Identificación de Cafeína por HPLC
Ingrid J. Valderrama M¹., Brayan D. Vergel J ¹., Carol J. Sanguino ¹., Jennifer Torres ¹.
¹Universidad Industrial de Santander, escuela de química, laboratorio de química analítica
Cra 32 #29-31 - Bucaramanga Santander.
Realizado: 03/02/2022 Entregado: 14/02/2022
Resumen
El informe presenta el método de cromatografía líquida de alta resolución (HPLC por sus siglas en
inglés) para la identificación de la presencia de cafeína en bebidas energizantes (en este caso Spartan).
En este experimento se analiza la muestra cualitativamente, sin embargo, realizando una curva de
calibración y teniendo en cuenta áreas bajo la curva es posible realizar un análisis cuantitativo de la
concentración.
Introducción
En esta práctica se identificó la cafeína en una bebida energética, en este caso Spartan, mediante
cromatografía de alta precisión (HPLC), debido a que, este método analítico permite la separación de
los componentes que luego pueden ser detectados, esta tecnología se basa en una fase móvil que
consiste en un fluido (liquido) que arrastra a la muestra con un flujo constante de presión
proporcionado por una bomba, hasta llegar al punto donde es introducida la muestra. Siguiendo el
flujo de presión la lleva a una columna donde se encuentra la fase estacionaria que se trata de un
solido o un liquido fijado en un sólido, aquí los componentes de la bebida interaccionan de distinta
forma con la fase estacionaria y con la fase móvil. De este modo, los componentes atraviesan la fase
estacionaria a distintas velocidades y se van separando, en este caso, se utilizó un cromatograma
patrón o de referencia, en el cual se registró un solo pico, que corresponde al de cafeína, luego de
que la muestra problema pasara de la fase móvil a la estacionaria, esta pasa por el detector que genera
una señal que puede depender de la concentración y del tipo del compuesto, el resultado fue un pico
esperado, con respecto al cromatograma de la muestra patrón, además, se evalúan otros componentes
que se identificaron con otros picos. Cabe resaltar que la solución de la fase móvil se encontraba en
una proporción de 40% metanol y 60% agua, esto permitía tener unos picos óptimos, los cuales es
posible cuantificar la concentración de cafeína, pero en este no se tomó en cuenta.
Marco teórico
La Cromatografía de líquidos, es una técnica de análisis químico ampliamente utilizada, la cual
permite separar física y cuantitativamente los distintos componentes de una solución, por la
absorción selectiva de los constituyentes de una mezcla, consta de dos fases, una fija que suele
llamarse fase estacionaria, y una móvil (fase móvil) que fluye permanente durante el análisis, y que
en este caso es un líquido. En la figura 1 se muestran los componentes básicos de un cromatograma
típico de alta resolución.
Figura 1. Esquema de un HPLC
La forma más sencilla de llevar a cabo una separación en cromatografía de líquidos es mediante
elución isocrática, es decir, usando un único disolvente para hacer pasar a los analitos a través de la
columna. Sin embargo, a menudo se puede obtener un cromatograma más satisfactorio mediante
elución gradiente, que consiste en utilizar mezclas variables de dos (y en algunas ocasiones más)
disolventes de distinta polaridad.
Los sistemas de inyección de la muestra se inyectan mediante una jeringa a través de un septo de
elastómero. El método más generalizado de introducción de muestras en cromatografía de líquidos es
mediante dispositivos con un bucle de muestreo.
Las columnas de HPLC son por lo general tubos de acero inoxidable. La mayoría de las columnas
tienen una longitud de 10 a 30 cm y un diámetro de 4 a 10nm. El método más generalizado de
introducción de muestras en cromatografía de líquidos es mediante dispositivos con un bucle de
muestreo. Los empaquetados más comunes en cromatografía de líquidos son de partículas de sílice,
que se han sintetizado a partir de partículas de sílice submicrométricas en condiciones tales que se
forman agregados de diámetro uniforme. El producto formado a menudo se recubre con una fina
película orgánica, que se une química o físicamente a su superficie.
En estos tipos de cromatografía no existen detectores universales, sino que hay un sistema de
detección dependiendo de la naturaleza de la muestra. Los detectores más generalizados en
cromatografía de líquidos están basados en la absorción de la radiación ultravioleta/visible.
Los detectores más utilizados en HPLC son:
Detector UV. Hay básicamente tres tipos:
➢ Detector de Longitud de Onda Fija
➢ Detector de Longitud de Onda Variable
➢ Detector de Arreglo de Diodos
Detector de Índice de Refracción
➢ Tipo Deflexión
➢ Tipo Fresnel
Detector de Fluorescencia. Este detector solamente puede detectar compuestos que tengan
fluorescencia nativa o inducida por reprivatización.
➢ Detector de Fluorescencia Inducida por Laser
➢ Según la Fuente de Excitación
➢ Según el sistema óptico
Detectores Electroquímicos. Pueden ser clasificados en tres tipos:
➢ Detector Amperométrico
➢ Detector Conductimétrica
➢ Detector Potenciométrico
Metodología
Resultados
Gráfica 1: Cromatograma de muestra de Spartan a 20 ppm en 25 ml.
Gráfica 2: Cromatograma de patrón 1 de cafeína a 15 ppm en 25 ml.
Gráfica 3: Cromatograma de patrón 2 de cafeína a 25 ppm en 25 ml.
Análisis de resultados
En las gráficas que muestran los resultados de los patrones se puede observar un pico correspondiente
a la cafeína con valores de 1,573 y 1,574 para el patrón 1 y 2 respectivamente. Dichos valores hacen
referencia al tiempo que emplean las moléculas de cafeína en atravesar la fase estacionaria.
En el caso de la muestra de Spartan se obtuvieron seis picos que hacen referencia a los distintos
componentes de la bebida, de estos se puede deducir que el pico correspondiente a la cafeína es el
que se encuentra en el rango de tiempo de 1,5 y 1,7, siendo el valor exacto del pico 1,575. Por lo
tanto, se evidencia una similitud entre los rangos de tiempo en el que se obtuvieron los picos, los
cuales pueden explicarse por factores como la utilización de la misma fase móvil, el mismo equipo y
que la metodología se realizó de manera simultánea.
Conclusiones
Fue posible evidenciar la presencia de cafeína en la muestra de Spartan con un pico obtenido en el
tiempo de 1,575 minutos lo cual coincide con los picos obtenidos en los patrones 1 y 2, también se
vieron otros picos los cuales corresponden a los demás componentes de la bebida; para fines de esta
práctica de laboratorio solo se buscaba identificar la presencia de cafeína en la muestra (estudio
cualitativo), sin embargo es posible encontrar las concentraciones de cafeína haciendo la
correspondiente curva de calibración con los picos y las áreas bajo la curva (estudio cuantitativo).
Bibliografía
Skoog, Douglas A.; West, Donald M.; Holler, James. (1998). Fundamentos de química analítica (4.a
ed.) [Libro electrónico]. Editorial Reverté. http://bibliotecavirtual.uis.edu.co:2168/?il=15279
Darío R. Cromatografía de líquida de alta eficiencia. Red latinoamericana de química.
http://www.relaq.mx/RLQ/tutoriales/cro
nmatografia/hplc.htm#:~:text=Los%20detectores%20m%C3%A1s%20utillizados%20en,Detector%20UV.&text=de%20Onda%20Fija-
,Detector%20de%20Longitud%20de,Detector%20de%20Arreglo%20de%20Diodos.
