5/3/22, 10:04 USP-NF <1117> ÓPTIMAS PRÁCTICAS DE LABORATORIO MICROBIOLÓGICO

Impreso el: sáb mar 05 2022, [Link] am

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Estado Oficial: Aún no Oficial al 05-mar-2022
Fecha oficial: 1-ago-2022
Tipo de Documento: Capítulo General
DocId: 4_GUID-CE88236A-7EA2-4193-B62B-9638C88BAFEA_2_es-ES
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DOI Ref: 2o0ku
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Disponible en inglés próximamente.

〈 1117 〉 MEJORES PRÁCTICAS DE LABORATORIO

MICROBIOLÓGICO
Agregue lo siguiente:

▲
INTRODUCCIÓN

PREPARACIÓN DE MEDIOS Y CONTROL DE CALIDAD

Preparación de medios
Almacén de datos
Pruebas de control de calidad

TIEMPOS DE INCUBACIÓN EN MEDIOS MICROBIOLÓGICOS

MANTENIMIENTO DE CULTIVOS MICROBIOLÓGICOS
EQUIPO DE LABORATORIO
AL
UTILIZANDO TECNOLOGÍAS MODERNAS
DISPOSICIÓN Y OPERACIONES DEL LABORATORIO
CI
MANEJO DE MUESTRAS
EXCURSIONES A TEMPERATURA DE INCUBACIÓN
COMPETENCIAS Y FORMACIÓN DEL PERSONAL
CALIFICACIÓN DE ANALISTAS
FI

CONSIDERACIONES PARA LAS EVALUACIONES DE RIESGOS MICROBIOLÓGICOS

RECURSOS DE LABORATORIO

Supervisión de laboratorios contratados

O

Supervisión de Proveedores

TRANSFERENCIA DE MÉTODO
DOCUMENTACIÓN
MANTENIMIENTO DE REGISTROS DE LABORATORIO
RÁ

MICROBIOLOGÍA CUANTITATIVA
INTEGRIDAD DE DATOS DE DATOS MICROBIOLÓGICOS
INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS DEL ENSAYO

Uso de controles negativos

Investigaciones
SE

REFERENCIAS
▲ (USP 1-ago-2022)

Cambiar para leer:

INTRODUCCIÓN

[Link] Results&highlight=1117 1/16

5/3/22, 10:04 USP-NF <1117> ÓPTIMAS PRÁCTICAS DE LABORATORIO MICROBIOLÓGICO
▲
Las buenas
prácticas en un laboratorio de microbiología consisten en actividades que dependen de varios
▲ (USP 1-ago-2022)

principios: técnica aséptica, control de medios, control de cepas de prueba, operación y control de equipos, registro y evaluación
▲
diligentes de datos, y capacitación del personal de laboratorio en competencias relacionadas. Debido al
▲ (USP 1 de agosto de 2022)

riesgo inherente de variabilidad en los datos de microbiología, la confiabilidad y la reproducibilidad dependen del uso de métodos
▲
aceptados y el cumplimiento de buenas
prácticas en el laboratorio. Este capítulo no cubre las actividades de laboratorio únicas y
específicas para la recuperación y detección de virología y micoplasma.
▲ (USP 1 de agosto de 2022)

Cambiar para leer:

PREPARACIÓN DE MEDIOS Y CONTROL DE CALIDAD

Preparación de medios
▲
Los medios de cultivo son la base para la mayoría de las pruebas microbiológicas.
Los medios de cultivo pueden prepararse
internamente u obtenerse comercialmente. El término “medios preparados” utilizado en este capítulo cubre ambos tipos de medios.
Por lo tanto, salvaguardar la calidad de los medios es fundamental para el éxito del laboratorio de microbiología. La
▲ (USP 1-ago-2022)

preparación de medios, el almacenamiento adecuado y las pruebas de control de calidad pueden garantizar un suministro constante
de medios de alta calidad.
Es importante elegir los medios o componentes correctos al hacer los medios en función del uso de fuentes aceptadas o
referencias para fórmulas. La fórmula del fabricante y las instrucciones de preparación acompañan habitualmente a los medios
deshidratados y preparados. Debido a que los diferentes tipos de medios pueden tener diferentes requisitos de preparación (p. ej.,
calentamiento, aditivos y ajuste de pH), es importante seguir estas instrucciones para garantizar una preparación de medios de
AL
calidad aceptable. Un certificado de análisis que describe la fecha de caducidad y las condiciones de almacenamiento
▲
recomendadas acompaña a los medios preparados,
pruebas, pruebas de propiedades inhibitorias e indicativas, según corresponda,
y los resultados de las pruebas de rendimiento con criterios de aceptación para ese medio. Para los medios preparados
internamente, se deben establecer criterios de control de calidad similares.
▲ (USP 1 de agosto de 2022)
CI
El agua es el diluyente universal para los medios microbiológicos. El agua purificada se usa con mayor frecuencia para la
preparación de medios, pero en ciertos casos puede ser apropiado el uso de agua desionizada o destilada. No se debe utilizar agua
de menor calidad para la preparación de medios microbiológicos. Se debe registrar el volumen del agua utilizada.
La preparación uniforme de los medios requiere un pesaje preciso de los medios deshidratados o de los componentes de los
medios. Se debe utilizar una balanza calibrada con el rango de peso apropiado para los ingredientes (consulte Pesaje en una balanza
FI

analítica 〈 1251 〉 ). Se deben usar recipientes y herramientas de pesaje limpios (como espátulas) para evitar que entren
sustancias extrañas en la formulación. Se debe registrar el peso de los componentes.
Los medios deshidratados deben disolverse completamente en agua antes de dispensarlos y esterilizarlos. Si es necesario
calentar para ayudar a disolver los medios, se debe tener cuidado de no sobrecalentarlos porque todos los medios de cultivo, en
O

mayor o menor medida, son sensibles al calor. El equipo utilizado en la preparación de los medios debe ser apropiado para permitir el
calentamiento controlado, la agitación constante y la mezcla de los medios. El oscurecimiento de los medios (reacción tipo Maillard
o oscurecimiento no enzimático) es una indicación general de sobrecalentamiento. Al agregar suplementos requeridos a los medios,
La preparación de medios en cristalería mal limpiada puede permitir que sustancias inhibidoras entren en los medios. Las
RÁ

sustancias inhibidoras pueden provenir de residuos de detergente después de limpiar la cristalería o de materiales anteriores
utilizados en la cristalería. Asegúrese de que el proceso de limpieza elimine los desechos y las materias extrañas, y que el detergente
se enjuague completamente con agua purificada. Consulte Aparato de limpieza de vidrio 〈 1051 〉 para obtener orientación
adicional.
La esterilización de los medios debe realizarse dentro de los parámetros proporcionados por el fabricante o validados por el
usuario. Los medios preparados comercialmente deben proporcionar documentación del método de esterilización utilizado. La
SE

esterilización en autoclave por calor húmedo es la técnica de esterilización preferida, excepto en los casos en que se requiere hervir
para evitar el deterioro de los componentes termolábiles del medio. La esterilización por filtración también puede ser apropiada para
algunas formulaciones.
Los efectos del método y las condiciones de esterilización en los medios deben validarse mediante pruebas de esterilidad y
promoción del crecimiento de los medios. Además, si se esteriliza con calor húmedo, el ciclo de autoclave debe validarse para
garantizar una distribución adecuada del calor para cargas y volúmenes seleccionados. Por lo general, los fabricantes recomiendan
un ciclo de autoclave de 121 ° durante 15 min utilizando un autoclave validado. Estas condiciones se aplican al tiempo a la
[Link] Results&highlight=1117 2/16
5/3/22, 10:04 USP-NF <1117> ÓPTIMAS PRÁCTICAS DE LABORATORIO MICROBIOLÓGICO

temperatura del medio. Dado que el tamaño del recipiente y la configuración de la carga del autoclave influirán en la velocidad de
▲
calentamiento, es posible que se requieran ciclos más largos para cargas más grandes. tiempo de
▲ (USP 1 de agosto de 2022) El
esterilización dependerá del volumen de medios y la carga del autoclave. Los ciclos de esterilización en los que el autoclave tarda en
▲
subir
o bajar a la temperatura pueden provocar el sobrecalentamiento de los medios. Por lo tanto, se debe
▲ (USP 1 de agosto de 2022)
tener cuidado para validar un ciclo de esterilización, equilibrando la necesidad de medios estériles con la tendencia de los medios a
▲ ▲
degradarse bajo un calentamiento excesivo.
Retención de los medios en el autoclave después del líquido
o el
▲ (USP 1-ago-2022)

ciclo de escape lento no se recomienda después del enfriamiento, ya que puede dañar el medio. Las condiciones de
▲ (USP 1-ago-2022)
calentamiento o esterilización inadecuadas , para medios preparados comercialmente o preparados internamente , pueden provocar
▲
una diferencia en el color, pérdida de claridad, fuerza de gel alterada o desviación del pH del rango recomendado
▲ (USP 1-ago-2022)
▲
por el fabricante, como así como actividad y/o selectividad reducidas de promoción del crecimiento.
Se deben documentar todos
los parámetros del ciclo de esterilización.
A menos que se especifique confirmar el pH del medio antes del proceso de esterilización, el pH de cada lote de
▲ (USP 1-ago-2022)
medio debe confirmarse después de que se haya enfriado a temperatura ambiente (20°–25°) extrayendo asépticamente una muestra
para la prueba. Se debe permitir que los medios comprados refrigerados alcancen la temperatura ambiente si se va a verificar la
confirmación del pH. Se recomienda una sonda de pH plana para superficies de agar y una sonda de inmersión para líquidos. Ver pH
〈 791 〉para obtener orientación sobre la medición del pH y la calibración del instrumento. El pH de los medios debe estar en un
rango de ±0,2 del valor indicado por el fabricante, a menos que el método validado acepte un rango más amplio.
Los medios preparados deben verificarse mediante la inspección adecuada de placas y tubos para los siguientes parámetros de

calidad e integridad:
▲
(USP 1-ago-2022)
Recipientes o tapas rotas
Llenado desigual de contenedores
AL
Deshidratación que produce grietas o superficies con hoyuelos en medios sólidos
hemólisis
CI
Oscurecimiento excesivo o cambio de color.
Formación de cristales por posible congelación
Número excesivo de burbujas
▲
FI

▲ (USP 1 de agosto de 2022)

Estado de los indicadores redox (si procede)

▲
Número de lote y fecha de vencimiento

▲ (USP 1-ago-2022)
O

▲
Esterilidad

▲ (USP 1-ago-2022)

Limpieza de platos (la tapa no debe pegarse al plato)

Almacén de datos
RÁ

▲
Es prudente
entender cómo el fabricante o proveedor transporta y almacena los medios antes de distribuirlos al
▲ (USP 1-ago-2022)

usuario final. Los fabricantes de medios deben usar condiciones de transporte y almacenamiento que minimicen la pérdida de
humedad, controlen la temperatura, eviten la contaminación microbiana y brinden protección mecánica a los medios preparados.
Los medios deben etiquetarse correctamente con los números de lote o lote, las fechas de preparación y caducidad y la
identificación de los medios. Los medios deben almacenarse de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Los medios
SE

▲
preparados internamente deben almacenarse en condiciones validadas. No almacene placas de medios que contengan
▲ (USP 1-

agar a 0° o menos, ya que la congelación podría dañar la estructura del gel. Proteja los medios almacenados de la
ago-2022)
▲
exposición a la luz, temperatura excesiva,
y cambios de temperatura, ya que esto puede causar condensación. Se debe considerar

[Link] Results&highlight=1117 3/16

5/3/22, 10:04 USP-NF <1117> ÓPTIMAS PRÁCTICAS DE LABORATORIO MICROBIOLÓGICO
▲
almacenar las placas de agar en un paquete o contenedor sellado para
evitar la pérdida de
▲ (USP 1-ago-2022) ▲ (USP 1-ago-2022)
▲
humedad de las placas.
▲ (USP 1 de agosto de 2022)
▲
La refundición de un contenedor original de medios sólidos,
si no contiene componentes termolábiles ( 1 ),
▲ (USP 1-ago-2022)

debe realizarse solo una vez para evitar medios cuya calidad se vea comprometida por el sobrecalentamiento o la posible
mediante
contaminación. Se recomienda que la refundición se realice en un baño de agua caliente o otros métodos adecuados que no
comprometan la calidad del medio.
El uso de hornos de microondas y placas calefactoras es común, pero
▲ (USP 1 de agosto de 2022)

se debe tener cuidado para evitar dañar los medios por sobrecalentamiento y para evitar posibles lesiones al personal de laboratorio
▲
por rotura de vidrio y quemaduras. Se recomienda que el medio de agar fundido se mantenga en un baño
▲ (USP 1 de agosto de 2022)
▲ ▲
de agua monitoreado
hasta que se haya templado a 45°–50°, y no más celebrada para
▲ (USP 1 de agosto de 2022) ▲ (USP 1-ago-2022)
▲ ▲
más de 8 h, o según se determine apropiado para la composición del medio. Se
▲ (USP 1 de agosto de 2022) ▲ (USP 1 de agosto de 2022)

debe tener cuidado al verter los medios de un recipiente sumergido en un baño de agua para evitar que el agua del baño se mezcle
▲ Se recomienda ▲
con los medios estériles vertidos.
limpiar con cuidado el exterior del recipiente antes de verter
.
▲ (USP 1-ago-2022) ▲

(USP 1 de agosto de 2022)

La eliminación de los medios de cultivo usados ​(así como de los medios vencidos) debe seguir los procedimientos locales de
seguridad contra riesgos biológicos.

AL Pruebas de control de calidad

Aunque los medios de cultivo se pueden preparar en un laboratorio a partir de componentes individuales, muchos laboratorios, por
▲
conveniencia, (USP 1-ago-2022)

utilice medios deshidratados o compre medios preparados comercialmente en placas de plástico o

recipientes de vidrio. Los fabricantes de medios intentan estandarizar las materias primas de fuentes biológicas, pero deben lidiar
CI
constantemente con diferencias inevitables en las materias primas obtenidas de fuentes naturales y, por lo tanto, se debe considerar
la variabilidad de los medios entre lotes. Además, el rendimiento de los medios preparados en un laboratorio o por un fabricante
depende en gran medida de las condiciones de preparación y almacenamiento. La preparación inadecuada de los medios puede
provocar condiciones insatisfactorias para el crecimiento o la recuperación microbiana y resultados poco fiables.
FI

Por lo tanto, se deben realizar pruebas de control de calidad en todos los medios preparados, incluidos los medios asociados con
▲
hisopos o medios en tiras
. Las pruebas que se realizan de forma rutinaria en medios preparados internamente
▲ (USP 1-ago-2022)

deben incluir el pH, la promoción del crecimiento, la inhibición y las propiedades indicativas (según corresponda). Se recomiendan
O

▲
comprobaciones de estabilidad periódicas para confirmar la fecha de caducidad solo hasta que se haya validado la caducidad del
medio.
Cuando los medios no han sido esterilizados terminalmente en su contenedor final y empaque secundario (p. ej., placas de medios
irradiados), se recomienda una inspección de ausencia de contaminación microbiana para medios líquidos o en placas en tubos para
RÁ

evitar el uso no intencionado de medios contaminados. La inspección de esterilidad se puede realizar en una muestra representativa
de la(s) combinación(es) específica(s) de medio y recipiente sobre la base del riesgo de impacto en su uso en las pruebas de control
microbiológico. La intención de la inspección debe ser detectar evidencia de crecimiento en el medio relevante, como turbidez en
medios de caldo líquido o formación de colonias en medios en placa. Similar a la práctica de preincubación de no irradiados,
Cada lote de medios esterilizados internamente debe probarse para promover el crecimiento.
▲ (USP 1 de agosto de 2022) Los

organismos de prueba se pueden seleccionar del capítulo de prueba compendial correspondiente. Además, los microorganismos
SE

utilizados en las pruebas de promoción del crecimiento pueden basarse en la recomendación del fabricante para un medio en
▲
particular o pueden incluir aislamientos ambientales representativos (pero estos últimos
aislamientos no deben
▲ (USP 1-ago-2022)

interpretarse como requisitos compendiales ).

▲
Comúnmente se afirma que un resultado satisfactorio de promoción del crecimiento incluye un crecimiento visiblemente
comparable al obtenido con un lote de medio previamente probado y aprobado. Esto es para una comparación cualitativa; el medio

[Link] Results&highlight=1117 4/16

5/3/22, 10:04 USP-NF <1117> ÓPTIMAS PRÁCTICAS DE LABORATORIO MICROBIOLÓGICO

de comparación debe tener la misma fórmula, consistencia y volumen. Si se desea una comparación cuantitativa, siga las
instrucciones en Validación de recuperación microbiana de artículos de farmacopea 〈1227 〉; el medio debe tener la misma
fórmula, consistencia y volumen. Para la comparación cualitativa y cuantitativa, no es necesaria la comparación física directa con un
lote probado previamente. La comparación de resultados numéricos en las pruebas cuantitativas debe ser apropiada para el
propósito previsto, con un conocimiento adecuado de la variabilidad del crecimiento microbiológico (es decir, factor de 2).
▲ (USP 1 de

agosto de 2022)

Las fechas de caducidad de los medios deben tener pruebas de promoción del crecimiento de apoyo para indicar que el
rendimiento de los medios todavía cumple con los criterios de aceptación hasta la fecha de caducidad incluida. La duración de la
vida útil de un lote de medios dependerá de la estabilidad de los ingredientes y la formulación en condiciones específicas, así como
del tipo de envase y cierre.
Cuando un lote de medios no cumple con los requisitos de las pruebas de promoción del crecimiento, se debe iniciar una
investigación para identificar la causa. Esta investigación debe incluir un plan de acción correctivo para prevenir la recurrencia del
problema. Cualquier lote de medios que no pase las pruebas de promoción del crecimiento no es adecuado para su uso. [ Nota : los
resultados fallidos de la prueba de promoción del crecimiento no se pueden utilizar para negar los resultados positivos de la prueba. ]
▲
Algunos reactivos se utilizan con fines de diagnóstico para ayudar a respaldar la identificación de
microorganismos,
▲ (USP 1-ago-
▲ ▲
, por ejemplo, tinción de Gram,
oxidasa, y prueba de coagulasa
reactivos Estos
2022) ​▲ (USP 1-ago-2022) ▲ (USP 1-ago-2022). ago-2022)

pueden tener atributos que pueden someterse a pruebas de control de calidad similares a los medios microbiológicos. Seleccione los
microorganismos estándar de control de calidad correctos, siguiendo las instrucciones del fabricante, y realice las pruebas antes de
las pruebas de diagnóstico de muestras desconocidas. Todos los reactivos de diagnóstico relevantes deben someterse a una
confirmación de calidad entrante antes de su uso.
Se debe tener especial cuidado con los medios que se utilizan en pruebas de esterilidad (consulte Pruebas de esterilidad 〈 71 〉

AL
para conocer los requisitos) y en estudios de monitoreo ambiental. Los medios utilizados para el control ambiental de las áreas
críticas deben estar preferentemente envueltos en doble capa y esterilizados terminalmente. Si no se realiza una esterilización
terminal, los medios deben someterse a una incubación previa al 100 % e inspección antes de su uso en un área crítica. [ Nota : las
▲ ▲
pruebas de promoción del crecimiento para este medio
deben realizarse para calificar que la
▲ (USP 1-ago-2022) ▲ (USP 1-ago-2022)
CI
▲
preincubación no afecta la recuperación. ] Esto evitará que la contaminación extraña se lleve a entornos
▲ (USP 1 de agosto de 2022)
controlados y evitará resultados falsos positivos. Se debe verificar un nivel de agar elevado para las placas de contacto con la
superficie.
FI

Agregue lo siguiente:

▲
TIEMPOS DE INCUBACIÓN EN MEDIOS MICROBIOLÓGICOS
Los tiempos de incubación para pruebas microbiológicas con una duración de menos de 3 días deben expresarse en horas: por
O

ejemplo, “Incubar a 30°–35° durante 18–72 h”. Las pruebas con una duración superior a 72 h deben expresarse en días: p. ej.,
“Incubar a 30°–35° durante 3–5 días”. Para pruebas con tiempos de incubación expresados ​en horas, incube durante el tiempo
mínimo especificado y ejerza un buen juicio microbiológico cuando exceda ese tiempo. Para las pruebas con tiempos de incubación
expresados ​en días, las incubaciones iniciadas por la mañana o por la tarde generalmente deben concluir a la misma hora del día por
RÁ

la mañana o por la tarde, respectivamente .

▲ (USP 1 de agosto de 2022)

Cambiar para leer:

MANTENIMIENTO DE CULTIVOS MICROBIOLÓGICOS

Los especímenes biológicos pueden ser los estándares más delicados de manejar debido a que su viabilidad y características
dependen de un manejo y almacenamiento adecuados. La estandarización de la manipulación y el almacenamiento de cultivos por
SE

parte del laboratorio usuario debe hacerse de manera que minimice la posibilidad de contaminación o alteración de las
características de crecimiento. El tratamiento cuidadoso y consistente de los cultivos madre es de vital importancia para la
consistencia de los resultados de las pruebas microbiológicas. Los cultivos para uso en pruebas compendiales deben adquirirse de
▲
una colección nacional de cultivos o de un proveedor secundario calificado y tienen una equivalencia documentada con las cepas
relevantes de la ATCC ( 2 ). Se pueden adquirir congelados, liofilizados, inclinados o listos para usar. La
▲ (USP 1-ago-2022)

[Link] Results&highlight=1117 5/16

5/3/22, 10:04 USP-NF <1117> ÓPTIMAS PRÁCTICAS DE LABORATORIO MICROBIOLÓGICO

confirmación de la pureza del cultivo y la identidad del cultivo debe realizarse antes de su uso en las pruebas de control de calidad.
Los cultivos listos para usar deben someterse a pruebas entrantes de pureza e identidad antes de su uso. Idealmente, la
confirmación de la identidad de las cepas de laboratorio de uso común debería hacerse a nivel de género y especie.
La preparación y reanimación de los cultivos debe seguir las instrucciones del proveedor o un método establecido y validado. Se
recomienda la "técnica del lote de semillas" para el almacenamiento de cultivos madre.
La muestra original de la colección de cultivo nacional o de un proveedor secundario calificado se resucita y cultiva en un medio
apropiado. Se suspenden alícuotas de este cultivo madre (la primera transferencia o pase) en un medio crioprotector, se transfieren a
▲
viales y se congelan a –30° o menos hasta su uso. Si se almacena a –70°
o menos, o en forma liofilizada, las
▲ (USP 1-ago-2022)

cepas pueden conservarse indefinidamente. Estas reservas congeladas se pueden usar para inocular cultivos de trabajo mensuales o
semanales. Una vez abierto, no vuelva a congelar las suspensiones de células no utilizadas después de cultivar una suspensión de
trabajo. La porción no utilizada debe descartarse para minimizar el riesgo de pérdida de viabilidad y contaminación del stock.
Se debe realizar un seguimiento del número de transferencias de cultivos de control de trabajo para evitar un subcultivo excesivo
que aumente el riesgo de alteración o mutación fenotípica. El número de transferencias permitidas para pruebas compendiales
específicas puede especificarse en esa prueba. Un paso se define como la transferencia de organismos de un cultivo viable a un
medio fresco con crecimiento de los microorganismos. Cualquier forma de subcultivo se considera una transferencia/pasaje.

Cambiar para leer:

EQUIPO DE LABORATORIO
▲
La mayoría de los equipos (incubadoras, baños de agua y autoclaves) están sujetos a prácticas de validación estándar de

▲
instalación calificación, calificación operativa y calificación de desempeño.
Se pueden encontrar orientaciones
▲ (USP 1-ago-2022)

útiles en Cualificación de instrumentos analíticos 〈1058 〉 . Además, calibración periódica (generalmente

▲ AL ▲ (USP 1 de agosto de 2022)

anualmente
o con una frecuencia basada en una evaluación de riesgos
▲ (USP 1 de agosto de 2022)
) es comúnmente requerido. El

equipo nuevo, fundamental para el funcionamiento del laboratorio, debe calificarse de acuerdo con un protocolo aprobado por la
unidad de garantía de calidad (QAU). Además, se debe realizar una limpieza y desinfección regulares de equipos como incubadoras,
refrigeradores y baños de agua para minimizar el potencial de contaminación en el laboratorio. Los sellos de las puertas de las
CI
▲
incubadoras y los refrigeradores deben limpiarse y revisarse para ver si están en buen estado. Estas actividades deben
incorporarse al programa de mantenimiento preventivo del equipo.
▲ (USP 1 de agosto de 2022)

Los instrumentos (medidores de pH y espectrofotómetros) utilizados en un laboratorio de microbiología deben calibrarse en un

FI

programa regular y probarse para verificar el rendimiento de manera rutinaria. La frecuencia de calibración y verificación del
▲
rendimiento variará según el tipo de instrumento y la importancia de ese equipo para la generación de datos en el laboratorio. Se
debe evaluar el equipo de laboratorio con software para mantener la integridad de los datos ( Código de Regulaciones Federales,
Título 21 (21 CFR), Parte 11).
O

▲ (USP 1 de agosto de 2022)

▲
El equipo que es difícil de desinfectar (como refrigeradores e incubadoras) debe separarse de operaciones
▲ (USP 1-ago-2022)

asépticas (como almacenamiento de medios para pruebas e incubación de muestras de prueba de esterilidad) y operaciones de
cultivo vivo para minimizar el potencial de contaminación inadvertida de las pruebas.
RÁ

Los autoclaves son fundamentales para el funcionamiento del laboratorio y deben tener una validación adecuada para demostrar
una esterilización adecuada para una variedad de operaciones. Los recursos de autoclave deben estar disponibles (y validados) para
esterilizar los medios de desecho (si se realizan en ese laboratorio), así como los medios preparados en ese laboratorio. La elección
de uno o varios autoclaves no está impulsada por la necesidad de separar las operaciones asépticas de las vivas (todo en el
autoclave con el mantenimiento adecuado es estéril después del ciclo), sino más bien por consideraciones de recursos (ver más
abajo).
SE

Agregue lo siguiente:

▲
UTILIZANDO TECNOLOGÍAS MODERNAS
El uso de nuevas tecnologías en un laboratorio de microbiología requiere nuevos aprendizajes y capacitación para garantizar una
implementación adecuada en el laboratorio (para ver ejemplos, consulte
Validación de métodos microbiológicos alternativos 〈1223

[Link] Results&highlight=1117 6/16

5/3/22, 10:04 USP-NF <1117> ÓPTIMAS PRÁCTICAS DE LABORATORIO MICROBIOLÓGICO

〉 , Caracterización microbiana, identificación y tipificación de cepas 〈1113 〉 ), y Pruebas microbianas rápidas para la liberación de
productos estériles de vida corta: un enfoque basado en el riesgo 〈1071 〉. Además de los especialistas de laboratorio, los
supervisores de laboratorio o el personal de control de calidad que evalúe la calificación de los sistemas o las desviaciones también
deben tener las habilidades para analizar e interpretar los datos complejos que pueden generar las nuevas técnicas. Para cada nueva
tecnología, es valioso desarrollar reglas y principios que construyan consistencia y precisión cuando el personal de laboratorio esté
usando esa tecnología para realizar el procedimiento relevante. Las normas y principios deben incluirse en el procedimiento escrito.

▲ (USP 1 de agosto de 2022)

Cambiar para leer:

DISPOSICIÓN Y OPERACIONES DEL LABORATORIO

▲
La disposición y el diseño del laboratorio deben considerar cuidadosamente los requisitos de las buenas
prácticas
▲ (USP 1-ago-
▲
en un laboratorio de microbiología y la seguridad del laboratorio. Es esencial que la contaminación cruzada
2022) ▲ (USP 1-ago-2022)
▲
de cultivos microbianos
o muestras de ADN/ARN para pruebas de PCR se minimice en la mayor medida posible, y
▲ (USP 1-ago-2022)

también es importante que las muestras microbiológicas se manipulen en un entorno que hace que la contaminación sea altamente
improbable.
En general, un laboratorio debe dividirse en áreas limpias o asépticas y áreas de cultivo vivo. Las áreas en las que se manipulan e
▲
incuban muestras ambientales
y de otras pruebas microbiológicas deben mantenerse completamente libres de
▲ (USP 1-ago-2022)
cultivos vivos, si es posible. Si no se puede lograr la separación completa de las zonas de cultivo vivas y limpias, se deben emplear
otras barreras y prácticas asépticas para reducir la probabilidad de contaminación accidental. Estas barreras incluyen ropa

AL ▲
protectora, procedimientos de higienización y desinfección, y contención por
▲ (USP 1-ago-2022)
gabinetes de seguridad biológica

designados solo para operaciones limpias o asépticas. Deben existir procedimientos para el manejo de derrames o percances con
▲
cultivos vivos
o ADN/ARN , y todo el personal técnico pertinente debe recibir capacitación sobre estos métodos.
▲ (USP 1-ago-2022)
CI
Algunas muestras demostrarán crecimiento microbiano y requerirán más análisis de laboratorio para identificar los contaminantes.
Cuando se detecta crecimiento, la muestra debe tomarse de la sección limpia del laboratorio a la sección de cultivo vivo sin demora
indebida. El subcultivo, la tinción, la identificación microbiana u otras operaciones de investigación deben realizarse en la sección de
cultivos vivos del laboratorio. Si es posible, cualquier muestra que contenga colonias en crecimiento no debe abrirse en la zona
limpia del laboratorio. La segregación cuidadosa de muestras y materiales contaminados reducirá los resultados falsos positivos.
FI

El personal que participe en actividades de muestreo no debe ingresar ni trabajar en la sección de manipulación de cultivos vivos
▲ específica ▲
de un laboratorio a menos que se tomen precauciones especiales, incluido
el uso de ropa protectora ▲ (USP 1-ago-2022)
▲
que no se debe usar fuera del laboratorio ( ej., abrigos) ▲ (USP 1 de agosto de 2022) y guantes y lavarse cuidadosamente y ▲ (USP 1 de
O

agosto de 2022)

desinfectar las manos al salir. Idealmente, el personal asignado a las actividades de muestreo, particularmente

aquellos que apoyan el procesamiento aséptico, no deberían trabajar en las cercanías de las operaciones del laboratorio de cultivos
vivos.
RÁ

Es importante tener en cuenta que la contaminación microbiana de las muestras, que conduce a resultados falsos positivos,
siempre es posible a menos que se tomen precauciones asépticas cuidadosas. Las instalaciones deben diseñarse de modo que el
muestreo de materias primas y excipientes se pueda realizar en condiciones controladas, incluida la vestimenta adecuada y el uso de
equipos de muestreo esterilizados. Puede que no siempre sea posible tomar muestras de los sistemas de servicios públicos, como
los sistemas de agua, en condiciones completamente asépticas; sin embargo, debe tenerse en cuenta que cuando las muestras no
se toman asépticamente, su confiabilidad se ve inevitablemente comprometida.
SE

Los métodos de muestreo ambiental deben requerir un manejo aséptico mínimo al cargar y descargar los instrumentos de
muestreo. Siempre que sea posible, el equipo de muestreo debe cargarse con su medio de recuperación microbiológica en el entorno
del que se va a tomar la muestra.
Todas las pruebas en laboratorios utilizadas para procedimientos de prueba críticos , como pruebas de esterilidad de formas de
▲
dosificación finales, productos a granel, cultivos de semillas para producción biológica o Pruebas de PCR de
▲ (USP 1-ago-2022)

[Link] Results&highlight=1117 7/16

5/3/22, 10:04 USP-NF <1117> ÓPTIMAS PRÁCTICAS DE LABORATORIO MICROBIOLÓGICO
▲
cultivos celulares utilizados en producción biológica , deben ser realizado en condiciones controladas.
Las pruebas de esterilidad
deben realizarse preferentemente en un aislador con clasificación ISO 5.
Se ha demostrado que los
▲ (USP 1 de agosto de 2022)
aisladores tienen niveles más bajos de contaminación ambiental que las salas limpias con personal y, por lo tanto, generalmente es
menos probable que produzcan resultados falsos positivos. La validación adecuada de los aisladores es fundamental tanto para
garantizar la integridad ambiental como para evitar la posibilidad de resultados falsos negativos debido a la desinfección química de
los materiales introducidos o utilizados en los aisladores (consulte Pruebas de esterilidad — Validación de sistemas de aisladores 〈
▲
1208 〉 ).
La desinfección adecuada de los materiales antes de cargar un aislador de prueba de esterilidad es otro paso importante
para reducir la posibilidad de resultados falsos positivos.
Para pruebas microbiológicas menos críticas, como con productos no estériles o muestras de carga biológica intermedia, es
preferible realizar pruebas bajo un gabinete de flujo de aire unidireccional (UDAF), o según corresponda. Durante la calificación, el aire
UDAF debe cumplir con el grado de calidad del aire para el cual está siendo calificado. Además de la calificación, el entorno del
gabinete (aire y superficies) puede probarse periódicamente. La frecuencia de las pruebas y los niveles definidos dependerán del
grado microbiológico del producto probado, la calidad del aire que pueden suministrar los filtros y el diseño del UDAF, el hecho de que
puede haber material no estéril en el UDAF y el régimen de limpieza/desinfección.
▲ (USP 1 de agosto de 2022)

Cambiar para leer:

MANEJO DE MUESTRAS
Los microorganismos viables en la mayoría de las muestras de microbiología , en particular las muestras de agua, monitoreo
ambiental y biocarga , son sensibles a las condiciones de manipulación y almacenamiento. Los parámetros críticos en estas
condiciones incluyen la composición del producto (o muestra), la composición del recipiente, el tiempo de almacenamiento y la
temperatura de almacenamiento. Por lo tanto, es importante minimizar la cantidad de tiempo entre el evento de muestreo y el inicio

AL ▲
de la prueba y controlar, tanto como sea posible, las condiciones de almacenamiento.
Las muestras microbiológicas nunca deben
almacenarse congeladas antes de analizarlas porque esta práctica conduce a la pérdida de viabilidad celular.
▲ (USP 1 de agosto de

Si la muestra se va a transportar a un lugar lejano para realizar la prueba, entonces las condiciones de transporte (tiempo,
2022)
▲
temperatura, etc.) deben calificarse como adecuadas para esa prueba y muestra. Por ejemplo, al monitorear el agua o la carga
CI
biológica antes de los pasos de reducción de la carga biológica o pasos de esterilización, las muestras se pueden mantener entre 2 °
y 8 ° durante un máximo de 24 h desde el momento de la recolección de la muestra hasta el inicio del análisis ( 3). Cuando no es
posible realizar la prueba dentro de las 24 horas (p. ej., cuando se utilizan laboratorios contratados), el tiempo máximo de retención
real entre la recolección y la prueba debe estar respaldado por estudios experimentales (p. ej., pruebas de desafío). Para las pruebas
FI

de endotoxinas bacterianas, se pueden realizar estudios para demostrar que las endotoxinas presentes en el producto y
almacenadas en el envase original durante cierto tiempo pueden recuperarse adecuadamente. Deben aplicarse las condiciones de
almacenamiento (p. ej., 2°–8°) en el laboratorio. Los lipopolisacáridos altamente purificados (LPS), como las endotoxinas estándar
de referencia (RSE) o las endotoxinas estándar de control (CSE), podrían no ser los indicadores de endotoxinas más relevantes para
O

tales estudios y el uso de indicadores de endotoxinas derivados de laboratorio proporcionaría una evaluación más realista, como se
analiza enIndicadores de Endotoxinas para Despirogenación 〈1228.5 〉 .
Si las muestras de monitoreo ambiental no se pueden incubar dentro de un marco de tiempo razonable (p. ej., debido al uso de un
laboratorio de pruebas externo), el tiempo desde la recolección de la muestra hasta el inicio de la incubación debe respaldarse con
datos experimentales.
RÁ

Todas las muestras deben examinarse y las pruebas deben completarse antes de su liberación, siempre que sea posible.
▲ (USP 1

de agosto de 2022)
▲
Es posible que sea necesario evaluar y aplicar la mezcla de productos antes del muestreo
para
▲ (USP 1 de agosto de 2022)
▲
SE

garantizar una dispersión adecuada y representación en la alícuota de la muestra.

▲ (USP 1 de agosto de 2022)

Todas las muestras microbiológicas deben tomarse utilizando técnicas asépticas, incluidas las que se toman en apoyo de
productos no estériles. Si es posible, todas las muestras microbiológicas deben tomarse en condiciones completamente asépticas

[Link] Results&highlight=1117 8/16

5/3/22, 10:04 USP-NF <1117> ÓPTIMAS PRÁCTICAS DE LABORATORIO MICROBIOLÓGICO
▲
en áreas de muestreo especializadas. Las áreas y los métodos de transporte de muestras deben diseñarse para
▲ (USP 1-ago-2022)
▲
minimizar la contaminación .
▲ (USP 1-ago-2022)
Las muestras enviadas al laboratorio de microbiología deben ir acompañadas de documentación que detalle el origen de la
▲
muestra, la fecha en que se tomó la muestra, la fecha de envío de la muestra, la persona o el departamento responsable del envío,

las condiciones de almacenamiento, y cualquier material potencialmente peligroso asociado con la muestra. El
▲ (USP 1-ago-2022)

departamento de pruebas debe acusar recibo de la muestra y conciliar la identidad y el número de muestras como parte de esta
documentación de muestra.

Eliminar lo siguiente:

▲
TIEMPOS DE INCUBACIÓN EN MEDIOS MICROBIOLÓGICOS
Incubation times for microbiological tests of less than 3 days' duration should
be expressed in hours: e.g., “Incubate at 30° to 35°
for 18 to 72 hours”. Tests longer than
72 hours' duration should be expressed in days: e.g., “Incubate at 30° to 35° for 3 to 5
days”. For
incubation times expressed in hours, incubate for the minimum specified time, and
exercise good microbiological judgment when
exceeding the incubation time. For incubation
times expressed in days, incubations started in the morning or afternoon should
generally be
concluded at that same time of
day.▲ (USP 1-Aug-2022)

Add the following:

▲
INCUBATION TEMPERATURE EXCURSIONS
Incubation equipment qualification and ongoing calibration provide the
acceptable range for temperature conditions relative to the

AL
expected procedural incubation
temperatures or range. When an excursion occurs outside of the procedural incubation
temperature(s), an assessment should be performed to determine the potential impact on the
test samples and what, if any, action
should be taken with the test samples. The effect of a
higher or lower temperature on microbial recovery from the test samples for
the recorded
period of time should be evaluated. An investigation of the excursion should be documented
along with the disposition
of the test samples. For instance, a slightly lower temperature
excursion (e.g., 1°–2°) for a brief time could be compensated with an
increase in incubation
time; or, for a higher temperature excursion (e.g., greater than 40° for a total aerobic
microbial count or greater
CI
than 30° for a total yeasts and molds count) consider any
negative impact on
recovery.▲ (USP 1-Aug-2022)

Change to read:

▲
COMPETENCIES
AND▲ (USP 1-AUG-2022) TRAINING
OF PERSONNEL
FI

Each person engaged in each phase of pharmaceutical manufacture should have

the education, training, and experience to do his
or her job. The demands of microbiological
testing require that the core educational background of the staff, supervisors, and
managers
be in microbiology or a closely related biological science. They should be assigned
responsibilities in keeping with their
O

level of skill and experience.

A coherent system of standard operating procedures (SOPs) is necessary to run
the microbiology laboratory. These procedures
serve two purposes in a training program.
Firstly, these SOPs describe the methodology that the microbiologist will follow to
obtain
accurate and reproducible results, and so serve as the basis for training. Secondly,
by
tracking the procedures in which a particular
microbiologist has demonstrated proficiency,
the procedure number or title also serves to identify what training the microbiologist
RÁ

has
received specific to his or her job function.
Training curricula should be established for each laboratory staff member
specific to his or her job function. He or she should not
independently conduct a
microbial
test until qualified to run the test. Training records should be current, documenting
the
microbiologist's training in the current revision to the particular SOP.
▲Performing USP microbiology
methods requires a quality control infrastructure that will support accuracy and consistency
of
SE

method outcomes. While this chapter provides information about effective microbiology
practices, there are other USP chapters that
offer guidance in relevant
areas where microbiology is integrated (see Guide to General Chapters and Chapter
Charts).▲ (USP 1-Aug-

2022)

Periodic performance assessment is a wise investment in data quality. This

performance testing should provide evidence of
competency in core activities of the
microbiology laboratory such as hygiene, plating, aseptic technique, documentation,
and
others
as suggested by the microbiologist's job function.

[Link] Results&highlight=1117 9/16

5/3/22, 10:04 USP-NF <1117> ÓPTIMAS PRÁCTICAS DE LABORATORIO MICROBIOLÓGICO

Microbiologists with supervisory or managerial responsibilities should have

appropriate education and in-house training in
supervisory skills, laboratory safety,
scheduling, budgeting, investigational skills, technical report writing, relevant
SOPs, and
other
critical aspects of the company's processes as suggested in their role of directing
a
laboratory function.
Competency may be demonstrated by specific course work, relevant experience,
and routinely engaging in relevant continuing
education. Achieving certification through
an
accredited body is also a desirable credential. Further, it is expected that laboratory
supervisors and managers have a demonstrated level of competence in microbiology at
least as
high as those they supervise.
Expertise in microbiology can be achieved in a variety
of
▲ways▲ (USP 1-Aug-2022)
in addition to academic course work and
accreditation. Each company is expected to
evaluate
the credentials of those responsible for designing, implementing, and operating
the
microbiology program. Companies can thus ensure that those responsible for the program
understand the basic principles of
microbiology, can interpret guidelines and regulations
based on good science, and have access to individuals with theoretical and
practical
knowledge in microbiology to provide assistance in areas in which the persons responsible
for the program may not have
adequate knowledge and understanding. It should be noted
that
microbiology is a scientifically based discipline that deals with
biological principles
substantially different from those of analytical chemistry and engineering disciplines.
Many
times it is difficult for
individuals without specific microbiological training to
make the
transition.

Add the following:

▲
QUALIFICATION OF ANALYSTS
The hiring of experienced personnel combined with periodic training and
qualification of analysts, including regular vision checks,
should limit to an acceptable
level the variability of microbiological test results produced by each analyst's handling
and reading of
test results, as well as ensure that the defined good documentation
practices
are understood and followed.
These also apply to personnel who may be involved in visual inspection of media
fill
units.▲ (USP 1-Aug-2022)

Add the following:

▲ AL
CONSIDERATIONS FOR MICROBIOLOGICAL RISK
ASSESSMENTS
A microbiological risk assessment can be beneficial and provide information to
assist in decision-making about the impact of
microbiological quality concerns. (See
Microbiological Examination of Nonsterile Products: Acceptance Criteria for
Pharmaceutical
Preparations and Substances for Pharmaceutical Use 〈1111〉 for additional
specific parameters for evaluating non-specified
microorganisms that may be present
in
nonsterile products.)
CI
Some examples of when a microbiological risk assessment might be used are: 1)
elevated bioburden counts (but within
specification); 2) growth of atypical colonies
after
enrichment on selective agar plates for compendium-specified microorganisms; 3)
exceeded
alert/action levels; and 4) identification of a recovered species of concern.
The nature and intent of a risk assessment can differ depending on the relevant
situation. The following is a list of example topics
FI

that could be included as part

of the
risk assessment.
Scope of the Event—Providing information on
the number of product lots that are directly or indirectly impacted on the basis
of
shared raw materials, shared equipment, and similar manufacturing processes.
Microorganism Identification—Identifying
the microorganism(s) to the species level whenever possible.
O

Characterization and Source of the

Microorganism(s)—Researching the literature to determine where the natural habitat
for
the microorganism can be found; the potential physiological states for the
microorganism (e.g., spore vs. vegetative,
planktonic vs. biofilm); and the potential
pathogenicity of the species, the disease potential of the microorganism for the
intended route of administration, and the number of microorganisms recovered.
RÁ

Manufacturing Process—Evaluating the

product/material manufacturing process (or for an API or raw material) to determine
if
it contains microbial ingress and/or growth-control points or growth-promoting, or
microbial-reducing steps.
Target Patient Base and Intended Use of the
Product(s)—Identifying potential health effects to the probable user group(s)
targeted by the product based on the product insert and label information.
Route of Administration of the
Product(s)—Identifying the route of administration of the product (e.g., oral
non-
SE

aqueous/aqueous, topical, inhalant, etc.). If it is an API or raw material,

identify the route of administration of the product that it
will be used to
manufacture.
Intrinsic Product(s)
Characteristics—Evaluating the intrinsic characteristics of the product and the
effect they could have on
the level of microorganism(s) over shelf life. This means
identifying the nature of the product (such as its water activity or pH)
and whether
the product can support growth or has antimicrobial activity.
Assessment Conclusion—Providing a sound,
scientifically-based determination. For example, determination that a
microorganism
is
objectionable or is not objectionable in the test article.

[Link] Results&highlight=1117 10/16

5/3/22, 10:04 USP-NF <1117> ÓPTIMAS PRÁCTICAS DE LABORATORIO MICROBIOLÓGICO

The risk assessment should include determination of the level of risk to the
patient or product for an impacted material that is used
to manufacture finished product(s)
or for a finished product that will be released to the market. An investigation to
determine
the
source of a recovered species of concern and its contamination risk may be required
to
be completed before a drug product is
released to the market. Writing and approval
of a
microbiological risk assessment should be performed by personnel with specialized
education
and experience in
microbiology.▲ (USP 1-Aug-2022)

Change to read:

LABORATORY RESOURCES
The laboratory management is responsible for ensuring that the laboratory has
sufficient resources to meet the existing testing
requirements
▲(4).▲ (USP 1-Aug-2022)
This requires some proficiency in budget management and in determining appropriate
measures
of laboratory performance. A measure of laboratory performance is the number of
investigations performed on tests conducted by
the laboratory, but this measure alone
is not
sufficient. In addition to tracking investigations, the period of time between sample
submission and initiation of testing should be tracked, as well as the period of time
between end of test and report release (or test
closure). Significant delays in these
measures are also indications of an under-resourced laboratory staff.
The laboratory management should have sufficient budget to meet testing
requirements. Particular measures of budgetary
requirements will be specific to the
given
laboratory, but budgetary considerations related directly to the need of the laboratory
for
sufficient resources must be addressed to ensure reliable testing results
▲(4).

Oversight of Contract
Laboratories
Some companies do not have the laboratory space, specialized equipment, or
capacity to conduct high-volume microbiological
analyses, so they may outsource this type
of testing to contract laboratories. It is the company’s responsibility to thoroughly
investigate the reputation and quality control performance of any new or unfamiliar
contract laboratory with which they engage in a
quality agreement. Before signing an
agreement, a manufacturer should confirm that the contract laboratory complies with
current

AL
good manufacturing practice (GMP) regulations regarding laboratory qualifications,
can perform the required USP compendial testing
for microbial recovery and bacterial
endotoxins (see Tests for Burkholderia Cepacia Complex 〈60〉, Microbial Enumeration Tests 〈61〉,
Tests for Specified Microorganisms 〈62〉, 〈71〉, and Bacterial Endotoxins Test 〈85〉), and an onsite
audit can be conducted or, perhaps,
a sample batch submitted for testing to ensure
the
quality of testing and data integrity. The qualifications of the laboratory
management
staff to interpret microbiological sample results need to be documented, especially
if
these staff will serve as subject
CI
matter experts for data review or if a laboratory
investigation of questionable sample results ever needs to be conducted. Reports
written
by the contract laboratory should include complete analytical worksheets from the
analysis
performed. The raw data should
be available to and periodically reviewed by a qualified
microbiologist of the client company in order to verify the reliability of finished
work.
All the data used for calculations, including all the positive (growth-promotion results)
and negative controls used during
analysis, should also be included in the final report.
In contrast, a certificate of analysis with a summary of analytical results does not
FI

provide all the information needed to verify sample test data or satisfy a regulatory
audit. Relevant method-suitability test results
should also be available to support
the
subsequent testing.

Oversight of Suppliers
O

The impact of the microbiological quality of materials from a supplier can

be significant for the laboratory (e.g., media, reagents,
cultures) or for manufacturing
(e.g., excipients, components); thus, microbiology knowledge and experience is critical
for adequate
oversight of a supplier. Since the microbiology laboratory can perform
specification tests for excipients and products, alignment of
knowledge and understanding
with a supplier is valuable. Based on evaluation of the appropriate microbiological
quality for each
material, adequate supplier oversight from a microbiological perspective
can provide increased knowledge, with consistent quality of
RÁ

the materials, and improved

trust in the relationship with the supplier. For the laboratory supplies, materials of
good quality are an
important input to systematically maintain laboratory capability for
performing consistent tests. For the manufacturing operations, an
excipient supply of good
quality provides the foundation for a consistently produced product that is
microbiologically safe for
patients. The full understanding and evaluation of a supplier’s
microbiological testing strategy, along with sampling, test
methodology, and training,
provides a means for developing a relationship with transparency and integrity. An
experienced
SE

microbiologist should initiate ongoing communications in this type of

customer–supplier relationship and serve as a technical expert.
The controls in place for
testing and inspection of incoming lab supplies are key to supply
control.▲ (USP 1-Aug-2022)

Add the following:

▲
METHOD TRANSFER

[Link] Results&highlight=1117 11/16

5/3/22, 10:04 USP-NF <1117> ÓPTIMAS PRÁCTICAS DE LABORATORIO MICROBIOLÓGICO

Performance of validated methods can change from one laboratory to another.

Differences in media, reagents, equipment,
procedures, and in levels of experience
of
personnel can all affect the outcome of a microbiological method. When transferring
a
method
from one laboratory to another, control of the change should be evaluated and directed
so
that there is minimal negative
impact. Each combination of method and test substance
should
be performed, according to the requisite procedure, by both the
sending and receiving
laboratories in an appropriately defined and documented activity (with a defined number
of
replicates) that will
ensure that method testing capability and experience have been
transferred effectively.
For method transfers, comparative testing of the same sample may not be
relevant for microbiological methods due to the non-
homogeneity of microbial cells
in the
sample. Since no contamination is frequently observed, such testing would result in
comparing
zero counts. Carrying out a method suitability verification of the analytical
method of the product to be transferred would provide
greater assurance that the
transfer-receiving unit may adequately perform the tests under the conditions with
the
material used (e.g.
nutrient
media).▲ (USP 1-Aug-2022)

Change to read:

DOCUMENTATION
Documentation ▲(either manually
or by an electronic laboratory management
system)▲ (USP 1-Aug-2022)
should be sufficient to
demonstrate that the testing was performed in a laboratory
and by
methods that were under control. This includes, but is not limited
to, documentation
of the
following:
Microbiologist training and verification of proficiency
Equipment validation, calibration, and maintenance
Equipment
▲monitoring▲ (USP 1-Aug-2022)
during test (e.g., 24-h/7-day chart recorders
▲for
incubators▲ (USP 1-Aug-2022))

Media preparation, sterility checks,

growth-promotion,▲indicative, and
inhibitory▲ (USP 1-Aug-2022)
capabilities

Media inventory
▲quality▲ (USP 1-Aug-2022)
control ▲and
shelf-life▲ (USP 1-Aug-2022)
testing

Data and calculations verification

AL
Critical aspects of test conducted as specified by a
procedure

Reports reviewed by QAU or a qualified responsible

manager
Investigation of data deviations (when required)
▲Data integrity guidance will
be addressed later in this
chapter.
▲ (USP 1-Aug-2022)
CI
Change to read:

MAINTENANCE OF LABORATORY RECORDS

Proper recording of data and studies is critical to the success of the
microbiology laboratory. The overriding principle is that the
FI

test should be performed

as
written in the SOP, the SOP should be written to reflect how the test is actually
performed,
and the
laboratory notebook should provide a record of all critical
▲information▲ (USP 1-Aug-2022)
needed to reconstruct the details of the
testing and confirm the integrity of the
data. At a
minimum, a laboratory write-up should include the following:
Date
O

Material tested
Microbiologist's name
Procedure number
Documented test results
RÁ

Deviations (if any)

Documented
▲significant method steps
and▲ (USP 1-Aug-2022)
parameters (equipment used, microbial stock cultures used,
media lots used)

Management/Second review signature

SE

Every critical piece of equipment should be

▲documented▲ (USP 1-Aug-2022)
in the write-up, and all should be on a calibration
schedule documented by SOP and
maintenance records. Where appropriate, logbooks or forms should be available and
supportive
of
the laboratory notebook records. Equipment temperatures (water baths, incubators,
autoclaves) should be recorded and traceable.
The governing SOP and revision should be clearly noted in the write-up.
Changes in the data should be crossed off with a single line
and initialed. Original
data
should not be erased or covered over.

[Link] Results&highlight=1117 12/16

5/3/22, 10:04 USP-NF <1117> ÓPTIMAS PRÁCTICAS DE LABORATORIO MICROBIOLÓGICO

Test results should include the original plate counts, allowing a reviewer to
recreate the calculations used to derive the final test
results. Methods for data
analysis
should be detailed in cited SOPs. If charts or graphs are incorporated into
▲paper▲ (USP 1-Aug-2022)
laboratory notebooks, they should be secured with clear tape and should not be obstructing
any data on the page. The chart or graph
should be signed by the person adding the
document,
with the signature overlapping the chart and the notebook page. Lab notebooks
should
include
page numbers, a table of contents for reference, and an intact timeline of use.
▲Similar requirements should be
established
for electronic laboratory notebooks that capture this same
information.▲ (USP 1-Aug-2022)
All laboratory records should be archived and protected against catastrophic
loss. A formal record-retention and -retrieval program
should be in place.

Add the following:

▲
QUANTITATIVE MICROBIOLOGY
Classical microbiology utilizes the colony forming unit (cfu) as the basis of
quantitation for growth-based methods (5). The
heterogeneous nature of microbial contamination can lead to inaccuracies
in quantitative methods. While representative sampling is
a high priority in all methods,
calculating colony counts with averaging can lead to subjective and varied results
depending
on the
plate reader and analyst experience. It is important to understand that although
averaging colony counts from multiple plates can
make the analysis simpler, a wide
range of
individual plate counts could lead to underestimation of actual contamination. Rounding
of
cfu, another quantitative principle, should be carefully evaluated for fit with the
method
to avoid reporting inaccurate results. [Note—
Microbial colonies represent biological entities; thus,
fractions or decimals in colony count results are meaningless.] There are
methods, such as kinetic bacterial endotoxin testing, where decimal place
calculations are expected. Be careful of placing too much
significance on the decimal
portion of a result when evaluating a result compared to an endotoxin limit
specification.▲ (USP 1-Aug-2022)

Add the following:

▲
AL
DATA INTEGRITY OF MICROBIOLOGICAL
DATA
Microbiological methods are classically performed manually and on the basis of
visual evaluation by an analyst performing the
test. Therefore, the interpretation
of test
results or the number of colonies tested may be prone to a certain subjectivity and
variability.
To further improve data integrity and reduce subjectivity, alternative
methods
for the reading of plates, such as the use of automated
plate readers or high-resolution
photographs of the plate, may be used. However, these systems can have inherent challenges
such as
CI
difficulty with the following: counting colonies embedded in the agar gel
from
pour-plated dishes, counting satellite colonies,
differentiating overlapping colonies,
differentiating particles from colonies, and interpreting the photo consistently from
one
individual
to another. Automated enumeration methods that stack images to capture
colonies
growing in time may overcome some of these
challenges.
It should be noted that, in order to avoid jeopardizing the asepsis status
required during testing, contemporaneous recording of
FI

actions during execution of

the
microbiological testing cannot be followed in all cases. It is acceptable for recording
of
actions to
take place immediately after the working session upon exiting the UDAF
hood
instead of constantly having to go back and forth from
aseptic to non-aseptic areas
to write
down test actions executed.
Counts from Petri plates are considered original data on the day that the
method requires the plates to be read and recorded. After
O

reading, if these same plates

are
subsequently stored at room temperature or under refrigeration, it is not possible
to
confirm the
original results because the microbial counts may increase during storage.
Many
microbial colonies continue to grow during
refrigeration but at a slower rate. The
colony
counts derived from conducting a microbe test using a compendial method depend on
adherence
to the incubation time and temperature stated in the prescribed method (i.e., 〈61〉).
RÁ

It is common practice for the raw data sheet that contains the original data,
as well as the data entry from the raw data sheet to the
laboratory information management
systems (LIMS), to be reviewed for accuracy and completion by a qualified analyst,
an
analyst
who has not executed or evaluated the test, or the supervisor.
An important data integrity threat with microbiological testing resides with
falsification of data and intentional omission of testing
results. To control this
risk, the
company culture and ethical standards are essential as well as the application of
a rigorous
quality
management system.
SE

For the compendial sterility test that combines criticality of the test and
higher risk of misinterpretation of results, it is now a
standard practice to have a second
analyst perform a contemporaneous evaluation of the sample (in test media) for microbial
growth. Nonetheless, applying uncritically a contemporaneous reading by a second analyst
(four-eyes principle) for all samples and
microbiological tests is not recommended.
Precision in counts may vary from one analyst to another (even if they are trained and
qualified) as colonies may overlap, swarm over media, etc., allowing for misinterpretation.
Microbiology is a “logarithmic science”
(〈1223〉); sample size is
statistically weak and testing procedures have inherent variability. By tolerating
no
differences in counts, a
high number of non-critical deviations will be generated,
thus
consuming resources unreasonably. As an alternative to a

[Link] Results&highlight=1117 13/16

5/3/22, 10:04 USP-NF <1117> ÓPTIMAS PRÁCTICAS DE LABORATORIO MICROBIOLÓGICO

contemporaneous enumeration,
a
contemporaneous verification by a second person that the testing activity is performed
correctly
may be executed for higher risk tests. A second person could verify, for
instance,
if the reading of results is correctly executed
according to the procedure, if the
result on
the Petri plate is correctly transcribed onto the GMP recording sheet (i.e., if growth
is
observed this is captured in the GMP sheet), and if the description of the sample
corresponds to the description on the GMP
recording sheet. An assessment of the risk
due to
a misinterpreted result and its impact on patient safety is performed to determine
the high
risk test outlined
above.▲ (USP 1-Aug-2022)

Change to read:

INTERPRETATION OF ASSAY RESULTS

Analytical microbiological assay results can be difficult to interpret for
several important reasons: 1) microorganisms are
ubiquitous in nature, and common
environmental contaminants—particularly organisms associated with humans—predominate in
many
types of microbiological analysis; 2) the analyst has the potential to introduce
contaminating organisms during sample
handling or processing in the laboratory; 3)
microorganisms may not be homogeneously distributed within a sample or an
environment; and
4) microbiological assays are subject to considerable variability of outcome. Therefore,
apparent differences from
an expected outcome may not be significant.
Because of these characteristics of microbiological analysis, laboratory
studies should be conducted with the utmost care
▲(using
aseptic
techniques)▲ (USP 1-Aug-2022)
to avoid exogenous contamination as previously discussed in this chapter. Equally
important,
results must be interpreted from a broad microbiological perspective, considering
not only
the nature of the putative contaminant but
the likelihood of that organism(s) surviving
in
the pharmaceutical ingredient, excipient, or environment under test. In addition,
the
growth
characteristics of the microorganism should be considered (especially in questions
of the
growth of filamentous fungi in
liquid media).
▲Microbiological data should be
scheduled to be reviewed and trended to assess the capability of the measures to control

contamination and ensure the microbiological quality of products or raw materials

remains
within the acceptance criteria defined and
AL
is not worsening. Trending of microbiological
data can be performed in several ways, but the end goal is to determine if an adverse
trend
is arising. An adverse microbiological trend is an early warning of a potential degradation
or loss of control within the
environment, the utility, raw material, or product tested.
Multiple designations may be used to define adverse trends, and it is up to the
user
to
define which is the most relevant definition in the context of the application. For
instance, an adverse trend can be defined as
repeating higher than usual counts or
increasing amount and variety of microorganisms or contamination occurrences over
a certain
CI
time period. An adverse trend may be systematically related to multiple events.
To reduce the role of subjectivity and to distinguish counts that are out of
expectation or that differ from the norm, monitoring
levels could be calculated using
statistical methods. There is no absolute standard that can be used to calculate levels
using
historical data as data distribution may differ among the different microbiological
tests. Microbiological data are generally not
normally distributed, may contain many
zero
counts (for highly controlled or aseptic areas), and are highly variable. Therefore,
FI

classical process control tools based on normally distributed data may not apply.
The
percentile ranking method using the negative
binomial or gamma fit distribution has
been
shown to be reliable and covers a large diversity of microbiological data (6). As an
alternative, if enough values are available, a non-parametric fit may be
used.
O

Use of Negative Controls

Some microbiological methods specify the use of a negative control, but
their use in other situations should be relevant and
appropriate. For example, the
testing
of rinse fluid without product in a membrane filtration sterility test could provide
useful
information in a laboratory investigation of an out-of-specification result.
Also,
for bioburden testing, a negative control can provide
RÁ

ongoing trending of lab equipment

sterilization and good aseptic
techniques.

Investigations▲ (USP 1-Aug-2022)

When results are observed that do not conform to a compendial monograph or

other established acceptance criteria, an
investigation
▲▲ (USP 1-Aug-2022)
is required. There are generally two distinct reasons for the observation of microbial
contamination
that does not comply with a target or requirement: A laboratory error
or
laboratory environmental conditions may have produced an
SE

invalid result, or the product

contains a level of contamination or specific types of contaminants outside established
levels or limits.
▲In such cases, conduct
an investigation using an appropriate investigative tool (e.g., Ishikawa "fishbone"
diagrams or the Kepner-

Tregoe
method).▲ (USP 1-Aug-2022)
Laboratory management and, in most cases, the QAU should be notified immediately.
▲Immediate
actions may be required if the
product’s quality is potentially impacted by the deviation. These may include, for
instance, putting the
batch in quarantine and assessing the potential impact for batches
produced in the same campaign or already released on the
market.▲ (USP 1-Aug-2022)

[Link] Results&highlight=1117 14/16

5/3/22, 10:04 USP-NF <1117> ÓPTIMAS PRÁCTICAS DE LABORATORIO MICROBIOLÓGICO

A full and comprehensive evaluation of the laboratory situation surrounding

the result should be undertaken. All microbiological
conditions or factors that could
bring about the observed condition should be fully considered, including the magnitude
of
the
excursion compared to established limits or levels. In addition, an estimate of
the
variability of the assay may be required to
determine whether the finding is
significant.
The laboratory environment, the protective conditions in place for sampling,
historical findings concerning the material under test,
and the nature of the material,
particularly with regard to microbial survival or proliferation in contact with the
material, should be
considered in the investigation. In addition, interviews with
the
laboratory analyst(s) may provide information regarding the actual
conduct of the
assay
that can be valuable in determining the reliability of the result and in determining
an
appropriate course of
action. If laboratory operations are identified as the cause
of the
nonconforming test outcome, then a corrective action plan should be
developed to address
the problem(s). Following the approval and implementation of the corrective action
plan,
the situation should be
carefully monitored and the adequacy of the corrective action
determined.
If assay results are invalidated on the basis of the discovery of an
attributable error, this action must be documented. Laboratories
also should have
approved
procedures for
▲additional▲ (USP 1-Aug-2022)
testing (retesting), and if necessary, resampling where

specific regulatory or compendial

guidance does not govern the conduct of an assay investigation.
▲Since microorganisms are not
necessarily
homogeneously distributed in a sample; microbial numbers evolve following storage;
all
volume of the sample is used
during testing in some cases; and sampling is a snapshot
of a
short time; the classical retesting rules for chemical analysis should
not be applied
in
microbiological testing. Additional testing of the original product, raw materials,
intermediates, environment, etc.,
however, may serve to provide supportive information
for
the root cause investigation but not be used to invalidate the original
results.▲ (USP 1-Aug-2022)

Add the following:

▲
REFERENCES

AL
1. International Organization for Standardization. Microbiology
of food, animal feed and water—Preparation, production, storage
and performance
testing of culture media, ISO 11133; 2014.
2. Reference Strain Catalogue Pertaining to
Organisms For Performance Testing of Culture Media. Version 29. World Data
Centre of
Microorganisms. International Committee on Food Microbiology and Hygiene
and
Working Party on Culture Media; Jan 2019.
3. American Public Health Association. Standard Methods for the
Examination of Water and Wastewater. APHA; 2017.
4. International Council for Harmonisation. Pharmaceutical
Quality System, Q10; 2008.
CI
5. Sutton S. Accuracy of Plate Counts. J Val
Technol. Summer, 2011; 42–46.
6. Gordon O, Goverde M, Pazda J, Staerk A, Roesti D. Comparison
of different calculation approaches for defining microbiological
control levels based
on historical data, PDA Journal of Pharmaceutical Science and
Technology. 2015;
69:383–398.▲ (USP 1-Aug-

2022)
FI

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5/3/22, 10:04 USP-NF <1117> ÓPTIMAS PRÁCTICAS DE LABORATORIO MICROBIOLÓGICO

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2o0ku

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