UNIVERSIDAD NACIONAL INTERCULTURAL DE LA AMAZONIA
FACULTAD DE INGENIERÍA CIENCIAS Y AMBIENTALES
CARRERA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AGROFORESTAL ACUÍCOLA
PRACTICA N° 02
EXTRACCION DE ADN VEGETAL DEL PLÁTANO (Musa
paradisiaca)
ASIGNATURA: Genética
DOCENTE. Ing. Enna Velazco Castro.
ESTUDIANTES:
Ø Nataly Anjis Mashigkash
Ø Anais Aurora Mayna Majipo
Ø Rober Inuma Rojas
FECHA DE LA PRÁCTICA: 17/06/2021
FECHA DE ENTREGA DEL INFORME: 24/06/2021
YARINACOCHA - PERU
2021-1
I. INTRODUCION
La extracción del ADN de cualquier tipo de célula es simple y puede hacerse
rutinariamente en algunos laboratorios. Como el ADN se encuentra dentro del
núcleo celular, primero debemos romper la membrana celular, para tener libre
al núcleo. Luego rompemos la membrana nuclear para dejar libre al ADN. Se
debe separar el ADN de las proteínas y por último aislarlo por precipitación.
Dentro de los posibles mecanismos de control de la expresión génica, los
cambios epigenéticos dependientes de metilación de residuos citosina del
ácido desoxirribonucleico (ADN) genómico y específicamente de secuencias
promotoras de genes concretos, regulan gran parte de las funciones
del genoma. A diferencia de las alteraciones genéticas, las modificaciones
epigenéticas no cambian la propia secuencia física del ADN y,
paradójicamente, a pesar de que ciertos cambios son heredables, la mayoría
de cambios epigenéticos son potencialmente reversibles. En función del
objetivo planteado, el análisis de los patrones de metilación puede abordarse
como metilación global o metilación sitio-específica.
II. OBJETIVOS
El objetivo principal de este trabajo fue definir un método de
extracción del ADN vegetal.
III. REVISION LITERARIA
AISLAMIENTO DEL ADN
El primer paso para desarrollar experimentos con marcadores moleculares es
la extracción del material genético de plantas que, por sus características
fenotípicas, poseen caracteres agronómicos de interés. Para la extracción del
ADN vegetal es necesario tener en cuenta tres factores:
1. El tipo de planta y de tejido que se va a emplear como fuente.
Por ejemplo, los tejidos jóvenes contienen más ADN que los tejidos viejos.
Además, es necesario considerar la composición bioquímica de los tejidos.
Por ejemplo, el método de extracción del material genético proveniente de
tejidos ricos en compuestos fenólicos es diferente al método empleado con
tejidos ricos en carbohidratos o aceites.
2. El tipo de ADN que se va a extraer.
Las plantas poseen tres tipos de ADN: el nuclear, el mitocondrial y el
cloroplástico. Reciben estos nombres dependiendo del tipo de organelo celular
en el que el ADN se encuentre. Los distintos tipos de ADN tienen
características bioquímicas semejantes. Sin embargo, el tipo de información
biológica que codifican es completamente diferente.
3. El tipo de análisis a realizar (RFLP, RAPD, AFLP, secuenciación, etc). Con
base en la cantidad y la calidad del ADN se pueden desarrollar diversas
técnicas de análisis, algunas de las cuales serán explicadas con mayor detalle
en próximos artículos.
En plantas existen múltiples protocolos para extraer y purificar el ADN:
Ruptura de membranas: Una vez el tejido es disgregado en células, se hace
necesario romper las membranas celulares para liberar el ADN. Esto puede
ser llevado a cabo químicamente con detergentes (SDS, Triton o
detergentes comerciales). También se emplean métodos físicos, como
aquellos basados en ultrasonido.
IV. MATERIALES Y MÉTODOS
a) Materiales
Medio plátano maduro
Detergente lavavajilla líquida
Sal
Agua corriente
Alcohol al 96° muy frío
Dos vasos de vidrio transparente
Un plato hondo
Papel filtro o papel toalla
Un tenedor
Una varilla de vidrio o palito moldadientes.
b) Metodología
Retírale la cáscara al plátano y córtalo en rodajas sobre el plato.
Aplástalo con ayuda de un tenedor hasta obtener un puré. Colocar en el
vaso normal una cucharada de detergente lavavajilla líquida y disuelve
con un poco de agua. Agrégale una cucharada de esta mezcla al puré
de plátano y también agrega una cucharada de sal, dos de agua y sigue
mezclando hasta obtener una masa homogénea.
Coloca el papel filtro o papel toalla doblado en cuatro (a manera de
embudo) sobre un vaso y pasa la mezcla anterior por este papel poco a
poco. Espera a tener un volumen de uno a dos centímetros de alto en el
vaso, retira el papel filtro o papel toalla y agrega un volumen de alcohol
al 96° muy frío igual al que se tiene de líquido filtrado. Deja reposar
durante 2 o 3 minutos hasta que se forme una zona turbia entre las dos
capas. Observa la formación de fibras blancas que se han formado.
Estas fibras son el ADN del plátano. Puedes retirar las fibras de ADN,
con ayuda de una varilla larga.
V. RESULTADOS.
Se Dejó reposar durante 2 o 3 minutos hasta que se formó una zona turbia
entre las dos capas. Luego se Observó la formación de fibras blancas que se
han formado. Estas fibras son el ADN del plátano.
Fig.1 fibras de ADN, se puede retirar con ayuda de una varilla larga.
Observo la formación de fibras blancas que se han formado. Estas fibras son el
ADN del plátano.
Fig. 2 fibras blancas ADN de plátano.
Cuestionario 1.
¿Porque se adiciona el detergente lavavajilla líquido a la
mezcla?
El detergente líquido o el lavavajillas utilizado en el experimento tiene como función
destruir las membranas celulares del tejido vivo que estamos utilizando. El detergente
disuelve las grasas o lípidos, que es el componente principal de la membrana
plasmática y nuclear de las células (es el mismo principio por el que el gel limpia la
grasa de nuestra piel). Al romperse las membranas celulares se permite la salida del
ADN al exterior.
2. ¿Porque se agrega sal a la mezcla?
La sal en disolución actúa disminuyendo la solubilidad de las proteínas, lo que
hace que precipiten y se separen más fácilmente del ADN para poder obtenerlo
con una mayor pureza.
3. ¿Porque se coloca alcohol de 96° frío a la mezcla?
El ADN es una molécula muy larga y tiende agruparse, de ahí la facilidad para
retirarla. Para aislar el ADN hay que hacer que precipite en alcohol, ya que el
ADN es soluble en agua, pero cuando se encuentra en alcohol precipita. Por
este motivo, nuestras hebras de ADN comienzan a hacerse visibles en la
interfase entre la mezcla y el alcohol. Además de permitirnos distinguirlo, el
alcohol separa el ADN de otros componentes celulares, los cuales quedan en
la solución acuosa.
VI. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
GRIFFITHS, A.J.F.; MILLER, J.H.; SUZUKI, D.T.; LEWONT1N, R.C.; GELBART,
W.M. 1993. An Introduction to Genetic Analysis. 5th ed. W.H. Freeman and
Company, New York.
TAYLOR, B.H.; MANHAR I, J.R.; AMAS1NO, R.M. 1993. Isolation and
characterisation of plant DNAs. In: B.R. Glick; J.E. Thompson. (Eds.). Methods in
Plant Molecular Biology and Biotechnology. CRC Press. Florida, p.37-47.
ROGERS, S.O.; BENDICH, A.J. 1988. Extraction of DNA from plant tissues. Plant
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Klug, W.S. & Cummings, M. R. (1999). Conceptos de Genética, 5ª ed. Prentice
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Informe de un experimento (extracción de ADN), monografí[Link]. [online]
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extraccion-adn/[Link]#ixzz5AYieakdL
EXTRACCIÓN CASERA DE ADN, [Link]. [online]
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