INFORME RMN
14-9-2020
DE PROTONES
QUÍMICA ANALÍTICA APLICADA
INTEGRANTES:
Anthonioz, Verónica.
Balangione, Agustina.
Maggi, Julieta.
Ontivero, Sofía.
Rivoira, Valentina.
PROFESORA: ING. MARÍA EUGENIA
TAVERNA
QUÍMICA ANALÍTICA APLICADA
Informe RMN de protones
ANTECEDENTES HISTÓRICOS
La Resonancia Magnética Nuclear fue descripta y medida por Isidor Isaac Rabi
en 1938 quien comenzó a trabajar en el campo de la Física Nuclear en un proyecto de
investigación de los efectos del campo magnético sobre las partículas, desarrollando el
método de Resonancia Magnética que permite el estudio de las propiedades magnéti-
cas y estructura interna de las moléculas, átomos y núcleos.
A partir de esos estudios se desarrollaron aplicaciones como el láser en el ojo
atómico y luego la Resonancia Magnética. De hecho, fue hasta 1946 que la resonancia
magnética se dio a conocer gracias a Edward Purcell de la Universidad de Harvard y
Felix Bloch de la Universidad de Stanford quienes recibieron el Premio Nobel de Física
en 1952. Ellos dieron cuenta que los núcleos magnéticamente activos podían absorber
energía de radiofrecuencia cuando eran colocados en un campo magnético de una po-
tencia específica, y así lograban identificar los núcleos. Diferentes núcleos atómicos
dentro de una molécula resuenan a diferentes frecuencias de radio para la misma fuerza
de campo magnético. La observación de tales frecuencias resonantes en los núcleos de
una molécula permite obtener información química, estructural, espacial y dinámica
acerca de las moléculas. Luego, en 2002 se le reconoció el Premio Nobel a Kurt Wuth-
rich por sus contribuciones a la RMN de alta resolución y en 2003 fue otorgado el Premio
Nobel en Medicina a Paul Lauterbur y Peter Mansfield por sus contribuciones a la apli-
cación de la RMN en la obtención de imágenes.
Desde su descubrimiento, la espectroscopia de RMN ha evolucionado de tal ma-
nera que es casi imposible mantenerse al día con todos los adelantos que surgen y que
han dado lugar a muchas subdisciplinas.
FUNDAMENTO
La resonancia magnética nuclear (RMN) es una de las herramientas más pode-
rosas que existen en la actualidad para dilucidar estructuras de moléculas, principal-
mente moléculas orgánicas. Para ello, y como su nombre lo indica, esta técnica se basa
en una característica intrínseca de los núcleos: sus propiedades magnéticas.
En esta técnica, una muestra es sometida a un campo magnético intenso, cons-
tante y homogéneo, y posteriormente irradiada con radiación electromagnética en el in-
tervalo de la radiofrecuencia.
Como resultado se obtiene la “señal de resonancia”. Brevemente, el núcleo ató-
mico excitado mediante la señal de radiofrecuencia emite una señal magnética llamada
Free induction Decay (FID), la cual es digitalizada a través de métodos matemáticos
para obtener las señales de resonancia de una muestra.
Consiste en un imán, un emisor y un detector de radiofrecuencia.
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Cuando una muestra que contiene núcleos dotados de ciertas propiedades mag-
néticas es colocada entre los dos polos de un imán y sometida al campo de radiofre-
cuencia (rf) del emisor, es capaz de absorber energía de rf (es lo que se llama entrar en
resonancia). Para relaciones bien determinadas entre la fuerza del campo magnético y
la frecuencia del emisor, una señal es detectada por el receptor.
Cabe destacar que los núcleos de los átomos tienen carga eléctrica, pero a su
vez se comportan como imanes, dado que tienen momento magnético intrínseco. A este
momento magnético, se lo conoce como spin nuclear.
Al llevar a cabo la técnica, no se hacen variar simultáneamente los dos campos,
el magnético y el eléctrico, sino que se fija uno y se hace variar progresivamente el otro,
lo que se denomina barrido.
La RMN puede utilizarse sólo para estudiar núcleos atómicos con un número
impar de protones o neutrones (o de ambos). Esta situación se da en los átomos de 1H,
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C, 19F y 31P.
En ausencia de campo magnético, los espines nucleares se orientan al azar. Sin
embargo, cuando una muestra se coloca en un campo magnético, tal y como se muestra
en la siguiente figura, los núcleos con espín positivo se orientan en la misma dirección
del campo, en un estado de mínima energía denominado estado de espín α, mientras
que los núcleos con espín negativo se orientan en dirección opuesta a la del campo
magnético, en un estado de mayor energía denominado estado de espín β. La diferen-
cia de energía entre los dos estados de espín α y β, depende de la fuerza del campo
magnético aplicado. Cuanto mayor sea el campo magnético, mayor diferencia energé-
tica habrá entre los dos estados de espín.
Cuando una muestra que contiene un compuesto orgánico es irradiada breve-
mente por un pulso intenso de radiación, los núcleos en el estado de espín α son pro-
movidos al estado de espín β. Esta radiación se encuentra en la región de las radiofre-
cuencias (rf) del espectro electromagnético por eso se le denomina radiación rf. Cuando
los núcleos vuelven a su estado inicial emiten señales cuya frecuencia depende de la
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diferencia de energía (∆E) entre los estados de espín α y β. El espectrómetro de RMN
detecta estas señales y las registra como una gráfica de frecuencias frente a intensidad,
que es el llamado espectro de RMN.
TIPOS DE ESPECTROS DE RMN
EL ESPECTRO 1HRMN
La abreviación HRMN se refiere a la resonancia magnética nuclear de hidrógeno.
El superíndice 1 indica que mediremos únicamente núcleos del isótopo 1H, dado que el
isótopo 2H (conocido como deuterio) tiene spin entero y su comportamiento es diferente.
Los espectros RMN suelen mostrar un gráfico de absorbancia vs. δ, que es equi-
valente a un gráfico de absorbancia vs frecuencia aplicada. En los mismos, se grafica δ
en la escala horizontal con el 0 del lado derecho (es decir, δ aumenta hacia la izquierda).
En aquellas sustancias que tienen diferentes tipos de hidrógenos, se observarán
distintas señales correspondientes a los diferentes tipos de hidrógenos. Por ejemplo, el
siguiente es el espectro 1HRMN del ácido 2-cloro-3-butinoico, que muestra tres señales
a δ a 2,83, 5,39 y 12,34.
Las distintas señales corresponden a cada protón, donde el H de δ más alto es
el más desprotegido, el de menor densidad electrónica protegiendo al núcleo. En este
caso, el H de menor densidad electrónica es claramente el que está unido al oxígeno,
que es el átomo más electronegativo. Por lo tanto, el pico de δ 12,34 debe ser el del H
del grupo carboxilo. El siguiente (δ 5,39) es el que está unido al C2, que tiene un átomo
de Cl electronegativo unido a él. Por último, el de mayor protección, o sea, el de δ más
bajo, debe ser el H acetilénico unido al C4 (δ 2,83).
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Se citará el siguiente ejemplo: el metil terbutil éter presenta dos señales. La señal
a δ 3,30 corresponde a los tres H del metilo (que son equivalentes entre sí) y la otra
señal a δ 1,19 corresponde a los nueve H del terbutilo. Estos valores son lógicos dado
que el O desprotege a los H del metilo en mayor medida que a los del terbutilo, que
están más lejos de él.
Para el ejemplo citado hay una diferencia más entre los grupos de H: la cantidad.
El terbutilo, al tener nueve hidrógenos, va a absorber más cantidad de radiación que el
metilo. De hecho, absorberán exactamente el triple. De esta manera, para medir la can-
tidad de radiación absorbida se analiza el área de cada pico, dado que el área de los
mismos es proporcional a su concentración. Por ejemplo, en este caso, las áreas bajo
la curva de las señales del terbutilo y del metilo estarán en relación 9:3. La medición se
efectúa a partir de la función integral del espectro, la que suele graficarse sobre el
mismo. Por ejemplo, el siguiente es el espectro del metil terbutil éter junto con su inte-
gral.
Para conocer el área de cualquier pico y así visualizar la cantidad de hidrógenos,
debemos considerar la diferencia de altura de la función integral antes y después del
mismo. En este caso, la integral del pico a δ 1,19 presenta una diferencia de altura de
23 mm, mientras que la integral del pico a δ 3,30 presenta una diferencia de altura de 8
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mm. Para determinar la cantidad de H que le corresponde a cada señal, sumamos todas
las alturas (en este caso 23 + 8 = 31 mm) y esa diferencia de altura corresponde a los
12 H del compuesto (la cantidad de hidrógenos totales del compuesto se conoce porque
se tiene información sobre la sustancia). En el caso de sustancias desconocidas, la fór-
mula molecular se obtiene por medio de otras metodologías (espectrometría de masas,
propiedades coligativas, etc.) distintas de RMN, dado que ésta establece proporciones
entre grupos de átomos de hidrógeno, pero no cantidades totales. Por proporcionalidad
directa, obtenemos los valores correspondientes a cada una (suelen necesitar redon-
deo).
En base a los resultados obtenidos, la señal a δ 3,30 corresponde a 3H y la de
δ 1,19 corresponde a 9H.
Los programas actuales para el manejo de datos de RMN efectúan esta integra-
ción de forma automática y dan los valores de área en unidades arbitrarias o relativas.
De cualquier manera, no debemos olvidar que la integración no nos dice los valores
absolutos de las áreas, sino las relaciones que existen entre ellas. Encontrar la cantidad
de H que corresponden a cada señal es tarea nuestra.
EL ESPECTRO 13CRMN
Existen otros núcleos (además de los protones) capaces de comportarse como
imanes y, por lo tanto, ser activos a la RMN. Un grupo de núcleos importantes lo cons-
tituyen los de 13C.
Debemos recordar que los núcleos de 12C, al tener A par y Z par, tienen momento
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de spin cero y entonces no son afectados por campos magnéticos. El isótopo C es
poco abundante en la naturaleza (tan sólo el 1,1% de los núcleos de C son de 13C). Esto
disminuye aún más la intensidad de las señales.
Es por estas razones que, por lo general, se necesitan muestras más concentra-
das y tiempos de análisis más largos para obtener un espectro de 13CRMN.
EL ESPECTRO DE OTROS COMPUESTOS
Para emplear la técnica, como se explicó anteriormente, es necesario que los
núcleos tengan un momento magnético distinto de cero. Esta condición no la cumplen
los núcleos con número másico y número atómico par (como el 12C, 16O, 32S). Los nú-
cleos más importantes en química orgánica son: 1H, 13C, 31P, 19F y 15N. Otros núcleos
importantes: 7Li, 11B, 27Al, 29Si, 77Se, 117Sn, 195Pt, 199Hg, 203Tl, 205Tl, 207Pb.
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EQUIPOS RESONANCIA MAGNÉTICA NUCLEAR
De forma esquemática los principales componentes de un equipo para medidas
de resonancia magnética nuclear son:
Como se observa, el espectrómetro de RMN consta de cuatro partes:
1. Un imán estable, con un controlador que produce un campo magnético pre-
ciso.
2. Un transmisor de radiofrecuencias, capaz de emitir frecuencias precisas.
3. Un detector para medir la absorción de energía de radiofrecuencia de la mues-
tra.
4. Un ordenador y un registrador para realizar las gráficas que constituyen el
espectro de RMN.
Para obtener un espectro de RMN, se coloca una pequeña cantidad del
compuesto orgánico disuelto en medio mililitro de disolvente en un tubo de vidrio largo
que se sitúa dentro del campo magnético del aparato. El tubo con la muestra se hace
girar alrededor de su eje vertical. En los aparatos modernos el campo magnético se
mantiene constante mientras un breve pulso de radiación rf excita a todos los núcleos
simultáneamente. Como el corto pulso de radiofrecuencia cubre un amplio rango de
frecuencias los protones individualmente absorben la radiación de frecuencia necesaria
para entrar en resonancia (cambiar de estado de espín). A medida que dichos núcleos
vuelven a su posición inicial emiten una radiación de frecuencia igual a la diferencia de
energía entre estados de espín. La intensidad de esta frecuencia disminuye con el
tiempo a medida que todos los núcleos vuelven a su estado inicial. Un ordenador recoge
la intensidad respecto al tiempo y convierte dichos datos en intensidad respecto a fre-
cuencia, esto es lo que se conoce con el nombre de transformada de Fourier (FT-RMN).
Un espectro FT-RMN puede registrarse en 2 segundos utilizando menos de 5 mg de
muestra.
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A lo largo del tiempo, los equipos fueron modificándose y optimizándose pro-
ducto de los avances de la tecnología (capacidad de computación suficiente para alma-
cenar una gran cantidad de datos y efectuar la Transformada de Fourier) y del estudio
de los imanes superconductores (con un tamaño mucho más reducido, se podían con-
seguir campos desde los 4 Tesla hasta cerca de los 25 Tesla), pasando desde el primer
equipo que data del año 1970, cuyas características constan de: elevado costo, gran
tamaño del imán cuyos campos resultantes no eran del todo homogéneos y requerían
de mucho espacio físico. Hoy en día, debido a que hubo un gran avance en el hallazgo
de nuevas aleaciones metálicas con densidades magnéticas que son favorables a tem-
peratura ambiente, los equipos constan de un tamaño más pequeño cuyos imanes lo-
gran campos homogéneos produciendo una mejoría en el análisis y con un menor costo.
APLICACIONES
La RMN presenta dos vertientes de estudio, por un lado, la espectroscopía, la
más conocida en el campo de la química y la bioquímica, y por otro la imagen más
extendida en la medicina y la biomedicina.
La enorme versatilidad de aproximación de esta técnica permite la investigación
de aspectos tan diversos como la estructura tridimensional y dinámica de macromolé-
culas biológicas, el estudio de la anatomía normal y patológica en seres humanos y
modelos animales, o el seguimiento in vivo de rutas metabólicas y su regulación. No
obstante, la Imagen de Resonancia Magnética (IRM) es la vertiente más conocida a
nivel popular dada su creciente implantación en el diagnóstico clínico. Es una técnica
que usa una radiación electromagnética no ionizante para obtener imágenes con un
excelente contraste entre tejidos blandos y una elevada resolución espacial en cualquier
dirección del espacio.
Campos de aplicación: Química Orgánica, química Inorgánica, farmacología,
medicina, bioquímica, química analítica, entre otras.
