1

UNIVERSIDAD DEL QUINDÍO

FACULTAD DE CIENCIAS Y TECNOLOGÍAS
PROGRAMA DE QUÍMICA Prof. Fernando Agudelo A.

FITOQUÍMICA II

LABORATORIO DE ALCALOIDES
ALCALOIDES: AISLAMIENTO Y PURIFICACIÓN
El término alcaloide (semejante al álcali) es aplicado a un extenso grupo de productos
naturales, de origen vegetal, que contienen nitrógeno básico. El nitrógeno contenido está
presente generalmente en un anillo heterociclo, como un pirrol, piridina, pirrolidina,
quinolina o isoquinolina, pero ocasionalmente es encontrado en una cadena lateral alifática.
Los alcaloides pueden ser considerados como aminas, derivados teóricamente de amoniaco;
la mayoría son terciarios (NR3), pero ocasionalmente aparecen como aminas secundarias
(NHR2). Menos comunes, son encontrados los compuestos cuaternarios (R4N+ OH-).

Los alcaloides son compuestos básicos; los átomos de nitrógeno aceptan protones desde un
ácido formando sales cuando son tratados con ácidos orgánicos como ácido acético, o
ácidos inorgánicos, como el clorhídrico.

Muchos de los alcaloides son insolubles en agua y moderadamente solubles en solventes

orgánicos como éter y cloroformo, mientras que sus sales tienen justamente las
características opuestas de solubilidad. Esta combinación de propiedades es empleada en la
separación de alcaloides de otros compuestos: si una mezcla de un alcaloide y otro
compuesto es tratada con ácido acuoso diluido y agitada con un solvente orgánico
apropiado, el otro compuesto puede ser extraído en el solvente mientras que el alcaloide
permanece en la capa acuosa ácida. Después las dos capas son separadas una de la otra, y la
adición de un exceso de hidróxido de sodio a la capa acuosa (ácida) liberará el alcaloide
libre, el cual puede ser extraído con un solvente orgánico (cloroformo, éter).

Esta secuencia de operaciones separará los alcaloides de compuestos ácidos y neutros. Esta
es la base del aislamiento y purificación de alcaloides en plantas.

Higrina.
O O
HCl
N Me N Me Cl
Me Me H
Higrina Clorhidrato de Higrina
Alcaloide terciario (soluble en agua)
 2

O O
NaOH
N Me Cl N Me
Me H Me
Clorhidrato de Higrina Higrina
(soluble en agua) (Alcaloide libre,
insoluble en agua
y soluble en
solventes orgánicos)

Coniina.

HCl
Cl
N N
H H
H
Coniina Clorhidrato de Coniina
(Alcaloide secundario) (soluble en agua)

NaOH
Cl
N N
H H H
Clorhidrato de Coniina Coniina
(soluble en agua) (Alcaloide libre,
insoluble en agua
y soluble en
solventes orgánicos)
 3

Sinapina

MeO Hidróxido de Sinapina

(Alcaloide cuaternario)

HO CH CHCO2CH2CH2N(CH3)3OH

MeO
HCl
MeO

HO CH CHCO2CH2CH2N(CH3)3 Cl
Cloruro de Sinapina
MeO (soluble en agua)

NaOH
MeO

HO CH CHCO2CH2CH2N(CH3)3OH

Hidróxido de Sinapina
MeO (soluble en agua)
 4

EXTRACCIÓN Y AISLAMIENTO DE ALCALOIDES.

Material Vegetal
seco y pulverizado
Extracción
Éter de petróleo

Fase Etérea Extracto

Lixiviación
Desecha Etanol 95%

Extracto
Etanólico
a) HCl 0.5 N, O ºC
Agitación magnética 3 h.
b) Centrifugación

Insoluble en Solución acuosa

HCl 0.5 N ácida

a) Basificar a pH 10
b) Extracción conCHCl3

Solución acuosa Extracto clorofórmico

pH 10
Fracción A
a) HCl 2 N pH 2-3
b) Reactivo de Reinecke
 5

Precipitado de Solución ácida

Reineckato

Disolución en
Acetona: Metanol (1:1)

Columna
Dowex-2-Cloruro

Cloruro de Alcaloides
Cuaternarios
Fracción B
 6

SEPARACIÓN DE UN ALCALOIDE CUATERNARIO

DE UNO TERCIARIO EN UN EXTRACTO ETANÓLICO

Extracto etanólico

a) 0.5 N HCl, 0° y agitación

b) Centrifugación
Insoluble en
H3CO 0.5 N HCl

H3CO CH CHCO2CH2CH2N(CH3)3Cl O

Soluble + N CH3 Cl
H3CO en agua H3C H
Soluble
en agua

H3CO Basificaciòn a pH 10
O
H3CO CH CHCO2CH2CH2N(CH3)3OH +
N CH3
Soluble CH3
H3CO en agua
Insoluble
en agua

Extracción O
H3CO con CHCl 3
N CH3
H3CO CH CHCO2CH2CH2N(CH3)3OH CH3

Soluble Soluble
H3CO en CHCl 3
en agua
 7

a) HCl 2 N a pH 2-3
b)Reactivo de Reinecke
Cr(SCN)4(NH3)2 NH4
H3CO

H3CO CH CHCO2CH2CH2N(CH3)3 Cr(SCN)4(NH3)2

Reineckato de sinapina
H3CO Insoluble
en agua

a) Disolución en acetona:metanol (1:1)

b) Pasar a través de una columna de
resina de intercambio aniónica (Cl )
H3CO

H3CO CH CHCO2CH2CH2N(CH3)3 Cl

Cloruro de sinapina
H3CO
 8

DERIVATIZACIÓN DE UN ALCALOIDE Y
SEPARACIÓN AL ALCALOIDE LIBRE

O2N
O
+ HO NO2
N CH3
CH3 O2N
Higrina Acido pícrico

O O2N

N CH3 O NO2
H3C H
O2N
Picrato de higrina

Procedimiento a) Procedimiento b)

a) Disolución en acetona a) Disolución en acetona

b) Pasar a través de una columna b) Pasar a través de una columna
de alúmina neutra de resina de intercambio aniónica
(Cl )
O
O

N CH3
N CH3 Cl
CH3 H3C H
Higrina Clorhidrato de higrina

Basificación

N CH3 + NaCl + H2O

CH3
Higrina
 9

DERIVATIZACIÓN DE UN ALCALOIDE Y
SEPARACIÓN AL ALCALOIDE LIBRE

H3CO

H3CO CH CHCO2CH2CH2N(CH3)3 Cl

Cloruro de sinapina
H3CO

Acido pícrico
H3CO O 2N

H3CO CH CHCO 2CH2CH2N(CH3)3 O NO 2

H3CO Picrato de sinapina O 2N

a) Disolución en acetona
b) Pasar a través de una columna
de resina de intercambio aniónica
H3CO (Cl )

H3CO CH CHCO2CH2CH2N(CH3)3 Cl

Cloruro de sinapina
H3CO
 10

SOLUBILIDAD.
Atendiendo a su solubilidad, los alcaloides se pueden clasificar en cuatro grupos.

1. Aminas primarias, secundarias y terciarias.

La base del alcaloide es soluble en solventes orgánicos y pueden formar sales solubles
en agua con ácidos minerales diluidos (1-10%). Por ejemplo, atropina.

2. Alcaloides de amonio cuaternario.

Siempre permanecen ionizados en medio ácido o alcalino. Son solubles en agua y
solventes muy polares como el etanol. Por ejemplo, el hidróxido de berberina.

3. Oxidos de amina.
Poseen en su estructura N-óxido, están ionizados y son solubles en agua y solventes
polares a cualquier pH. Ejemplo, N-óxido de retronecina.

HO CH2OH

N
O

4. Alcaloides Fenólicos.
Además de poseer la amina primaria, secundaria, terciaria, presentan uno o varios
hidroxilos fenólicos. Estos alcaloides pueden formar sales solubles en agua, al ser
tratados con ácidos minerales diluidos. Al tratarlos con NaOH (álcali fuerte) o NH 4OH,
forman el fenóxido soluble en agua. Para extraer estos alcaloides con un solvente no
miscible en agua, la sal del alcaloide, disuelta en agua, se alcaliniza con una base débil,
por ejemplo, el bicarbonato de sodio; así forma la base del alcaloide y no el fenóxido.
Ejemplo, Nor-laudanosolina.

Nor-laudanosolina
HO

HO
HO
NH

HO
 11

UNIVERSIDAD DEL QUINDÍO

FACULTAD DE CIENCIAS BÁSICAS Y TECNOLOGÍAS
PROGRAMA DE QUÍMICA Prof. Fernando Agudelo A.

FITOQUÍMICA II
ANÁLISIS DEL MATERIAL VEGETAL

Alcaloides de Piperidina de las flores y frutas verdes de Cassia spectabilis

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL GENERAL

Material Vegetal
Las flores y frutas de C. spectabilis fueron colectadas en mayo y diciembre de 1999 de un
espécimen cultivado en el Jardín Botánico del Estado de Sao Paulo Brasil. Un espécimen
identificado (SILVA 193) fue depositado en el herbario del Jardín Botánico.

Extracción y Aislamiento
El extracto etanólico de las flores fue concentrado, redisuelto en MeOH/H 2O (8:2) y
sucesiva partición con hexanos, CH2Cl2, EtOAc, y n-BuOH. La fracción soluble en CH 2Cl2
fue concentrada, produciendo 39 g de material crudo. Este fue redisuelto en 100 mL de
CH2Cl2 y extraído con 40% HCl acuoso (3 x 50 mL); las fracciones acuosas combinadas
fueron reajustadas a pH 9 usando NH4OH concentrado.

La solución acuosa básica resultante fue extraída exhaustivamente con CH2Cl2, secada
sobre MgSO4 anhídrido, y concentrada, proporcionando 9 g de una fracción alcaloidal
cruda. La porción alcaloidal cruda fue adicionalmente cromatografiada sobre una columna
de Al2O3 neutra con un gradiente de una mezcla de Etanol/Cloroformo/hexanos como
eluente.

R 2O HO 4
4
3 5 3 5
2` 12` 14` 2 6 2` 12` 14`
2 6 7
7
R1 N N 1`
1` 9 9
H O H O
3

1 R1 = CH3 ; R2 = Ac (-)-3-O-acetilespectalina
2 R1 = CH2OH ; R 2 = H (-)-7-hidroxiespectalina
3 iso-6-espectalina
4 R1 = CH3 ; R2 = H (-)-espectalina
 12

 Rotación óptica fue medida en un polarímetro Perkin Elmer modelo 341 usando
lámpara de sodio (589 nm) a 20° C.
(Actividad óptica: Es la capacidad de ciertas sustancias para girar el plano de la luz
monocromática polarizada a la derecha o a la izquierda. Esta capacidad se suele
deber a la asimetría de una molécula.)

 Espectro IR (infrarrojo) fue registrado en un Perkin Elmer 1725X FT. Con

pastillas de KBr.
IR-FT: Infrarrojo con Transformada de Fourier.

 Espectros de RMN 1H, 13C fueron registrados en un Espectrofotómetro Varian

500, a 500 y 125.67 MHz, respectivamente, con CDCl 3 como solvente, y estándar
interno TMS; los experimentos de RMN gCOSY, gHMQC, gHMBC, NOESY y
DEPT fueron llevados a cabo usando el mismo espectrómetro, usando pulsos
estándar en el Varian.
HMBC: Heteronuclear Multiple Bond Coherence 2D NMR
HMQC: Heteronuclear Multiple Quantum Coherence 2D NMR
HOHANA: Homonuclear Hartmann-Hahn
HETCOR: Heteronuclear Chemical Shift Correlation 2D NMR
NOESY: Nuclear Overhauser and Exchange Spectroscopy 2D NMR
DQF-COSY: Double Quantum Filtered - Correlated Spectroscopy 2D NMR.
TOCSY: Totally Correlated Spectroscopy
DEPT: Distortionless Enhancement by Polarization Transfer NMR

 Los Espectros de Masas de alta resolución fueron medidos en un

Espectrómetro Micromasas Q-TOF, usando modo ESI y MeOH/H 2O (1:1) como
solvente (cono de voltaje de 30 V).
(Espectrómetro de masas: instrumento utilizado para realizar medidas exactas de las
masas atómicas relativas, en el análisis de abundancia de isótopos de varios
compuestos químicos (especialmente moléculas orgánicas complejas) y mezclas.).
EIMS: Electron ionization mass spectrometer
ES-TOF: Electrospray- Time-Of-Flight

 Cromatografía. La alumina (Al2O3) utilizada grado I, tipo WN-3 fue utilizada

para columna cromatogràfica, TLC, TLC preparativa; la visualización de los platos
de TLC fue hecha por spray con reactivo de yodocloroplatinato (Merck) y reactivo
de Dragendorff.
TLC: Thyn Layer Chromatography
 13

Nuevos Alcaloides de Pandanus amaryllifolius

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL GENERAL
Material Vegetal
El primer bache de hojas frescas de Pandanus amaryllifolius fue purchased en
un mercado tradicional en Yakarta en junio de 2001. El segundo bache de
hojas fue colectado en Yakarta en junio de 2002. La planta fue identificada en
el Herbario Bogoriense en Bogor, Indonesia. Las hojas fueron secadas al aire
y transportadas a Australia para extracción subsiguiente. Los especimenes
identificados (AS012 y AS014) son conservados en el IMB, de la Universidad
de Queensland, Brisbane, Australia.
Extracción y Aislamiento de los Compuestos 1 y 2
El primer bache de hojas secas (180 g) fue extraído con EtOH del 95% tres
veces y posteriormente filtrado. Los filtrados combinados fueron evaporados
al vació y se les hizo partición entre Et 2O y HCl 1 M. La capa acuosa fue
basificada a pH 9-10 con NaOH 1M y extraída exhaustivamente con CHCl 3
para dar una fracción alcaloidal cruda. Con la fracción alcaloidal cruda (140
mg) se realizó partición por NP cromatografía de flash usando DCM, EtOAc,
y MeOH en incremento de polaridad. La fracción eluída en EtOAc 100% (10
mg) fue adicionalmente purificada usando RP-HPLC (H2O/CH3CN/TFA
0.05%, gradiente del 1%, velocidad de flujo 3 mL/min.).

21
H3C
2 O
4 21
H3C
O
6
O

5 O
O
6 O
O 15
11 N CH
9 16 20 3
O N
15 O
H 11
2
CH3 lactona pandanamina
20
1
lactona pandanamina
 14

 Rotación óptica fue medida en un polarímetro Perkin Elmer modelo

241 MC.

 Los espectros de masas de alta resolución HRESIMS fueron medidos

en un espectrómetro de masas sector magnético de doble enfoque
Finnigan MAT 900 XL.
EIMS: Electron ionization mass spectrometer
ES-TOF: Electrospray- Time Of Flight

 Espectros de RMN 1H, 13C, HSQC, HMBC, NOESY y DQF-COSY

fueron registrados en un Espectrómetro Bruker DRX 500 MHz; el
espectro DEPT fue registrado en un espectrómetro Varian Gemini 300
MHz.
HMBC: Heteronuclear Multiple Bond Coherence 2D NMR
HMQC: Heteronuclear Multiple Quantum Coherence 2D NMR
HOHANA: Homonuclear Hartmann-Hahn
HETCOR: Heteronuclear Chemical Shift Correlation 2D NMR
NOESY: Nuclear Overhauser and Exchange Spectroscopy 2D NMR
DQF-COSY: Double Quantum Filtered - Correlated Spectroscopy 2D
NMR.
TOCSY: Totally Correlated Spectroscopy
DEPT: Distortionless Enhancement by Polarization Transfer NMR

 Cromatografía. La cromatografía de Flash fue realizada usando Sílica

gel Scharlau 60 (0.04-0.06 nm) La RP-HPLC fue realizada usando una
columna semipreparativa Vydac C-18 con detección de UV a λ 250 nm.
RP-HPLC: Reverse Phase High Performance Liquid Chromatography
 15

Alcaloides de raíces de Piper nigrum

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL GENERAL

Material Vegetal
Las raíces de P. nigrum L. usadas en el estudio fueron colectadas en la flores
y frutas de C. spectabilis fueron colectadas en la isla de Hainan, China, en
abril de 2001, e identificadas por Y. C. Un espécimen identificado (TH04001)
está depositado en el herbario de de la Universidad de Tohol, Japón.
Extracción y Aislamiento
Las raíces secas y en polvo (7 kg) fueron extraídas repetidamente con metanol
del 70% (3 L x 4) a temperatura ambiente. Los extractos de metanol acuoso
fueron combinados y evaporados al vacío para dar un residuo de (508 g). El
residuo fue dispersado en H2O (1 L), luego extraído sucesivamente con
cloroformo (1 L x 3). Los solventes fueron evaporados al vació. El extracto
clorofórmico (150 g) fueron cromatografiados por sílice gel CC (2500 g) con
un gradiente de éter de petróleo y acetona dando 10 fracciones, A-J. La
fracción E (10 g) fue sometida a sílica gel CC (100g), eluida con éter de
petróleo y acetona (10:1, 800 mL; 4:1, 600 mL), para dar dos subfracciones,
E1 y E2. La fracción E1 (1.5 g) fue purificada adicionalmente por RP-CC
(Cromatografía de Columna de Fase Reversa) (7.5 g, MeOH-H 2O, 3:1) y RP-
HPLC (MeOH-H2O, 4:1) para proporcionar…

10
HO O
1`
1`
HO N O 10 1 N
4 1
OH
O
2
1
 16

 Los Espectros UV fueron obtenidos con un espectrofotómetro UV-160

Shimadzu.

 Los Espectros IR fueron medidos con un espectrómetro JASCO

FT/IR-300E (por el método de pastilla de KBr).

 Rotación óptica fue medida con un polarímetro digital JASCO DIP-

370 en una celda de 0.5 dm.

 Los Espectros de masas de alta resolución EIMS y HREIMS fueron

medidos en un espectrómetro de masas JEOL JMS-AX505HA. Los
FABMS y HRFABMS fueron tomados con un JEOL JMS-700.
EIMS: Electron ionization mass spectrometer
ES-TOF: Electrospray- Time Of Flight

 Espectros de RMN 1H, 13C fueron medidos con un con un JEOL ECP-
500 y un JEOL AL-400 en solución de CDCl3 con TMS como
referencia interno, y los desplazamientos químicos son expresados en δ
(ppm).
HMBC: Heteronuclear Multiple Bond Coherence 2D NMR
HMQC: Heteronuclear Multiple Quantum Coherence 2D NMR
HOHANA: Homonuclear Hartmann-Hahn
HETCOR: Heteronuclear Chemical Shift Correlation 2D NMR
NOESY: Nuclear Overhauser and Exchange Spectroscopy 2D NMR
DQF-COSY: Double Quantum Filtered - Correlated Spectroscopy 2D
NMR.
TOCSY: Totally Correlated Spectroscopy
DEPT: Distortionless Enhancement by Polarization Transfer NMR

 Cromatografía. Las separaciones de Cromatografía Lìquida de Alta

Eficiencia en fase reversa (RP-HPLC) fueron realizadas usando un
sistema JASCO PU-2080 HPLC, equipado con un detector
refractómetro diferencial Shodex RI-101 y una columna Senshu Pak C 18
(20 x 150 mm i.d.) a una velocidad de flujo de 5.0 mL/min. La
cromatografía de columna de fase reversa (RP-CC) fue acompañada con
RP-C18 sílica gel (100-200 mesh, Chromatorex DM1020T ODS, Fuji
Silesia Chemical Ltd.).
 17

DETECCIÓN DE ALCALOIDES.
Si consideramos la gran cantidad de material vegetal que está disponible para un
laboratorio de investigación y el tiempo y costo requeridos para estudiar cada uno
de ellos, es obvia la utilidad de realizar pruebas preliminares para seleccionar las
plantas más promisorias.

Método de Cain
El material vegetal seco y pulverizado (50 g) es extraído en Soxhlet con metanol, y
el solvente es evaporado al vacío hasta sequedad. El extracto metanólico (50 mg)
es colocado en un pequeño tubo de ensayo, y 1.0 mL de HCl 1.0 N es adicionado.
La mezcla es agitada con una barra de vidrio por 10 min. en orden de lograr la
disolución completa de los alcaloides, los cuales, debido a su carácter básico,
pasan a la solución acuosa ácida como sales. Después de la filtración,
generalmente se obtiene un extracto claro, pero algunas veces es necesaria la
centrifugación. Al residuo sólido se le adiciona 0.5 mL de HCl 1.0 N, y la operación
es repetida.

Los filtrados combinados (1.5 mL) son divididos en tres porciones, y cada una es
colocada en un pequeño tubo de ensayo. Luego, son adicionadas dos o tres gotas
de los reactivos de precipitación: Mayer, Bouchardat y Dragendorff. La formación
de un precipitado coloreado es indicativo de una prueba positiva:

Blanco (Mayer),
Naranja (Dragendorff), y
Café (Bourchardat).

Los resultados son registrados como:

Abundantes (+++)
Moderados (++)
Escasos (+)
Negativos (-)

Los precipitados pueden también ser formados por proteínas, purinas, cumarinas,
y algunos polifenoles. Una prueba negativa es indicativa de la ausencia de
alcaloides, por lo que estos reactivos son usados como pruebas presuntivas para
su presencia.

Reactivo de Mayer.
Solución A: HgCl2 (1.36 g), H2O (60 mL).
Solución B: KI (5 g), H2O (10 mL)
Las dos soluciones son mezcladas y diluidas con agua hasta 100 mL. Este
reactivo puede ser usado en solución ácida, pero debe ser evitada la
contaminación con otros solventes próticos; el precipitado es soluble, por ejemplo,
en ácido acético o etanol.
 18

Debido a la alta solubilidad de algunos alcaloides, en exceso de reactivo,

solamente unas pocas gotas deben ser adicionadas.

Reactivo de Dragendorff.
Solución A: Bi(NO3)3. 5H2O (8 g), HNO3 (20 mL).
Solución B: KI (27.2 g), H2O (50 mL).
Ambas soluciones son mezcladas y dejadas por 24 horas; después se filtra y se
lleva a 100 mL con agua. Este reactivo siempre es usado con muestras ácidas.

Reactivo de Bouchardat.
Una solución de KI (4 g) en agua (100 mL) es saturada con I 2.
 19

PREPARACIÓN DEL MATERIAL VEGETAL.

El material vegetal (raíces, hojas, semillas, o flores), se selecciona sobre la base

de los resultados de las reacciones de precipitación. En horno, se seca al vacío,
por debajo de los 50 ºC. Luego, el material se pulveriza y se lleva a completa
sequedad.

LABORATORIO DE FITOQUÍMICA II
PRACTICA Nº 1

EXTRACCIÓN DE ALCALOIDES
EXTRACCIÓN SOXHLET. DESENGRASADO (Mínimo 8 horas)

Reactivos.
5 L. Éter de petróleo 60-80 ºC. Cantidad por grupo 500 mL..

Materiales.
Extractor Soxhlet
Pinzas y sus nueces
Condensador de reflujo (bolas) y sus mangueras.
Balón de fondo redondo de 1000 mL.
Estufa eléctrica
Beaker de 400 mL.
Beaker de 500 mL.
Probeta de 100 mL.
Balanza con dos cifras decimales.
Frasco lavador

Nota: Se requieren unos 500 mL de éter de petróleo o hexanos para realizar esta
práctica. Hay que tener en cuenta que parte del solvente se evapora durante la
extracción Soxhlet por lo que se requiere un volumen adicional de 50 mL.

Extracción con éter de petróleo.

La planta en polvo (100 g) es extraída en Soxhlet con 500 mL de éter de petróleo
60-80 ºC. La solución es refluida y después de 8 horas, la fase etérea es removida
(conteniendo principalmente lípidos y carotenoides). El material vegetal en polvo
se deja al aire para que se seque y posteriormente se usa para la extracción
alcohólica.

Notas:
Muchos alcaloides no son solubles en éter de petróleo, pero este extracto debe
ser chequeado utilizando uno de los reactivos de precipitación de alcaloides. Si
alguno de los alcaloides requeridos son solubles en éter de petróleo, la material
vegetal puede ser pretratado (humedecido) con ácido acuoso para llevar los
alcaloides a sus sales. Este procedimiento ha sido utilizado en la extracción de la
ergotamina, de los hongos del ergot, Claviceps purpurea.
 20

LABORATORIO DE FITOQUÍMICA II

PRACTICA Nº 2

EXTRACCIÓN DE ALCALOIDES
LIXIVIACIÓN (Mínimo 8 días)

Reactivos.
Etanol 95%.

Materiales.
Embudo de separación para la Lixiviación.
Embudo pequeño de gravedad
Balanza con dos cifras decimales.
Probeta de 100 mL.
Beaker de 400 mL.
Pinza y su nuez para el embudo en la Lixiviación.
Espátula metálica
Frasco lavador
Gafa de seguridad.

Después de realizado el desengrase, el material vegetal es extraído con etanol

(empleando lixiviación o Soxhlet), y el solvente es removido al vacío por debajo de
los 50 ºC para obtener el extracto etanólico.
 21

LABORATORIO DE FITOQUÍMICA II

PRACTICA Nº 3

EXTRACCIÓN DE ALCALOIDES. AISLAMIENTO

Reactivos.
HCl 0.5 N
NaOH 15%
Etanol 95%.
Cloroformo o diclorometano
Reactivos de Mayer, Dragendorff, Bouchardat, Reinecke.
Carbón activado

Materiales.
Equipo de Rotaevaporador
8 Tubos de ensayo pequeños
Gradilla
3 Pipeta de 1.0 mL graduada
1 Pipeta de 5 mL. Graduada
Placa excavada
Espátula metálica
Erlenmeyer de 125 mL.
Aro y su nuez
Soporte universal
Embudo de separación de 250 mL.
Frasco lavador
Gafa de seguridad.

El extracto etanólico es tratado con HCl 0.5 N, el cual remueve las bases como
sales solubles. La solución ácida es basificada con 15% NaOH a pH 10, y las
bases libres son extraídas en cloroformo (alcaloides secundarios y terciarios).

La solución acuosa puede contener alcaloides solubles en agua (alcaloides

cuaternarios), los cuales son determinados por los reactivos de precipitación –
Reinecke o Mayer- en solución ácida; el precipitado es disuelto en acetona:
metanol (1:1), y la solución es pasada a través de una resina de intercambio iónico
en forma de cloruro, dando, después de la evaporación, una mezcla de cloruros
crudos. Este método es usado especialmente para alcaloides con nitrógeno
cuaternario. Diferentes técnicas cromatográficas son utilizadas para separar los
componentes desde la mezcla de sus bases.

Tratamiento del Extracto Etanólico.

Adicione, lentamente, 60 mL de HCl 0.5 N al extracto de 30 mL y agite
magnéticamente, enfríelo en un baño de hielo (0 ºC), y continúe la agitación por 3
horas. Conserve toda la noche la solución en el refrigerador, la solución es filtrada
 22

para remover las gomas, lave con agua (2 x 5 mL). Las fracciones de lavado son
adicionadas a la solución ácida.

Tratamiento de la solución acuosa pH 10.

La solución residual acuosa, libre de CHCl 3 y enfriada en un baño de hielo, es

acidificada con HCl 2 N a pH 2-2.5. El reactivo de Reinecke es adicionado a una
muestra de 2 mL de la solución ácida; si hay un precipitado, el Reineckato es
adicionado a la solución acuosa total, y el control de la precipitación completa es
realizado sobre una muestra de 2 mL del correspondiente líquido centrifugado.
Después de permanecer toda la noche en el refrigerador, el precipitado es filtrado
por Buchner y lavado con agua fría (3 x 5 mL) hasta que sea alcanzada la
reacción negativa al Rojo Congo. El producto es secado a peso constante a
temperatura ambiente y en la oscuridad.

Conversión al Cloruro de Alcaloide

La sal de Reineckato es disuelta en acetona, seguida por dilución con metanol
(utilizar volúmenes de acetona: metanol correspondiente al peso del producto x
50). La solución es pasada a través de una resina de intercambio iónico (columna)
en forma de cloruro (correspondiente al peso del Reineckato x 25), previamente
lavada con acetona: metanol (1:1); la evaporación del eluente da los cloruros
cuaternarios (Fracción de alcaloides B).

La determinación de los alcaloides por los reactivos de precipitación es llevada a

cabo tanto en las fracciones A y B.

Nota: En algunos casos no se hace basificación con NaOH, en lugar de ello, se

utiliza carbonato de sodio o amoniaco. En algunos casos, el amoniaco puede dar
un nuevo alcaloide que no estaba presente en la planta original. Un ejemplo
clásico de la fácil conversión del swerosido iridoide a la gentianina, alcaloide
monoterpénico de la piridina.

O O
NH3 (ac)
O O
Temp. ambiente
GluO O N
Swerosido Gentianina
 23

REACCIONES DE PRECIPITACIÓN Y COLORACIÓN.

El examen de los alcaloides se realiza por medio de las reacciones de precipitación y
coloración, de las cuales las primeras sirven más bien como reacciones de grupo y las
segundas, por el contrario, como reacciones especiales.

I. Reactivos de Precipitación.

A. Soluciones de Compuestos Inorgánicos.

1. Monoácidos simples.
Los ácidos halogenados, como clorhídrico, bromhídrico y yodhídrico, se usan en
algunos casos para precipitar los alcaloides de sus soluciones en los solventes
orgánicos y para separarlos por cristalización fraccionada.

Solución de Ácido Clorhídrico diluido

HCl concentrado 21 g.
Agua destilada 100 g

Solución de Ácido Clorhídrico al 5%

HCl diluido 70 mL.
Agua destilada 100 mL.

2. Ácidos complejos y sales dobles.

Constituyen el grupo más importante de reactivos de precipitación de los
alcaloides, en virtud de la poca solubilidad de los precipitados y elevado peso
molecular.

Los compuestos formados poseen muchas veces composición química compleja y

desconocida.

a) Poliyoduros y combinaciones complejas de yodo:

Reactivo de Bouchardat.
Yodo 2.0 g.
Yoduro potásico 2.0 g.
Agua destilada 100 mL.

Este reactivo precipita los alcaloides de sus soluciones ácidas bajo formas de
compuestos de color castaño oscuros, solubles en exceso de reactivos y en el
alcohol. Sustituyendo el yoduro potásico por cantidad equivalente de yoduro
de bario, se aumenta la sensibilidad del reactivo.
 24

Reactivo de Meyer.
Cloruro mercúrico 3.71 g.
Yoduro de potasio 10 g.
Agua destilada 200 mL.

Precipita la mayor parte de los alcaloides, algunos en soluciones muy

diluídas, bajo forma de compuestos blanco-amarillentos, amorfos, solubles
en exceso de reactivo, alcohol, yoduros, etc. Adicionando 30% de cloral, se
favorece la formación de precipitados cristalinos.

Reactivo de Dragendorff.
Subnitrato de bismuto 8.0 g.
Yoduro de potasio 22.8 g.
Ácido nítrico al 30% 20 mL.
Agua destilada 100 mL

Insolubiliza los alcaloides de las soluciones acidificables por el ácido

sulfúrico bajo forma de precipitados anaranjados, a veces cristalinos,
solubles en exceso del reactivo o en alcohol y descomponibles por los álcalis
y carbonatos alcalinos.

Reactivo de Marmé.
Yoduro de Cadmio 5 g.
Yoduro de potasio 10 g.
Agua destilada 110 mL.

Este reactivo como el de Caille-Viel (yoduro doble de cadmio y potasio) y el

de Selmi (de potasio y platino), de usos más restringidos, son del mismo tipo
que los anteriores.

b) Poliácidos complejos.
Algunos ácidos minerales de peso molecular elevado precipitan los
alcaloides de sus soluciones bajo forma de compuestos densos y amorfos.

Reactivo de Bertrand.
Ácido silico-túngstico 30 g.
Agua destilada 1000 mL.
Precipita los alcaloides en medio ácido, en compuestos de composición
definida.
Reactivo de Scheibler.
Túngstato sódico 10 g.
Fosfato sódico 8 g.
Agua 50 g.
Ácido nítrico hasta reacción ácida.
Precipita los alcaloides en solución ácida o neutra.
 25

Reactivo de Sonneschein.
Ácido molíbdico 17.5 g.
Carbonato sódico anhidro 13.5 g.
Solución de fosfato disódico al 5% 30 mL.

Precipita a casi todos los alcaloides en solución clorhídrica, en forma de

compuestos amorfos, amarillos e insolubles. Descomponibles a semejanza
de los fosfotúgstatos y silicotúngstatos por los álcalis (amoniaco, carbonato
de sodio, etc.), liberándose los alcaloides, que pueden ser recuperados por
los disolventes orgánicos.

Otros reactivos inorgánicos son: el ácido ferrocianhídrico y el

ferricianhídrico, el cloroplatínico, cloruros de mercurio, cobre, estaño, cinc,
oro, plata, dicromato de potasio, etc., que producen precipitados de tipo
diverso.

B. Soluciones de sustancias orgánicas.

1. Derivados nitrados.

Reactivo de Hager (ácido pícrico)

Solución acuosa saturada en frío. Precipita los alcaloides en medio neutro o
ácido, en solución acuosa o gliceroalcohólica, en forma de picratos amarillos, en
general cristalinos.

Para obtener preparaciones microscópicas de este precipitado, se deposita una

gota de solución del alcaloide en el portaobjetos y luego una gota del reactivo; el
precipitado que se forma al principio amorfo, luego cristaliza, siendo muy
típicos para la observación microscópica los picratos de los alcaloides.

Otros reactivos de este grupo son el picroetílico glicerinado que presenta mayor
sensibilidad (solución saturada en frío, de ácido pícrico en alcohol, con 5% de
glicerina).

2. Ácidos orgánicos.
Son varios los ácidos orgánicos que se han propuesto como reactivos de
precipitación de los alcaloides, pero la mayoría no tienen interés analítico. El
ácido tánico es el más útil de todos.

Tanino 1 g.
Agua 8 g.
Alcohol 1 g.

Debe emplearse la solución reciente.

 26

II. Reactivos de Coloración.

Se conocen diversos reactivos que originan con los alcaloides coloraciones variadas,
algunas muy típicas. El empleo de estos reactivos precisa que cada alcaloide sea aislado
en estado de pureza suficiente.

Entre otras reacciones pueden señalarse los distintos grupos:

1. Deshidratantes.
-Ácido sulfúrico concentrado.

2. Oxidantes.
-Ácido nítrico
-Ácido perclórico.

3. Oxidantes y deshidratantes.
Reactivo de Erdmann
Acido nítrico al 25% X gotas.
Ácido sulfúrico 20 mL.

Reactivo de Frohde
Molibdato sódico 0.1 g.
Ácido sulfúrico concentrado 100 mL.

Reactivo de Mandelin
Vanadato amónico 0.5 g.
Ácido sulfúrico concentrado 100 mL.
Reactivo de Lafón
Selenito amónico 0.5 g.
Ácido sulfúrico concentrado 100 mL.

4. Aldehídos en presencia de deshidratantes.

Reactivo de Wassicky
p-Dimetilaminobenzaldehído 2 g.
Ácido sulfúrico concentrado 6 g.
Agua 0.4 mL.

Hidrato de cloral
Hidrato de cloral 60 g.
Agua 40 g.
 27

MANERA DE PRACTICAR LAS REACCIONES

En una pequeña cápsula de porcelana o vidrio de reloj, se toma una muestra del
alcaloide, se le añaden unas gotas del reactivo y se mezcla removiendo. La coloración
aparece en un tiempo más o menos rápido. Dejando estar según los casos, o por
calentamiento, la coloración suele cambiar. Algunos alcaloides no dan ninguna
reacción. Se recomienda para los alcaloides desconocidos, empezar el ensayo por la
reacción de Frohde; este reactivo permanece incoloro con varios alcaloides, por
ejemplo: Atropina, Cafeína, Quinina, Cocaína, Coniina, Cistina, Nicotina, Estricnina,
Teobromina; e igual suele ocurrir con los reactivos de Erdmann, ácido sulfúrico
concentrado y nítrico concentrado.

ALGUNAS REACCIONES ESPECÍFICAS COLOREADAS

Atropina.
Calentando cuidadosamente una muestra del alcaloide con una gota del reactivo de
Wassicky, toma coloración roja, y dejando estar cambia la coloración del rojo cereza al
rojo violeta.

Brucina.
Una muestra de brucina toma con ácido nítrico concentrado una coloración roja que
frecuentemente cambia en amarillo.

Codeína.
Con reactivo de Frohde toma coloración verde, que cambia rápidamente en azul. Con
reactivo de Wassicky sin calentar, rápidamente rojo claro.

Cafeína.
Se evapora al baño maría, alrededor de 0.01 g de cafeína en un vidrio de reloj, con 10
gotas de agua oxigenada al 3% y unas gotas de clorhídrico al 25%. Queda un residuo
rojo amarillento, el cual con unas gotas de amoniaco al 10% da coloración rojo-púrpura
(reacción de la murexida).

Colchicina.
La disolución del alcaloide en 5 a 10 gotas de ácido clorhídrico y 4 a 6 gotas de
disolución de cloruro férrico al 10% se hierve hasta evaporar la mitad del líquido (2 a 3
minutos); se forma una coloración verde oliva intenso y que por enfriamiento se
oscurece.
 28

Alcaloide del Cornezuelo (ergotina, ergotoxina, ergotamina, ergotinina).

Con el reactivo de Wassicky en frío, coloración amarillo-verdoso, con trazos negros que
mezclado se transforma en pardo verdoso sucio, que frecuentemente se transforma en
rojo-violeta, azul-violeta y azul. En caliente, rápidamente azul, y posterior verdoso.
Disolviendo unos 0.3 g. de la mezcla de los alcaloides en 1 mL. de éster acético ,
añadiendo 1 mL. de ácido acético glacial y una gota de solución diluida del cloruro
férrico y colocando una capa inferior del sulfúrico concentrado, se forma un anillo azul
en el lugar de la separación de las dos zonas.

Emetina.
Con el reactivo de Frohde se forma coloración verde sucio, que por adición de unos
granos de cloruro sódico se transforma en gris-verdoso claro. La mezcla de emetina,
cefalina y psicotrina toma, en las mismas condiciones, una coloración purpúrea que por
adición de cloruro sódico se transforma en azul de Prusia.

Hidrastina.
Con reactivo de Mandelin, primeramente coloración roja y luego naranja.
Se añade a una solución 0.05 g de las sales de los alcaloides, 5 mL. de agua, con 1 mL.
de sulfúrico al 20% y 5 mL. de una disolución al 0.1 % de KMnO 4, y se forma después
de desaparecer el color del permanganato una fluorescencia azul, que después de diluir
50 mL. de agua permanecerá intensa todavía.

Morfina.
Con reactivo de Frohde se forma una coloración violeta, que frecuentemente cambia en
azul, verde, amarillo y rosa. Con el reactivo de Wassicky reacciona como la codeína.

Estricnina.
La disolución incolora de estricnina en ácido sulfúrico concentrado (en vidrio de reloj)
por adición de un cristal de dicromato de potasio, toma coloración violeta, que pronto se
transforma en rojo y luego desaparece.

Quinina.
La quinina se disuelve en ácido sulfúrico diluido con fluorescencia azul (reacción de
Denigés). Añadiendo a 5 mL de una disolución de quinina (1:200) 1 mL de agua de
bromo
 29

Hemos observado que en el análisis fitoquímico preliminar se emplean reactivos de

precipitación y reactivos para revelado de cromatogramas.

Los siguientes reactivos pueden producir precipitados con alcaloides disueltos en ácido
mineral diluido (HCl del 1 al 5%). El orden descendiente obedece a un estudio de
sensibilidad (Martello y Farnsworth).

Reactivo de Wagner
Reactivo de Bouchardat
Reactivo de Dragendorff
Reactivo de Scheiber
Reactivo de Wagner
Reactivo de Mayer
Reactivo de Cloruro Aurico
Reactivo de Marne.

Los reactivos para pulverización se aplican sobre la placa de cromatografía en la cual,

previamente se han separado los alcaloides contenidos en el extracto. El reactivo de
Dragendorff modificado por Munier y Macheboeuf se emplea para la detección de
alcaloides en capa delgada, sin embargo este reactivo no es específico y muchos otros
compuestos como mono, sesqui, triterpenoides y esteroides, son revelados con este
reactivo.

Los reactivos para detectar alcaloides deben manejarse con gran cuidado, porque pueden
ocurrir resultados positivos o negativos falsos. Por ejemplo, algunas proteínas dan
resultados positivos con los reactivos para alcaloides aunque muchos aminoácidos no
reaccionan.

Forguile y Farnsworth han reportado la existencia de compuestos que, careciendo de

nitrógeno en sus estructuras, pueden producir pruebas positivas falsas con los reactivos para
alcaloides; por ejemplo, la kawanina y la yangonina, y en general compuestos con un grupo
carbonilo ,-insaturado. Sin embargo, no ocurre en todos los casos.

Habib concluyó que una sustancia no nitrogenada produce pruebas positivas con los
reactivos para alcaloides:
 Cuando posee un su estructura un oxígeno en un sitio con alta densidad electrónica
como carbonilos, ya que estos grupos funcionales incrementan la densidad
electrónica de la función oxigenada. Ejemplo, éteres, ésteres, alcoholes y ácidos
,-insaturados.

 Cuando en condiciones similares a las anteriores, no hay instauración, pero el

carbono  está unido a uno o más metilos libres, los cuales introducen carga con un
resultado similar a la de la ,-insaturación.

 La presencia de grupos hidroxilos en las estructuras anteriores que presentan

reacciones negativas.
 30

CROMATOGRAFÍA DE CAPA DELGADA PARA ALCALOIDES.

Tipo de Alcaloide Fase Sólida Eluente_________________

I. General Sílica gel G CHCl3/acetona/dietilamina ([Link])

CHCl3/trietilamina (9:1)
CHCl3/ciclohexano/dietilamina ([Link])
Ciclohexano/dietilamina(9:1)
Benceno/acetato de etilo/dietilamina (7:21)
CHCl3/metanol (19:1)
Alúmina G CHCl3
Ciclohexano/ CHCl3 (3:7) + 0.5% dietilamina

II. Fenilalquilaminas Sílica gel G Isopropanol/ 5% NH4OH

Acetona/metanol/ácido acético ([Link])

III. Aminas simples Sílica gel G Etanol/25% NH4OH (8:2)

n-Butanol/ácido acético/agua ([Link])
IV. Piridina-pirrolidina Sílica gel G CHCl3/metanol (3:1)
CHCl3/metanol/ NH4OH ([Link])
CHCl3/metanol/ ácido acético ([Link])
Benceno/CHCl3/metanol ([Link])
Alúmina ácida CHCl3/etanol (19:1)

V. Pirrolizidina Sílica gel G Benceno/acetato de etilo/dietilamina ([Link])

VI. Piperidina-Quinolizidina Sílica gel G Butanona/metanol/7.5% NH4OH (3:1.5:0.5)

CHCl3/metanol (4:1)
CHCl3/ciclohexano/dietilamina ([Link])
CHCl3/etanol absoluto/25% NH4OH ([Link])
Ciclohexano/dietilamina (7:3)

VII. Quinolina Sílica gel G Isopropanol/benceno/dietilamina ([Link])

Benceno/éter/dietilamina ([Link])
VIII. Isoquinolina Sílica gel G Benceno/metanol (9:1)
Xileno/butanona/metanol/dietilamina ([Link])
CHCl3/etanol/acetato de etilo/acetona ([Link])
Hexano/ciclohexano/ciclohexanol ([Link]) + 0.5%
dietilamina
Ciclohexano/dietilamina (9:1)

IX. Bisbencilisoquinolina Sílica gel G

(0.1 N NaOH) CHCl3/acetato de etilo/metanol ([Link])

X. Amarillidaceas Sílica gel G Acetato de etilo/ CHCl3/metanol ([Link])

XI. Colchicum Sílica gel G CHCl3/acetona/dietilamina ([Link])
Benceno/acetato de etilo/dietilamina ([Link])
Acetato de etilo/etanol (4:1)
XII. Ipeca Sílica gel G CHCl3/metanol (85:15)
XIII. Lobelia Sílica gel G Ciclohexano/CHCl3/dietilamina ([Link])
CHCl3/metanol (3:1)
Alúmina ácida CHCl3/etanol (19:1)
 31

XIV. Tropano Sílica gel G CHCl3/acetona/dietilamina ([Link])

CHCl3/dietilamina (9:1)
Butanona/metanol/7.5 NH4OH ([Link])

Alúmina G Ciclohexano/CHCl3 (3:7) + 0.05% dietilamina

XV. Indol
A. Harmala Alúmina G Acetona/etanol (85:15)
B. Ergot Sílica gel G Acetato de etilo/N,N-dimetilformamida/etanol (13:
1.9:0.1)
CHCl3/metanol (95:5)
Alúmina G CHCl3/etanol/agua ([Link])
C. Terpenoide Sílica gel G n-Butanol/ácido acético/agua ([Link])
Benceno/Trietilamina (9:1)
Benceno/acetato de etilo/etanol ([Link])
CHCl3/metanol (19:1)

XVI. Cinchona Sílica gel G Benceno/metanol (4:1)

CHCl3/etanol (9:1)
CHCl3/metanol/dietilamina ([Link])
Alúmina G Hexano/CCl4/dietilamina ([Link])
XVII. Furanoquinolina Sílica gel G CHCl3/metanol (49:1)
Ciclohexano/CHCl3/dietilamina ([Link])
XVIII. Esteroides Sílica gel G CHCl3/metanol (19:1)
Benceno saturado con amoniaco
Éter saturado con amoniaco
XIX. Esteroide glicosídico Sílica gel G Acetato de etilo/piridina/agua ([Link])
Ciclohexano/acetato de etilo (1:1)
CHCl3/metanol (3:2)
 32

CARACTERÍSTICAS FARMACOLÓGICAS GENERALES DE LOS

ALCALOIDES.

La toxicidad de los alcaloides es variable y no siempre grande; desde la atropina o la

estricnina, que son mortales en miligramos, hasta la quinina, que solamente lo es en dosis
de 2 o más gramos, encontraremos las más variadas toxicidades o acciones farmacológicas.
Los alcaloides tropánicos en general actúan sobre las terminaciones del parasimpático; la
morfina, sobre los centros nerviosos del dolor en la zona cortical; la estricnina, sobre la
médula, y la quinina, sobre las zonas vestibular, coclear y óptica.

La actividad farmacológica depende de la estructura química; como consideraciones

generales, podemos establecer las siguientes

I. Anestésicos locales.
Los anestésicos locales son en general ésteres de aminoalcoholes o de los
aminoácidos. Entre los ésteres de aminoalcoholes podemos señalar, entre los
más típicos, la cocaína. Este alcaloide, aunque pertenece por su estructura al
grupo del tropano (los tropánicos no son realmente anestésicos), está
caracterizado por una función amina y dos funciones ésteres.
La anestesina, novocaína, tutocaína, pantocaína, etc., y varios alcaloides de
síntesis, son ésteres de aminoalcoholes.

II. Analgésicos.
Constituyen un grupo de alcaloides de un interés farmacológico muy particular.
Una leve modificación en la estructura molecular es suficiente para transformar
radicalmente la acción farmacodinámica. Entre los analgésicos naturales el más
típico es la morfina. En la estructura química del alcaloide hay que considerar
dos núcleos fundamentales: uno fenantrénico (carácter convulsionante) y otro
isoquinolínico (carácter antiespasmódico). Además posee una función fenol que
exalta las propiedades del núcleo fenantrénico, un puente oxigeno que resulta de
la acción neutra y una función alcohol secundaria.
Las sustituciones en las funciones fenol, alcohol, o las dos a la vez, determinan
la formación de los alcaloides de síntesis: codeína, tebaína, heroína, etc.

III. Antipiréticos específicos.

Comprende un grupo muy semejante de estructuras por parentesco químico y
que están dotados de un doble efecto antitérmico y bactericida. Poseen el núcleo
de la quinoleína y el de la piperidina. El alcaloide más típico del grupo es la
quinina.
En su fórmula, los elementos activos son los dos núcleos isoquinoleínico y
piperidínico, en éste con la cadena lateral etilénica. La función alcohol
secundaria también es necesaria para la actividad, pues su destrucción impide la
acción farmacológica del alcaloide.
 33

IV. Simpaticomiméticos.
Pertenecen al grupo de los aminoalcoholes y los aminofenoles. La estructura
química fundamental de este grupo de bases alcaloideas es la de las
fenilaquilaminas en la cual se acoplan o no, entre los más activos, uno, dos o
ningún grupo hidroxilo.
Las consideraciones más importantes a establecer en el grupo de los
simpaticomiméticos, para relacionar la estructura química con la acción
farmacológica, son las siguientes:
a. La función amina es necesaria para la actividad, dado que todos los agentes
capaces de elevar la tensión arterial son estructuras aminadas. (En la serie
grasa sólo son activas las aminas primarias con cadena abierta). Los
componentes que tiene un grupo amino primario son casi siempre mucho
más hipertensores que los análogos con amina secundaria. Las bases
metiladas en el nitrógeno son también más activas que las bases etiladas,
tanto en los efectos motores como los inhibidores. La posición del grupo
aminado sobre el carbono en beta tiene una influencia esencial en la acción
simpaticomimética.
b. La función alcohol desempeña un papel muy importante, porque conduce en
ciertos casos a cuerpos que son de 100 a 200 veces más activos que los que
poseen otras funciones. La función alcohol varía según la simetría del
carbono alfa; la adrenalina levógira es 10 veces más activa que la adrenalina
dextrógira.
c. La función fenol aumenta el poder hormonal. En las estructuras que
solamente poseen una función OH, el poder hipertensor depende de la
posición de este grupo funcional y aumenta en el orden de las posiciones
orto y para. La actividad más fuertemente simpaticomimética viene dada por
la presencia de dos hidroxilos fenólicos en posición meta y para.
La tiramina, junto con la adrenalina, son los representantes de dos clases de
aminas hipertensoras. La primera constituye el miembro más simple de estos
derivados dela feniletilamina, conteniendo un solo OH fenólico. La segunda
representa los compuestos con 2 OH fenólicos en 3 y 4.
La desaparición de las dos funciones fenoles conduce a estructuras que,
como la efedrina, la intensidad inicial y la especificidad de los efectos
iniciales disminuye considerablemente.
En consecuencia, la acción vasoconstrictora de la epinefrina (adrenalina)
aparece como resultante de una serie de factores sinérgicos que convergen en
la misma molécula química: a) función amina típica y específica, situada en
posición especialmente favorable en beta; b) la metilación del nitrógeno que
aumenta la actividad; c) asimetría del carbono portador de la función alcohol
secundario, y d) presencia de dos OH fenólicos, que refuerzan esa acción.
 34

V. Parasimpaticomiméticos.
En este grupo no se da ninguna homogeneidad química. De la acción
farmacodinámica no es responsable ninguna función química especial o
característica. Unos son bases de amonio cuaternario, como la muscarina.
Nótese, no obstante, que realmente la sustancia típica de origen animal, que es la
genuina representante de las bases parasimpaticomiméticas, es la acetilcolina,
base de amonio cuaternario, y que las sustancias que actúan sobre el simpático
(colinérgico) liberan acetilcolina en la terminación del nervio (mediadores
químicos).

VI. Simpaticolíticos.
Son alcaloides un poco complejos que se encuentran en el cornezuelo del
centeno y en el yohimbo. Los del cornezuelo son derivados del ácido lisérgico.

VII. Parasimpaticolíticos.
Constituyen un grupo de estructura química homogénea formados por ésteres,
en los cuales cada uno de los constituyentes pertenecen a un tipo determinado
característicamente. La atropina (éster trópico del tropanol) es el representante
principal de este grupo farmacodinámico; junto con ella, los isómeros de la l-
hiosciamina y la d-hiosciamina, siendo también muy semejante a ellos la
escopolamina, que difiere solamente por la presencia de un oxígeno puente.
El alcohol esterificante de la tropina, que resulta del acoplamiento de un núcleo
pirrolidínico con un núcleo piperidínico, constituye el núcleo del tropano. El
ácido esterificante es ácido trópico.
Las conclusiones más interesantes que pueden deducirse en el grupo de los
parasimpaticolíticos son las siguientes:
a) El nitrógeno terciario N-CH es menos activo, la noratropina (NH).
b) En la isomería, el derivado levógiro posee una acción mucho más enérgica
que el derivado racémico; la l-hiosciamina es unas 40 veces más activa que
la atropina.
c) El ácido esterificante ejerce notable influencia en los derivados midriáticos.
Los ácidos más activos son ácido-alcoholes cíclicos.

VIII. Diuréticos.
Aunque la acción diurética en los medicamentos está representada en funciones
muy distintas, es de notar que en los alcaloides se trata de derivados de la
purina, como la teobromina, cafeína y la teofilina.

Finalmente hay que considerar que en muchos alcaloides su estructura química no es

conocida todavía y en otros, aun siendo conocida, no es posible extraer verdaderas
conclusiones de índole farmacodinámica.
 35

ELUCIDACIÓN ESTRUCTURAL.

Una vez se ha aislado el alcaloide se requiere determinar su estructura.

Generalmente los alcaloides los encontramos acompañados de otros, lo cual requiere que
sean separados por métodos cromatográficos.

El contenido de alcaloides de una planta generalmente no es el mismo en todas las partes

(raíces, tallos, corteza, hojas, frutas, semillas). En muchos casos los alcaloides están
restringidos a una sola parte de la planta. Por ejemplo: Afelandrina aparece solamente en
las raíces de Aphelandra squarossa var. Roezii.

Otro factor que puede influenciar el contenido de alcaloides es la estación del año en la cual
la planta ha sido colectada. (Por ejemplo, durante o después del florecimiento); el tipo de
suelo puede también hacer una diferencia.

Propiedades Físicas.
Antes que el estudio químico de cualquier compuesto sea realizado, debe haberse
caracterizado, esto es, las propiedades específicas tales como punto de fusión, rotación
óptica, y datos espectroscópicos deben ser determinados. Para este propósito una
presunción fundamental es que la sustancia está pura y homogénea. Generalmente son
llevadas a cabo pruebas de pureza, envolviendo el uso de métodos cromatográficos como
cromatografía de capa delgada (TLC), junto con la recristalización y determinación del
punto de fusión. La pureza es chequeada por análisis elemental para carbono e hidrógeno.

Sustancia:
Punto de fusión:
Rotación óptica:
Composición elemental:
Espectrometría de masas: (Ion molecular)

El peso molecular de un alcaloide frecuentemente es determinado sólo por espectrometría

de masas, usando ionización por impacto de electrones. Sin embargo, este método envuelve
ciertas posibilidades de error que pueden afectar cuando el peso molecular de un compuesto
desconocido estructuralmente es determinado por este método.
La muestra debe ser vaporizada en orden de obtener el espectro de masas, y la temperatura
de vaporización depende de diversos factores, incluyendo el tamaño molecular y el número
y la clase de grupos funcionales presentes. Durante la vaporización, la posibilidad que
ocurran reacciones térmicas no pueden ser excluidas. Esto podría dirigir a reorganizaciones,
como también a la pérdida de pequeños o grandes fragmentos neutros. Los productos que
han sido formados de esta manera, después de la ionización, darían un falso peso
molecular a causa de deshidratación (M-18), descarboxilación (M-44), descarbonilación
(M-28), y así sucesivamente.
 36

No siempre es fácil determinar cuando el ion molecular resulta de la sustancia original, o

cuando ésta ha sufrido un cambio térmico. Por esta razón es necesario chequear el peso
molecular por otros medios, tales como los métodos osmométricos o análisis de
combustión.
Esto último da una buena idea de la pureza de la sustancia. Así sales hidro de alcaloides se
descomponen térmicamente en el espectrómetro de masas en la base libre y el ácido. El
espectro de masas puede ser fuertemente distinguido de aquella del alcaloide puro, y el
análisis de combustión dará información de la sal.

Otros análisis.
Valores de pKa (solvente), los cuales muestran el ambiente que rodea al (a los) nitrógeno
(os).

Espectros y Grupos Funcionales.

Espectro IR.

RMN 1H: (Se observa la integración y el tipo de protones.)

Protones aromáticos 6.5 y 7.7 ppm.
Constantes de acoplamiento

RMN 13C

Espectro UV/Visible.(solvente)
Observación de los grupos cromóforos