillas (cereales, legumbres, frutos secos), tubérculos y
raíces, que son ricos en azucares y aportan gran cantidad de energía junto a nutrientes esenciales, las
frutas y hortalizas, que son pertenecientes a grupos de enorme interés alimenticio por los beneficios
de su ingesta animal y bacteriano, su riqueza en vitaminas, elementos de minerales y fibra, esta última
que no es digerida por el ser humano y comúnmente es ingerida y digerida por seres vivos
bacteriológicos o microrganismos que se dedican a degradar y romper moléculas que el hombre no
puede hacerlo, hacen que su consumo sea imprescindible para conseguir una alimentación de
sobrevivencia, sana y equilibrada (Montaña , et al., 2008). Ya que mismo tiempo que se degrada estos
alimentos se puede producir bioelectricidad limpia.

10
 Figura 2-1. Vegetales y Frutas.
Fuente: Sociedad Argentina de Nutrición, 2008.

1.5.1. Frutas

Las frutas son frutos comestibles de ciertas plantas cultivadas, como la pera, manzana, banano, fresa,
etc., según la Real Academia Española (2001). El Código Alimentario Español (1991) las define
como: “Frutos, infrutescencias o partes carnosas florales que han alcanzado un grado adecuado de
madurez y son propias para el consumo humano” (Montaña , et al., 2008).

11
 Figura 3-1. Composición de Frutas.
Fuente: Nutrición y salud (Montaña , et al., 2008).

1.5.2. Vegetales

El Código Alimentario Español (C.A.E, 1991) define Vegetales y Hortaliza como: “Cualquier planta
herbácea hortícola en razón que se puede utilizar como alimento, ya sea en crudo o cocinada” este
organismo también indica que la denominación de verdura distingue a un grupo de hortalizas en las
que: “la parte comestible está constituida por sus órganos verdes (hojas tallos o inflorescencias)”. No
obstante, a nivel popular, el termino de hortalizas se ha cambiado al nombre de verduras (Montaña ,
et al., 2008).

Figura 4-1. Composición de Vegetales.

Fuente: Nutrición y salud (Montaña , et al., 2008).

Cuando hablamos de calidad nutritiva de los alimentos, tenemos que tomar muy en cuenta que entre
los nutrientes que son proporcionales, existen los denominados macronutrientes y los
micronutrientes; los que se menciona primero se requieren en mayor proporción y son: proteínas,
carbohidratos y lípidos que se ha citado anteriormente en las figuras; entre los segundos se incluyen
otros componentes que se necesitan en menor cantidad; que son las vitaminas y los elementos
minerales, ácidos grasos y aminoácidos esenciales. En la actualidad se da gran importancia a

12
compuestos bioactivos denominados “fotoquímicos” principalmente con los vegetales (Montaña , et
al., 2008).

1.5. Aguas residuales como sustratos en CCMs

En varias sociedades existe la descarga de aguas residuales provenientes del uso cotidiano de
poblaciones urbanas y rurales, entonces se recurre al tratamiento bio-electroquímico de las
mencionadas aguas residuales que cada vez cobra mayor importancia en cuanto al crecimiento de la
población, el cual está destinado a cumplir con varios objetivos; como es la eliminación de
contaminantes y simultáneamente valorarlos energéticamente (Paña, 2017).

En donde nace con la idea de CCM, en cuanto a la dinámica de función se basa en la existencia de
microorganismos, dado que por su naturaleza son capaces de oxidar la materia orgánica e inorgánica
del agua residual, produciendo un flujo de electrones estacionario o no estacionario a un ánodo, el
memento que los electrones fluyen se establece una corriente eléctrica hasta la parte del cátodo con
la finalidad de cerrar el círculo de corriente, en este último recepta protones que al instante de tomar
contacto con el oxígeno se da la formación de H2O y así exterminar los radicales libres presentes en
el circuito (Paña, 2017).

Para que exista la utilidad de la electricidad producida hace falta un gradiente de potencial eléctrico
conectadas a los electrodos de cátodo y del ánodo. En referencia al tratamiento de aguas residuales
sintéticas o no sintéticas de forma bio-electroquímico presente dos variantes: la primera perteneciente
a las celdas microbiológicas electrolíticas (MEC) y a las celdas de combustible microbiana (CCM)
(Paña, 2017).

1.6.1. Nitratos en agua residual

Los nitratos son iones formados por tres átomos de oxígeno, uno de nitrógeno y con una carga
negativa (NO3-), no presentan ningún color ni sabor y se encuentran en la naturaleza disueltos por
varios disolventes comúnmente por el agua. Su presencia natural en las aguas superficiales o
subterráneas es consecuencias del ciclo natural del nitrógeno, no obstante, en determinadas zonas ha
habido una alteración de este ciclo en el sentido de que se ha producido un aumento en la
concentración de nitratos, este fenómeno se produce fundamentalmente a un excesivo uso y abuso de
abonos y fungicidas nitrogenados y a su posterior arrastre por las aguas de lluvia, aguas subterráneas

13
o de riego en zonas rurales y de poca afectación en poblados urbanos. Actualmente en la Comunidad
Europea (UE) el nivel máximo permitido de nitratos en aguas potables es de 50 mg/l, siendo 25 mg/l
el valor guía (Palomares, 2013).

El suelo es la matriz fundamental donde se encuentra la actividad ilimitada de reacciones químicas y

biológicas que dan apertura al desarrollo de la vida, y donde ocurre procesos fundamentales como la
mineralización de diferentes elementos y uno de los más significativos que es la fijación de nitrógeno.
Hoy en día el nitrógeno se ha transformado en uno de los principales elementos de mayor
contaminación presentes en los cuerpos de agua, causando grandes consecuencias como la
eutrofización de los ríos, lagos, lagunas y mares, en los ambientes acuáticos en nitrógeno puede ser
encontrado en forma de amonio N-NH4 +, nitritos N-NO2- o nitratos N-NO3-, los cuales pueden ser
utilizados por las bacterias nitrificantes amonio y nitrito oxidantes y desnitrificantes para su
crecimiento y consecuente su utilización como ejecutores de reacciones redox en la producción de
bioelectricidad y finalmente para su remoción (Rodríguez Rodríguez, et al., 2017).

Hace un tiempo atrás, a nivel mundial se viene estudiando el desarrollo de nuevos procesos avanzados
para el tratamiento biológico de las aguas residuales con la obtención de bioelectricidad, que puedan
constituir una alternativa económica y eficaz frente a los procesos clásicos o convencionales (fangos
activos, lechos bacterianos, aireación prolongada, entre otros varios con el mismo fin). Una de estas
alternativas puede basarse en un reactor biopelícula con soporte permeable a gases (membranas
planas o también llamadas fibras sintéticas huecas), que suelen denominarse como reactor
biomolecular, otra alternativa es la utilización de celdas de combustible microbiana que han tenido
gran aprobación o productividad en laboratorios para tratamientos de aguas contaminadas (Lolmede,
et al., 2000).

1.6. Metales Pesados

El termino de metal pesado refiere a cualquier elemento químico metálico que tenga una relativa alta
densidad y sea tóxico o venenoso en concentraciones incluso bajas. Los ejemplos de metales pesados
o metaloides, incluyen el mercurio (Hg), cadmio (Cd), arsénico (As), cromo (Cr), talio (Tl), y plomo
(Pb), entre otros (Prieto Méndez, et al., 2009).

De acuerdo con el incremento de la población a nivel mundial existen altos niveles presentes de
metales pesados en presencia como es el plomo, níquel, manganeso, entre otros que son muy
perjudiciales para el entorno de la humanidad, que están presentes en suelos y también en aguas

14
negras, utilizada a su vez para el riego agrícola que es una de las principales utilidades, estas aguas
pueden ser acumulados en estos sistemas de suma importancia para los agricultores. Ya que tienen
un carácter no biodegradable, estos residuos pueden ser perjudiciales a tal punto que llegan hacer
tóxicos y ejercen directamente con los cultivos y consecuentemente su biodisponibilidad pueden
resultar peligrosos. Encontramos un gran número de plantas que presentan la sensibilidad relativa con
la presencia de los metales pesados y con la tendencia de acumulación de los metales pesados.
Haciendo énfasis en los aspectos de relación con algunas de las características fisicoquímicas de los
suelos y la fitotoxicidad por metales (Prieto Méndez, et al., 2009).

Hay varias actividades y utilidades donde están presentes los metales pesados, como al momento de
escuchar la radio, al usar una linterna, al arrancar el motor de nuestro automóvil, entonces nunca
pesamos que todos estos elementos contienen metales pesados. Por lo tanto, tenemos que ser
conscientes de todas las consecuencias que existen cuando los metales se descartan, también tenemos
que entender cuando se desecha o tiramos una pila a la basura, el destino de los metales pesados
durante la fabricación de pilas y baterías y en otros procesos industriales (Vullo, 2003).

Existen varias afectaciones como en el caso particular de los suelos que afecta la fertilidad y el uso
posterior de los mismos, mientras que, en el caso de los acuíferos y aguas superficiales, pueden
comprometer seriamente el uso de estos recursos como fuente de agua para el consumo humano. La
remediación de estos ambientes contaminados mediante la utilización de métodos químicos involucra
procesos de costos excesivamente altos debido a la especificidad requerida para el aislamiento de
estos metales y así obtener un mundo libre de contaminación y sano con la vida (Vullo, 2003).

Los metales pesados son sustancias propias de la naturaleza de peso molecular alto, muy difundidos
y en muchos casos muy útiles, como, por ejemplo, el plomo que se utiliza mucho para tubería, y el
cadmio. Cuando nos referimos a la contaminación, los metales pesados tienen efectos en la salud y
tienen la característica de afectar a diferentes órganos de cuerpo humano (Eróstegui Revilla, 2009).

Las medidas sanitarias para controlar la contaminación de los metales pesados, son escasas y
lamentablemente la gente tiene que bañarse, tomar agua, etc., es decir que no hay una medida directa
como en el caso de hervir el agua en el caso de contaminación por bacterias, así que es imposible
tomar una medida directa (Eróstegui Revilla, 2009), en caso que no se pude prevenir la llegada de
estos metales al agua o al suelo tenemos las alternativas de la utilización de CCMs de una mejor
forma de purificar el agua y al mismo tiempo generar electricidad como valor agregado.

En los últimos años se ha producido un rápido aumento del nivel del plomo en el ambiente y más aún
en el alimento más vulnerable para los seres vivos que es el agua, como consecuencia de diversas

15
actividades antrópicas tales como la fundición, la minería, la fabricación de pinturas, la combustión
de combustibles y el reciclaje de baterías ácidas (Cala & Kunimine, 2003).

Las baterías ácidas de plomo desechadas son consideradas residuos peligrosos según la Directiva
Europea EEC (1991), el reciclado de estos artículos como residuos es enfocado a sus respectivos
depósitos en vertederos o su incineración ya que el porcentaje de metal recuperable puede establecerse
en torno al 98%, pero no siempre llega al reciclaje, entonces es importante que se realicen estas
investigaciones de saneamiento ambiental en beneficio para la naturaleza y principalmente para el ser
humano (Cala & Kunimine, 2003).

1.7. Suelos de paramo

La palabra paramo proviene del latin “paramus”, ubicados en regiones de alta montaña en el norte de
los Andes, su límite puede variar de acuerdo a aspectos botánicos y ecologicos (Tapia Cabrera &
Pacheco Serrano, 2015).

El paramo andino del Ecuador es unico en el mundo, de tal razon que abarca suelos con
microorganismos capaces de producir bioelectricidad a partir de un sustrato o medio vital, los
territorios de paramos han sido conservados en su mayoria intangibles, y otros han sido modificados
desde tiempos inmemoriales, estos espacios cumplen un rol fundamental destacándose su importancia
social como espacio con gran diversiad de vida, produciendose actividades ganaderas y agrícolas, el
páramo realiza un rol fundamental como habitat para infinidad de especies, obteniendose un paisaje
único y captador de fuentes de agua para poblaciones de páramo e incluso de ciudades aledañas
(Cunalata Rugel & Inca Cóndor, 2012).

16
 Fotografía 1-1. Páramo Andino – Chimborazo, Pajonal.
Fuente: Bonilla, Jhonny; 2018

Los páramos del Ecuador presentan una notable biodiversidad debido a tres factores principales: la
presencia de la cordillera de los andes y otras sierras menores, la localización ecuatorial, la existencia
de una fuente húmeda amazónica y de varias corrientes cálidas y frías frente al litoral (Caranqui, et
al., s.f.). En el Ecuador, el páramo cubre alrededor de 1.250.000 ha, equivalente al 6% del territorio
nacional (Cunalata Rugel & Inca Cóndor, 2012).

Este ecosistema se encuentra en altitudes típicamente tropical, presentando una gran variedad,
utilizando términos generales, se encuentra sobre la línea de bosques continuos, son característico de
los bosques andinos y llega hasta donde puede existir plantas por debajo del cubrimiento de nieve.
Como límite de altura inferior en el Ecuador comúnmente es de 3.500 msnm, pero las condiciones
geológicas, antrópicas y climáticas hacen que este límite varíe, encontrándose así desde 2.800 msnm,
especialmente en el sur del país, o hallando bosques cerrados hasta por sobre los 4.000 msnm. Los
páramos ecuatorianos han venido evolucionando durante millones de años hasta convertirse en un
ecosistema regulador de recursos hídricos sometido a fuertes presiones, demanda fundamental para
usos agrícolas, actividades agropecuarias, construcción de infraestructuras como embalses y acequias
de comunidades presentes cercanas (Cunalata Rugel & Inca Cóndor, 2012).

Desde hace varios años los suelos de paramo ha sido objeto de estudio, por parte de la Escuela
Superior Politécnica de Chimborazo. Gracias a su biodiversidad de flora y fauna se pueden obtener
varios resultados, como es la determinación de carbono y minerales presente en estos terrenos, así

17
como también fuentes hídricas, que han venido dando estudios de análisis. Debido a nuestra
investigación es de carácter ideal para poder cumplir con nuestras metas de estudio, teniendo una
confiabilidad muy alta en base a los resultados a obtenerse. Los microorganismos de páramo han dado
buenos resultados en investigaciones de bioelectricidad, por consecuencia de las superficies
terrenales, que se encuentran intactas por parte de maquinaria y los humanos que habitan en
comunidades cercanas.

1.8. Celdas de Combustible Microbiano

Las celdas de combustible microbiano (CCM) comprenden una nueva tecnología alternativa y
emergente en combatir la crisis energética mundial. Recientemente los sistemas de innovación para
la creación de electricidad han sido el enfoque a nuevos estudios en busca de producir energía limpia
a partir de fuentes de carbono orgánico e inorgánico como los seres microscópicos y aguas residuales,
estos sistemas operan bajo diferentes matrices o configuraciones utilizando una gran variedad de
sustratos y aguas residuales, se ha logrado un buen desempeño a temperaturas extremas produciendo
menor cantidad de CO2 en comparación a tecnologías convencionales en la producción de energía
(Armas Chugcho & Ramirez Yambombo, 2014).

Figura 5-1. Representación de una Celda de Combustible Microbiano.

18
 Fuente: Academia de Ciencias de Morelos, A.C; 2018.

La MFC (Microbial Fuel Cell) funcionan como un dispositivo bioelectroquímico que convierte
sustratos de cualquier procedencia en electricidad mediante el metabolismo de los microorganismos
electroquímicamente activos. El proceso que se efectúa en estas CCMs, es de la siguiente manera:
empezando con los compuestos orgánicos que se oxidan en la sección anódica de la misma, dando
lugar a que los electrones producidos por los microorganismos electrogénicos presentes, se transfieren
a los electrodos presentes de origen y descarga, pasando por un circuito externo o también llamado
diferencial de corriente, mientras tanto los protones se difunden en la membrana de intercambio de
protones (PEM) desde la cámara anódica hasta la cámara catódica. Los excesos de protones presentes
en la sección catódica tienden a reaccionar con el oxígeno presente de la atmosfera, debido a que, esta
última cámara es aeróbica, así llegando al equilibrio electroquímico formando H2O (Paña, 2017).

1.9.1. Estructura de una CCM

Las MFCs funcionan de manera similar a las más conocidas celdas de combustible basadas en la
oxidación de hidrógeno (Sacco, et al., s.f.). Una CCM típicamente está compuesta por dos cámaras
como se refleja en la figura 6-1, una anaeróbica y la otra es una cámara o sección aeróbica, en el
medio de entre ellas hay un separador. La sección anaeróbica contiene los sustratos orgánicos que, al
oxidarse por acción de los microorganismos, generan electrones, protones y CO2 (Revelo, et al.,
2013).

19
 Figura 6-1. Arquitectura y Funcionamiento de las CCMs.
Fuente: (Revelo, et al., 2013).

En cada una de las secciones se coloca un electrodo, el ánodo en la cámara anaeróbica y el cátodo en
la cámara aeróbica, una vez que los electrones se liberan en la cámara anódica, éstos son captados
por en ánodo, y posteriormente transferidos hacia el cátodo mediante un circuito externo o con la
ayuda de un diferenciador de corriente. Simultáneamente, en la sección anódica se generan protones
que migran hacia la sección catódica a través del separador, donde se combinan con el oxígeno de la
atmosfera para reducirse en la formación de agua con los electrones que captan directamente del
cátodo, por la razón que esta reacción no está catalizada por los microrganismos, ya que, el cátodo
está presente como abiótico (Revelo, et al., 2013).

Las CCMs son sistemas prometedores por cuanto a su facilidad técnica de llegar con su instalación,
el manejo una vez armada y conectada da una mayor simplicidad para su ejecución y producción del
recurso renovable. Acoplándose a procesos de remediación ambiental como es el caso del tratamiento
de aguas residuales. Funcionando para residuos sólidos orgánicos e inorgánicos, llegando a una
prioridad en el campo científico y cumpliendo políticas ambientales actualizadas (Armas Chugcho &
Ramirez Yambombo, 2014).

1.9.2. Sección Anódica

20
Los materiales con los que se deben construir los ánodos tienen que tener la característica de ser
conductores de electricidad, biocompatible y químicamente estables en la solución del reactor. Los
ánodos metálicos consistentes de malla de acero inoxidable no corrosivo pueden ser utilizados, así
como también placas de cobre, con el fin mejorar el transporte de electrones y producción de
bioelectricidad. El material de electrodos más versátil es el carbón, disponible como placas de grafito
compact, en barras o granuladas (De León Samayoa, 2016).

En esta sección se da el proceso de oxidación del sustrato presentes en las celdas de combustible
microbiano a través de las comunidades microbianas, resultantes como catalizadores para la
generación de dióxido de carbono y la liberación de electrones. Estos últimos son captados por el
electrodo que esté presente actuando como ánodo, y transfiriéndolos al cátodo. La glucosa es el
principal nutriente destinado para el crecimiento bacteriano (Armas Chugcho & Ramirez Yambombo,
2014), produciéndose la siguiente reacción:

𝐶6 𝐻12 𝑂6 + 6 𝐻2 𝑂 → 𝑚𝑖𝑐𝑟𝑜𝑜𝑟𝑔𝑎𝑛𝑖𝑠𝑚𝑜𝑠 𝑒𝑙𝑒𝑐𝑡𝑟𝑜𝑔𝑒𝑛𝑖𝑐𝑜𝑠 → 6 𝐶𝑂2 + 24 𝐻 + + 24 𝑒 −

Simultáneamente en la sección anódica se generan protones que se transfieren a la sección catódica

mediante una membrana de intercambio protónico (MIP) realizando la combinación con el oxígeno
del aire con la razón de reducirse y formando agua. La transferencia de electrones es muy importante
en las CCMs porque utilizan distintas vías como citocromos, mediadores y pilis (Armas Chugcho &
Ramirez Yambombo, 2014). Por consecuente los electrones emigran del ánodo para arribar a la
siguiente sección que es el cátodo.

1.9.3. Sección Catódica

El oxígeno es el aceptor más adecuado para los electrones en una CCM debido a su alto potencial de
oxidación, disponibilidad, bajo costo, sustentabilidad, y las carencias de residuos químicos. La
elección del material del cátodo afecta de manera importante el desempeño, y su variedad de
aplicaciones. Para incrementar la velocidad de reducción del oxígeno, los catalizadores de platino son
usualmente usados para oxígeno disuelto o cátodos de difusión de gas (De León Samayoa, 2016).

Por lo tanto, esta sección desempeña un papel sumamente importante en el rendimiento y la eficiencia
de las CCMs, dependiendo así de la reacción en concentración de protones con el oxígeno como

21
aceptor de electrones debido a su potencial estándar de 0.818 mV (Armas Chugcho & Ramirez
Yambombo, 2014), de bajo costo y mayor compatibilidad, produciéndose la siguiente ecuación
electroquímica.

6 𝑂2 + 24 𝐻 + + 24 𝑒 − → 12 𝐻2 𝑂

Deseando un mejor desempeño y aumentando la velocidad de reducción del oxígeno se utiliza

catalizadores químicos como el Pt (Platino) dando mejores resultados, pero las consecuencias es que
tiene un costo elevado (Armas Chugcho & Ramirez Yambombo, 2014).

1.9. Aplicaciones de la CCM

Las CCMs tienen varias aplicaciones en comparación con otras tecnologías usadas para la producción
de energía a partir de la materia orgánica (Logan & Regan , 2006). Este tipo de tecnología pueden ser
implementadas en lugares aislados donde no existe infraestructura eléctrica, produciendo así una
energía limpia (De León Samayoa, 2016).

Es una tecnología con el compromiso de generar energía eléctrica alternativa, con remoción de
materia orgánica y biorremediación, sin embargo, para aplicaciones prácticas es indispensable
mejorar la eficiencia en los procesos bioelectroquímico, con variaciones en sustratos y comunidades
bacterianas. Finalmente conseguir un buen desempeño eléctrico (Revelo, et al., 2013).

Las capacidades ambientales de realizar biorremediación para la limpieza de aguas en estación de

industrias mineras, que es un apoyo para la comunidad científica, como también tratamiento de
sustancias contaminantes como nitratos, sulfuros y sulfatos. Existen aplicaciones destacadas a nivel
tecnológico como es el caso de generación de electricidad, con CCM implantados en robots, como
los Gastrobots, los mismos que usan la energía de biomasa que ellos mismos recogen, tales como:
azúcar, fruta, insectos muertos, hierba mala, etc., existe el desarrollo de sistemas que pueden producir
electricidad a partir de materia orgánica presente en sedimentos acuáticos, estos son conocidos como
“Benthic Unattended Genarators” o “BUGs” estos estudios tiene el propósito de encender
dispositivos electrónicos en localizaciones remotas como por ejemplo en los fondos de los océanos
(Paña, 2017).

22
Existe la creación de biosensores utilizados para aplicaciones como es el estudio de correcciones
medioambientales, alimenticias y biomédicos. Los biosensores están compuestos por dispositivos
analíticos que parten de la combinación de un microorganismo en contacto directo o intimo hacia un
transductor físico en contabilidad a este microorganismo, donde se produce una señal clara y medible
en dirección proporcional a la concentración de los analitos. Utilizando estos biosensores como
suplentes o sustitutos de las enzimas libres o células libres no viables, preparadas por diferentes
métodos de adquisición. Un ejemplo claro tenemos la permeabilización donde las enzimas
periplásmicas careciendo de células completas, realizan el monitoreo de aquellas especies que actúan
como sustratos o también como inhibidores de los métodos y procesos implicados como las funciones
metabólicas de cada célula o más avanzadas como la respiración (Campuzano, 2011).

23
 CAPÍTULO Ⅱ

2. METODOLOGÍA

Este trabajo tiene técnicas acogidas de investigaciones precedentes, para la caracterización físico
química de suelo, técnica de muestreo mediante gradillas utilizando medidas de 6m x 6m en los
suelos de páramo y técnicas para la comparación de medias o promedios. Provenientes de temas
similares a la obtención de bioelectricidad mediante la utilización de celdas de combustible
microbiano, ya sean con suelos con microorganismos electrogénicos o también con bacterias puras y
cultivables, utilizando el mismo principio que tienen las CCM de configuración simple.

2.1. Parte experimental

2.1.1. Localización del suelo de paramo para el estudio

La ubicación donde se realizó este estudio se encuentra en superficies de difícil acceso, partiendo de
la ciudad de Riobamba en la provincia de Chimborazo, el camino de vía Riobamba Guaranda,
llegando a la reserva del parque nacional Chimborazo, aproximadamente 1 hora con 20 minutos en
carretera asfáltica, pasando por la comunidad de San Juan, se llega a la población de “Casa Cóndor”
con las coordenadas de 1°31.929´S como Latitud y 78°50.802´O como Longitud.

En esta ubicación como se muestra en la fotografía 1-2 presenta características como por ejemplo la
superficie de 3 cm de profundidad el suelo es sumamente húmedo, por estas y varias razones más la
presencia de vida micro bacteriana, en este lugar es potencialmente electrogénico.

24
 2Fotografía 1-2. Lugar de estudio – Páramo, superficie Pajonal.
Bonilla, Jhonny; 2018

Con ayuda de un altímetro digital, como se muestra en la fotografía 2-2,se puede captar las diferentes
variables que presenta esta ubicación, en equipo de meteorología portátil “Marca Kestrel modelo
3500”, éste equipo nos proporciona información importante como la altura, con un valor de 13185 ft
equivalente a 4018.79 metros sobre el nivel del mar, el momento de captación o muestreo de suelo
fue a las 10:45 am, la velocidad mínima del viento es de 3.6 km/h, la velocidad máxima de viendo
arroja en dato de 12.1 km/h, marcando una temperatura de 10.2 °C, humedad del 100 %, punto de
rocío de -34.1, y con una presión atmosférica de 615.3 heptopascales, equivalentes a 0.6073
atmosferas de presión.

25
 3Fotografía 2-2. Altímetro – ft sobre el nivel del mar.
Bonilla, Jhonny; 2018

2.1.2. Arquitectura y ensamblaje de carcasas para las CCMs

Se realizó el diseño por ordenador de las partes que conforman la carcasa de las CCMs, para
posteriormente ser cortadas por una máquina laser con una cortadura impecable, por lo cual están
conformadas de una base, un cubo y en la parte superior consta de piezas que sostienen los electrodos
anódico y catódico. Como se muestra en la fotografía 3-2, el cubo formado tiene una capacidad de
125 mL, resultado de las dimensiones laterales que son 5cm de largo, ancho y altura.

Para la selección de electrodos con los que se va a utilizar principalmente fueron construidas 4 celdas
de acrílico con las mismas dimensiones cada una, esto fue con el propósito de generar 2 CCMs
utilizando electrodos de Cobre metálico y 2 CCMs con electrodos de tejido de fibra de carbono.

Este material es conocido para uso de la industria publicitaria, donde estas empresas comercializan
el material y entregan al cliente de la manera que se desee, gracias a su prolongada duración y la
característica que este material no reacciona con sustancias no peligrosas, es de buena selección para
ensamblar y hacer funcionar las CCMs.

26
 4Fotografía 3-2. Diseño de piezas para las CCMs.
Bonilla, Jhonny; 2018

Cuando ya se obtienen las piezas listas y despegadas del protector de anti rayones, se procede al
ensamblaje de los cubos con las dimensiones mencionadas anteriormente, la unión de las piezas se
realiza con ayuda del pegamento liquido instantáneo y conjuntamente se añade bicarbonato, esto
ayuda para formar un tipo de costra o arcilla y así sellar los vértices para que no exista el paso de agua
o cualquier líquido que se vaya a utilizar en la investigación.

Al unir el cubo de 125 mL con la base, existen 2 orificios para insertar cada corcho a cada lado, con
la intención de que por el un lado y con ayuda de una jeringa introducir el líquido que va a contener
los microorganismos electrogénicos provenientes del suelo de páramo, en cambio que por el lado
opuesto del otro corcho de caucho y de igual manera con la ayuda de la jeringa vamos a insertar agua
destilada con la presencia del sustrato que en este caso va hacer los vegetales y frutas.

La razón por la cual los corchos son de caucho, es por la característica del caucho de no ceder el paso
de líquido que va a estar en la parte interior de la CCM, es decir, sellar la parte interna de la parte
externa de forma hermética como se encuentra en el anexo C.

La composición de la CCM de configuración simple va de forma ascendente y en la forma que va a

ser mencionada: después del cubo, donde se va a producir la reacción de óxido - reducción por parte
de las bacterias, ubicamos un cuadrado de acrílico con orificio para que ascienda los microorganismos
conjuntamente con el sustrato, consecuentemente para que tengan contacto con el electrodo, el mismo
que receptará los electrones desprendidos de esta cámara anódica, a continuación, ubicamos un
caucho con las mismas dimensiones y apariencia de acrílico antes mencionado, con la finalidad de

27
sellar bien los espacios entre las capas de acrílico, dando ninguna oportunidad a las fugas que se
puedan desarrollar entre el acrílico y el electrodo de la cámara anódica, por lo que es obvio, el
siguiente paso de instalación es la placa de cobre para las 2 CCMs que van a ser utilizadas con este
material, y respectivamente con el tejido de fibra de carbono para las 2 CCMs, después de estos
electrodos para cada caso, se ubica otra capa de caucho para evitar la fugas y aislar los electrodos, al
tener listos estos materiales y correctamente ubicados, se procede a colocar 3 piezas de acrílico con
hueco, razón por la cual el electrodo de esta cámara no va a estar pegado a la pared de la sección
anódica, debido a que interfiere en la producción de voltaje, generando un corte circuito entre la
producción y el monitoreo de voltaje, el resultado puede llegar a ser cero. A continuación se coloca
papel celofán que es el responsable de separar las 2 cámaras, la anódica y la catódica, este material
tiene que cubrir toda la superficie y actuar como membrana de intercambio protónico (MIP), dado
que sus dimensiones son 8cm x 8cm y asilan la sustancia liquida, el sustrato y los microorganismos
de la parte superior, que es nada más que la cámara catódica y permitiendo solamente el paso de
protones para que se mantenga el equilibrio, haciendo funcionar de manera correcta la CCM. Después
viene otro caucho que ya sabemos su efecto, a continuación, se coloca el electrodo que va a estar en
la cámara catódica, independientemente si es de cobre o de tejido de fibra de carbono, y finalmente
ubicamos un cuadrado de acrílico con hueco en el centro para cubrir al electrodo que va a tomar
contacto con el aire y para ser testigo de la oxidación provocada por el oxígeno y la formación de
H2O.

Como se observa en la figura 1-2, el material 1, representa los electrodos de la celda de combustible
microbiano, el material 2, representa los cauchos que detiene las fugas, el material 3, representa la
membrana de intercambio de protones (MIP), que en este caso se utilizó papel celofán, el material 4,
representa la parte anódica de la CCM y está formada por el material de acrílico y el material 5
representa la sección catódica la cual está formada por el material de acrílico.

28
 7Figura 1-2. Esquematización de los materiales que se utilizó en la formación de las CCMs.
Bonilla, Jhonny; 2018

En los filos de los 4 lados que tiene cada cuadrante de acrílico vamos a encontrar 8 orificios de 0.5
cm de diámetro, en estos orificios se insertan 8 tornillos, de principio a fin de cada CCM, esto se
realiza con el propósito de sostener firmemente cada parte y pieza de la que está hecha en ensamblada,
una de las obligaciones del ajuste de estas tuercas, es el aislamiento de los electrodos, tanto en la
sección catódica y también en la sección anódica, otro deber de la sostenibilidad firme es eliminar las
fugas que se puedan perpetrar al momento del ingreso de las sustancias que van a estar presentes en
la división anódica.

2.2. Métodos

2.2.1. Muestreo del suelo de páramo

Teniendo en cuenta que este suelo tiene sus propias características físicas y químicas, siendo
fundamental para esta investigación el alto contenido de materia orgánica, fosforo y potasio (Guambo
Galarza & Allauca Caisaguano, 2015), considerando una asepsia rigurosa con el propósito de no

29
afectar la materia orgánica y su composición con seres microscópicos, los cuales van hacer quienes
efectúen la degradación vía oxido reducción para la obtención de bioelectricidad, procedemos con la
ubicación exacta antes mencionada, los materiales que van a tener contacto con la materia orgánica,
deben estar listos para su uso, como es el caso del barreno y un instrumento que me facilite retirar el
producto del mismo. Posteriormente hacemos uso del equipo de protección personal, con ayuda de
las estacas de madera procedemos a insertarlas en el suelo con una distancia de 6x6 metros formando
un cuadrado como se ilustra en la siguiente fotografía 4-2, la quinta estaca se inserta en la mitad del
cuadrante.

5Fotografía 4-2. Ubicación de estacas en el cuadrante.

Bonilla, Jhonny; 2018

30
 6Fotografía 5-2. Inserción del barreno en el punto fijado.
Bonilla, Jhonny; 2018

Esta técnica es conocida como grillas de muestreo (Guambo Galarza & Allauca Caisaguano, 2015),
en cada posición donde se encuentran las estacas procedemos a realizar un muestreo puntual,
insertando el barreno de forma perpendicular con la superficie, como se observa en la fotografía 5-2,
y obteniendo la muestra en una profundidad de 20 a 40 cm, en la fotografía 6-2, mediante el uso del
instrumento para retirar la muestra del suelo, procedemos a ubicarlas en las diferentes fundas con su
respectivo etiquetado.

7Fotografía 6-2. Medición de 20cm a 40cm de profundidad.

Bonilla, Jhonny; 2018

31
 8Fotografía 7-2. Obtención de la muestra.
Bonilla, Jhonny; 2018

Después de obtener las 5 muestras del cuadrante cada una con un peso aproximado de 1 kg, se debe
lograr no afectar la temperatura a las que están acostumbrados los microorganismos, utilizando un
cooler para el transporte hasta el laboratorio donde se realizarán los diferentes análisis físicos y
químicos,

2.2.2. Ensayo para la selección de material de electrodos en configuración simple de CCMs

Las celdas de combustible microbiano que se van a efectuar en esta investigación, han venido
produciendo óptimos resultados, y es por ello que se sigue con investigaciones procesadas en la
ESPOCH, acerca de CCMs, este trabajo confiere varias pruebas de investigaciones como desde los
inicios de crear bioelectricidad entre microorganismos de especies provenientes de la sierra y del
oriente ecuatoriano, hasta trabajos alcanzados con bacterias puras en pequeñas celdas de una sola
cámara.

Partiendo de estudios con la utilización de fuentes de carbono y glucosa, utilizando material orgánico
como sustrato, que constituyen una fuente de carbono entre proteínas, fibra y lípidos se tuvo en cuenta
que todos aquellos productos provenientes de la naturaleza poseen gran cantidad de microorganismos,

32
degradando todos los compuestos orgánicos complejos bajo distintas condiciones entre temperatura
y hábitat de cada ser (Armas Chugcho & Ramirez Yambombo, 2014), dando como resultado la
utilización en CCMs gracias a su fácil acceso y originarios de desperdicios domésticos, como también
residuos de mercados.

Los estudios restantes como preámbulo a esta investigación, son estudios en donde se utilizaron
metales pesados como Cromo, magnesio y plomo, de los cuales con el plomo se obtuvo mejores
resultados. Considerando también la utilización de bacterias puras en CCMs donde el sustrato
utilizado fue nitratos, como fuente dietética para poblaciones que han sido afectadas por
contaminantes pertenecientes a la industria agraria, se replicó en este caso investigativo

El material a utilizarse en este estudio ha sido seleccionada a base de los preámbulos antes
mencionados, por lo tanto las CCMs debieron contener el material principal para el trasporte de
electricidad o de electrones, tales como el Cobre, Grafito como se muestra en la figura 2-2, o entre
otros (Paña, 2017).

8Figura 2-2. Electrodos de fibra de carbono en CCM con materia orgánica.

Fuente: (Armas Chugcho & Ramirez Yambombo, 2014).

2.2.3. Preparación de sustratos para la selección de electrodos en CCMs

El material primordial para las CCM de configuración simple, es la carcasa de las celdas y sus
electrodos, denominados como acrílico transparente de 3mm de espesor, para los electrodos se realizó
una selección entre tejido de fibra de carbono y Cobre como tal.

33
Ha venido haciéndose algunas modificaciones en las anteriores CCMs como es la adecuación en una
sola cámara sin la necesidad de mantener sumergido al electrodo cátodo en el agua o con la fase
catódica, sino que simplemente va a estar en contacto con el aire, empleando el oxígeno como aceptor
de electrones (Paña, 2017). A continuación, en la tabla 1-2 se enlista las sustancias que estuvieron
presentes en la cámara anódica que se necesitó para poder armar las CCMs, realizando el primer
proceso que es la selección de electrodos, antes de poner en marcha la valoración de sustratos
vegetales, nitratos y plomo para la maximización de producción de bioelectricidad, con el uso de
equipo de multímetro digital mostrándose en la fotografía 8-2.

9Fotografía 8-2. Multímetro digital MT 15.

Bonilla, Jhonny; 2018

Tabla 1-2: Sustancias para las CCMs de selección de electrodos

Sustancias para una CCM Cantidad

Agua purificada cualquiera en este caso 3L
(Vivant)
Suelo de páramo 8 gramos
Realizado por: Bonilla Jhonny, 2018

3 Tabla 2-2: Sustratos de CCMs para la selección de electrodos de 1000 ppm

Vegetales y frutas como sustratos para 1000 ppm

Frutas Cantidad (g) Vegetales Cantidad (g)

34
 Banano 0.1 Haba 0.1

Manzana 0.1 Choclo 0.1

Uva 0.1 Lechuga 0.1

Piña 0.1 Zapallo 0.1

Sandia 0.1 Tomate 0.1

Total frutas 0.5 Total vegetales 0.5

Total frutas y vegetales 1 gramo

Realizado por: Bonilla Jhonny, 2018

4Tabla 3-2: Sustratos de CCMs para la selección de electrodos de 500 ppm

Vegetales y frutas como sustratos para 500 ppm

Frutas Cantidad (g) Vegetales Cantidad (g)
Banano 0.05 Haba 0.05

Manzana 0.05 Choclo 0.05

Uva 0.05 Lechuga 0.05

Piña 0.05 Zapallo 0.05

Sandia 0.05 Tomate 0.05

Total frutas 0.25 Total vegetales 0.25

Total frutas y vegetales 0.5 gramos

Realizado por: Bonilla Jhonny, 2018

35
 10Fotografía 9-2. Pesaje de vegetales.
Bonilla, Jhonny; 2018

Los sustratos tales como frutas y vegetales fueron obtenidas del mercado popular San Alfonso, de la
ciudad de Riobamba, esto es una prueba que los sustratos que necesitamos para las CCMs tienen que
ser disponibles de residuos sólidos orgánicos, donde que estos productos son desechados a la basura,
si es que no se les da un tratamiento o uso adecuado.

Estos sustratos se utilizaron por la razón que, se ha desarrollado en base a estudios anteriores, se ha
venido utilizando estos sustratos y para obtener resultados imparciales se realizaron las mismas
concentraciones para cada electrodo a monitorearse y el pesaje de los sustratos como se observa en
la fotografía 9-2.

La valoración de sustratos parte de investigaciones previas, todas las anteriores pertenecientes al

mismo sistema de investigación, generar bioelectricidad mediante microorganismos electrogénicos
con su debido sustrato para cada CCM, ya que solo se han efectuado ensayos con un solo tipo de
sustrato, esta investigación se realiza con la finalidad de una comparación eminentemente para los
sustratos utilizados en ensayos anteriores.

Para la investigación secundaria tomada en cuanta, la fuente de producción de bioelectricidad se trata

de la configuración de matrices de CCMs con la utilización de una única bacteria aislada y
reproducida, denominada cepa Pseudomona spp, en el desarrollo de esta investigación se utilizó como

36
sustrato de las CCMs aguas residuales sintéticas conformadas por nitratos, utilizando cámaras de
contenido para 125 mL en cada CCM, los ensayos realizados en un tiempo de 15 días, la utilización
de este sustrato se efectuó mediante la problemática de aguas contaminadas para la utilización de
regadíos agrícolas y consecuentemente buscando un remediación ambiental (Paña, 2017).

Concluyendo con el ultimo sustrato tomado en cuentas, la investigación previa fue con la utilización
de metales pesados como sustratos utilizados en CCMs con la batería aislada perteneciente la familia
de la anterior investigación, los sustratos procesados en este ensayo son elementos como el zinc,
cromo y plomo, entonces debido a que este último elemento proceso mejores resultados en esta
investigación fue tomado solo en cuenta el plomo, esta investigación se realizó en un tiempo de
monitoreo de 15 días, utilizando concentraciones máximas permitidas por la constitución del ecuador
y con leyes que rigen normativas ambientales (Echeverría, et al., 2016).

2.2.4. Construcción y configuración de las CCMs para la selección de electrodos

Cuando ya se encuentro construidas las 4 CCMs, como se muestra en la fotografía 10-2, como son 2
para cada tipo de electrodos, se procedió a la preparación de la muestra de suelo en forma de
disolución, y de igual manera al sustrato en forma de disolución, esto se realizó por razones de
flexibilidad al momento de la introducción, con ayuda de jeringas y por medio de los corchos de anti
fugas, al momento de la introducción de los líquidos o las disoluciones hay que tomar en cuenta las
diferencias de presión que se presenten dentro y fuera de la división anódica de cada CCMs.

11Fotografía 10-2. Ensamblaje de las CCMs.

Bonilla, Jhonny; 2018

37
Siguiendo con el proceso, las soluciones a utilizarse en esta parte de la investigación, existen 2
disoluciones que van hacer introducidas en las CCMs, la primera es la disolución del sustrato, que,
en este caso, es el de frutas con vegetales, para la siguiente disolución es la constituida por el suelo
de paramo y agua destilada.

Para la preparación de los sustratos de 1000 ppm y 500 ppm, se debe aplicar los siguientes cálculos:

5Tabla 4-2: Cálculos de concentración para los sustratos, en la determinación de electrodos.

Para 500 ppm

𝑚𝑔 𝑑𝑒 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑡𝑜
Concentración de partes por millón (ppm) =
1 𝑙𝑖𝑡𝑟𝑜 𝑑𝑒 𝑑𝑖𝑠𝑜𝑙𝑣𝑒𝑛𝑡𝑒
500 𝑚𝑔 𝑑𝑒 𝑓𝑟𝑢𝑡𝑎𝑠 𝑦 𝑣𝑒𝑔𝑒𝑡𝑎𝑙𝑒𝑠
= = 500 𝑝𝑝𝑚
1 𝑙𝑖𝑡𝑟𝑜 𝑑𝑒 𝑎𝑔𝑢𝑎 𝑑𝑒𝑠𝑡𝑖𝑙𝑎𝑑𝑎
Para 1000 ppm

𝑚𝑔 𝑑𝑒 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑡𝑜
Concentración de partes por millón (ppm) =
1 𝑙𝑖𝑡𝑟𝑜 𝑑𝑒 𝑑𝑖𝑠𝑜𝑙𝑣𝑒𝑛𝑡𝑒
1000 𝑚𝑔 𝑑𝑒 𝑓𝑟𝑢𝑡𝑎𝑠 𝑦 𝑣𝑒𝑔𝑒𝑡𝑎𝑙𝑒𝑠
=
1 𝑙𝑖𝑡𝑟𝑜 𝑑𝑒 𝑎𝑔𝑢𝑎 𝑑𝑒𝑠𝑡𝑖𝑙𝑎𝑑𝑎
1𝑔 𝑑𝑒 𝑓𝑟𝑢𝑡𝑎𝑠 𝑦 𝑣𝑒𝑔𝑒𝑡𝑎𝑙𝑒𝑠
= = 1000 𝑝𝑝𝑚
1 𝑙𝑖𝑡𝑟𝑜 𝑑𝑒 𝑎𝑔𝑢𝑎 𝑑𝑒𝑠𝑡𝑖𝑙𝑎𝑑𝑎
Realizado por: Bonilla Jhonny, 2018

Con respecto a la preparación de la disolución donde van a estar los microorganismos electrogénicos,
es decir, el suelo de páramo y como disolvente agua purificada (Vivant), es constituida de la siguiente
manera:

6Tabla 5-2: Composición de la disolución del suelo de páramo, en la determinación de electrodos.

SUSTANCIA CANTIDAD
Suelo de páramo de 4000 msnm 2 gramos
Agua purificada (Vivant) 50 mL
Realizado por: Bonilla Jhonny, 2018

Cuando ya se tenga listo el coctel de microorganismo con sus correspondientes sustratos, el siguiente
paso es la inserción de las 2 sustancias a las celdas o cajas de acrílico con todos los elementos de una
celda de combustible microbiano listos y en posición correcta, sin intento de fuga.

38
12Fotografía 11-2. Coctel de microorganismos provenientes de suelo de paramo para las CCMs.
Bonilla, Jhonny; 2018

2.2.5. Selección de electrodos o MIC para la utilización en la CCMs, por reactivar

Empezando con la primera disolución de frutas y vegetales, se crea una solución de 1000 ppm para
las 2 primeras CCMs y 500 ppm para las siguientes 2 CCMs, tenemos que tomar en cuenta que los
electrodos a utilizarse en este primer ensayo de toma de datos de bioelectricidad mediante un
voltímetro, siendo de la siguiente manera.

7Tabla 6-2: Constitución para las 4 CCMs en la selección de electrodos

Tipo de electrodo
Cobre Tejido de fibra de Carbono
Concentración
Una CCM para 500 ppm con Una CCM para 500 ppm con electrodo
500 ppm
electrodo de cobre de Tejido de fibra de Carbono
Una CCM para 1000 ppm con Una CCM para 1000 ppm con electrodo
1000 ppm
electrodo de cobre de Tejido de fibra de Carbono
Realizado por: Bonilla Jhonny, 2018

Como cada celda de acrílico tiene un volumen interno de 125 mL, entonces la conformación de cada
celda de combustible microbiano, está constituida por 123 mL de sustrato y 2 mL de suelo de paramo
de sus respectivas disoluciones.

Las CCMs con los electrodos de cobre anódico y catódico tiene la apariencia como esta en la
fotografía 12-2.

39
 13Fotografía 12-2. Apreciación de las CCMs con cobre como electrodos.
Bonilla, Jhonny; 2018

Y para las CCMs con los electrodos de tejido de fibra de carbono anódico y catódico tiene la
apariencia como esta en la siguiente fotografía 13-2. Se debe evitar eliminar el aire presente en el
interior de cada CCM, para la incorporación de las sustancias al interior de las mismas, se realiza con
la ayuda de jeringas plásticas, introduciendo la aguja de cada jeringa por el corcho de caucho, para
así una vez extraída la aguja quede sellada la parte externa e interna de cada CCM.

Conformadas de esta manera las 4 CCM para su posterior monitoreo de producción de bioelectricidad,
y en base a los resultados arrojados, podremos seleccionar el material del electrodo que va hacer
utilizado en el siguiente paso, mediante su desempeño como tal.

14 Fotografía 13-2. Apreciación de las CCMs con tejido de fibra de carbono como electrodos.
Bonilla, Jhonny; 2018

40
2.2.6. Monitoreo de CCMs utilizando vegetales para selección de electrodos

Midiendo el pH del sustrato a utilizarse en este ensayo, nos determina un valor de 7.8 para la solución
de frutas y vegetales, verificando que la cámara anódica se encuentre sin aire, las CCM se lleva a un
monitoreo de producción de bioelectricidad, este monitoreo se lleva a cabo en el laboratorio de
contaminación ambiental perteneciente a la Facultad de Ciencias de la ESPOCH, con la ayuda del
multímetro digital conectamos al conector positivo de equipo directamente con el cátodo de la CCM,
con el conector negativo del equipo en cambio conectamos al electrodo de la cámara anódica
anaeróbica.

De esta manera la perilla del multímetro digital se conduce hasta alcanzar la escala mínima de DCV
(V), que es donde el equipo lee de forma directa y digital la producción de voltios, sí la demanda de
voltaje es mayor al intervalo marcado en la escala que esta introducida en el multímetro digital,
debidamente arrastramos la perilla al siguiente nivel de equipo para descartar el error indicado por el
equipo y así marcar el voltaje superior producido por la CCM.

El monitoreo o la toma de datos se los hizo de forma manual, en un tiempo de 8 horas con intervalos
de 30 minutos para las 4 CCM configuradas, obteniendo como datos 16 valores para cada CCM,
entonces con un total de 64 valores entre todas las CCMs configuradas para la selección de electrodos,
como se muestra en la fotografía 14-2.

A continuación, se muestra de forma gráfica la maniobra que se realizó en la medida de valores de la

CCM y con ayuda del multímetro digital MT 15.

15Fotografía 14-2. Toma de datos utilizando el multímetro digital.

Bonilla, Jhonny; 2018

41
2.2.7. Activación de las CCMs con la utilización de vegetales, nitratos y plomo como sustratos

La primera investigación hace realce a la utilización de materia orgánica como fuente de sustrato para
la producción de bioelectricidad en CCMs contenidas en diferentes tamaños y volúmenes, compuestas
por suelos de paramo provenientes del sector Pichan Central pertenecientes a la Provincia de
Chimborazo, utilizando 3 matrices de diferentes tamaños, conteniendo frutas y vegetales con un peso
total de 1000g y con una duración de 60 días (Armas Chugcho & Ramirez Yambombo, 2014).

De acuerdo a resultados obtenidos de la producción de bioelectricidad para la selección adecuada, se

realiza la activación de CCMs definitivas que van hacer monitoreadas por un tiempo de 15 días,
tomadas en cuenta por 15 valores para cada CCM contenido los sustratos correspondientes para cada
una, en un proceso donde se compara directamente con un blanco, es decir, que una de las CCMs no
constara con el sustrato, dada la situación que solo estará contenida del suelo de páramo, y agua
purificada (Vivant). Para los 3 restantes CCMs estarán compuestas de sustratos y el suelo de páramos,
todas con la misma concentración y misma cantidad bacteriana, con el fin llegar a la equidad entre
sustratos de vegetales con frutas, nitratos y plomo respectivamente, en un volumen total de 125 mL,
dado que es la máxima capacidad de volumen perteneciente en la cámara anódica en cada CCM que
será monitoreada mediante un multímetro digital.

2.2.8. Ensamblaje y activación de la CCM como grupo control

Se realiza una CCM perteneciente al blanco de comparación, con el propósito del efecto que realiza
el sustrato sobre las bacterias electrogénicas, para la CCM sin sustrato se utilizó los materiales
situados en la tabla de materiales y equipos experimentales.

8Tabla 7-2: Sustancias para la CCM sin sustrato.

Sustancias Cantidad
Suelo de páramo de 4000 msnm 2g
Agua destilada para la solución bacteriana 50 mL
Agua purificada (Vivant) para la CCM 123 mL
Realizado por: Bonilla Jhonny, 2018

42
 16Fotografía 15-2. Preparación de la disolución de suelo.
Bonilla, Jhonny; 2018

Al contener todos los equipos y sustancias necesarias, se procede al ensamblaje de la celda de

combustible microbiano específicamente para la configuración de cero sustratos, solamente las
bacterias provenientes del suelo de páramo disueltas en agua destilada, para ello se realiza la mezcla
de H2O y suelo de páramo en un Erlenmeyer de 250 mL, contenidas en las siguientes proporciones:
pesando 2 gramos de suelo de paramo de 4000 msnm con 50 mL de agua destilada, esta mezcla se
homogeniza por un tiempo de 10 minutos, notando que el disolvente se encuentre de una tonalidad
oscura, por la razón de haber un gran contenido de precipitado.

El siguiente paso es ajustar los tornillos de la CCM ensamblada para evitar la presencia de fugas, una
vez que se realizó esto, continuamos con la introducción de las sustancias, como se ofrece el protocolo
de la siguiente secuencia:

 Por el primer corcho introducir 20 mL de agua destilada con la jeringa

 Realizar el mismo paso por 3 ocasiones.
 Por el corcho secundario introducir 2 mL del agua de suelo de páramo, con la jeringa de 3 mL.
 Posteriormente introducir los 63 mL restantes por el corcho del agua destilada, es decir, por el
corcho primario.

43
 Para este paso se efectúa de la siguiente manera, 3 veces con la ayuda de la jeringa de 20 mL y
los restantes 3 mL con la ayuda de otra jeringa que no haya sido contaminada por el suelo de
paramo.
 Todos estos utensilios deben estar esterilizados.

De esta forma se llena la cámara anódica de esta CCM que no contiene el sustrato, y por lo tanto cabe
de forma precisa los 125 mL pertenecientes a esta sección, ya que el electrodo de cobre de la cámara
anódica se encuentra cubierta por los microorganismos electrogénicos y el agua destilada, una mezcla
concretada homogéneamente.

Una nota muy importante es la diferencia de presión, interna y externa a la cámara anódica, ya que al
momento que se introduce el líquido, en la parte interna aumenta la presión de tal cámara, entonces,
lo recomendable es extraer el aire presente en esta zona, de acuerdo con la gravedad y la bomba se
sección, que en este caso es la jeringa que se está utilizando, realizando este procedimiento la
diferencia de presión de la parte interna y externa de la CCM va aproximarse a cero, con la finalidad
de que no exista desbordes o fugas y evitar la presencia de oxígeno en la cámara anódica, realizando
el electrodo anódico un mejor trabajo.

2.2.9. Ensamblaje y activación de la CCM con vegetales como sustrato

Para los sustratos pertenecientes a la familia de productos orgánicos, presentamos las frutas y
vegetales, al realizar esta configuración de CCM tomamos aspectos relevantes que ayuda a esta
investigación, ya que es un caso primordial por la facilidad que le damos a los microorganismos en
la producción de bioelectricidad con la aportación de fuentes vitamínicas, fibra, glucosa, etc., para
esta CCM necesitamos los materiales que están citados en la tabla 22-2 de materiales y equipos
experimentales.

Para esta CCM el sustrato tiene una concentración de 1000 ppm que va hacer el igualitario para todos
los sustratos de los 3 CCM restantes.

La composición de la solución del sustrato está determinada por los siguientes productos de la tabla
8-2 y realizando los cálculos respectivos de la tabla 9-2.

9Tabla 8-2: Conformación del sustrato en la CCM de frutas y vegetales.

Vegetales y frutas como sustratos para 1000 ppm

44
 Frutas Cantidad (g) Vegetales Cantidad (g)
Banano 0.1 Haba 0.1

Manzana 0.1 Choclo 0.1

Uva 0.1 Lechuga 0.1

Piña 0.1 Zapallo 0.1

Sandia 0.1 Tomate 0.1

Total frutas 0.5 Total vegetales 0.5

Total frutas y vegetales 1 gramo

Mas H2 O destilada 1000 mL
Realizado por: Bonilla Jhonny, 2018

10Tabla 9-2: Cálculo para la composición de sustrato frutas y vegetales de concentración.

Concentración en 1000 ppm de frutas y vegetales como sustratos

𝑚𝑔 𝑑𝑒 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑡𝑜
Concentración de partes por millón (ppm) =
1 𝑙𝑖𝑡𝑟𝑜 𝑑𝑒 𝑑𝑖𝑠𝑜𝑙𝑣𝑒𝑛𝑡𝑒
1000 𝑚𝑔 𝑑𝑒 𝑓𝑟𝑢𝑡𝑎𝑠 𝑦 𝑣𝑒𝑔𝑒𝑡𝑎𝑙𝑒𝑠
=
1 𝑙𝑖𝑡𝑟𝑜 𝑑𝑒 𝑎𝑔𝑢𝑎 𝑑𝑒𝑠𝑡𝑖𝑙𝑎𝑑𝑎
1𝑔 𝑑𝑒 𝑓𝑟𝑢𝑡𝑎𝑠 𝑦 𝑣𝑒𝑔𝑒𝑡𝑎𝑙𝑒𝑠
= = 1000 𝑝𝑝𝑚
1 𝑙𝑖𝑡𝑟𝑜 𝑑𝑒 𝑎𝑔𝑢𝑎 𝑑𝑒𝑠𝑡𝑖𝑙𝑎𝑑𝑎
Realizado por: Bonilla Jhonny, 2018

Antes de realizar el corte con el cuchillo de las frutas y vegetales se procede a un enjuague riguroso
con agua destilada para quitar todo rastro se ceniza, tierra o agente externo a los productos orgánicos,
después de realizar este procedimiento, el cuchillo sirve para obtener trozos muy pequeños entre
pulpas y cortezas de la frutas y vegetales, esto se realiza con la facilidad de ayudar a disolverse el
producto después del pesaje en el agua destilada.

Recordemos que la parte catódica o el electrodo de cobre que se encuentra realizando el papel de
cátodo tiene que estar en contacto con el oxígeno proveniente del aire atmosférico y para la cámara
anódica donde se produce las reacciones de óxido reducción esta conformadas de las soluciones y
sustancias que se encuentran en la siguiente tabla 10-2.

45
 11Tabla 10-2: Composición para la disolución bacteriana en la CCM de vegetales.

Sustancias Cantidad
Suelo de para de 4000 msnm 2g
Agua purificada (Vivant) 50 mL
Realizado por: Bonilla Jhonny, 2018

Después de constatar de estar bien sellado la cámara anódica perteneciente a esta CCM, realizamos
el mismo procedimiento que se hizo para la CCM sin sustrato, teniendo en cuenta el diferencial de
presión de la parte interna con la parte externa, entonces insertamos la cantidad de soluciones como
indica en la Tabla 11-2 y se observa los sustratos disponibles en la fotografía 16-2.

12Tabla 11-2: Composición de la cámara anódica en la CCM de vegetales.

Sustancias en disolución Cantidad

Solución bacteriana proveniente de paramo a 4000 msnm 2 mL
Solución del sustratos frutas y vegetales 123 mL
Total de contenido en la cámara anódica 125 mL
Realizado por: Bonilla Jhonny, 2018

17Fotografía 16-2. Sustratos para la CCM de frutas y vegetales.

Bonilla, Jhonny; 2018

46
2.2.10. Ensamblaje y activación de la CCM con nitratos como sustrato

Para la activación de la CCM con nitratos de carbono, se realizó estudios preliminares, siguiendo el
método de la formación de agua residual sintética es conformada de agua purificada (Vivant) y el
compuesto de nitrato de potasio, dando la característica de pertenecer al grupo de fertilizantes de
mayor utilización de la industria y trabajo agronómico (Paña, 2017). Dando resultados exitosos en la
producción de bioelectricidad, con una bacteria en específico, pero como esta investigación trata de
la valoración de sustratos para la producción de bioelectricidad, no es necesario un riguroso estudio
a los microorganismos que se utiliza, mientras tanto el enfoque va específicamente para los sustratos,
y para ello en el diseño experimental se especifica rigurosamente que los sustratos de cada celda de
combustible microbiano, se tenga una igualdad de concentración, para garantizar la investigación
dirigida especialmente para los sustratos a valorarse.

Para preparar la celda de combustible microbiano es necesario contar con los materiales y equipos
tomados en cuenta en la siguiente tabla, realmente es el mismo procedimiento que se realizó para la
celda de combustible de frutas y vegetales, pero con la diferencia, que en este caso se utilizara otro
tipo de sustrato.

Utilizando el mismo procedimiento de ensamblaje que para la anterior celda de combustible

microbiana, nos enfocamos con la preparación de la CCM se emplea nitratos como sustrato, en el
mercado nacional este compuesto está formado de la formulación de nitrato de potasio (𝐾𝑁𝑂3 ), como
esta sustancia la obtenemos en estado sólido, es necesario disolver en el disolvente universal, gracias
a su alto nivel de disolubilidad con el agua.

La concentración del sustrato para la celda de combustible microbiano de 1000 ppm como todos los
sustratos, se realiza siguiendo los cálculos y utilizando la formula presente en la Tabla 12-2, para
mayor exactitud y con la utilización del laboratorio de protección ambiental de investigación,
hacemos uso de la balanza analítica como se muestra en la fotografía 17-2.

13Tabla 12-2: Cálculo para la concentración de nitratos.

Concentración en 1000 ppm de 𝐾𝑁𝑂3

Concentración en partes por millón (ppm) =

𝑚𝑔 𝑑𝑒 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑡𝑜 1000 𝑚𝑔 𝑑𝑒 𝐾𝑁𝑂3
=
1 𝑙𝑖𝑡𝑟𝑜 𝑑𝑒 𝑑𝑖𝑠𝑜𝑙𝑣𝑒𝑛𝑡𝑒 1 𝑙𝑖𝑡𝑟𝑜 𝑑𝑒 𝑎𝑔𝑢𝑎 𝑑𝑒𝑠𝑡𝑖𝑙𝑎𝑑𝑎
1𝑔 𝑑𝑒 𝐾𝑁𝑂 3
= 1 𝑙𝑖𝑡𝑟𝑜 𝑑𝑒 𝑎𝑔𝑢𝑎 𝑑𝑒𝑠𝑡𝑖𝑙𝑎𝑑𝑎 = 1000 𝑝𝑝𝑚 de nitratos

47
 Realizado por: Bonilla Jhonny, 2018

18Fotografía 17-2. Pesaje de nitratos para la CCM correspondiente.

Bonilla, Jhonny; 2018

Se utiliza la misma mezcla de agua con suelo de páramo que se utilizó para las dos anteriores celdas
de combustible microbiano, debido a que solo se utiliza 2 mL para CCM, es decir, la proporción que
se presenta tabla 13-2, como en casos pasados, antes de introducir a la cámara anódica de la CCM
realizamos una homogenización con un tiempo de 5 minutos, se realiza esta ejecución con la finalidad
de ascender los precipitados del Erlenmeyer que contienen esta sustancia.

14Tabla 13-2: Composición para la disolución bacteriana en la CCM en nitratos.

Sustancias Cantidad
Suelo de para de 4000 msnm 2g
Agua purificada (Vivant) 50 mL
Realizado por: Bonilla Jhonny, 2018

Para la introducción del contenido a la cámara anódica correspondiente a esta celda de combustible
microbiano, utilizamos la proporción presente en la tabla 19-2, de forma gráfica en la fotografía 18-
2, siguiendo los pasos previamente anunciados en la conformación de la CCM utilizando frutas y
vegetales como sustratos. Al momento de disolver el sustrato se requiere agitar con la varilla de
agitación prolongadamente la solución por al menos 5 minutos para que tenga una consistencia

48
homogénea y el sustrato esté presente en todas las partes y direcciones de del líquido con la
correspondiente concentración.

19Fotografía 18-2. Solución de 1000 ppm para nitratos.

Bonilla, Jhonny; 2018

Como dato importante debemos evitar que todas las CCMs configuradas hasta este momento no
presente ninguna cantidad de oxígeno en la cámara anódica y las sustancias que estén en la misma se
encuentren sobrepasando el electrodo de cobre anódico.

15Tabla 14-2: Contenido de la cámara anódica en la CCM de nitratos.

Sustancias en disolución Cantidad

Solución bacteriana proveniente de paramo a 4000 msnm 2 mL
Solución del sustrato con 𝐾𝑁𝑂3 123 mL
Total de contenido en la cámara anódica 125 mL
Realizado por: Bonilla Jhonny, 2018

2.2.11. Ensamblaje y activación de la CCM con plomo como sustrato

Con estudios y ensayos realizados a microorganismos capaces de absorber metales pesados en

efluentes pertenecientes de industrias mineras, los investigadores en biosorción se convirtieron en
ejes activos a través de numerosos biosorbentes en los que se proponen diferentes orígenes para la
eliminación de metales y / o colorantes, en los últimos años la atención con investigaciones hacia los
métodos biológicos para conseguir el tratamiento de efluentes, se encuentran en los procesos de

49
comercialización (Echeverría, et al., 2016). Con la utilización de metales pesados como es este caso
se utiliza el plomo, para investigaciones de remediación, produciendo un valor agregado como es la
generación de bioelectricidad, se ejecuta de estudios previos la utilización de este metal, formando
agua sintética a partir del nitrato de plomo (𝑃𝑏(𝐾𝑁𝑂3 )2 ) obteniéndolo de forma comercial a este
metal pesado, con mejores resultados en ensayos previos. Para preparar esta CCM se necesitan los
materiales que se encuentran citados en la tabla 22-2 de materiales y equipos experimentales, similar
a las anteriores CCMs con sustratos diferentes y mayor coincidencia con la utilización de nitratos
como sustrato.

Para la concentración del sustrato de plomo se realizó el mismo calculo correspondiente a los dos
anteriores sustratos, ya que todos tienen la misma concentración de 1000 ppm y se lo realizó
utilizando la siguiente formula de la tabla 15-2, al instante de que se obtuvo la sustancia con el
disolvente, fue necesario con la varilla de agitación, agitar la solución por alrededor de 10 minutos,
este tiempo es mayor al tiempo utilizado en nitratos por la razón de que el nitrato de plomo no es tan
soluble como el nitrato de potasio, y en concentraciones no muy mayores es altamente toxico para
cualquier ser vivo.

16Tabla 15-2: Cálculo para la concentración de plomo.

Concentración en 1000 ppm para el 𝑃𝑏(𝐾𝑁𝑂3 )2

Concentración en partes por millón (ppm) =

𝑚𝑔 𝑑𝑒 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑡𝑜 1000 𝑚𝑔 𝑑𝑒 𝑃𝑏(𝐾𝑁𝑂3 )2
=
1 𝑙𝑖𝑡𝑟𝑜 𝑑𝑒 𝑑𝑖𝑠𝑜𝑙𝑣𝑒𝑛𝑡𝑒 1 𝑙𝑖𝑡𝑟𝑜 𝑑𝑒 𝑎𝑔𝑢𝑎 𝑑𝑒𝑠𝑡𝑖𝑙𝑎𝑑𝑎
1𝑔 𝑑𝑒 𝑃𝑏(𝐾𝑁𝑂 )
3 2
= 1 𝑙𝑖𝑡𝑟𝑜 𝑑𝑒 𝑎𝑔𝑢𝑎 𝑑𝑒𝑠𝑡𝑖𝑙𝑎𝑑𝑎 = 1000 𝑝𝑝𝑚 de plomo

Realizado por: Bonilla Jhonny, 2018

La sustancia debe estar bien disuelta como se lo observa en la siguiente fotografía 19-2, con el fin de
que el fluido tenga la misma concentración en todo el recipiente y así no altere los resultados de la
investigación al momento de realizar el monitoreo y la comparación con los otros sustratos.

50
 20Fotografía 19-2. Solución de 1000 ppm para plomo.
Bonilla, Jhonny; 2018

Con el mismo procedimiento de los anteriores casos como para los nitratos y frutas, vegetales.
Utilizamos la solución bacteriana, acogemos e introducimos los microorganismos sin antes agitar de
forma prolongada esta solución con la misma finalidad de realizar el ascenso del precipitado en el
Erlenmeyer de 250 mL compuesta de la misma cantidad perteneciente a la tabla 22-2.

17Tabla 16-2: Composición para la disolución bacteriana en la CCM de plomo como sustrato.

Sustancias Cantidad
Suelo de para de 4000 msnm 2g
Agua purificada (Vivant) 50 mL
Realizado por: Bonilla Jhonny, 2018

En la fotografía 23-2 se puede notar la ejecución de la inserción del líquido que contiene el plomo
como sustratos a través de una jeringa y por el corcho de caucho que solo es para inserte el sustrato,
debido a que por la parte posterior se encuentre el corcho de caucho por donde vamos a introducir la
población bacteriana de suelo de páramo, y a medida que se ingrese la sustancia debemos aspirar el
aire presente en el interior de esta sección.

51
 21Fotografía 20-2. Introducción de sustrato plomo a la CCM.
Bonilla, Jhonny; 2018

Para el contenido de la cámara anódica de la celda de combustible microbiano con la capacidad de

generar bioelectricidad utilizando plomo, un metal pesado como sustrato, está conformada de la
manera como se estipula en la tabla 17-2, y antes de realizar la succión del sustrato en necesario agitar
el recipiente que este lo contiene, y de la misma forma utilizar jeringas nuevas para cada sustrato y
cada CCMs, evitando la contaminación, como se observa la fotografía 20-2.

18Tabla 17-2: Contenido de la cámara anódica en la CCM de plomo como sustrato.

Sustancias en disolución Cantidad

Solución bacteriana proveniente de paramo a 4000 msnm 2 mL
Solución del sustrato con (𝑃𝑏(𝐾𝑁𝑂3 )2 ) 123 mL
Total de contenido en la cámara anódica 125 mL
Realizado por: Bonilla Jhonny, 2018

Teniendo listos las 4 CCMs y realizando todos los pasos consecutivos, estamos listos para la
adquisición de datos, se los realizará con la ayuda del equipo denominado multímetro digital, que
tiene como característica medir el voltaje producido en cada celda de combustible microbiano, la
forma y el tiempo de cómo se realiza el monitoreo y la adquisición de datos de forma manual se lo
describe en el literal 2.2.11.

52
2.2.12. Monitoreo y adquisición de datos para las CCMs reactivadas

Verificando que la cámara anódica de cada celda de combustible microbiano se encuentre sin aire,
las CCMs se llevan a un monitoreo de producción de bioelectricidad, este monitoreo se lleva a cabo
en el laboratorio de Protección Ambiental perteneciente a la Facultad de Ciencias de la ESPOCH,
con la ayuda del multímetro digital conectamos al conector negativo de equipo directamente con el
ánodo de la CCM, con el conector positivo del equipo en cambio conectamos al electrodo de la cámara
catódica aeróbica para cada CCM.

De esta manera la perilla del multímetro digital se conduce hasta alcanzar la escala mínima de VCD
(V), que es donde el equipo lee de forma directa y digital la producción de voltios, sí la demanda de
voltaje es mayor al intervalo marcado en la escala que esta introducida en el multímetro digital,
debidamente arrastramos la perilla al siguiente nivel de equipo para descartar el error indicado por el
equipo y así marcar el voltaje superior producido por la CCM.

El monitoreo o la toma de datos se los hizo de forma manual, durante un tiempo de 15 días, lo cual
este tiempo fue el periodo que se hizo funcionar todas las CCMs simultáneamente, con la finalidad
de realizar la comparación entre sí, en este caso es de comparación de sustratos. Todos los días de
monitoreo se realizó la medición en el intervalo de horario de entre las 10:00 horas y 11:00, la razón
por la cual se realizó la lectura en este intervalo de tiempo del día, es para garantizar la equidad para
todas la CCM de su respectivo sustrato utilizadas en esta investigación. Obteniendo para este ensayo
un total de 15 valores en todos los días para cada CCM, con un total de 60 valores entre todas las
CCMs reactivadas, así se determinó si el sustrato interviene o afecta en la producción de
bioelectricidad. Esto ayudó para valorar el mejor sustrato con el cual se propondrá la mejor propuesta
de configuración para la celda de combustible microbiano, con los mejores caracteres y buenos
resultados.

53
 22Fotografía 21-2. Toma de datos para las CCMs activadas.
Bonilla, Jhonny; 2018

En la fotografía 21.2., se muestra de forma gráfica la maniobra que se realizó para la medida de
valores de la CCM con la utilización de sustratos, el blanco de comparación, usando como electrodos
las placas de cobre y con ayuda del multímetro digital MT 15.

2.2.13. Evaluación de voltaje producido por las CCMs, con la utilización de vegetales, nitratos y
plomo como sustratos

Una vez obtenidos los datos de producción de bioelectricidad emanadas por las bacterias
electrogénicas provenientes de los suelos de páramos a una altura de 4000 msnm, a través de la
reacción electroquímica de óxido – reducción y degradando el sustrato introducido para cada ocasión,
cada valor es introducido en una hoja de cálculo de programa Excel, realizando el cálculo de
sumatoria, promedio y compactación de datos, adjuntado graficas dinámicas para una mejor
resolución de lectura de resultados. Mediante colores para cada resultado de sustrato y prolongando
la recta polinómica.

Mientras que una línea de tendencia polinómica utilizada para resaltar datos adquiridos, es una línea
curva que facilita sus resultados y en general conlleva a la utilización cuando los datos fluctúan, como,
por ejemplo, para analizar las pérdidas y ganancias de un conjunto de datos con gran dispersión o
para este caso la ganancia y perdida de voltaje al producir bioelectricidad. Por lo tanto, el orden del

54
polinomio puede otorgarse mediante al nuero de fluctuaciones de los datos obtenidos o también de
acuerdo a la función de los valores máximos y mínimos que nos otorgué la curva a tratar los resultados
(Microsoft, 2007), otorgando una mejor comparación entre resultados que están en el siguiente
capítulo.

Los valores obtenidos y comparados en unidades de voltaje, determinan si los sustratos utilizados y
propuestos influyen en los microrganismos para una mejor producción de bioelectricidad, si es así,
cuál de todos los sustratos utilizados, es el mejor, para concluir con la principal configuración de
celda de combustible microbiano, observándose de la parte superior en la fotografía 22-2,
produciendose una satisfactoria obtención de bioelectricidad en relación y comparación con
investigaciones anteriores de este mismo tipo.

23Fotografía 22-2. Selección del mejor sustrato.

Bonilla, Jhonny; 2018

2.2.14. Propuesta de la mejor configuración de CCM

Cuando ya se tiene una visión de la mejor celda de combustible microbiano, mediante la adquisición
de datos y resultados demandador hasta esta parte de la investigación, se procede la toma de
decisiones, dado por hecho que entre las CCMs utilizadas con sustratos y la CCM que no se usó
ningún sustrato, entonces la mayor producción de bioelectricidad fue de parte de las CCMs que se
utilizó sustratos de vegetales, nitratos y plomo. Mientras que la mejor producción de bioelectricidad
que se generó entre estos sustratos utilizados, fue por parte de las frutas y vegetales.

55
Para ello se realiza la última etapa de esta investigación, la cual se procede a la reactivación de la
mejor CCM donde es, con la utilización de frutas y vegetales, este proceso se realiza con la finalidad
de dar a conocer la forma de la mejor CCM y su producción de forma cuantitativa de bioelectricidad.

Para este paso a seguir es necesario la utilización de todos los elementos que forman parte de la CCM
donde las frutas y vegetales son protagonistas como sustratos, otro de los materiales principales para
esta CCM que se va a monitorear es la utilización de electrodos de cobre, como se observa el electrodo
de la parte superior en la fotografía 23-2, ya que recordemos que fueron los mejores actuadores en la
producción de bioelectricidad en comparación con el tejido de fibra de carbono.

24Fotografía 23-2. Electrodo de cobre.

Bonilla, Jhonny; 2018

2.2.15. Ensamblaje de la CCM propuesta, utilizando vegetales como sustrato

Como estamos hablando de la mejor CCM. que nos va a brindar la mayor producción de
bioelectricidad y con resultados anteriores a este ensayo, se considera las mismas cantidades de
sustratos entre frutas y vegetales, como se está presente en la siguiente tabla.

19Tabla 18-2: Conformación del sustrato para mejor propuesta de CCM.

Vegetales y frutas como sustratos para 1000 ppm

Frutas Cantidad (g) Vegetales Cantidad (g)
Banano 0.1 Haba 0.1

Manzana 0.1 Choclo 0.1

Uva 0.1 Lechuga 0.1

56
 Piña 0.1 Zapallo 0.1

Sandia 0.1 Tomate 0.1

Total frutas 0.5 Total vegetales 0.5

Total frutas y vegetales 1 gramo

Mas H2 O destilada 1000 mL
Realizado por: Bonilla Jhonny, 2018

En tanto para concentración que se utilizará en este ensayo, serán los mismos 1000 ppm con que se
ha venido desarrollando esta investigación, para obtener la concentración deseada, tendremos que
utilizar la ecuación figada en la siguiente tabla 19-2.

20Tabla 19-2: Cálculo para la composición de sustrato en la mejor propuesta de CCM.

Concentración en 1000 ppm de frutas y vegetales como sustratos

𝑚𝑔 𝑑𝑒 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑡𝑜
Concentración de partes por millón (ppm) =
1 𝑙𝑖𝑡𝑟𝑜 𝑑𝑒 𝑑𝑖𝑠𝑜𝑙𝑣𝑒𝑛𝑡𝑒
1000 𝑚𝑔 𝑑𝑒 𝑓𝑟𝑢𝑡𝑎𝑠 𝑦 𝑣𝑒𝑔𝑒𝑡𝑎𝑙𝑒𝑠
=
1 𝑙𝑖𝑡𝑟𝑜 𝑑𝑒 𝑎𝑔𝑢𝑎 𝑑𝑒𝑠𝑡𝑖𝑙𝑎𝑑𝑎
1𝑔 𝑑𝑒 𝑓𝑟𝑢𝑡𝑎𝑠 𝑦 𝑣𝑒𝑔𝑒𝑡𝑎𝑙𝑒𝑠
= = 1000 𝑝𝑝𝑚
1 𝑙𝑖𝑡𝑟𝑜 𝑑𝑒 𝑎𝑔𝑢𝑎 𝑑𝑒𝑠𝑡𝑖𝑙𝑎𝑑𝑎
Realizado por: Bonilla Jhonny, 2018

Correspondiente a los microrganismos electrogénicos utilizados para la producción de bioelectricidad

en esta CCM, se utiliza las sustancias y cantidades presentes en la siguiente tabla, dando una prioridad
a la muestra de carácter fresco, también realizando una agitación entre el soluto y el disolvente, con
un tiempo de 5 minutos para alcanzar la mayor homogeneidad posible.

21Tabla 20-2: Composición para la disolución bacteriana en la mejor propuesta de CCM.

Sustancias Cantidad
Suelo de para de 4000 msnm 2g
Agua purificada (Vivant) 50 mL
Realizado por: Bonilla Jhonny, 2018

57
Después del ajuste de las 8 tuercas que conforman la instalación de las 2 cámaras de la respectiva
CCM, entre la cámara anódica y catódica se debe realizar una minuciosa observación por donde puede
realizarse algún tipo de fuga de líquido, para lo consecuente es necesario presionar todas las capas de
cada cámara en la CCM, con respecto al electrodo de cobre presente en la parte catódica es necesario
que no tenga la más mínima cantidad de contacto con el agua, ya que tiene que tomar contacto
netamente con el oxígeno del aire, con respecto a la cámara anódica, es netamente anaeróbica ya que
la cantidad justa que tiene este espacio coincide con la cantidad que está presente en la tabla 21-2
donde se encuentra las sustancias que forman la parte anódica y donde se produce la bioelectricidad
en consecuente a las reacciones de óxido - reducción que efectúan los seres microscópicos
unicelulares bio electrogénicos.

22Tabla 21-2: Composición de la cámara anódica en la mejor propuesta de CCM.

Sustancias en disolución Cantidad

Solución bacteriana proveniente de paramo a 4000 msnm 2 mL
Solución del sustratos frutas y vegetales 123 mL
Total de contenido en la cámara anódica 125 mL
Realizado por: Bonilla Jhonny, 2018

Para introducir el total de 125 mL de sustancias en la cámara anódica debemos tomar muy en cuenta
la diferencia de presión que se produce entre esta cámara y el exterior presente en la fotografía 24-2.
Para lograr una óptima introducción de sustancias, con la ayuda de las jeringas se debe controlar la
presión que se mantiene dentro de la cámara, esta es la única alternativa por la razón que en la parte
exterior no se puede controlar la presión, entonces la jeringa actúa de la misma forma que una bomba
de succión.

Dado que, a medida que se introducen las sustancias hacia la cámara anódica, se debe realizar la
expulsión de aire presente en la misma cámara anódica, con una sola meta, extraer todo el aire y evitar
las fugas que por consecuencias de la diferencia de presión se produzca en la celda de combustible
microbiano de frutas y vegetales como sustratos propuesta para la mejor producción de
bioelectricidad.

58
 25Fotografía 24-2. Introducción bacteriana a la CCM propuesta.
Bonilla, Jhonny; 2018

2.2.16. Monitoreo y evaluación de producción de bioelectricidad de la CCM de mejor

configuración

Este monitoreo o adquisición de datos se realiza mediante un multímetro que nos brinda resultados
en unidades de voltaje, de la misma marca y modelo que se ha realizado a los ensayos anteriores, con
el equipo mencionado se procede a la medición de voltaje para esta CCM, con los cable de este equipo
se toma contacto con los electrodos de cobre de la CCM propuesta para la mayor producción de
bioelectricidad, el cable va conectado al cátodo de la CCM y el cable negro o positivo va conectado
a la parte anódica de la CCM, obteniéndose en el display del equipo de medida un valor mayor a cero,
acorde al número de voltios que la celda de combustible microbiano emende en ese instante.

El tiempo de monitoreo o de adquisición de datos para esta CCM de mejor configuración se realiza
por un tiempo de 7 días, entonces se toman valores diarios, donde este valor es tomado a la misma
hora de cada día, para este caso se realizó entre las horas de 10 y 11 horas de cada día, obteniéndose
al final de este monitoreo un total de 7 datos o valores con respecto a este ensayo de monitoreo de
voltaje.

La apariencia de la celda de combustible microbiano se encuentra en la fotografía 25-2, donde

presenta la parte catódica y anódica con sus respetivos electrodos de cobre metálico.

Consecuentemente de estos valores se realizará un análisis de datos y conformación de graficas

estadísticas para determinar la valoración de voltaje o bioelectricidad producida por esta CCM que
resulta ser la mejor de esta investigación

59
 26Fotografía 25-2. Aspecto de la CCM propuesta de la investigación.
Bonilla, Jhonny; 2018

2.3. Técnicas

2.3.1. Análisis del suelo

La mayoría de análisis para suelo que se realizan, han sido para índice de fertilidad, con el fin de
aportar investigaciones en diferentes ubicaciones con respecto a los productos que se cosechan en la
zona estudiada. El suelo de páramo que se ha muestreado debe pasar por un análisis químico de pH,
así también con los análisis físicos en este caso la temperatura y la conductividad, este último
mencionado, refleja la capacidad de cationes presentes en la muestra de suelo, mientras mayor es su
conductividad, mayormente se prolonga su capacidad de producir bioelectricidad y directamente
proporcional a la materia orgánica, como presentes las 6 muestras se suelo para análisis en la
fotografía 26-2.

27Fotografía 26-2. Muestras listas para análisis.

Bonilla, Jhonny; 2018

60
2.3.2. Análisis de pH

Se necesitan 6 vasos de precipitación para realizar la medición del pH, los 5 primeros para las
muestras procedentes de cada punto de suelo de páramo, en cada vaso de precipitación se adiciona
10 gramos de muestra, con respeto al sexto vaso de precipitación, se adiciona 2 gramos de cada
muestra provenientes de los 5 puntos, así suman los 10 gramos para cada análisis de pH, ya que el
ultimo vaso contiene una mezcla o un promedio equivalente de todas las muestras recogidas.

28Fotografía 27-2. Panel de lectura, pH metro.

Bonilla, Jhonny; 2018

Siguiendo con la lectura del pH de las muestras, la preparación acoge el agua destilada en un
equivalente de 2 a 1; es decir por cada 10 gramos de suelo de páramo se añade 20 mililitros de agua
destilada, que posteriormente con ayuda de la varilla de agitación, la mezcla debe estar lo más
homogéneamente posible, para así obtener mejores resultados en cuanto a la muestra de su análisis.
Después de la lectura para cada medida de pH, con ayuda de la piseta rociamos agua destilada sobre
el electrodo de medida perteneciente al equipo, esto con la finalidad de quitar cualquier rastro de la
muestra anterior, para proceder con una adecuada lectura en la nueva muestra.

2.3.3. Análisis de temperatura

Utilizando la misma dosis y muestras del análisis de pH, se procede a medir la temperatura con ayuda
de un termómetro digital, realizando el mismo procedimiento de preparación que se efectuó con la
lectura para pH, mediante los siguientes materiales.

61
Entre el agua destilada y la muestra debe tener la misma consistencia de dosificación que en el ensayo
anterior, es decir de 2 a 1; removiendo y agitando hasta obtener una mezcla homogénea, mostrado en
la fotografía 28-2, procurando que el termómetro entre de manera suave hasta la parte central del vaso
de precipitación, por ende, hasta la mitad de la muestra, ya que existen microorganismos que pueden
llegar a marcar temperaturas extremadamente altas o bajas.

29Fotografía 28-2. Dosificación de muestra 1:2 suelo agua.

Bonilla, Jhonny; 2018

2.3.4. Análisis de conductividad

La conductividad está marcada por unidades de media de uS (micro Siemens), ya que es un indicativo
para conocer la facilidad de poder transmitir la corriente eléctrica por parte de un material o sustancia,
que en este caso se trata de materia orgánica presente en el suelo de páramo, se trata del
desprendimiento de electrones que presenta estas sustancias, logrando identificar el movimiento y
flujo eléctrico que presentan las muestras preparadas, observando la fotografía 29-2. La
conductividad eléctrica también depende mucho de la configuración presente en cada muestra como
son los microrganismos o los materiales que los conforman, y de la temperatura que se está expuesto
tal muestra.

Utilizando los materiales y equipos citados en la tabla anterior, y siguiendo el mismo mecanismo de
preparación de las 6 muestras de suelo provenientes de los 2 análisis anteriores, continuamos
midiendo la conductividad, ya que estas muestras tienden a precipitar, tenemos que esta con constante
agitación, una vez obtenida la mezcla homogenizada, se procede con la introducción del equipo,
llegando hasta la mitad de la misma, en el inicio de la lectura nos vamos a encontrar con datos
sumamente volátiles, por consecuente a ello tenemos que ser precavidos con los datos arrojados por
el equipo, mientras se espera hasta obtener una lectura constante y con poca alteración.

62
 30Fotografía 29-2. Lectura de conductividad a la muestra.
Bonilla, Jhonny; 2018

No podemos olvidar que, al finalizar la lectura de cada una de las muestras debemos lavar con agua
destilada el equipo para no tener errores y que la lectura sea de forma limpia y segura para las
próximas muestras a medirse.

2.4. Lugar de investigación

El suelo de páramo ha venido siendo objeto de mucho interés para el estudio a nivel profesional en el
área ambiental, gracias a su biodiversidad en bienes y servicios ambientales, tanto como indicadores
biológicos por su poca intervención agrícola y humana, por la razón que presenta una gran cantidad
de carbono orgánico total y minerales teniendo una gran importancia para esta investigación y para
todos los estudios relacionados a la producción de bioelectricidad (Guambo Galarza & Allauca
Caisaguano, 2015). Por ende, este estudio de equipamiento y monitoreo a todas las celdas de
combustible microbiano utilizadas en toda la investigación, se llevó acabo en el laboratorio de
Análisis Instrumental y en el laboratorio de Protección Ambiental; los dos laboratorios pertenecientes
a la Facultad de Ciencias aledaños al edificio principal de tal facultad, desarrollado en la Escuela

63
Superior Politécnica de Chimborazo, este centro académico se encuentra en la zona urbana de la
ciudad de Riobamba capital de la Provincia de Chimborazo, una de las 24 Provincias de la Republica
de Ecuador.

2.4.1. Equipos y materiales experimentales

En la tabla 22-2 se describe la necesidad que tiene esta investigación en cuando a los materiales,
quipos y cantidades en cada etapa de la misma:

23Tabla 22-2: Materiales y equipos experimentales

CANTIDAD
ETAPAS DE LA INVESTIGACIÓN MATERIALES Y EQUIPO
UTILIZADA
Hasta el arribo de la Equipo para montaña 1

ubicación, donde se Altímetro 1

extrae la muestra a Paraguas en caso 1

utilizarse
Mochila para implementos 1
Estacas de 60 cm de largo con filo 5
puntiagudo
Flexómetro de 10 metros de longitud 1
Bolsas de sellado al vacío Ziploc 5
Materiales y
(20x30)cm
equipos para la Etiquetas para las bolsas de muestra 5
Muestreo del suelo
obtención del suelo enumeradas del 1 al 5
de páramo
de páramo Combo o martillo 1
Soga, piola o cuerda 1
Barreno para más de 40cm de 1
profundidad
Guantes quirúrgicos 1
Gafas 1
Alcohol 2L
Mascarillas 1
Bolsa de basura plástica grande 2
Cuchara de metal mediana 1
Materiales y equipo Cantidad
Materiales de CCMs para la selección de
Acrílico trasparente de 3 mm de 1 plancha de 1.5m x
electrodos
grosor 1.5m

64
 Mandil 1
Mascarilla 1
Guantes 1
Pinza tipo alicate 1
Tornillos y tuercas de 0.5 cm 32
Tejido de fibra de carbono de 8cm x 4
8cm
Planchas de cobre de 8cm x 8cm 4
Cauchos para evitar fugas 16
Papel celofán (actuador como 4
separador de cámaras anódica y
catódica)
Pegamento liquido instantáneo (2 g) 15
Bicarbonato 1 lb
Jeringa de 3 mL 4
Jeringa de 50 mL 4
Erlenmeyer 1000mL 1
Erlenmeyer 250mL 1
Varilla de agitación 2
Cuchillo 1
Espátula 1
Corchos de 1 cm de diámetro 8
Equipos Cantidad
Equipos de CCMs para la selección de
Cortadora a láser de acrílico 1
electrodos
Multímetro digital MT 15 1
Balanza analítica 1
Materiales y equipos Cantidad
Celda de acrílico (5x5x5)cm 1
Electrodos de cobre 2
MIP 1
Tornillo – tuerca 8
materiales y equipos para la CCM sin Mandil 1
sustrato. Mascarilla 1
Espátula 1
Jeringa de 3 mL 2
Jeringa de 20 mL 1
Erlenmeyer 250 mL 1
Balanza analítica 1

65
 Papel aluminio (7x7)cm 1
Cauchos anti fugas 4
Erlenmeyer 1000 mL 1
Materiales y equipos Cantidad
Celda de acrílico (5x5x5)cm 1
Electrodos de cobre 2
MIP 1
Tornillo – tuerca 8
Mandil 1
Mascarilla 1
materiales y equipos para la CCM con Espátula 2
vegetales como sustrato. Jeringa de 3 mL 2
Jeringa de 20 mL 1
Erlenmeyer 250 mL 1
Balanza analítica 1
Papel aluminio (7x7)cm 3
Cauchos anti fugas 4
Erlenmeyer 1000 mL 1
Cuchillo 1
Guantes de látex par 1
Materiales y equipos Cantidad
Celda de acrílico (5x5x5)cm 1
Electrodos de cobre 2
MIP 1
Tornillo – tuerca 8
Mandil 1
Materiales y equipos para la CCM Mascarilla 1
utilizando nitratos como sustrato. Espátula 2
Jeringa de 3 mL 2
Jeringa de 20 mL 1
Erlenmeyer 250 mL 1
Balanza analítica 1
Papel aluminio (7x7)cm 2
Cauchos anti fugas 4
Erlenmeyer 1000 mL 1

66
 Corcho para la introducción de
sustancia 2
Guantes de látex par 1
Materiales y equipos Cantidad
Celda de acrílico (5x5x5)cm 1
Electrodos de cobre 2
MIP 1
Tornillo – tuerca 8
Mandil 1
Mascarilla 1
Espátula 2
Materiales y equipos para la CCM
Jeringa de 3 mL 2
utilizando plomo como sustrato.
Jeringa de 20 mL 1
Erlenmeyer 250 mL 1
Balanza analítica 1
Papel aluminio (7x7)cm 2
Cauchos anti fugas 4
Erlenmeyer 1000 mL 1
Corcho para la introducción de
sustancia 2
Guantes de látex par 1
Materiales y equipos Cantidad
Celda de acrílico (5x5x5)cm 1
Electrodos de cobre 2
MIP 1
Tornillo – tuerca 8
Mandil 1
Materiales y equipos para mejor Mascarilla 1
propuesta de CCM. Espátula 2
Jeringa de 3 mL 2
Jeringa de 20 mL 1
Erlenmeyer 250 mL 1
Balanza analítica 1
Papel aluminio (7x7)cm 3
Cauchos anti fugas 4
Erlenmeyer 1000 mL 1

67
 Cuchillo 1
Guantes de látex par 1
Realizado por: Bonilla Jhonny, 2018

2.4.2. Equipos y materiales de laboratorio

En base a los equipos y materiales pertenecientes al laboratorio están presentes en la tabla 23-2 en
cuanto concierne a los materiales utilizados junto con sus cantidades.

24Tabla 23-2: Materiales y equipos para medición de pH

ETAPAS DE LA INVESTIGACIÓN MATERIALES, EQUIPO Y CANTIDAD

Materiales y equipos Cantidad
pH metro 1

Vasos de precipitación de 100 mL 6

Materiales y equipos para
Espátula 1
medición de pH, del suelo de
Balanza analítica 1
páramo
Agua purificada (Vivant) 1L

Varilla de agitación 1

Piseta 1

Par de guantes de látex 1

Materiales y equipos Cantidad

Termómetro digital 1

Vasos de precipitación de 100 mL 6

Espátula 1
Materiales y equipos para medir la
Balanza analítica 1
temperatura, del suelo de páramo
Agua purificada (Vivant) 1L

Varilla de agitación 1

Piseta 1

Mascarilla 1

Par de guantes de látex 1

Materiales y equipos para Materiales y equipos Cantidad

conductividad del suelo de páramo Conductímetro (uS) 1

Vasos de precipitación de 100 mL 6

68
 Espátula 1

Balanza analítica 1

Agua purificada (Vivant) 1L

Varilla de agitación 1

Piseta 1

Mascarilla 1

Par de guantes de látex 1

Realizado por: Bonilla Jhonny, 2018

2.5. Diseño técnico de la investigación

El proyecto que se ha desarrollado en esta investigación, proviene de la reactivación de celdas de

anteriores investigaciones con temas similares, para lo cual se utilizó suelo de páramo proveniente de
la reserva de producción de fauna Chimborazo, ubicado a 4000 msnm con un muestreo de 5 puntos
en forma de zigzag, a una profundidad de 20cm a 40cm en la superficie vegetal de Pajonal. Se
determinó ensayos de análisis de suelo entre ello el pH, conductividad y temperatura; se probó dos
tipos de electrodos para la utilización final entre electrodos de cobre y electrodos de tejido de fibra
de carbono, donde el mejor productor y conductor de electrones fue de parte de los electrodos de
cobre. Mediante este preámbulo se procedió a la reactivación de las celdas de combustible microbiano
con la utilización de 3 diferentes sustratos acompañado de un blanco testigo, determinándose así su
influencia sobre los microorganismos electrogénicos, dato que, los sustratos como los vegetales,
nitratos y plomo aseguran su mejor eficiencia con respecto al blanco o CCM sin sustratos, todo esto
en la producción de bioelectricidad con una duración de 15 días. Mediante este proceso se pudo
realizar la valoración de todos 3 sustratos utilizados en este ensayo, con todos los datos registrados
en la herramienta de análisis numérico denominado Excel, donde, con la ayuda de gráficos y
parámetros de cálculo obtenemos el resultado de mejores valores y promedios, con estos resultados
se propone la utilización de métodos y herramientas estadísticas para desarrollar una comparación de
medias; empezando por la prueba de normalidad, prueba de varianzas homogéneas, por ende basta
que una de las dos pruebas no se cumpla para desarrollar la comparación de medias por el método de
la prueba de Kruskal – Wallis, ya que es una prueba no paramétrica, debido a que no se cumple con
el supuesto de homogeneidad de varianzas. Nos ofrece toda la información en base a la agrupación
de conjuntos de intervalos mediante una comparación múltiple y ajustada entre medias o promedios.
Finalmente se propone la mejor configuración de CCM para la máxima producción de bioelectricidad,
reactivando la celda con los sustratos de frutas y vegetales y utilizando los electrodos de cobre como

69
ánodo y cátodo. Consiguiendo así que se maximice la obtención de bioelectricidad en comparación
con los ensayos anteriores.

31Fotografía 30-2. CCMs y multímetro digital.

Bonilla, Jhonny; 2018

2.6. Planteamiento de la hipótesis

Hipótesis textual

La utilización de 3 sustratos en las CCMs sí influye en la producción de bioelectricidad.

Hipótesis estadística

Las CCMs con sustratos producen el mismo valor que la CCM que no contiene algún sustrato.

𝐇𝐨 : 𝛍1 = 𝛍2 = 𝛍3 = 𝛍4

Al menos una CCM con sustrato diferente produce mayor bioelectricidad que una CCM sin sustrato.

Las concentraciones de sustratos utilizados en las CCMs influyen en la producción de voltaje con la
obtención de resultados cuantitativos.

𝐇𝟏 : 𝛍1 < 𝛍2 = 𝛍3 = 𝛍4

Para el presente estudio nos interesa saber si los diferentes sustratos a mismas concentraciones
influyen en la producción de Bioelectricidad, para ello se ha contrastado la siguiente hipótesis:

70
 𝐇𝐨 : 𝛍1 = 𝛍2 = 𝛍3
𝐇𝟏 : 𝛍i ≠ 𝛍j para algun i ≠ j

Donde:

𝛍1 = CCM sin sustrato

𝛍2 = CCM con sustrato de frutas y vegetales

𝛍3 = CCM con sustrato de nitratos

𝛍4 = CCM con sustrato de plomo

Variables dependientes: Generación de bioelectricidad (mV).

Variables independientes: variedad de sustratos, como vegetales/frutas, nitratos y plomo (ppm).

Factor de Interés: Sustratos (Vegetales, Nitrato y Plomo)

Variable Respuesta: Bioelectricidad

71
 CAPÍTULO Ⅲ

3. RESULTADOS Y DISCUSIÓN

3.1. Resultados de los análisis del suelo de páramo

En la parte experimental de muestreo del suelo de páramo se obtuvo 5 muestras de diferentes puntos
en el área de 6 x 6, donde a cada una de estas se realizó los análisis que se muestra en la siguiente
tabla. Existe un sexto análisis, ya que es la mezcla de todas las muestras anteriores como muestra en
los resultados.

25Tabla 1-3: Resultados de los análisis del suelo de páramo.

Altura 4000 msnm Tipo se suelo pajonal

muestra µS temp. (°C) ph
1 de 5 203 18.7 7.09
2 de 5 237 18.5 7.26
3 de 5 312 17.8 7.01
4 de 5 378 17.9 7.24
5 de 5 393 18.6 7.33
mezcla 1-5 346 18.6 7.15
total 1869 110.1 43.08
pro. 6 total 311.50 18.35 7.18
Realizado por: Bonilla Jhonny, 2018

En la gráfica 1-3, que forma los resultados de análisis de conductividad para las muestras de suelo de
paramo a 4000 msnm.

72
 µS
500

400

300

200

100

0
0 2 4 6 8

Gráfico 1-3. Conductividad del suelo de páramo.

Bonilla Jhonny, 2018

Se indica la gráfica 2-3, que forma los resultados de análisis de temperatura en °C para las muestras
de suelo de paramo a 4000 msnm.

temp. (°C)
18,8
18,7
18,6
18,5
18,4
18,3
18,2
18,1
18
17,9
17,8
17,7
0 1 2 3 4 5 6 7

Gráfico 2-3. Temperatura del suelo de páramo en °C.

Bonilla Jhonny, 2018

A continuación, se indica la gráfica 3-3, que forma los resultados de medición de pH en las muestras
de suelo de paramo a 4000 msnm.

73
 ph
7,35
7,3
7,25
7,2
7,15
7,1
7,05
7
6,95
0 1 2 3 4 5 6 7

Gráfico 3-3. PH de las muestras del suelo de páramo.

Bonilla Jhonny, 2018

3.2. Resultados de las CCMs para la Selección de electrodos o MIC

En los datos obtenidos en forma de producción de bioelectricidad con las CCM utilizando 2 tipos de
electrodos anódicos y catódicos, se muestra en la siguiente tabla los resultados, tanto para las CCM
con tejidos de fibra de carbono, como para las CCM con electrodos de cobre. El monitoreo se llevó
acabo como muestra el tiempo determinado en la tabla 2-3, donde los resultados fueron otorgados
favorables para el cobre como mejor producción de bioelectricidad y es el electrodo que se utiliza en
posteriores ensayos de monitoreo.

26Tabla 2-3: Resultados para la selección de tipo de electrodo.

RESULTADOS DE BIOELECTRICIDAD PARA LA SELECCIÓN DE ELECTRODOS EN (V)

cobre tejido de fibra de carbono
Cantidad Tiempo 500 ppm 1000 ppm 500 ppm 1000 ppm
1 0 horas y 30 min 0.024 0.087 0.014 0.028
2 1 horas y 00 min 0.035 0.074 0.018 0.024
3 1 horas y 30 min 0.051 0.084 0.017 0.036
4 2 horas y 00 min 0.076 0.096 0.016 0.045
5 2 horas y 30 min 0.062 0.104 0.017 0.053
6 3 horas y 00 min 0.085 0.116 0.018 0.058
7 3 horas y 30 min 0.081 0.148 0.029 0.046
8 4 horas y 00 min 0.092 0.242 0.059 0.069
9 4 horas y 30 min 0.092 0.276 0.051 0.075
10 5 horas y 00 min 0.118 0.296 0.075 0.086
11 5 horas y 30 min 0.162 0.337 0.072 0.089
12 6 horas y 00 min 0.148 0.348 0.083 0.102

74
 13 6 horas y 30 min 0.175 0.338 0.084 0.108
14 7 horas y 00 min 0.162 0.345 0.069 0.112
15 7 horas y 30 min 0.182 0.387 0.085 0.114
16 8 horas y 00 min 0.204 0.405 0.074 0.108

sumatoria 1.749 3.683 0.781 1.153

promedios 0.11 0.23 0.05 0.07
Realizado por: Bonilla Jhonny, 2018

En el grafico 4-3, se ilustra de forma comparativa los datos obtenidos en este ensayo, razón por la
cual se aprecia de manera redundante la mejor producción de bioelectricidad, dando como prioridad
la utilización de cobre como electrodos en la valoración de sustratos para la obtención de
bioelectricidad mejorando la adquisición de datos en los siguientes ensayos.

0,45

0,4

0,35

0,3
resultado de v

0,25

0,2

0,15

0,1

0,05

0
1 3 5 7 9 11 13 15 17
cobre 500 ppm numero de toma de valores
cobre 1000 ppm
carbono 500 ppm
carbono 1000 ppm

Gráfico 4-3. Resultados de bioelectricidad para la selección de electrodos en voltaje.

Bonilla Jhonny, 2018

Realizando las líneas de tendencia polinómica como se ilustra en el grafico 5-3, se muestra la mejor
producción de bioelectricidad dando como ganador en la utilización de electrodos y con el fin de
75
mejorar la demanda de bioelectricidad al material de cobre tanto en la cámara anódica como en la
cámara catódica, así utilizar al cobre como membranas en monitoreo en base a la activación de celdas
de combustible microbiano utilizando sustratos. Dedicándose al camino de obtener la celda de
combustible microbiano propuesta en esta investigación.

0,45

0,4

0,35

0,3
resultado de v

0,25

0,2

0,15

0,1

0,05

0
1 3 5 7 9 11 13 15 17
-0,05
cobre 500 ppm numero de toma de valores

cobre 1000 ppm

carbono 500 ppm

Gráfico 5-3. Tendencia polinómica para la selección de electrodos.

Bonilla Jhonny, 2018

3.3. Resultados de las CCMs para valoración de sustratos

En la tabla 3-3 se muestra los resultados obtenidos del monitoreo manual de las CCM activadas para
la determinación del mejor sustrato con el propósito de proponer la mejor configuración de celda de
combustible microbiano a partir de suelos de páramo y sustratos orgánicos e inorgánicos en este
trabajo de investigación.

27Tabla 3-3: Resultados para la valoración de sustratos utilizados.

RESULTADOS DE BIOELECTRICIDAD EN (V)

DIA blanco vegetales nitratos plomo

76
 1 0.043 0.604 0.062 0.135
2 0.074 0.615 0.085 0.095
3 0.062 0.572 0.097 0.703
4 0.104 0.518 0.142 0.406
5 0.082 0.489 0.107 0.328
6 0.083 0.481 0.127 0.321
7 0.091 0.396 0.129 0.331
8 0.107 0.381 0.116 0.341
9 0.115 0.386 0.191 0.348
10 0.111 0.334 0.204 0.354
11 0.086 0.324 0.182 0.379
12 0.074 0.297 0.157 0.346
13 0.077 0.293 0.159 0.328
14 0.082 0.275 0.168 0.319
15 0.091 0.261 0.148 0.314

sumatoria 1.282 6.226 2.074 5.048

promedio 0.09 0.42 0.14 0.34
Bonilla Jhonny, 2018

Para el gráfico 6-3, se ilustra las mejores producciones de bioelectricidad, donde está entre los
sustratos de frutas y vegetales y plomo, pero con dados reales y promedios finales de determina como
ganador a la producción de bioelectricidad en la CCM donde se utilizó frutas y vegetales como
sustratos.

77
 0,8
COMPARACIÓN DE SUSTRATOS
0,7

0,6
BIOELECTRICIDAD V

0,5

0,4

0,3

0,2

0,1

0
-1 1 3 5 7 9 11 13 15
blanco b vegetales a tiempo / dias

nitratos a plomo a

Gráfico 6-3. Resultados de datos finales para la determinación de sustrato.

Bonilla Jhonny, 2018

Determinando las líneas de tendencia polinómicas para cada resultado de sustratos, se verifica que
existe una posible homogeneidad entre dos sustratos, los cuales es para plomo y para frutas y
vegetales. Con datos detallados en la tabla 3-3 dando como mejor producción de bioelectricidad a los
sustratos de frutas y vegetales, pero como existe esta incógnita de homogeneidad se realiza en
consecuencia una prueba de comparación de medias o promedios.

78
 0,8

0,7

0,6
BIOELECTRICIDAD V

0,5

0,4

0,3

0,2

0,1

0
-1 1 3 5 7 9 11 13 15
tiempo / dias
blanco b vegetales a
nitratos a plomo a
Polinómica (blanco b) Polinómica (vegetales a)
Polinómica (nitratos a) Polinómica (plomo a)

Gráfico 7-3. Líneas de tendencia polinómica finales para la determinación de sustrato.

Bonilla Jhonny, 2018

3.4. Comprobación de hipótesis

3.4.1. Resultados de la comparación de medias o promedios

PRUEBA DE NORMALIDAD

𝐻0 : 𝐿𝑜𝑠 𝑑𝑎𝑡𝑜𝑠 𝑝𝑟𝑜𝑣𝑖𝑒𝑛𝑒𝑛 𝑑𝑒 𝑢𝑛𝑎 𝑑𝑖𝑠𝑡𝑟𝑖𝑏𝑢𝑐𝑖ó𝑛 𝑛𝑜𝑟𝑚𝑎𝑙

𝐻1 : 𝐿𝑜𝑠 𝑑𝑎𝑡𝑜𝑠 𝑛𝑜 𝑝𝑟𝑜𝑣𝑖𝑒𝑛𝑒𝑛 𝑑𝑒 𝑢𝑛𝑎 𝑑𝑖𝑠𝑡𝑟𝑖𝑏𝑢𝑐𝑖ó𝑛 𝑛𝑜𝑟𝑚𝑎𝑙

28Tabla 4-3: Datos para la obtención de p-valor.

Kolmogorov-Smirnova

Estadístico gl Sig.

79
 BIOELECTRICIDAD ,105 45 ,200*
Bonilla Jhonny, 2018

Gráfico 8-3. Probabilidad de bioelectricidad normal.

Bonilla Jhonny, 2018

La tabla anterior presenta un p-valor de 0,2 mayor a 0.05, por lo tanto, se rechaza la hipótesis nula.
Esto nos indica que los datos provienen de una distribución anormal.

PRUEBA DE VARIANZAS HOMOGÉNEAS

𝐻0 : 𝜎12 = 𝜎22 = 𝜎32 = 𝜎42

𝐻1 : 𝐴𝑙 𝑚𝑒𝑛𝑜𝑠 𝑢𝑛𝑎 𝑒𝑠 𝑑𝑖𝑓𝑒𝑟𝑒𝑛𝑡𝑒

29Tabla 5-3: Homogeneidad de varianzas.

Prueba de homogeneidad de varianzas

Bioelectricidad

80
 Estadístico de
Levene gl1 gl2 Sig.

3,757 2 42 ,032

Bonilla Jhonny, 2018

De la tabla anterior el p-valor es 0,032 menor a 0.05 lo que indica que se rechaza la hipótesis de
homogeneidad de las varianzas y se concluye que las concentraciones no tienen varianzas
homogéneas.

Prueba de varianzas iguales: BIOELECTRICIDAD vs. CONCENTRACIONES

Prueba de Bartlett
Valor p 0,000
1
CONCENTRACIONES

0,00 0,05 0,1 0 0,1 5 0,20 0,25

Intervalos de confianza de Bonferroni de 95% para [Link].

Gráfico 9-3. Prueba de varianzas para resultados de bioelectricidad respecto a la concentración.

Bonilla Jhonny, 2018

Con los análisis de los supuestos (Normalidad y homogeneidad de varianzas), se observa que no se
cumple con el supuesto de homogeneidad de varianzas, por este motivo se aplica una prueba no
paramétrica para la comparación de medias.

COMPARACIÓN DE MEDIAS
PRUEBA DE KRUSKAL-WALLIS

81
Desarrollo:
Factor de Interés: Sustratos (Vegetales, Nitrato y Plomo)
Variable Respuesta: Bioelectricidad
Planteamiento de Hipótesis:
Para el presente estudio nos interesa saber si los sustratos influyen en la producción de
Bioelectricidad, para ello se ha contrastado la siguiente hipótesis:

𝐇𝐨 : 𝛍1 = 𝛍2 = 𝛍3
𝐇𝟏 : 𝛍i ≠ 𝛍j para algun i ≠ j

RESOLUCIÓN
30Tabla 6-3: Rangos para la comparación de medias.

Rangos

CONCENTRACIONES N Rango promedio

BIOELECTRICIDAD VEGETALES 15 32,60

NITRATO 15 9,40

PLOMO 15 27,00

Total 45

Bonilla Jhonny, 2018

31Tabla 7-3: Datos estadísticos para la comparación de medias.

Estadísticos de pruebaa,b

BIOELECTRICIDAD

Chi-cuadrado 25,490

gl 2

Sig. asintótica ,000

a. Prueba de Kruskal Wallis

82
 b. Variable de agrupación: CONCENTRACIONES
Bonilla Jhonny, 2018

Región de rechazo
Si 𝒑 − 𝒗𝒂𝒍𝒐𝒓 < 𝟎, 𝟎𝟓 , se rechaza la hipótesis nula

Decisión
Obteniendo que p-valor es menor a 0,05, se rechaza la hipótesis nula.
Con el presente análisis se llega a la conclusión de que la comparación de sustratos utilizados en la
producción de bioelectricidad difiere significativamente. Así pues, podemos afirmar que se han
encontrado diferencias estadísticamente significativas entre la utilización de sustratos, en la
producción de bioelectricidad.

32Tabla 8-3: Comparaciones múltiples de medias o promedios.

Comparaciones múltiples

Variable dependiente: Bioelectricidad

HSD Tukey

Intervalo de confianza al 95%

Diferencia de
(I) conc (J) conc medias (I-J) Error estándar Sig. Límite inferior Límite superior

Vegetales Nitrato ,27680* ,03882 ,000 ,1825 ,3711

Plomo ,07853 ,03882 ,119 -,0158 ,1728

Nitrato Vegetales -,27680* ,03882 ,000 -,3711 -,1825

Plomo -,19827* ,03882 ,000 -,2926 -,1040

Plomo Vegetales -,07853 ,03882 ,119 -,1728 ,0158

Nitrato ,19827* ,03882 ,000 ,1040 ,2926

*. La diferencia de medias es significativa en el nivel 0.05.

Bonilla Jhonny, 2018

Subgrupos homogéneos

83
33Tabla 9-3: Determinación de subgrupos homogéneos.

Bioelectricidad

HSD Tukeya

Subconjunto para alfa = 0.05

Concentración N 1 2

Nitrato 15 ,1383

Plomo 15 ,3365

Vegetales 15 ,4151

Sig. 1,000 ,119

Se visualizan las medias para los grupos en los subconjuntos

homogéneos.

a. Utiliza el tamaño de la muestra de la media armónica = 15,000.

Bonilla Jhonny, 2018

84
Gráfico 10-3. Producción de bioelectricidad en base a la comparación de promedios.
Bonilla Jhonny, 2018

En la tabla anterior se observa un grupo homogéneo; el grupo homogéneo se encuentra en plomo y

vegetales esto nos indica que sus medias son estadísticamente iguales, observando así una diferencia
de medias no significativa ya que el valor p (0,119) es mayor a 0,05.

3.4.2. Comprobación de hipótesis textual

Hipótesis textual

La utilización de 3 sustratos diferentes en las CCMs sí influye en la producción de bioelectricidad.

Hipótesis estadística

Las CCMs con sustratos producen el mismo valor que la CCM que no contiene algún sustrato.

85
 𝐇𝐨 : 𝛍1 = 𝛍2 = 𝛍3 = 𝛍4

Al menos una CCM con sustrato diferente produce mayor bioelectricidad que una CCM sin sustrato.

Las concentraciones de sustratos utilizados en las CCMs influyen en la producción de voltaje con la
obtención de resultados cuantitativos.

𝐇𝟏 : 𝛍1 < 𝛍2 = 𝛍3 = 𝛍4

Donde:

𝛍1 = CCM sin sustrato

𝛍2 = CCM con sustrato de frutas y vegetales

𝛍3 = CCM con sustrato de nitratos

𝛍4 = CCM con sustrato de plomo

Variables dependientes: Generación de bioelectricidad (mV).

Variables independientes: Concentración de sustratos (ppm).

Factor de Interés: Sustratos (Vegetales, Nitrato y Plomo)

Variable Respuesta: Bioelectricidad

Resolución

La hipótesis nula menciona que todas las configuraciones de CCMs reactivadas producen la misma
bioelectricidad, con sustratos y sin sustratos, es decir los niveles de producción son iguales; mientras
que la hipótesis alterna nos dice que las configuraciones de CCMs con la utilización de sustratos es
mayor a la restante o a la que no tiene sustrato.

De esta forma se rechaza la hipótesis nula y se acepta la hipótesis alterna.

86
3.5. Resultados de la mejor configuración de CCM propuesta en la investigación

Cuando ya se tiene una visión de la mejor celda de combustible microbiano, de acuerdo a la mayor
producción de bioelectricidad, usando los materiales, equipos y sustancias como sustratos de acuerdo
a los ensayos realizados anterior mente, se puede tener claro la forma de cómo va a estar formado una
CCM con el fin de tener una producción constante y sobresaliente en relación a las demás CCMs que
se utilizaron como proceso de selección.

Realizando la activación de la mejor CCM o la CCM propuesta en esta investigación, como dato
oficial se obtiene al mejor sustrato para la producción de bioelectricidad, encaminado los resultados
favorables a la utilización de frutas y vegetales, dando resultados esperados como se ilustra en la
tabla10-3 produciendo los mejores resultados de bioelectricidad determinados en esta investigación,
por ende los mejores resultados adquiridos se producen en base a la utilización de electrodos anódicos
y catódicos utilizando el metal cobre y como sustratos las frutas y vegetales.

34Tabla 10-3: Resultados de bioelectricidad para la CCM propuesta.

RESULTADOS DE
BIOELECTRICIDAD
EN V DE LA CCM PROPUESTA
día frutas y vegetales
1 0.485
2 0.526
3 0.614
4 0.497
5 0.489
6 0.456
7 0.468

sumatoria 3.535
promedio 0.51
Bonilla Jhonny, 2018

87
De forma gráfica se representa los resultados de los valores adquiridos mediante el método manual
para la CCM planteada y definida en unidades de voltaje que concluye esta investigación con
resultados favorables y contundentes en valores positivos y significativos.

GRAFICA: RESULTADOS DE BIOELECTRICIDAD

DE LA CCM PROPUESTA EN UNIDADES DE (V)
0,7

0,6

0,5
BIOELECTRICIDAD V

0,4

0,3

0,2

0,1

0
1 2 3 4 5 6 7
tiempo / dias
vegetales

Gráfico 11-3. Resultados de bioelectricidad de la CCM propuesta.

Bonilla Jhonny, 2018

La línea de tendencia para los resultados finales de este trabajo de investigación representados en el
siguiente gráfico, representa la propuesta definida por el autor pertinente. Dando como resultados
óptimos y mejores que los esperados en el planteamiento de esta investigación.

88
 LÍNEA DE TENDENCIA POLINÓMICA EN RESULTADOS DE
BIOELECTRICIDAD DE LA CCM PROPUESTA
0,7

0,6
BIOELECTRICIDAD V

0,5

0,4

0,3

0,2

0,1

0
1 2 3 4 5 6 7

vegetales Polinómica (vegetales)

tiempo / dias

Gráfico 12-3. Línea de tendencia polinómica de bioelectricidad de la CCM propuesta.

Bonilla Jhonny, 2018

Dando como la mejor propuesta a la CCM de bacterias electrogénicas provenientes del suelo de
páramo, utilizando frutas y vegetales como sustratos, con electrodos de cobre para su conductividad
de electrones y con la cámara anódica de 125 centímetros cúbicos de volumen.

3.6. Discusión de resultados

Una celda de combustible microbiano es de forma sencilla una pila que emite energía eléctrica a
través de un voltaje determinado, su funcionalidad hace referencia al transporte de electrones desde
la cámara anódica hasta la cámara catódica, mediante una seria de microorganismos electrogénicos,
y emanando agua a la atmosfera, por estas razones el estudio con estos tipos de tecnología hace que
aumente con el pasar del tiempo y se produzca energía limpia y renovable. Con el uso de sustratos
orgánicos e inorgánicos según los resultados obtenidos en esta investigación, resaltamos con claridad
que una CCM produce mejores resultados, siempre y cuenta conste con sustratos, a comparación de
una CCM que contenga ningún sustrato va hacer menor la producción de bioelectricidad,

89
Los resultados obtenidos para una CCM que no contiene algún tipo de sustratos, el voltaje llego a un
promedio de 0.09V, muy por debajo para las CCMs que utilizaron sustratos orgánicos e inorgánicos.
Para las CCMs que se utilizó sustratos el voltaje producido se presenta en el siguiente orden, 0.14V
para la CCM con nitratos como sustratos, 0.34V para CCM con plomo como sustrato y finalmente
con 0.42V para la CCM con frutas y vegetales como sustratos. Estos datos son producidos en un lapso
de 15 días, con una concentración de 1000 ppm para cada sustrato y determinados los promedios
finales en cada una de las CCMs.

Estos resultados se obtuvieron porque la en las frutas y vegetales existen azucares, fibra y algunas
otras fuentes de energía con respecto a los otros 2 sustratos. Por esta razón se considera un buen
conjunto entre el suelo de paramo y el mejor sustrato, en esta investigación se generó valores mayores
a los presentados por otras investigaciones en la ESPOCH, con respecto a bioelectricidad, ya que en
este trabajo se utilizaron electrodos de cobre, y no como en otros trabajos que solo se utilizó tejido de
fibra de carbono.

Para la utilización de los electrodos a utilizarse en esta investigación, se nominó a 2 tipos de

materiales, los cuales son: el cobre metálico y grafito que viene en presentación de tejidos de fibra de
carbono. Para la selección de electrodos se realizó el ensayo preliminar mediante 16 tomas de datos
en un tiempo de 08 horas, arrojando los siguientes datos de forma de promedio obtenemos, 0.23V
para cobre y 0.07 para tejido de fibra de carbono, ya que los resultados son claros, la configuración
propuesta en esta investigación se redacta de la siguiente manera.

En base a los resultados escritos en esta discusión la mejor CCM y propuesta en este trabajo de
investigación, está constituida por una CCM de configuración simple, electrodos anódico y catódico
utilizando cobre metálico, empleando suelo de paramo a 4000 msnm y aprovechando el mejor sustrato
estudiado que son las frutas y vegetales. Obteniéndose un flujo de datos satisfechos y contenidos en
un lapso de 7 días, por lo tanto, se alcanzó y promedio de 0.51V y un máximo de 0.614V para tal
CCM. En cuanto a los análisis adquiridos para el suelo de paramo utilizado se determinó valores,
tales como: 7.18 para pH, 18.35°C para temperatura y 311.50 µS como valores de conductividad,
realizados en promedio para las 6 muestras provenientes de dicha altura

90
CONCLUSIONES

 Las celdas de combustible microbiano utilizando como sustratos vegetales, nitratos y plomo
de configuración simple, contenidas en la cámara anódica el sustrato y suelo de paramo en
un volumen de 125 mL, fueron reactivadas exitosamente con la finalidad de producir
bioelectricidad.
 Se monitoreo el voltaje producido por las celdas de combustible microbiano, evaluando la
producción de bioelectricidad, el sustrato con el que se generó una mayor cantidad de
bioelectricidad es vegetales con un valor de 0.42V, luego el plomo con un valor de 0.34V y
finalmente el sustrato de nitratos con un valor de 0.14V.
 La propuesta planteada en esta investigación, de mejor configuración para celdas de
combustible microbiano, está comprendida, como sustratos las frutas y vegetales consumidas
por los microorganismos electrogénicos del suelo de paramo de 4000 msnm y utilizando
como electrodos catódico y anódico placas de cobre metálico.

RECOMENDACIONES

 Realizar investigaciones secuenciales a este trabajo, determinando mejores sustratos de

origen natural o sintético para poder obtener mejores resultados en la producción de
bioelectricidad.
 Investigar los mejores microorganismos electrogénicos, con el propósito de elevar la
producción de energía y proponer mejoras en las configuraciones de celdas de combustible
microbiano, en cuanto al diseño, volumen y eficiencia de las mismas.
 Buscar diferentes opciones para membranas de intercambio protónico y electrónico, o
comúnmente electrodos para obtener mejores resultados y descartar algún tipo de perdida en
la producción de bioelectricidad.
 Proponer mejoras en el material y diseño de ensamblaje de las celdas de combustible
microbiano con el fin de utilizar materiales inertes y de menor costo en futuras
configuraciones.

91
BIBLIOGRAFÍA

Alzate, Liliana, [Link]. Evaluacíon del desempeño e identificación de exoelectrógenos en dos tipos de
celdas de combustible microbianas con diferente configuración en el ánodo . [En línea] 03 de
diciembre de 2009. [Citado el: 28 de junio de 2018.] [Link]
Armas Chugcho, Patricia Abigail y Ramirez Yambombo, Geovany Gustavo. Generación de
electricidad microbiana con diferentes matrices orgánicas mediante celdas de combustible . [En línea]
5 de enero de 2014. [Citado el: 27 de junio de 2018.]
[Link]
Busalmen, Juan Pablo. Bacterias electrogénicas: de los sedimentos a las celdas de combustible
microbiano. [En línea] 04 de 2010. [Citado el: 28 de 06 de 2018.]
[Link]
Cala, Victoria y Kunimine, Yukihiko. Distribución de plomo en suelos contamindos en el entorno
de una planta de reciclaje de baterías ácidas. [En línea] 06 de 2003. [Citado el: 10 de 07 de 2018.]
[Link]
Camargo, Luis Alejandro, Arboleda, Maria Nohemi y Cardona, Edison. Producción de energía
limpia en Colombia, la base para una crecimiento sostenible. [En línea] [Citado el: 27 de junio de
2018.] [Link]
Campuzano, S. Presente y futuro de los biosensores microbianos electroquímicos . [En línea] 30 de
06 de 2011. [Citado el: 2018 de 09 de 28.] [Link]
Caranqui, Jorge, [Link]. Diversidad y similitud de los páramos de la Provincia de Chimborazo en
Ecuador. [En línea] [Citado el: 11 de 07 de 2018.]
[Link]
Corredor Rojas, Laura Milena. Pilas de combustible y su desarrollo . [En línea] 23 de septiembre
de 2011. [Citado el: 28 de junio de 2018.]
[Link]
Cunalata Rugel, Cristian Geovanny y Inca Cóndor, Carlos Patricio. Cuantificación de carbono
total almacenado en suelos de páramo en las comunidades Shobol - Chimborazo, San Juan
Chimborazo . [En línea] 2012. [Citado el: 10 de 07 de 2018.]
[Link]
De León Samayoa, Limber Natanael. Tratamiento de agua residual Municipal en una Celda de
Combustible Microbiano con compósitos de poliuretano, grafito y polipirrol. [En línea] 11 de 2016.
[Citado el: 11 de 07 de 2018.]
[Link]
%20SAMAYOA%20DE,%20LIMBER%[Link]?sequence=1.
Echeverría, Magdy, Calderón , Cristina y Guambo, Alex. Biosorption process of heavy metals
and bioelectricity generation through mocrobial fuel cells. Riobamba : centro de investigación de
energías alternativas y ambiente ESPOCH, 2016.
El Comercio. Planeta El Comercio. [En línea] 2016. [Citado el: 2018 de junio de 2018.]
[Link]
Microorganismos-Investigacion-Ciencia-bacterias.
Eróstegui Revilla, Carlos Pedro. Contaminación por metales pesados . [En línea] 2009. [Citado el:
10 de 07 de 2018.] [Link]
Flores Ramírez, Rogelio, [Link]. Exposición infantil al plomo en sitios contaminados . [En línea] 08
de 2012. [Citado el: 10 de 07 de 2018.] [Link]
36342012000400008&script=sci_arttext&tlng=en.
Gonzáles Chávez, M C, [Link]. Seleccion de sustratos de crecimiento en microplantulas de citricos
inoculadas con glomus sp. Zac - 19. [En línea] marzo de 2001. [Citado el: 28 de junio de 2018.]
[Link]
Guambo Galarza, Alex Fernando y Allauca Caisaguano, Gabriela Elizabeth. Estudio de la
imfluencia de la demanda bioquímica de oxígeno de aguas residuales en la produccion de
bioelectricidad de una celda de combustible microbiano. [En línea] 8 de octubre de 2015. [Citado el:
27 de junio de 2018.] [Link]
Hernández Gómez, Guillermo Andrés y Sánchez Olvera, Manuel Alejandro. la
plirifuncionalidad de las bacterias electrogénicas . [En línea] 27 de 03 de 2017. [Citado el: 26 de 06
de 2018.] [Link]
Social/Documents/Divulgacion/Revista/Catorce/211/[Link].
Infosalus. RoC desarrolla "Sublime Energy", un producto innovador que usa la bioelectricidad contra
el envejecimiento. [En línea] 10 de 09 de 2010. [Citado el: 28 de 06 de 2018.]
[Link]
[Link].
Logan , Bruce E. y Regan , John M. Electricity - producing bacterial communities in microbial fuel
cells. [En línea] 12 de 2006. [Citado el: 11 de 07 de 2018.]
[Link]
Logan, B.E. Exoelectrogenic bacteria that power microbial fuel cells. 2009.
Logroño, Washington Nelson. Producción de bioelectricidad microbiana utilizando residuos
orgánicos como sustratos, para dos casos de estudio: Andes-Amazonia, Ecuador. [En línea] 21 de 02
de 2014. [Citado el: 27 de 06 de 2018.]
[Link]
Lolmede, [Link]. Tratamiento de agua residual con elevado contenido de nitratos utilizando reactores
biomembrana aireados. [En línea] 3 de 09 de 2000. [Citado el: 02 de 07 de 2018.]
[Link]
Microsoft.. elegir la mejor línea de tendencia para los datos . [En línea] 2007. [Citado el: 16 de 08 de
2018.] [Link]
datos-1bb3c9e7-0280-45b5-9ab0-d0c93161daa8.
Montaña , Hurtado, Sánchez , Mata y Esparza Torija, Isasa. Nutricion y salud, frutas y verduras
fuentes de salud . [En línea] 2008. [Citado el: 29 de 06 de 2018.]
[Link]
ame1=Content-
Disposition&blobheadervalue1=filename%[Link]&blobkey=id&blobtable=MungoBlobs&blo
bwhere=1352883450648&ssbinary=true.
Palomares, Antonio E. Instituto de Tecnología Química (UPV-C SIC). [En línea] 2013. [Citado el:
01 de 07 de 2018.] [Link]
nitratos-y-tecnicas-para-su-tratamiento.
Paña, Silvia Alexandra. Identificacion y aprovechamiento de la cepa Pseudomona spp en una celda
de combustible microbiano para la produccion de bioelectricidad a desarrollarse en el centro de
energias alternativas (ESPOCH). [En línea] 08 de 2017. [Citado el: 06 de 28 de 2018.]
[Link]
Pardo, Pablo. Molinos de viento sin aspas. [En línea] 16 de junio de 2015. [Citado el: 27 de junio de
2018.] [Link]
Prieto Méndez, Judith, [Link]. Contaminación y fototoxicidad en plantas por metales pesados
provenientes del suelo y agua. [En línea] 10 de 2009. [Citado el: 10 de 07 de 2018.]
[Link]
Revelo, Dolly M., Hurtado, Nelson H. y Ruiz, Jaime O.. Scielo . [En línea] 2013. [Citado el: 25 de
Junio de 2018.] [Link]
07642013000600004.
Rodríguez Rodríguez, Abad, [Link]. Aislamiento de cepas bacterianas oxidantes de amonio y nitrito
del suelo y su uso potencial en la reducción de nitrógeno en la aguas residuales domésticas . [En línea]
12 de 2017. [Citado el: 02 de 07 de 2018.]
[Link]
Rosales Colunga, L M. Prospección de inóculos para la generación de electricidad en una celda de
combustible microbiano a partir de suero de leche . [En línea] noviembre de 2016. [Citado el: 28 de
junio de 2018.]
[Link]
Agroindustrias,%20Automatizaci%C3%B3n%20y%20Agronegocios%202016%[Link]#pag
e=98.
Saavedra Salas , Igor Marcos. Diseño de una celda de combustible microbiológica con uso de
baterias oxidantes de Azufre y Hierro. [En línea] 03 de 2012. [Citado el: 11 de 07 de 2018.]
[Link]
Sacco, Natalia, Bonetto, Maria y Cortón , Eduardo. Generacion de electricidad en una celda de
combustible microbiana madiada utilizando Micro-ánodos descartables. Buenos Aires : UBA,
Ciudad Universitaria .
Sanin, Luz Helena , [Link]. Acumulación de plomo en huesos y sus efectos en la salud . [En línea] 27
de 04 de 1998. [Citado el: 10 de 07 de 2018.] [Link]
36341998000400009&script=sci_arttext&tlng=pt.
Sepúlveda Asprilla, Niza Inés. Redalyc. [En línea] 21 de 02 de 2015. [Citado el: 29 de 06 de 2018.]
[Link]
Tapia Cabrera, Fanny Marlene y Pacheco Serrano, Christian Geovanny. Efectos de las
plantaciones de Pino (Pinus Patula) en las propiedades hidrofísicas de los horizontes Ándicos de los
suelos de páramo en dos zonas de la cuenca alta del río Paute . [En línea] 2015. [Citado el: 10 de 07
de 2018.] [Link]
Valdivieso Valdivieso, Lucely Nataly. DSpace. [En línea] 10 de 2017. [Citado el: 29 de 06 de 2018.]
[Link]
Villaseca del Pozo, Laura. Sintesis de perovsquitas basadas en la (1-x-y) Sry Mn(3) y nitruros del
sistema W2N para su aplicación como electrodos en pilas de combustible de intercambio protónico
de alta temperatura. Univerdidad autonoma de Madrid . Madrid : Univerdidad autonoma de Madrid
, 2012, pág. 2.
Vullo, Diana L. Microorganismos y metales pesados: una interacción en beneficio del medio
ambiente . [En línea] 12 de 11 de 2003. [Citado el: 10 de 07 de 2018.]
[Link]