Instituto Politécnico Nacional
Unidad Profesional Interdisciplinaria de
Biotecnología
Biotecnología Ambiental
Intrones y exones
Profesor:
Dr. Raúl Ricardo Díaz Contreras
Grupo: 4AV1
Alumna:
Maldonado López Gabriela
Fecha de entrega: 17 febrero de 2022
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CONTENIDO
INTRODUCCIÓN .............................................................................................................................. 3
SPLICING ........................................................................................................................................... 4
FORMACIÓN DEL ESPLAICEOSOMA ........................................................................................... 5
Reconocimiento del sitio de procesamiento 5’ por los ARNsn ....................................... 7
BIBLIOGRAFÍA.................................................................................................................................. 8
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INTRODUCCIÓN
Tras la transcripción del ADN a ARN se lleva a cabo un proceso de corte y empalme de
ARN, también conocido como splicing, el cual involucra la eliminación de los intrones de
un gen, conservando los exones. Este proceso ocurre a través de la eliminación del enlace
fosfodiéster entre los exones y los intrones, y la unión posterior del enlace entre los exones
(Gelambi, 2020).
Un intrón es una parte del gen que no codifica ningún aminoácido, caso contrario al
exón. En las células las secuencias de genes son alternadas por una o más secuencias de
ADN (intrones), las partes de la secuencia de genes que contienen la información para
producir las proteínas, exones, se expresan, mientras que, los intrones no codifican
porque interfieren con los exones. Los exones son los que permanecen en el ARNm
maduro y finalmente con el código de los aminoácidos, por lo tanto, los intrones son
“eliminados” del ARN para dejar unidos una serie de exones que codificarán los
aminoácidos (Margulies, Ph. D., s. f).
Ilustración 1. Localización de intrones y exones en el ADN y ARN (National Human Genome Research Institute, s. f.)
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SPLICING
Es un proceso postranscripcional de maduración del ARNm, en el cual se eliminan los
fragmentos secuenciales intrones. Durante este proceso el exón no es separado,
manteniéndose en el ARNm maduro debido a que contienen la información para
producir la proteína codificada en el gen. Cada exón codifica una parte especifica de la
proteína completa, es así como el conjunto de exones forma la región codificante del
gen. El proceso es llevado a cabo en el espliceosoma, el cual es un conjunto de
ribonucleoproteínas donde se eliminan los intrones y dan paso a la unión de los exones
(Olazabal, 2018).
En el proceso implica modificaciones del pre- ARNm donde se adiciona en el extremo 5’
de la 7- metilguanosina trifosfato, también conocido como Cap, esta adición es
importante para la unión al ribosoma del extremo 5’ del ARNm. La modificación del pre-
ARNm se modifica en su extremo 3’ debido a la adición de una secuencia de nucleótidos
de adenina, llamada cola de poli (A), constituyendo el extremo 3’ del ARNm maduro, una
vez formado éste, se transporta al citoplasma para participar en la traducción (Jiménez,
et al., 2004).
El proceso de corte y empalme se lleva a cabo mediante dos reacciones sucesivas de
transesterificación que es dependiente de la hidrólisis de ATP además de que es
catalizada por un complejo de ribonucleoproteínas llamado esplaiceosoma o
empalmosoma, que esta formado por ARNs nucleares pequeños denominados U1, U2,
U4, U5 y U6, denominados así por su alta riqueza en uridina, junto con un grupo adicional
de factores de corte y empalme constituido por una serie de proteínas necesarias en el
ensamblaje del esplaiceosoma (Jiménez, et al., 2004).
Ilustración 2. Arreglo estructural de los ARNs nucleares pequeños (Jiménez, et al., 2004)
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Además de lo anterior, para el ensamblaje del esplaiceosoma es requerido más de 150
proteínas, de la cual destaca la molécula PRP8 que presenta una secuencia de 2300
residuos de aminoácidos que están asociadas a los ARNsn U4, U5 y U6. La molécula PRP8
interactúa con el pre- ARNm en los sitios 5’ y 3’ del exón para después efectuar la unión
entre los exones (Jiménez, et al., 2004).
FORMACIÓN DEL ESPLAICEOSOMA
Durante la formación del esplaiceosoma, procesamiento del pre- ARNm involucra por
cada sitio dos exones, exón- 1 y exón- 2, que son interrumpidos por un intrón.
Inicialmente el esplaiceosoma es formado debido a la interacción del ARNsn U1 con el
sitio de procesamiento 5’ del exón- 1 del pre- ARNm, seguido por el reconocimiento del
punto de ramificación en el intrón del pre- ARNm por ARNns U2, formando el pre-
esplaiceosoma. Finalmente, armado por la subsiguiente asociación de los ARNsn U4, U6
y U5 formando el esplaiceosoma maduro. La unión de U1 y U4 se desestabiliza y el
esplaiceosoma es activado para llevar a cabo su catálisis (Jiménez, et al., 2004).
Ilustración 3. Ensamblado del esplaiceosoma. A) pre- ARNm, B) Reconocimiento de los sitios de procesamiento 5' y el
punto de ramificación por U1 y U2, respectivamente, C) Asociación de (U4, U5 y U6) al pre- ARNm, formando el
esplaiceosoma completo (Jiménez, et al., 2004)
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Los intrones son eliminados del pre- ARNm en dos acciones distintas, en donde
intervienen un sitio de procesamiento 5’, un sitio de ramificación y un sitio de
procesamiento 3’. La reacción, es iniciada por un ataque nucleofílico, conocida como una
sustitución nucleofílica 2 (SN2) del grupo OH de la posición 2’ de una adenosina que se
encuentra en la secuencia del intrón, conocida como sitio de ramificación sobre el enlace
fosfodiéster que une al exón- 1 en la posición 5’ del intrón, también llamado sitio de
procesamiento 5’. Dando como resultado la liberación del exón- 1 y la formación de un
intermediario en forma de lazo, el intrón 3’- exón- 2. El siguiente paso de la reacción se
lleva a cabo con un segundo ataque nucleofílico del 3' OH del exón libre (exón 5') sobre
el enlace fosfodiéster del exón 3', conocido como sitio de procesamiento 3', dando como
resultado la liberación del intrón y la unión de los dos exones (Jiménez, et al., 2004).
Ilustración 4. Reacciones de transesterificación que intervienen en el corte y empalme del pre ARNm. A) Se muestra el
pre-ARNm y los sitios de corte y empalme. B) Primer ataque nucleofílico en la región 5' del exón por parte del OH de la
adenosina que forma parte del sitio de procesamiento 5'. C) Segundo ataque nucleofílico en la región 3' del exón que
forma parte del intermediario en forma de lazo, por parte del OH del exón cortado en la primera reacción. D) Se
muestran los dos exones unidos formando de esta forma el ARNm maduro, siendo eliminando el intrón.
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Reconocimiento del sitio de procesamiento 5’ por los ARNsn
El reconocimiento del sitio de procesamiento 5' por U1 está dado en la primera porción
del intrón, donde el ARNsn U1 contiene una secuencia que es complementaria a este
sitio. Este apareamiento involucra los primeros seis nucleótidos del intrón. A continuación,
el ARNsn U2 se une al punto de ramificación del intrón. La consiguiente asociación entre
U1 y U2 favorece el acercamiento entre los sitios de procesamiento 5' y 3' del pre- ARNm.
La asociación de U2 con el pre-ARNm es independiente de ATP y requiere una
conformación específica de esta molécula.
El ensamblaje previo de las tres moléculas U4, U5 y U6 para que el esplaiceosoma se
complete, se lleva a cabo mediante un apareamiento extensivo de aproximadamente 20
bases entre los ARNsn U4 y U6. La función del ARNsn U5 en el esplaiceosoma ha sido
gradualmente esclarecida con una convergencia de datos genéticos y bioquímicos
provenientes de varios sistemas. Una comparación filogenética revela que U5 contiene
una secuencia invariable de nueve nucleótidos dispuestos en un lazo de 11 nucleótidos.
Algunos datos genéticos y bioquímicos en células de mamífero y levaduras dan lugar a
un modelo funcional para ARNsn U5, en el cual uno de sus lazos interactúa con
secuencias del exón en el sitio de procesamiento 5' y 3'. Los datos muestran que los
contactos existentes entre U5 y la parte 5' del exón-1 son estables en el pre-ARNm y
persisten a través de ambos pasos catalíticos. Una vez incorporados los cinco ARNsn, se
completa el esplaiceosoma, sin embargo, para que éste tenga actividad catalítica, aún
debe sufrir varios cambios conformacionales. Uno de ellos es la interrupción de la
interacción U4-U6 y una secuencia motivo en U6 sustituye a U1 en el sitio de
procesamiento 5'. La ruptura del apareamiento entre U4 y U6 permite la activación
catalítica de este último, determinando así la primera fase del corte y empalme. De esta
manera ARNsn U4 actúa como un inhibidor que protege a U6 hasta que estén alineados
los centros específicos de empalme. A continuación, U6 es liberado de U4 y se aparea
con las secuencias conservadas del intrón en el sitio de procesamiento 5'. Posteriormente
U6 queda apareado con U2, el cual a su vez está apareado con el punto de ramificación
del intrón. Probablemente, los ARNsn U2 y U6 forman el centro catalítico del
esplaiceosoma.
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BIBLIOGRAFÍA
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EXONES%20E%20INTRONES2019_4_29P13_10_53.pdf
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