CLASIFICACIÓN, MORFOLOGÍA Y FISIOLOGÍA DE LOS HONGOS.

PROCEDIMIENTOS DEL
DIAGNOSTICO DIRECTO PARA HONGOS.
Los hongos son un grupo amplio de organismos que se hallan distribuidos ampliamente en el
suelo, los vegetales, el agua y en el aire. La mayor parte de las especies son de carácter
saprófito, y un número menor de ellos son patógenos. Están formados por células eucariotas, son
heterótrofos, formadores de esporas y por lo general carecen de movimiento; su pared celular
está formada por celulosa y quitina; no poseen pigmentos fotosintéticos y absorben sus alimentos
por digestión enzimática externa. La mayoría requiere oxígeno para sobrevivir, sin embargo
algunas especies pueden comportarse como anaerobias facultativas. Constituyen una importante
herramienta de investigación en el estudio de los procesos biológicos debido a la rapidez con que
crecen y se reproducen. Pertenecen al reino fungi.

Clasificación desde el punto de vista morfológico

Los hongos se dividen en: mohos y levaduras y estos a su vez se subdividen en: monomórficos y
dimórficos. En dependencia de que sean pluricelulares (mohos) o unicelulares (levaduras); y que
se desarrollen en cualquier medio de cultivo, a diferentes temperaturas de la misma forma
(monomórficos); en el caso de los dimórficos que adquieren la forma de moho en agar sabouraud
a 25 oC, y la de levadura en agar sangre a 37 oC, o en los tejidos del hospedero parasitado.
Morfología y estructuras microscópicas de los hongos
Hifas: constituye la unidad anatómica y funcional de los hongos, los mohos tienen una forma
filamentosa y producen hifas y talos verdaderos permitiendo su observación a simple vista, las
levaduras tienen formas gemante y presentan pseudohifas y pseudotalos que se reproducen por
tubos germinales o gemación (división celular
Estructuralmente se pueden encontrar dos tipos de hifas:
Cenocíticas (no septadas o no tabicadas) y no cenocíticas (septadas o tabicadas). Los septos
pueden tener más de un poro, y hallarse éstos en distintos lugares, lo que permite el paso de la
masa protoplasmática y la migración de los núcleos. Los hongos septados se consideran más
evolucionados que los otros, por lo que se les llama hongos superiores. Los hongos no septados
son los hongos inferiores.
Desde el punto de vista de su morfología encontramos varias formas de las hifas:
 En espiral
 Raqueta
 Candelabro fávico
 Estolones
 Rizoides
 Pectinadas
 Cuerpos nodulares
Talo o Micelio: el conjunto de hifas constituye el micelio, el cual da lugar a la colonia en la
superficie del agar. Es una estructura producto del entrecruzamiento de las hifas que van
formando lo que se denomina como el cuerpo del hongo, el cual se denomina talo.
Se clasifica funcionalmente en: vegetativo (encargado de la nutrición del hongo y crece de la
superficie del medio de cultivo hacia abajo) y reproductor o fértil (su función es la reproducción
del hongo y crece de la superficie del medio de cultivo hacia arriba).
Estructuralmente se clasifica de la siguiente forma:
 Unicelular (Formado por células independientes de levaduras).
 Pseudomicelio (Formado por células de levaduras, dispuestas una a continuación de la otra,
que se disocian fácilmente por carecer de tabiques).
 Micelio no cenocítico (Formado por hifas tabicadas de mohos).
 Micelio cenocítico (Formado por hifas no tabicadas de mohos).
En las levaduras domina habitualmente la forma de desarrollo unicelular. Su morfología, es
variada, presentando células ovoides, esféricas, triangulares, bacilares, en forma de botella,
apiculadas y otras; siendo esto de gran utilidad como criterio taxonómico.
Esporas: estructura del hongo que básicamente posee la función de intervenir en la reproducción
y comunicarle la propiedad de la resistencia del hongo. Las esporas se pueden dividir en sexuales
y asexuales.
Morfología y estructuras macroscópicas de los hongos
Desde el punto de vista macroscópico lo que se observan son colonias de mohos y levaduras. El
micelio es el encargado de darle determinado aspecto al hongo.
Una colonia no es más que la agrupación de un conjunto de células descendientes de una célula
microbiana, micóticas en este caso, las cuales se desarrollan en un medio de cultivo sólido, el
cual posee las condiciones necesarias para garantizarles al hongo su reproducción bajo
condiciones óptimas de pH, temperatura, nutrientes, humedad y oxígeno entre otras.
Tipos de colonias de los Mohos
Las colonias de los mohos pueden ser muy diversas, clasificándose fundamentalmente en cuanto
a su tamaño, forma, elevación, borde, superficie, coloración y consistencia.
Los principales tipos de colonias de los mohos son:
1. Filamentosas

Las colonias de hongos filamentosas difieren en su aspecto y estructuras y existen diversos tipos,
que dependen de las características tanto del micelio vegetativo como del micelio reproductivo.

 Algodonosas: son aquellas que poseen un micelio aéreo muy abundante, dando aspecto de
algodón a la colonia. Por ejemplos: la Absidia ramosa.

 Lanosas: son aquellas que poseen un micelio aéreo más o menos abundante a partir del cual
se forman los esporóforos, de modo que su origen está lejos del sustrato. Por ejemplos: el
Microsporum canis.

 Aterciopeladas: son las que tienen poco micelio aéreo, de manera que el crecimiento visible
consta casi por completo de conidióforos que emergen de hifas sumergidas, las cuales ofrecen
exactamente el aspecto de un terciopelo. Por ejemplos: el Aspergillus fumigatus.

2. Membranosas o glabrosas: son las que tienen su micelio adherido al medio de cultivo. Por
ejemplos: el Coccidiodes inmites.

3. Pulverulentas: son las que su micelio adquiere la forma de polvo. Por ejemplos: el
Microsporum nanum y la colonia avejentada del Aspergillus fumigatus.

Tipos de colonias de levaduras.

Las superficies de las colonias, pueden ser de aspecto mate o brillante y que su contorno es
variable. En su forma más simple, una colonia está más o menos libre de repliegues y es plana,
convexa o con una papila central. En las formas más complejas se pueden observar pliegues
radiales o concéntricos, presentando el borde delgado o grueso. La superficie puede ser lisa o
rugosa, apreciando a veces combinaciones de las características antes descritas.
Los principales tipos de colonias de levaduras son:
  Mucosas: son colonias elevadas, de superficie lisa, brillante y viscosa. Por ejemplo:
Cryptococcus neoformans.
 Pastosas o butirosas: son las que tienen la superficie lisa y brillante, borde entero y
consistencia cremosa, parecida a la “mantequilla” (butirosa). Por ejemplo: Candida albicans.
 Secas: se caracterizan por estar adheridas al medio de cultivo y ser opacas. Por ejemplo: las
levaduras no patógenas.
Estructuras subcelulares y composición química de los hongos
Cápsula: Algunos hongos producen una cubierta adherente o más compacta. La cápsula o capa
adherente se compone de agua y de polisacáridos amorfos, que no se tiñen fácilmente y que
pueden hacer que las células se aglutinen o formen un conglomerado.
Pared celular: Es la estructura principal de un hongo ya que determina su forma, la protege de
cualquier diferencia de presión osmótica y participa en el proceso de morfogénesis micótica (por
ejemplo, la esporulación o el dimorfismo levadura-moho).
Membrana citoplasmática
La membrana citoplasmática, es una estructura que limita los orgánulos vitales localizados en el
interior del citoplasma. Retiene dentro de sus límites las distintas moléculas necesarias para el
mantenimiento de las funciones biológica y que, al mismo tiempo, regula el paso de solutos entre
el interior de la célula y su ambiente externo (concentra los nutrientes en el interior de la célula y
excreta los productos de desecho); es el lugar en donde se realiza la biosíntesis de determinados
constituyentes celulares, en especial de los componentes de la pared y de la cápsula, y se
localizan ciertas enzimas y orgánulos celulares como los ribosomas. Por lo tanto, los hongos (ni
ninguna otra célula conocida) no pueden vivir sin la presencia de este organoide de importancia
vital que es la membrana citoplasmática.
Citoplasma: está rodeado por la membrana citoplasmática, la cual está distendida y en
ocasiones separada de la pared celular por un espacio periplasmático donde se encuentran
enzimas hidrolíticas.
Orgánulos citoplasmáticos: En los hongos el ADN (con 16 cromosomas) está acumulado en un
orgánulo denominado núcleo. Cada núcleo está bien definido y limitado por una membrana
unitaria doble, cuya cara externa está en continuidad con el retículo endoplasmático, el cual
comunica al núcleo con el ribosoma.
Fisiología de los hongos
 Nutrición:
Los hongos se encuentran entre los microorganismos más heterogéneos. Algunos utilizan para el
crecimiento fuentes de carbono, estos incluyen además, una amplia variedad de aminoácidos,
ácidos orgánicos, azúcares, lípidos derivados de azúcares, alcoholes y compuestos orgánicos
más complejos. La especificidad de las cepas en la utilización de fuentes de carbono es
frecuente.
La glucosa es el azúcar más utilizado por los hongos y es casi una fuente de carbono universal.
La fructosa es ampliamente empleada también.
Las condiciones nutricionales mediante las cuales los hongos producen los cuerpos reproductores
están estrechamente relacionados con aspectos nutricionales como lo son: concentración de
nutrientes en el medio, fuente de carbono y nitrógeno, reacción C-N, microelementos esenciales,
vitaminas y hormonas.
- Concentración de nutrientes
 Se ha observado en varios tipos de hongos, que mientras la concentración de nutrientes sea
elevada, el protoplasma continúa su crecimiento hasta que se agoten los mismos y aparezcan
los cuerpos de fructificación.
Se ha comprobado que existe también una estimulación en el tipo de reproducción (sexual y
asexual) de acuerdo con la concentración de los nutrientes.
- Fuentes de nitrógeno
La fuente de nitrógeno es otro factor que influye en la esporulación ya que existe un efecto
indirecto sobre el pH del medio, observándose que en algunos hongos ésta es favorecida por
ciertas fuentes de nitrógeno que no son las mismas que favorecen el crecimiento. En los
hongos la utilización del nitrógeno se realiza de dos formas: asimilándolo como nitrógeno
celular y los nitritos que son rápidamente empleados. La capacidad de utilizar nitratos es
aprovechada por algunas levaduras en su clasificación.
- Fuentes de carbono
Algunas fuentes de carbono favorecen el crecimiento, mientras que otras estimulan la
esporulación.
Se observa un mejor crecimiento con glucosa que con sacarosa, observándose con esta
última un efecto favorable para la formación de peritecios. También se comprobó que la
glucosa 1-fosfato y la fructosa1-6 difosfato fueron igualmente activas para la esporulación. Las
fuentes de carbono que más favorecen la esporulación son: glucosa, sacarosa, maltosa y
almidón.
- Relación carbono–nitrógeno
El balance de los componentes del medio es muy importante en el crecimiento y la
esporulación, observándose que la reacción C-N influye en la formación de estructuras de
reproducción sexual. En altas concentraciones de glucosa y nitrato de potasio no favorece la
formación de peritecios.
- Microelementos
Por lo general, cuando algunos elementos esenciales están en bajas concentraciones, la
esporulación tiende a ser deprimida antes que el crecimiento sea inhibido. Ejemplo, la falta de
zinc retarda el crecimiento 10 días.
- Vitaminas
Muchos hongos no pueden sintetizar cantidades suficientes de ciertas vitaminas, dependiendo
para su crecimiento óptimo de fuentes externas de éstas, que se suministran en el medio.
La ausencia de vitaminas puede ocasionar en el hongo la no formación de órganos sexuales.
Tal es el caso del Melanospora destruens, la cual es capaz de crecer en presencia de biotina
como único factor del crecimiento, pero la producción de peritecios solo ocurre cuando,
además se le adiciona al medio tiamina.
Algunas especies necesitan de ácido nicotínico y piridoxina (Vit. B 6). También existe una
relación entre la concentración de los azúcares y la concentración de tiamina y biotina.
Un exceso de ciertas vitaminas puede causar una disminución en la esporulación de algunos
hongos.
 Respiración:
En general se tratan de todas las oxidaciones que producen energía, para que pueda ser utilizada
por la célula. Puede ser aerobia o anaerobia.
La respiración aerobia es definida por el hecho de que el último aceptor de electrones es el
oxígeno molecular.
En la respiración anaerobia, el hidrógeno proveniente del sustrato es transferido de compuestos
inorgánicos tales como nitratos, sulfatos y carbonatos, que actúan de aceptores finales de
electrones.
 Existe otro mecanismo metabólico por el cual, aunque menos eficiente, la célula obtiene energía;
en este proceso el aceptor final de electrones es un compuesto orgánico, siendo ella la
fermentación.
En los hongos filamentosos, la energía se obtiene, fundamentalmente, a través de la respiración
aeróbica, aunque se ha observado que varios de ellos son capaces de fermentar la glucosa.
 Reproducción:

Es la formación de nuevos individuos que tienen todas las características de la especie, hay dos
tipos de reproducción: la sexual y la asexual.
No todos se reproducen de las dos maneras, algunos sólo de forma asexual (porque no tienen
sexo o no lo sabemos), son los hongos imperfectos. Los hongos que se reproducen tanto asexual
como sexualmente son los hongos perfectos.

- Reproducción Asexual:

Cuando no se conoce ninguna etapa sexual la clasificación está basada en el desarrollo

morfológico de los conidios (propaulos reproductores asexuales). Pueden formarse sobre
conidióforos especializados, sobre los lados o extremos de hifas no especializadas, o a partir de
una célula o de una hifa. Cuando más de una clase de conidios es producida dentro de una
colonia determinada, los pequeños conidios unicelulares son llamados microconidios y los
grandes macroconidios.

Mecanismos de reproducción asexual. Tipos de esporas (conidios)

Artrosporas Ej. Coccidiodes.

 Fragmentación del talo:

Clamidosporas Ej. Spirotrichum

 Fisión: División de células somáticas en dos células hijas.

 Gemación de células somáticas: Blastosporas Ej. Levaduras.
 Mitosporas: Producción de esporas micóticas donde cada una forma un tubo germinativo que
se elonga para generar una hifa y posteriormente un micelio.

Existen dos tipos principales de mitosporas:

1. Esporangiosporas: Mitosporas que se forman dentro de un esporangio, el cual sale de un
esporangióforo (hifa que produce o sostiene al esporangio).
2. Conidiosporas: Mitosporas que se forman lateral o apicalmente en las hifas, sobre una
estructura llamada conidio, la cual a la vez es producida por un conidióforo.

- Reproducción Sexual:
La reproducción asexual implica una alternancia haploide-diploide que involucra la unión de 2
gametas (n) que unen sus citoplasmas para formar un dicarión (n + n) que, tras la cariogámia,
formará un cigoto (2n). Esta célula diploide puede, tras una meiosis, volver a formar células
haploides. Durante la formación de esporas sexuales ocurre la meiosis.
Tipos de esporas sexuales:
Zigosporas: Fusión de las puntas de las hifas cercanas. Ej. Mucorales.
 Ascosporas: Se forman de cuatro a ocho esporas dentro de una célula especializada (Ascos).
Ej. Saccharomyces cerevisiae.
Basidiosporas: Se forman cuatro esporas sobre la superficie de una célula especializada. Ej.
Mohos Filamentosos.
Mecanismos de reproducción sexual en los hongos:
 Copulación planogamética
En este mecanismo, cuando menos, una de las gametas es móvil. Este tipo de reproducción
se presenta en Oomycetes y Chitridiomycetes.
 Contacto gametangial
En éste solamente hay contacto de gametángios; los anterozoides pierden su membrana
quedando solamente el núcleo desnudo que fecunda a la oosfera por medio de corrientes
citoplasmáticas. Este tipo de reproducción se presenta en Oomycetes y en Ascomycetes.
 Copulación gametangial
En este, los extremos de una hifa se ensanchan (formando un progametangio) y forman un
septo (gametangio). Dos gametangios que sean compatibles se fusionan y forman un
cigosporangio con una cigospora. Este tipo de reproducción se presenta en Cigomycetes y
Chitridiomycetes.
 Espermatización
Es un tipo de reproducción en la que un espermacio, formado en un espermacióforo se une a
una hifa receptiva del mismo. Se presenta en Basidiomycetes y en Ascomycetes.
 Somatogamia
La somatogamia implica la unión de hifas somáticas para formar un micelio dicariotico.
Se presenta en Basidiomycetes y en Ascomycetes.
 Efectos Perjudiciales:
Desde el punto de vista perjudicial los hongos son productores de un gran número de
enfermedades, las cuales se conocen bajo el término de micosis.

Caracteristicas de las infecciones micoticas

 Generalmente producidas por hongos de reproducción asexual.
 No presentan en su mayoría magnitudes epizootiológicas ni epidemiológicas.
 La mayoría de los hongos provocan micosis exógenas (vienen del exterior), excepto la
Candida albicans, que además de endógena también puede tener origen exógeno.
 Generalmente necesitan de factores predisponentes.
 Pueden realizan procesos granulomatosos.
 No es suficiente la inmunidad humoral para la protección.
Clasificacion de los hongos según su poder patógeno:
Patogenos: son capaces de producir enfermedades por ellos mismo
Patógeno primario: por sí solo es capaz de provocar una infección.
Patógeno oportunista: requiere de condiciones predisponentes por parte del individuo
(inmunodepresoras) para poder infectarlo
Oportunistas: Necesitan de un factor predisponente.
La mayoría de los hongos son oportunistas, y dentro de ellos hay una levadura, la Candida
albicans, que habita normalmente en el organismo de animales de sangre caliente (su hábitat
natural es en la mucosa intestinal y vaginal); que provoca una micosis llamada moniliasis o
candidiasis, cuando hay un proceso en que el organismo baja sus defensas y también por
alteraciones del balance ecológico (por: diabetes, embarazo, mala nutrición, deficiencias
vitamínicas, terapia prolongada con corticoides, tratamientos prolongados con antibióticos
 antibacterianos de amplio espectro que destruye la flora bacteriana y no a las levaduras y
también por la invasividad de este agente),la levadura exalta su virulencia.
Importancia de los hongos de acuerdo a su patogenicidad en los animales

La infección por hongos dependen de diferentes factores, tales como: especie, raza, sexo, edad,
estado de salud, causas predisponentes, condiciones ambientales (exceso de humedad,
temperaturas elevadas, mala ventilación y hacinamiento) y aspectos referentes a la patogenicidad
y virulencia del agente.

Patogenia general de las micosis

- Acción mecánica. Los filamentos, cuando penetran en el tejido lo disocian y rompen

las fibras.

- Acción irritativa/inflamatoria. Las inflamaciones son reacciones de defensa del

organismo. La van produciendo conforme van avanzando.

- Acción bioquímica destructiva. Enzimas proteolíticos que rompen células.

- Acción tóxica. Muchas enzimas son toxinas que matan células y provocan focos
necróticos.

- Acción antigénica (alergénica). Producen un determinado tipo de hipersensibilidad al

sistema inmune. Con lesiones estériles (ni el agente, ni la toxina se encuentran ya
allí)

Los hongos pueden producir diferentes enfermedades en los animales, que dependen del agente
infector y del individuo que infecta. Mecanismos de acción patogénica.

-Micetismo o Envenenamiento: debido a la ingestión de hongos que tienen un componente

químico- tóxico o venenoso en su composición. Intoxicación alimentaria por la ingestión de
sustancias químicas constituyentes de las setas.

-Alergenicidad: debida a la interacción del hospedero con elementos antigénicos del hongo, lo
que le provoca un proceso de hipersensibilidad o alergia.

-Micotoxicosis: entidad clínica provocada por la ingesta de toxinas elaboradas por el

metabolismo del hongo (micotoxinas) al crecer sobre algún alimento (hongos anemófilos). Y luego
puede desaparecer el hongo, dejando su toxina.

-Micosis o Invasividad de los tejidos: enfermedades producidas por la invasión de hongos en

los tejidos superficiales o profundos del hospedero. Los hongos, invadiendo los tejidos, provocan
verdaderas infecciones. Estas micosis se clasifican según su localización en: superficiales o
cutáneas, subcutáneas y sistémicas o profundas.

- Infecciones superficiales: (Cutáneas). Afectan al estrato córneo de la piel y anejos cutáneos:

pelos, plumas, cuernos, picos y uñas. Dentro de los hongos que las causan distinguimos los
saprofíticos (aprovechan el mal estado de la piel) y los hongos patógeno primarios
(queratinolíticos). Como los dermatofitos (productores de tiña). Ej. géneros: Trichophyton y
Microsporum.

-Infecciones subcutáneas: afectan al tejido subcutáneo y a la piel. Como los micetomas (el
agente forma una placa en la bolsa gutural de los caballos, crece e invade la carótida interna y
muere por hemorragias en pocas horas) que son producidos por la fase asexual de Aspergillus
nidulans. La fase sexual es de Emericella nidulans, cuando se cultiva, aparece directamente la
fase sexual. También pueden producir infecciones subcutáneas la esporotricosis y la
rhinosporidiosis.

-Infecciones sistémicas: causadas por hongos patógenos .Por lo general penetran por las vías
respiratorias altas y luego se diseminan por todo el cuerpo. Como ejemplos tenemos: la
histoplasmosis, blastomicosis, paracoccidiomicosis y coccidiomicosis.

PROCEDIMIENTOS DE LABORATORIO PARA EL DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO

DIRECTO DE LOS HONGOS

1-Examen Directo al Microscopio (E.D.M.).

Observación de estructuras microscópicas

(forma, tamaño, tinción).

2-Siembra, cultivo y aislamiento.

Caracterización macroscópicas y microscópicas

de las colonias.

3- Pruebas Bioquímica

Clasificación taxonómica de los

Microorganismos.

4-Técnica del antibiograma

Elección del antibiótico ideal para orientar

el posible tratamiento.

5-Prueba Biológica

Permite poner en práctica los postulados de Koch.

6-Pruebas moleculares

Permite la identificación, clasificación

y evolución de los microorganismos. Tales como el PCR.

Procedimiento microscópico de uso común para el diagnóstico de infecciones micóticas.

Procedimiento Microcópico Propósito

Muestras conteniendo tejidos o El alcalis fuerte degrada la muestra y

raspados de costras, escamas o pelos, permite visualizar estructuras del
montadas en fresco en KOH del 10% al hongo.
40%.

Porciones desmenuzadas de colonias Permite observar la morfología micótica

micóticas montadas en fresco y en azul y la presencia de esporas. Degrada a
de algodón lactofenol. los hongos y proporciona un contraste
adecuado.

Cortes de tejido y material biológico El reactivo PAS y la plata tiñen las

teñidos con ácido periódico-schiff (PAS) paredes celulares micóticas para dar un
o con plata. contraste adecuado con el fondo en
cortes de tejidos y materiales
biológicos.

Procedimientos macroscópicos de uso común para el diagnóstico de infecciones

micóticas.

Procedimiento Macroscópico Propósito

Agar glucosa sabouraud para cultivo; El pH bajo del medio y la incubación a TA

incubación a temperatura ambiente (TA) favorecen la proliferación de hongos pero
hasta por seis semanas. no de bacterias. También pueden
agregarse antibióticos como por ejemplo
cloranfenicol y cicloheximida para inhibir
el crecimiento de bacterias y de hongos
respectivamente.

Agar sangre o agar infusión cerebro- Varios hongos crecen a 37 0C. La fase de
corazón a 37 0C por 24-48 horas, hasta levadura de los hongos dimórficos crece
una semana o más. a esta temperatura.

Cultivos en laminillas, con bloques Permite la observación del crecimiento

inoculados de agar glucosa de sabouraud micótico casi sin alterar. Es útil en
(alrededor de 1 cm2 de 2-3mm de particular para identificaciones dudosas y
espesor) sobre una laminilla colocar un conocer la tasa de crecimiento del hongo.
cubreobjeto e incubar en cámara húmeda
a TA; cuando las esporas se forman el
cubre objetos se levanta con cuidado y
se examina montándolo en fresco con
azul de algodón lactofenol.
Hongo Productor de Enfermedades Respiratorias y Aborto

Agente Etiológico:Aspergillus fumigatus.

Enfermedad: Aspergilosis.
Características de la Enfermedad y Animales Susceptibles:
Aspergillus es un ejemplo de lo que denominamos "patógeno oportunista", es decir, que suele
afectar a pacientes con mecanismos de defensa comprometidos. Entre los factores de
patogenicidad de este hongo se encuentran:
 El pequeño tamaño de sus conidias que permite que sean aspiradas y que pueda causar
infección en el pulmón y en los senos paranasales.
 Su capacidad de crecer a 37ºC, lo que le hace idóneo para afectar al humano y muchos
animales.
 Su capacidad de adherencia a superficies epiteliales y posiblemente endoteliales y su gran
tendencia a invadir los vasos sanguíneos.
 La producción de un gran número de productos extracelulares tóxicos para las células de
los mamíferos (elastasa, restrictocina, fumigatoxina).

Los Hongos del género Aspergillus son ubicuos y cuando son favorables las condiciones de
humedad y temperatura, se desarrollan profusamente en el heno, pienso, en plantas en
descomposición y ditritus animales. Estos Mohos Monomórficos producen cantidades
prodigiosas de esporas que forman con facilidad aerosoles en el medio, las esporas inhaladas
provocan la enfermedad. La Aspergilosis es una enfermedad infecciosa, que afecta
generalmente al aparato respiratorio que se manifiesta por la formación de nódulos caseosos
amarillos que se instalan primariamente en el pulmón, con posterior diseminación a otros
sistemas orgánicos, fundamentalmente en animales o personas con otras enfermedades
debilitantes o a causa de estrés. Con mayor evidencia en aves que en los mamíferos.
Aves:
Es mortal en pollitos con menos de dos semanas, muestran:
 Anorexia y adelgazamiento.
 Fiebre.
 Somnolencia.
 Signos respiratorios (secreciones nasales, coriza, disnea, jadeo y respiración acelerada).
 Diarrea.
 Polidipsia.
 Algunos pollitos presentan lesiones oftálmicas y en la piel.
 La letalidad puede llegar al 20%.
 En la necropsia se pueden observar fundamentalmente pulmones, sacos aéreos y otras
serosas con nódulos caseosos amarillos.

Bovinos:
Son una causa de aborto micótico en los mamíferos, en particular en el ganado vacuno. Aparece
generalmente entre el 6to- 8vo mes de gestación. En el feto se observa una hiperqueratosis con
alopecía areata (caída del pelo en determinadas áreas) y manchas de color verde a gris humo
cuando es típica la enfermedad. Hay retención placentaria.
 Equinos:
Produce infecciones en piel y mucosas.
Perros:
Se reportan casos con lesiones en el aparato respiratorio incluyendo los cornetes nasales.

Toma, conservación y envío de muestras

En el caso de Aspergilosis pulmonar en animales mayores se deben enviar al laboratorio de
Micología fragmentos de pulmones en especial donde se encuentra la lesión.
En aves; aves en diferentes estadios de la enfermedad y muertas, además de algunas
muestras de pienso, de la paja de la cama, de las excretas y de la contaminación ambiental
de las incubadoras y de las instalaciones.
Cuando se produce aborto micótico se recogen porciones de placenta, el feto o contenido
gástrico de éste, muestras de piel y diferentes vísceras.
Todo se debe enviar en recipientes estériles, frescas o conservadas en refrigeración o
congelación, con los datos de la necropsia, de la empresa y otros de importancia.

DIAGNÓSTICO MICOLÓGICO DIRECTO

- Examen Directo al Microscopio
Calentamos al rojo vivo con la ayuda de un mechero la espátula; cauterizando la zona exterior
de la parte lesionada y con una pinza y una tijera estéril extraemos la parte esterilizada, para
posteriormente con el asa bacteriológica, depositar el contenido del material infeccioso entre
cubre y portaobjeto, sobre una gota de agua destilada estéril o de NaOH al 10 % o de
Lactofenol.
De esta forma en el examen directo al microscopio óptico de campo claro, utilizando el lente
seco, de menor a mayor aumento, observaremos en algunas ocasiones; las típicas hifas
conidióforas que son lisas, incoloras, que poseen tabiques o septos. En los pulmones y sacos
aéreos (oxigenados) se ven cabezas conidiales columnares (cadenas paralelas de conidias:
microconidias), monoesterigmáticas (una sola cadena de esterígmas en fiálides:
monoesterígmata), las conidias son globosas y equinuladas de color verde, de 3 micrones de
diámetro y tienen un crecimiento basípeto (la de menor tamaño y más joven se encuentra
más cerca del esterígma, la más vieja y más grande se encuentra más alejada del esterígma),
que brotan de la mitad anterior de la vesícula. Todo parte de una célula podal que se
encuentra en el micelio vegetativo.
- Cultivo
Sembramos en la superficie del Agar Sabouraud con Estrepto-Penicilina y sin Actidione o en el
medio de Czapek (en tubos o en placas de Petri) con la aguja el material sospechoso,
poniendo los medios en incubación a 25-30oC de 3-7 días. Puede crecer también a 37oC o
más temperatura e incluso en otro tipo de Agar como el Agar Sangre.
- Características Macroscópicas de las Colonias
El crecimiento es rápido (entre 2-5 días), apareciendo colonias blancas deshilachadas, que
se convierten en azul-verdosas y pulverulentas (conforme se desarrollan las cabezas
conidiales). Al envejecer las colonias adquieren coloraciones grisáceas (gris humo, de ahí el
nombre de fumigatus).
- Características Microscópicas de las Colonias
Depositamos una gota de agua destilada o de Lactofenol, en un portaobjeto limpio y
desgrasado, flameamos una aguja bacteriológica, y luego de destapar, cerca del mechero, el
tubo con el Agar Sabouraud o Czapek germinado y flamearlo, extraemos una pequeña
porción de la colonia, depositándola rápidamente en el portaobjeto, tapando éste con un
 cubreobjeto. Flameamos la boca del tubo, lo tapamos y esterilizamos la aguja.
Posteriormente observamos al microscopio óptico compuesto de campo claro con el lente
seco de menor a mayor aumento, que las cabezas conidiales son columnares y compactas,
con cadenas paralelas de conidios (fialosporas). El conidio es rugoso, equinulado de color
verde, esférico de 3 micrones de diámetro, tiene crecimiento basípeto (la conidia más vieja y
por consiguiente la más grande también, es la más alejada del conodióforo y de la fiálide, y la
más joven y también la más pequeña, es la más próxima al conidióforo y a la fiálide) y nace de
una fila sencilla de esterígmas o fiálides (monoesterígmatus). Los esterígmas o fiálides están
situados sobre la porción terminal de una vesícula en forma de ampolla, siendo sostenida por
la hifa conidiófora que es lisa, incolora, que posee tabiques o septos; la hifa del Aspergillus
mide 500nm de largo, la cual brota de la Célula Podal (que es el micelio vegetativo, que
posee septos o tabiques) que se observa al igual que las otras estructuras cuando hacemos
el microcultivo.
- Microcultivo (cultivo sobre portaobjeto).
Cuando el aspecto de los esporos es atípico y su identificación es dudosa, se lleva a cabo un
cultivo en portaobjeto (microcultivo), del modo siguiente:
 De una Placa de Sabouraud Agar de 2 mm de profundidad (o Agar Czapek), cortar 1cm 2
de medio de cultivo y colocarlo sobre un portaobjeto estéril con una pinza esterilizada.
 Inocular los cuatro bordes del bloque con una pequeña porción de cultivo (con una aguja
que contiene esporos).
 Colocar un cubre estéril sobre el bloque de Agar.
 Llevarlo a una cámara Húmeda cerrada (Placa de Petri grande con varias capas de papel
secante empapadas en agua de glicerina al 20 % y con un soporte en ‘’ V’’, en donde se
coloca el microcultivo).
 Incubar a temperatura de la habitación y examinar sin desalojar el cubre cada dos o tres
días.
 Lo antes posible, en cuanto aparezca una esporulación adecuada, quitar el cubre y
colocarlo con la mayor parte del cultivo adherido cara arriba.
 Quitar el bloque de Agar del porta y agregar una gota de alcohol al cubre y al porta. Un
poco antes de la evaporación del alcohol añadir una gota de azul de lactofenol a las dos
muestras.
 Colocar un porta limpio sobre el cubre y un cubre limpio sobre el porta. Marcar y cerrarlo
con laca o con Bálsamo de Canadá.
 Examinar al microscopio de campo claro con el lente seco de menor a mayor aumento.
 Observaremos las características microscópicas de Aspergillus fumigatus.

- Observación de la Tasa de Crecimiento del hongo en Agar Sabouraud o en Agar

Czapek, invertidas.
Se determina la tasa de crecimiento del hongo, midiendo el diámetro de la colonia en el tiempo
de desarrollo del agente y relacionarlos entre sí.
- Técnicas de Biología Molecular (PCR)
Recientemente se ha desarrollado una PCR que amplifica una región de ADN ribosomal muy
específica de Aspergillus fumigatus cuyos resultados preliminares son muy alentadores por su
elevada sensibilidad y especificidad.
DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO INDIRECTO
Las pruebas inmunológicas de detección de anticuerpos constituyen un método diagnóstico de
gran utilidad en los aspergilomas humanos, ya que aproximadamente el 90% de los pacientes
poseen anticuerpos detectables. La técnica más utilizada es la de Inmunodifusión, aunque se
han desarrollado otras con mayor sensibilidad, como el enzimoinmunoensayo (ELISA),
Radioinmunoensayo y métodos de Inmunofluorescencia Indirecta(IFI). A diferencia de lo que
ocurre con el aspergiloma, estas técnicas no son útiles en el diagnóstico de aspergilosis
invasivas.

Se están estudiando diversos métodos de detección de antígenos, como el galactomanano, o de

sus metabolitos, como el d-manitol, tanto en el suero como en la orina u otros líquidos corporales.
Las técnicas habitualmente utilizadas son el Enzimoinmunoensayo, el Immunoblotting y el
Radioinmunoensayo. Aunque estos métodos tienen una gran especificidad, su sensibilidad no
es muy alta, debido al rápido aclaramiento de los antígenos del suero, que hace necesario un
seguimiento prospectivo y seriado de los pacientes. En la actualidad no forman aún parte del
conjunto de técnicas diagnósticas habitual en hospitales.

DIAGNÓSTICO CONFIRMATIVO

Observar las estructuras típicas del Hongo en los tejidos, las lesiones y las características Macro
y Microscópicas de las colonias.

INMUNOPROFILAXIS E INMUNOTERÁPIA

No se aplican.

1- Trichophyton verrucosum
Enfermedad: Tiña Favosadel ganado bovino.
Características de la Enfermedad y Animales Susceptibles
Trichophyton verrucosum es un dermatófito zoofílico, determina la gran mayoría de las
dermatomicosis del ganado vacuno y de manera ocasional afecta a caballos, perros, gatos y
cerdos. Con frecuencia contraen la infección las personas que atienden a los bovinos
infectados.
Los esporos contenidos en los pelos y escamas dérmicas infectadas pueden alojarse en los
postes de madera y permanecer viables durante varios años, perpetuando así el origen de la
infección.
En el ganado bovino adulto las lesiones están distribuidas por todo el cuerpo,
preferentemente en: la cabeza, el cuello (costras que dejan escaras húmedas y sangrantes),
los lados del tronco y la espalda.
En los terneros las lesiones están al final de la cabeza, alrededor de los ojos y ambos lados
de las orejas; en algunas ocasiones las lesiones aparecen en las partes bajas de las
extremidades, grupa y rabo.
Aparecen escamas en lesiones que pueden ser regulares en su mayoría, con exudado y
caída total del pelo, que con el tiempo se van secando formando costras.
Toma, conservación y envío de muestras
Se limpia y desinfecta la zona lesionada con alcohol al 70 % y después de evaporarse éste,
en una placa de Petri o nylon, por medio de un bisturí y una pinza estériles, se depositan
pelos que se encuentran en los alrededores de la lesión alopécica, más escamas y costras
recogidas a través de un raspado de la piel.
Diagnóstico Microbiológico Directo
Examen Directo al Microscopio
 Los pelos se observan en un cuarto oscuro a la luz ultravioleta de la lámpara de Wood.
Trichophyton verrucosum no es fluorescente. Fluorescencia (-).
 Tratamos en un portaobjetos un fragmento de costra y pelos con Hidróxido de Sodio (NAOH) o
de Potasio del 10 – 40 %, o Lactofenol, o Azul de algodón, tapamos con el cubreobjetos y
observamos al microscopio óptico compuesto de campo claro, con el lente seco de menor a
mayor aumento. Si la muestra es positiva observaremos que los pelos presentan disposición
Ectothrix Megasporado con cadenas de artrosporas muy grandes (de 5 – 10 nm. de diámetro)
por fuera del pelo y con micelio dentro del mismo. En las costras y escamas se encuentran
hifas y algunas microconidias.

Cultivo
Sembramos en Agar Sabouraud (pH 5,6) que contenga un agregado de Tiamina (Vit B1) más
Inositol.
Por último sembramos en Agar D.T.M (Dermatophytos Test Medium) el cual es un medio
selectivo de aislamiento para los Dermatófitos por tener tetraciclina o gentamicina, que inhiben el
crecimiento bacteriano y posee también actidione o ciclohexamida, que no permite el desarrollo
de los hongos saprofitos, además contiene Rojo de Fenol como indicador de pH para detectar la
producción de amoniaco (NH3), por la alcalinización que producen los Dermatófitos en el medio,
mediante la coloración Roja que produce.
El crecimiento se favorece mediante la incubación a 37 C de 3 – 4 semanas. Aunque puede
incubarse a temperatura ambiente de 25 C aproximadamente.

Características Macroscópicas de la colonia

Trichophyton verrucosum se caracteriza por un crecimiento muy lento; formando en 3 – 4
semanas colonias desde blancas a amarillas, hacinadas y arrugadas, pudiendo presentar
tres variedades de colonias:
1- Variedad ochraceum o verrucosa
Se origina una pequeña colonia de superficie muy irregular, verrugosa y que da un intenso
pigmento amarillo.
2- Variedad album
La colonia tiene aspecto esponjoso, color de cera, de crecimiento superficial con una saliente
central esponjosa y una areola pulverulenta.
3- Variedad discoide
Se origina como lo dice su nombre cuando la colonia es plana como un disco, unas veces
glabra (lisa) y otras aterciopeladas. En su centro se observa un pequeño nódulo.
Características Microscópicas de la colonia
Las Microconidias son abundantes y están dispuestas a lo largo de los filamentos (hifas) o en
racimos.
La micromorfología por lo general es pobre. Los más frecuentes elementos que aparecen al
final, son las Clamidosporas en mayores o menores cadenas longitudinales. Las
Macroconidias muy rara vez se forman.
En resumen se ven hifas llenas de Clamidosporas y de vez en cuando un Candelabro Fávico.
Pruebas Biológicas (Bioquímicas)
1- Pruebas Nutricionales
 Realizamos la siembra de la colonia en Caseína sin Vitaminas, en Caseína con Tiamina y en
el medio de Caseína + Tiamina + Inositol.
Luego de 3 – 4 semanas a temperatura ambiente, obtendremos que:
- En el medio de Caseína libre de vitaminas no crece (diferenciación con Trichophyton
schenleini).
- En Caseína + Tiamina crecen el 16 % aproximadamente.
- En el medio de Caseína + Tiamina + Inositol crecen el 100 %.
2- Pruebas Enzimáticas
Sembramos un fragmento de colonia en los tubos con Tirosina, Caseína, Urea, Gelatina Y
Almidón, que luego de 2 – 3 semanas de incubación a temperatura ambiente observaremos
en los casos positivos lo siguiente:
- Tirosina (-) (importante).
- Caseína (+).
- Urea (variable).
- Gelatina (+).
- Almidón (-).
3- Prueba Queratinolítica
Para realizar la Prueba Queratinolítica cogemos una Placa de Petri, con pelos humanos
estériles, agregamos agua destilada y depositamos un fragmento de la colonia sobre los
pelos, tapamos la Placa y la dejamos durante unos días a temperatura ambiente.
Posteriormente realizamos un examen de los pelos al microscopio óptico de campo claro, con
el lente seco de menor a mayor aumento, donde podremos observar que Trichophyton
verrucosum en los pelos ¨in vitro ¨ produce queratinolisis Coaxial (de forma longitudinal) a
diferencia de otros Trichophyton que la producen Rectangular.
Nota: Además se puede observar el diámetro aproximado de la colonia en Placa Invertida
después de 10 días, que en el caso de Trichophyton verrucosum oscila entre 5- 10 mm.
Inmunoprofilaxis
La enfermedad en los terneros se encuentra bastante controlada desde la introducción masiva
de la vacunación con la vacuna LTF-130 de fabricación soviética.

Microsporum canis

Enfermedad: Tiña Microspórica.

Características de la enfermedad y animales susceptibles:
Microsporum canis es un Dermatófito Zoofílico, siendo el agente más común de la Tiña
Microspórica.
La infección proviene generalmente de animales domésticos, la propagación es
posteriormente interhumana.
Ataca fundamentalmente a perros y gatos.
En el Perro produce caída del pelo en áreas circulares circunscritas con pequeña
descamación de la piel (Tiña Tonsurante).
El Gato es atacado con frecuencia por el Microsporum canis cuando son jóvenes o pequeños
(los adultos, generalmente, son portadores sanos del M. canis, constituyendo un peligro para
los Niños, los Perros y los gatitos jóvenes).

Toma, conservación y envío de muestras

Se limpia y desinfecta la zona lesionada con alcohol al 70 % y después de evaporarse éste,
en una Placa de Petri o nylon, por medio de un bisturí y pinzas estériles, se depositan pelos
 que se encuentran en los alrededores de la zona alopécica, más escamas y costras recogidas
a través de un raspado de la piel.
Diagnóstico Micológico Directo
Examen Microscópico Directo de la Muestra:
 Se deben observar las lesiones de los Perros y de los Gatos con una Lámpara Wood (Luz
Ultravioleta), ya que Microsporum canis produce fluorescencia verde – amarilla. Esto no se
puede tomar como diagnóstico final, ya que existen otros Microsporum que producen la
misma fluorescencia, pero sí nos permite orientar el diagnóstico.
 Después de la observación de las lesiones y haber recogido asépticamente las muestras,
tratamos en un portaobjetos un fragmento de costras y pelos con Hidróxido de potasio o de
sodio al 20 %, o Lactofenol, o Azul de Algodón; tapamos con un cubreobjetos y observamos
al microscopio óptico compuesto de campo claro, con el lente seco de menor a mayor
aumento.
 En los pelos afectados, es posible hacer un diagnóstico presuntivo, no solamente de
Dermatófitos o Tiña, sino a veces se puede sospechar del Género y hasta de la Especie (en
veterinaria), orientándose por el tamaño, la localización y ordenamiento de las artrosporas en
el pelo.
 Microsporum canis produce Ectothrix Microspórico, presentando exteriormente una vaina de
pequeñas artrosporas (2 –3 mm. de diámetro), que forman un mosaico alrededor del pelo.
 En los raspados cutáneos se observan Hifas Septadas (con tabiques), que a menudo se
segmentan para dar lugar a cadenas rectangulares de Artrosporas u Oidios.
Cultivo
Posteriormente, sembramos en Agar Sabouraud ¨ CC ¨(con ciclohexamida y cloranfenicol) en
tubos y en placas, y en Agar D.T.M. (Dermatophytus Test Medium) en tubos; con la aguja el
material sospechoso (pelos, escamas y costras), poniendo los medios en incubación de 25 –
30 C.
Características Macroscópicas de la colonia
Crece con rapidez, produciendo una colonia filamentosa Blanco – Lanosa o Vellosa, que
cuando se desarrolla adquiere color amarillo (de cuero).
Hacia la segunda semana este pigmento se difunde al medio y el reverso se pone de color
pardo – rojizo.
Características Microscópicas de la colonia
Las Macroconidias son abundantes, son características sus alargadas Macroconidias
fusiformes (75 nm.) y con extremos afilados ¨Forma Navicular¨, con 6 – 12 células
(pluriseptados) y con gruesa pared verrugosa o equinulada, con tabiques transversales que
circunscriben amplias celdillas, que aparecen al 5 to-6to día. Se observan Hifas en Raqueta
Pectinadas, Cuerpos Nodulares y Clamidosporas (Hifas en raquetas, escasas espirales y
clamidosporas e hifas pectinadas en los cultivos viejos).
Escasas Microconidias Maciformes nacen de los lados de las hifas.Microconidios piriformes
(1–2 nm.) habitualmente escasos, en breves racimos o sésiles, que brotan lateralmente de la
hifa.
Pruebas Biológicas (Bioquímicas)
1- Prueba Queratinolítica
Para realizar la Prueba Queratinolítica utilizamos Placas de Petri con pelos estériles de
vacuno o caballo, agregamos agua destilada y depositamos un fragmento de la colonia sobre
los pelos, tapamos las placas y las dejamos durante unos días en incubación a 25 C - 30 C,
posteriormente realizamos un examen de los pelos al microscopio óptico compuesto de campo
claro, con el lente seco de menor a mayor aumento, donde podemos observar que
 Microsporum canis los ataca a ambos (pelos de vacuno y de caballo) en forma Coaxial y
Rectangular a la vez, a diferencia del M. gypseum que los ataca a ambos en forma Coaxial
solamente.
Enfermedad Gastrointestinal producida por Levadura
Especie: Candida albicans
Enfermedad: Candidiasis o Moniliasis.
Características de la enfermedad y animales susceptibles
Es una infección aguda o sobre aguda de la piel, mucosas, uñas, pico y órganos.
Viven como saprofitas en la piel normal, mucosas de la boca, vagina y en el tracto
gastrointestinal.
Varias causas pueden predisponer a la alteración del balance ecológico, tales como:
- Diabetes.
- Embarazo.
- Mala nutrición.
- Deficiencias vitamínicas.
- Terapia con corticoides.
- Tratamientos prolongados con antibióticos antibacterianos de amplio espectro.
- Contacto sexual.
Pueden provocar en:
 Ternero:
- Diarrea con melena (sangre).
- Anorexia.
- Deshidratación.
- Muerte.
 Aves:
- Úlceras en el buche.
- Exudado catarral o mucoide con pseudomembrana.
 Cerdo:
- Úlceras estomacales.
- Vómitos.
- Diarrea.
Otras alteraciones:
- Mastitis.
- Abortos.
- Neumonía.
- Metritis.
- Candidiasis cutánea
- Vulvo-vaginitis.

Toma, conservación y envío de muestras

- Exudado rectal.
- Exudados de úlceras.
- Vísceras afectadas.
Frescas, conservadas o congeladas.
Diagnóstico Microbiológico Directo
Examen Directo al Microscopio
 Con los exudados realizamos un frotis y teñimos con los colorantes de Gram.
Si aparece solamente una levadura oval teñida de azul, puede tener existencia saprofita,
debiéndose sembrar en 0,5 ml de suero sanguíneo a 37 oC durante dos horas. Si aparece lo
mismo, el caso es negativo desde el punto de vista diagnóstico (flora normal). Si aparecen
levaduras teñidas de azul, con tubos germinales y/o Pseudohifas indica colonización
patógena.
Cultivo
Sembrar en Agar Sangre y Agar Sabouraud ‘‘CC’’ (Cicloheximida y Cloranfenicol) e Incubar a
37 oC, de 3-7 días.
Examen Macroscópico de las Colonias
Aparecen colonias blancas, butirosas (mantequilla) y brillantes. Luego emiten filamentos hacia
la profundidad transformándose en la forma rugosa o membranosa cuando se ponen los
cultivos viejos.
Examen Microscópico de las Colonias
- Se observarán células levaduriformes ovoideas teñidas de azul.
- Tubos germinales (en estos casos tenemos que diferenciarlos con la Candida
stellatoideae, que no asimila la sacarosa).
- Pseudohifas.
- Blastosporas.
- Clamidosporas terminales (Si no se observa, se puede sembrar la colonia en Agar
Clamidospora de Nickerson para que se desarrollen las mismas).
Pruebas Bioquímicas
 Pruebas de Fermentación de carbohidratos (Zimograma).
Para diferenciarlas de otros géneros patógenos. Ej: Cryptococcus y Rhodotorula.
 Pruebas de asimilación de carbohidratos (Auxograma).
Para diferenciarla de las otras especies de Candidas. Se utilizan:
- Glucosa: + (acidez y gas)
- Lactosa: -
- Maltosa:+ (acidez y gas)
- Sacarosa: + (acidez)
- Rafinosa: -
Pruebas Biológicas o Inoculación Experimental
Al conejo por vía endovenosa le produce la muerte a los 5 días. Con abscesos en vísceras
(parte cortical del riñón).
Diagnóstico Microbiológico indirecto
No se emplea con frecuencia.
La detección de anticuerpos como método diagnostico en las candidiasis, tiene como
limitantes, la frecuente existencia de títulos de anticuerpo en individuos sanos, por ser estos
microorganismos parte de la flora normal del tracto gastrointestinal y la difícil detección de
títulos de anticuerpos en pacientes inmunodeprimitidos. Sin embargo, en los últimos años se
han obtenidos altos índices de sensibilidad y especificidad utilizando los métodos para
detectar anticuerpos contra tubos germinativos y componentes de la pared celular de Candida
albicans en candidiasis sistémicas de pacientes inmunocomprometidos.

Inmunoprofilaxis e Inmunoterapia

No tiene.

Especies del género Candida, más frecuentes como patógenas:

 - Candida albicans.
- Candida dubliniensis.
- Candida tropicalis.
- Candida glabrata.
- Candida parapsilosis.
- Candida lusitaniae.
- Candida guilliermondii.
- Candida krusei.
- Candida rugosa.
Identificación: morfología microscópica y pruebas bioquímicas realizadas con galería API-
32C (bioMérieux).
Pruebas de identificación de especies de Candida:
 Formación de tubo germinativo en suero o clara de huevo.
 Zimograma o fermentación de carbohidratos.
 Auxograma o asimilación de carbohidratos.
 Microcultivos en Agar maíz-arroz.
 Producción de velo en medio Sabouraud líquido.
 Utilización del sistema API 20 C Biomeriux.

Otra Especie de levadura monomórfica:Cryptococcus neoformans
Enfermedad: Criptococosis, Torulopsis o Enfermedad de Busse-Buschke.
Características de la enfermedad y animales susceptibles: Cryptococcus neoformans es
una levadura monomórfica encapsulada, que vive como saprófita en frutas, leche de varios
animales y sobre todo en el excremento de aves como las palomas.
Es una micosis oportunista de evaluación aguda, sub-aguda y crónica, que se adquiere por vía
respiratoria (inhalación de la levadura con polvo contaminado), de localización pulmonar en el
90%y especial afinidad por el Sistema Nervioso Central (SNC), pudiendo afectar también
cualquier víscera, musculo, piel y mucosas. La diseminación ocurre en pacientes con
inmunodeficiencias. Es cosmopolita y rara. Es la micosis más frecuente en pacientes con
SIDA (en todo paciente humano con criptococosis debe solicitarse pruebas para SIDA).
Tomando en consideración la localización de las lesiones, pueden producirse criptococosis:
- Pulmonar.
- Meningo-cerebral.
- Cutánea y muco-cutánea.
- Ósea.
- Visceral diseminada.
Los focos primarios en vías respiratorias dan origen a diseminaciones generalizadas, que
pueden afectar al SNC (por el cual tienen especial predilección), a estructuras óseas, piel y
otros órganos. Ataca fundamentalmente a perros, gatos, bovinos, equinos y hombre.
Perros y Gatos
Se observan granulomas subcutáneos e infecciones de la faringe y de los senos paranasales.
Vacas
Produce una mastitis característica.
Equinos
Causa granulomas nasales que pueden extenderse a los pulmones y vísceras.
Toma, conservación y envío de muestras
Granulomas, pus, leche, secreción y raspado de las lesiones, esputo, líquido cefalorraquídeo,
fragmentos de biopsias, entre otras.
 Diagnóstico Micológico Directo
Examen Directo al Microscopio
El examen directo del material infeccioso, muestra una levadura esférica de 8 – 20 µm (sin la
cápsula mide de 3 – 9 µm), con una gruesa cápsula gelatinosa, polisacárida. Se reproduce por
gemación simple. La adición de tinta china facilita la demostración de las cápsulas
características.
Cultivo
Se siembra en Agar sangre cerebro-corazón a 37 ºC y en Agar glucosado de Sabouraud a 25
ºC (ambos con cloranfenicol 0.05g por litro y sin actidione, ya que inhibe su crecimiento).
Características macroscópicas de las colonias
En el Agar glucosado de Sabouraud a 25 ºC a la semana da una colonia elevada, lisa y
brillante, y de consistencia viscosa, la cual se desliza hacia el fondo de la cuña. De color
crema o pardo.
En el Agar sangre cerebro-corazón a 37 ºC da la misma germinación anterior (recuerde que es
un monomórfico).
Características microscópicas de las colonias
Se ve una levadura redonda con gemación simple, de un tamaño de 3–9 µm. La cápsula va
creciendo a medida que la colonia se vuelve viscosa, y se observa bien en tinta china.
Propiedades biológicas
Se diferencia de las demás levaduras en la forma siguiente:
 Hidroliza la Urea Agar de Christensen (a diferencia del género Candida).
 No produce pigmento (a diferencia del género Rhodotorula).
 No produce ascosporas (a diferencia de las levaduras verdaderas).
 No asimila el Nitrato de potasio, asimila la galactosa, crece a 37 ºC y hasta 39ºC, y es
patógena para el ratón (a diferencia de las otras especies de su género).
Inoculación experimental
Se inoculan ratones de 45 días, por diferentes vías (intraperitoneal, intracerebral e
intravenosa), los cuales mueren entre 1 y 3 semanas. Si al mes no han muerto se sacrifican.
Hallando masas gelatinosas en la cavidad peritoneal, asociadas con lesiones en cerebro y
pulmones. Se hacen preparados en tinta china y cultivos a partir de hígado, pulmones y
cerebro. Las levaduras capsuladas se verán con toda nitidez.
Diagnóstico Micológico Indirecto
Del suero y del líquido cefalorraquídeo se realizan pruebas de aglutinación en látex e
inmunofluorescencia.

– Hongo Dimórfico
Especie: Histoplasma capsulatum.
La enfermedad puede manifestarse desde formas clínicas muy leves, que algunas veces son
confundidas con catarro común, hasta formas con síntomas severos.
El diagnóstico de histoplasmosis se basa en:
- El estudio micológico (diagnóstico directo).
- El estudio inmunológico (diagnóstico indirecto).

Toma, conservación y envío de muestras

Las muestras analizadas dependerán de las manifestaciones clínicas. Podrán ser piel, fluido
de lavado bronquioalveolar, biopsia ósea o de lesiones (cutáneas, mucosas y ganglionares),
sangre para la búsqueda de histoplasmas en mononucleares (teñidos con Giemsa) y
hemocultivos (de sangre citratada), punción esternal, de hígado y de bazo (examen citológico
 y cultivo), bazo, hígado, raspados y exudados de úlceras y cortes superficiales de ganglios
linfáticos, entre otras.
Si la lesión es de piel o mucosa, se efectuará una toma de la lesión con bisturí estéril,
extrayendo abundante material. Si la lesión fuera costrosa, se deberá descostrar la misma
antes de realizar la toma.
En el caso de que se sospeche histoplasmosis visceral, el material a estudiar puede
corresponder a expectoración, biopsias de ganglios linfáticos, lavados broncoalveolares,
punción medular y punción hepática. Es importante destacar que la recolección del material
que será procesado debe realizarse en un recipiente estéril sin formol (excepto para el
laboratorio de Patología). En todos estos materiales, se realizará el procesamiento adecuado
a cada uno de ellos, para iniciar la búsqueda del agente etiológico.

Examen Micológico directo

El examen directo entre cubre y porta objeto no da resultado.

Como Histoplasma capsulatum es una levadura intracelular de pequeño tamaño, es
importante que su búsqueda y diagnóstico siempre sean efectuados por personal
debidamente entrenado.
Una vez procesada la muestra, se realizarán improntas en láminas portaobjetos, las que serán
teñidas con la técnica de Giemsa. La observación se realiza con microscopio óptico entre 400
y 1000 aumentos. Se debe buscar la presencia de macrófagos o monocitos los que pueden
tener en su interior levaduras ovoides de unos 3-5 micrómetros de tamaño, con gemación
polar y una típica tinción en casquete. Alrededor de la levadura existe un halo claro que
semeja una cápsula y corresponde a la retracción del citoplasma, de donde deriva el nombre
de capsulatum. El citoplasma se observa de color celeste y el núcleo como un punto rojo
difuso. Otras tinciones que pueden utilizarse son: PAS, Gomori-Grocott, o hematoxilina-
eosina.
Cultivo
El aislamiento del hongo en los medios de cultivo certifica el diagnóstico. Será la primera
manipulación a realizarse una vez preparado el material a procesar, para evitar posibles
contaminaciones con hongos ambientales.
Histoplasma capsulatum es un hongo dimórfico, con dos formas morfológicamente diferentes:
a 28 ºC (temperatura ambiente), se desarrolla en forma filamentosa, con morfología
microscópica característica de microconidios y macroconidios verrucosos terminales, siendo
ésta la forma de desarrollo saprofítico. Cuando parasita a 37 ºC, lo hace en forma de levadura.
Para el diagnóstico etiológico se realizan cultivos en distintos medios (Agar Sabouraud,
micobiotic, Agar Saboraud "CC" y otros) que se mantienen entre 25- 28 ºC. Éstos son
observados en forma periódica y se mantienen en el laboratorio por lo menos un mes antes de
descartarlos.
Para confirmar el dimorfismo se cultiva a 37 ºC en Agar infusión de cerebro-corazón o Agar
sangre, desarrollándose en estos la forma de levadura.
Características macroscópicas de las colonias
 Entre 25- 28 ºC (2 - 4 semanas); las colonias son medianas, algodonosas blancas o cremas,
siendo después amarillas, tostadas, pardas y castañas.
 A 37 ºC (2-4 semanas); las colonias son pequeñas, blancas, cremosas, levaduriformes,
cerebriformes, algo membranosas.
Características microscópicas de las colonias
 Entre 25-28 ºC: Se forman un micelio con hifas septadas delgadas, con microconidias lisas
redondas, ovales o piriformes de 1,5-4 µm, sésiles o pediculadas, y con macroconidias
verrugosas (o clamidosporas tuberculadas) de 7 - 20 µm, redondas, de gruesas paredes con
proyecciones.
 A 37 ºC: Se ven levaduras ovales con yema de 1-5 µm.
Inoculación en animales
H. capsulatum se aísla de muestras muy contaminadas por inoculación al ratón.
Consiste en la inoculación del material (previamente procesado y homogeneizado con una
suspensión de antibióticos) por vía intraperitoneal a ratones de laboratorio (Mus musculus), los
que mueren por una infección generalizada o se sacrifican a los 2 meses. Posteriormente se
estudian las lesiones y se procesan el hígado y el bazo de manera similar a las biopsias de los
pacientes (cortes histológicos, frotis teñidos con Giemsa y siembras en los medios ya
mencionados).
La fase de moho se convierte en levadura por inoculación al ratón.
Este método se efectúa en laboratorios de referencia, ya que es necesario tener una reserva
importante de ratones, siendo su uso reservado para estudios experimentales.
Diagnóstico Micológico Indirecto
La histoplasmina se usa para descubrir la hipersensibilidad cutánea de los pacientes,
mediante la prueba alérgico-cutánea retardada. La prueba cutánea alérgica, positiva (leída a
las 48 horas y con una pápula de 5mm) indica infección(actual o antigua).
Los métodos inmunológicos son empleados para la detección de anticuerpos específicos o
para la detección de antígenos circulantes, a partir de diferentes fluidos corporales. En el caso
de esta micosis, las más utilizadas para la búsqueda de anticuerpos son las técnicas de
inmunoprecipitación. Es utilizada la doble difusión, que comienza a positivizarse dos a tres
semanas después de la exposición al hongo. Los primeros anticuerpos precipitantes aparecen
contra la fracción M del hongo (de micelio). Los que precipitan contra la fracción H (asociada a
la histoplasmosis activa), son más tardíos, pudiendo estar ausentes. Este estudio constituye
uno de los pilares diagnósticos en los pacientes inmunocompetentes, perdiendo valor en los
inmunodeprimidos.
Otras pruebas inmunológicas que se utilizan son: aglutinación de látex y ELISA. La detección
de antígenos circulantes por alguna de estas técnicas adquiere relevancia en los pacientes
inmunodeprimidos.