Microscopia
Es el conjunto de técnicas y métodos destinados a hacer visibles los objetos de estudio demasiado
pequeños para ser percibidos a simple vista y están fuera del rango de resolución del ojo humano.
Historia
El microscopio fue inventado por Zacharias Janssen en 1590. En 1665 aparece en la obra de William
Harvey sobre la circulación sanguínea al mirar al microscopio los capilares sanguíneos, y Robert
Hooke publicó su obra Micrographia.
En 1665 Robert Hooke observó con un lente un delgado corte de corcho y notó que el material era
poroso; contenía cavidades poco profundas a modo de celditas a las que llamó células. Se trataba
de la primera observación de células muertas. Unos años más tarde, Marcello Malpighi, anatomista
y biólogo italiano, observó células vivas. Fue el primero en estudiar tejidos vivos al microscopio.
A mediados del siglo XVII el neerlandés Anton van Leeuwenhoek, utilizando microscopios simples
de fabricación propia, describió por primera vez protozoos, bacterias, espermatozoides y glóbulos
rojos. El microscopista Leeuwenhoek, sin ninguna preparación científica, puede considerarse el
fundador de la bacteriología. Tallaba él mismo sus lupas, sobre pequeñas esferas de cristal, cuyos
diámetros no alcanzaban el milímetro (su campo de visión era muy limitado, de décimas de
milímetro). Con estas pequeñas distancias focales alcanzaba los 275 aumentos. Observó los glóbulos
de la sangre, las bacterias y los protozoos; examinó por primera vez los glóbulos rojos y descubrió
que el semen contiene espermatozoides. Durante su vida no reveló sus métodos secretos, y a su
muerte, en 1723, 26 de sus aparatos fueron cedidos a la Royal Society de Londres.
Durante el siglo XVIII continuó el progreso y se lograron objetivos acromáticos por la asociación de
Chris Neros y Flint Crown, obtenidos en 1740 por H. M. Hall y mejorados por John Dollond. De esta
época son los estudios efectuados por Isaac Newton y Leonhard Euler. En el siglo XIX, al descubrirse
que la dispersión y la refracción se podían modificar con combinaciones adecuadas de dos o más
medios ópticos, se lanzan al mercado objetivos acromáticos excelentes.
Durante el siglo XVIII el microscopio tuvo diversos adelantos mecánicos que aumentaron su
estabilidad y su facilidad de uso, aunque no se desarrollaron por el momento mejoras ópticas. Las
mejoras más importantes de la óptica surgieron en 1877, cuando Ernst Abbe publicó su teoría del
microscopio y, por encargo de Carl Zeiss, mejoró la microscopía de inmersión sustituyendo el agua
por aceite de cedro, lo que permite obtener aumentos de 2000. A principios de los años 1930 se
había alcanzado el límite teórico para los microscopios ópticos, no consiguiendo estos aumentos
superiores a 500X o 1000X. Sin embargo, existía un deseo científico de observar los detalles de las
estructuras celulares (núcleo, mitocondria, etc.).
El microscopio electrónico de transmisión (TEM) fue el primer tipo de microscopio electrónico
desarrollado. Utiliza un haz de electrones en lugar de luz para enfocar la muestra, consiguiendo
aumentos de 100.000X. Fue desarrollado por Max Knoll y Ernst Ruska en Alemania en 1931.
Posteriormente, en 1942 se desarrolla el microscopio electrónico de barrido.
Tamaño y biología
Tamaños de células, virus, y otras cosas pequeñas
La biología es una area muy rica visualmente. Sin embargo, muchas de las estructuras y eventos
biológicos más interesantes son más pequeños de lo que el ojo humano puede ver sin ayuda. En
realidad, el ojo humano tiene una resolución de cerca de 100 µm. En el cuadro de abajo note que,
de todas las estructuras nombradas, solamente la célula vegetal está escasamente dentro de
nuestra resolución.
El Microscopio óptico
El microscopio óptico tiene un límite resolución de cerca de 200 nm (0.2 µm). Este límite se debe a
la longitud de onda de la luz (0.4-0.7 µm). Las células observadas bajo el microscopio óptico pueden
estar vivas o fijadas y teñidas.
El Microscopio Electrónico de Transmisión(MET)
El microscopio electrónico de transmisión (MET) tiene un límite de resolución de cerca de 2 nm.
Esto es debido a limitaciones del lente usado para enfocar electrones hacia la muestra. Un MET
mira a réplicas de células muertas, después de haber sido fijadas y teñidas con iones de metales
pesados. Los electrones son dispersados cuando pasan a través de una fina sección del espécimen,
y luego detectados y proyectados hacia una imagen sobre una pantalla fluorescente.
El Microscopio Electrónico de Barrido (MEB)
El microscopio electrónico de barrido (MEB) también tiene un límite de 2nm. Al igual que el MET, el
MEB permite mirar a células muertas, después de haber sido fijadas y teñidas con iones de metales
pesados. Con esta técnica los electrones son reflectados sobre la superficie del espécimen.
Diferencias de microscopio Óptico y Electrónico
