UNVERSIDAD AUTÓNOMA DEL ESTADO DE MORELOS

FACULTAD DE FARMACIA

Estudio in vitro del efecto fotoprotector UV de

nanopartículas de melanina formuladas en diferentes
formas cosméticas
Estudio in vitro del efecto
fotoprotector UV de nanopartículas
de melanina formuladas en diferentes
formas cosméticas.
Tesis
QUE PARA OBTENER EL GRADO DE:
LICENCIADO EN FARMACIA

PRESENTA:

LAURA VANELY BASTIDA FRANCO

DIRECTOR DE TESIS
DR. SERGIO ALCALÁ ALCALÁ

Cuernavaca, Morelos. Fecha: 2021

El presente trabajo se realizó en el Laboratorio de Investigación en Tecnología
Farmacéutica (Laboratorio- 1) de la Facultad de Farmacia de la Universidad
Autónoma del Estado de Morelos, bajo la dirección del Dr. Sergio Alcalá Alcalá.
 DEDICATORIA

El presente trabajo está dedicado a mis mejores amigos y compañeros de

generación, con los que conviví durante estos últimos años, creciendo, conviviendo
y sobre todo apoyándome por sobre todas las cosas en lo personal y lo profesional.
Gracias Itzel Aguirre Sandoval, Andrea Gómez Martínez e Israel Torres Arce por
estar siempre ahí, para todo.

Dedicado a Fausto Cesar Acevedo Torres, por estar conmigo en estos

últimos años en todo sentido y no dejarme caer jamás, por poner toda tu confianza
en mí, por tu amor incondicional, por apoyarme y ayudarme en cualquier decisión
que pudiera tomar, por hacerme crecer como persona y sobre todo por permitirme
estar en esta y mil vidas más a tu lado.

Dedicado a mi compañera de tesis María Betzabeth Vargas Catalán, con

quien después de años coincidimos de la mejor manera para trabajar en conjunto y
hacer de este último año de carrera un tiempo productivo, gracias por estar conmigo
con la actitud en alto. De igual manera, gracias Brenda Quetzalli Pimentel Urzúa,
por mantenerte y apoyarme, donde las tres pudimos crecer en lo académico y
profesional con nuevos proyectos e ideas.

Quiero dedicar mi trabajo y esfuerzo a todas las personas y familiares que

tuvieron un espacio para apoyarme cuando las necesitaba; gracias a mi tía Rocío
Franco Salinas y a toda su familia por estar conmigo para ayudarme por más mínima
cosa de la que requiriera de ustedes. Gracias a la familia Franco y a la familia
Bastida por tanto apoyo de su parte.

Dedico mi trabajo a mis abuelo Isaac Franco Valadéz, y sobre todo a mi

abuela, amiga y confidente, mi mami Angelina Salinas González, quién merece una
dedicatoria especial por estar desde el primer día conmigo para darme todo lo que
estuviera a su alcance, acompañándome en mis desvelos, apoyándome en mi vida
desde siempre y por ser mi segunda madre.
 Pero sobre todo, quiero dedicarles este logro a mis padres, Laura y Alfredo,
quienes han sido parte fundamental en mi vida para llegar hasta donde me
encuentro, por formar a la persona que soy hoy en día y por mantener su confianza
en mí para poder sacar mi carrera adelante, desde un inicio hasta el final de ella.
Nunca me faltó nada gracias a ustedes y estuvieron conmigo a pesar de las
adversidades que la vida pudiera traer, para dar, proveer y tenderme una mano
cuando lo requería.
 AGRADECIMIENTOS

Agradezco al Dr. Sergio Alcalá Alcalá por la confianza depositada en mí para

comenzar con este proyecto, por su apoyo, su confianza, paciencia y su guía para
culminar con mi trabajo y mi estancia en la carrera. Gracias por ser un excelente
docente y tutor, por brindarme su apoyo en cada obstáculo que se me presentara
dentro y fuera de mi estancia en las instalaciones del laboratorio; estoy agradecida
por la experiencia obtenida, ya que gracias a ella descubrí lo que en verdad me
gusta y sobre lo que me gustaría experimentar hacer con mi vida laboral.

Agradezco al Dr. Jorge Armando Moreno Escobar, al Dr. Sergio Alberto Bernal
Chávez, al Dr. Jesús Rivera Islas, a la Dra. Diana Lizbeth Gómez Galicia y a la Dra.
María Luisa García Betancourt por formar parte del Comité Revisor de la Tesis, por
su tiempo y aporte de observaciones y sugerencias para la mejora y
perfeccionamiento de lo expuesto en este trabajo.

Agradezco a las personas que me ayudaron en mi formación, a profesores, técnicos

y compañeros, quienes compartieron conmigo parte de sus conocimientos,
sabiduría y experiencia para despertar en mí el interés por la carrera y sobre todo
por la ciencia.

Agradezco a todas las personas que han estado, que estuvieron y que siguen
conmigo, porque cada una de ellas ha dejado parte de su esencia y enseñanzas
para volverme la persona que soy hoy en día, y porque gracias a ellas he logrado
lo que me ha llevado a estar en este punto de mi vida.

Agradezco infinitamente a mi familia por estar siempre para mí en cualquier cosa

que pudiera apoyarme para poder culminar mi carrera, y sobre todo a la familia que
formé dentro de las instalaciones de la Facultad, ya que sin ellos, la proeza hubiera
sido mayor.
 INDICE GENERAL

ÍNDICE DE FIGURAS ............................................................................................................................ iv

ÍNDICE DE TABLAS .............................................................................................................................. vi
ABREVIATURAS................................................................................................................................. viii
RESUMEN ............................................................................................................................................ x
1. INTRODUCCIÓN ...............................................................................................................................1
2. MARCO TEÓRICO Y ANTECEDENTES................................................................................................4
2.1 La piel ........................................................................................................................................4
2.1.1. Anatomía y estructura. ......................................................................................................4
2.1.2 Capas de la piel y sus funciones .........................................................................................5
2.2. Melanina ..................................................................................................................................6
2.2.1 Estructura y melanogénesis ...............................................................................................6
2.2.2 Funciones de la melanina ...................................................................................................7
2.3. Radiación solar. ........................................................................................................................9
2.3.1 Tipos de radiación solar que llegan a la Tierra ...................................................................9
2.3.2 Efecto de las radiaciones sobre la piel ...............................................................................9
2.3.3. Tratamientos para el daño por radiación solar ...............................................................11
2.4. Protectores solares. ...............................................................................................................15
2.4.1 Clasificación de protectores solares. ................................................................................15
2.4.2. Normatividad nacional e internacional ...........................................................................19
2.4.3. Factor de protección solar (FPS)......................................................................................23
2.4. Nanotecnología ......................................................................................................................26
2.4.1. Nanotecnología aplicada a protección solar ...................................................................26
2.4.2. Conceptos........................................................................................................................26
2.4.3. Clasificación de las nanopartículas ..................................................................................27
2.4.4. Enfoques de manufactura ...............................................................................................28
2.4.4. Caracterización física .......................................................................................................30
[Link]. Caracterizaciones ópticas .............................................................................................32
2.4.5. Biocompatibilidad y toxicidad de las nanopartículas ......................................................33
2.4.6. Nanopartículas de melanina ...........................................................................................34

i
3. JUSTIFICACIÓN. .............................................................................................................................37
4. OBJETIVOS .....................................................................................................................................38
4.1 Objetivo general ......................................................................................................................38
4.2. Objetivos específicos ..............................................................................................................38
5. HIPÓTESIS ......................................................................................................................................39
6. DIAGRAMA DE LA ESTRATEGIA METODOLÓGICA .........................................................................40
7. METODOLOGÍA .............................................................................................................................41
7.1. Caracterización de la melanina recombinante preformada como materia prima. ................41
7.1.1. Tratamiento de la materia prima ....................................................................................41
7.1.2. Identidad por espectrometría UV-Vis .............................................................................41
7.1.3. Identidad por espectroscopía infrarrojo .........................................................................41
7.2. Método analítico por espectrofotometría UV para la cuantificación de la melanina ............41
7.3. Obtención de nanopartículas de melanina ............................................................................42
7.3.1. Método de doble emulsión- evaporación (DE) ...............................................................42
7.3.2. Optimización, concentración, lavado y recuperación .....................................................43
7.3.3. Caracterización de nanopartículas de melanina .............................................................44
7.4. Obtención de las formulaciones cosméticas para las nanopartículas de melanina ...............45
7.4.1. Establecimiento de las formas cosméticas bajo el enfoque QbD....................................45
7.4.4. Caracterización de las formulaciones- medición de los Atributos Críticos de Calidad ....49
7.5. Determinación del factor de protección solar .......................................................................51
8. RESULTADOS. ................................................................................................................................53
8.1. Caracterización de la melanina recombinante preformada como materia prima .................53
8.1.1. Tratamiento de materia prima ........................................................................................53
8.1.2. Identidad por espectrofotometría UV-visible .................................................................54
8.1.3. Identidad por espectroscopía IR de la melanina materia prima .....................................55
8.2. Método analítico por espectrofotometría UV para cuantificar melanina ..............................55
8.2.1. Exactitud del método analítico por espectrofotometría UV para cuantificar melanina .56
8.2.3 Medición de la concentración de nanopartículas de melanina........................................57
8.3. Obtención de nanopartículas de melanina (MNP’s) ..............................................................57
8.3.1. Optimización, concentración, lavado y recuperación .....................................................57
8.3.2. Caracterización de nanopartículas de melanina .............................................................58
8.4 Obtención de las formulaciones cosméticas para las MNP’s ..................................................59
8.4.1. Establecimiento de las formas cosméticas bajo el enfoque QbD....................................59

ii
 8.4.2. Selección de excipientes .................................................................................................70
8.4.4. Caracterización de las formulaciones-medición de CQA’s ..............................................74
8.5. Determinación in vitro del FPS mediante el método de Mansur ...........................................75
9. DISCUSIÓN.....................................................................................................................................77
10. CONCLUSIÓN GENERAL. ..............................................................................................................81
11. CONCLUSIONES PARTICULARES. .................................................................................................82
12. PERSPECTIVAS. ............................................................................................................................83
13. REFERENCIAS ...............................................................................................................................85
14. ANEXOS. ......................................................................................................................................90

iii
 ÍNDICE DE FIGURAS

Página

Figura 1. Capas de la piel y sitio de alojamiento de los melanocitos ................... 04

Figura 2. Vía de síntesis de la melanina. Dopa: dihidroxifenilalanina; DHI: 5,6-
dihidroxiindol; DHICA: 5,6-dihidroxiindol-2-carboxílico; TRP: proteína
relacionada con la tirosinasa ................................................................ 07
Figura 3. (a) Emulsión cosmética tipo crema; (b) Emulsión cosmética tipo. ........ 18
Figura 4. Forma cosmética en gel. ....................................................................... 18
Figura 5. Forma cosmética de protector solar en forma de aceite corporal. ........ 18
Figura 6. Forma cosmética de protector solar en forma de espuma. ................... 19
Figura 7. Logotipo del Factor UVA. ...................................................................... 20
Figura 8. Métodos sintéticos típicos para NP’s para los enfoques de arriba hacia
abajo (top-down) y de abajo hacia arriba (bottom-up) ......................... 29
Figura 9. (A) Cambio en la densidad de carga alrededor de un coloide; (B)
distribución de iones positivos y negativos alrededor del coloide
cargado. ............................................................................................... 32
Figura 10. Diagrama de la estrategia experimental.............................................. 40
Figura 11. Sistema de montado para la elaboración de NPs de melanina por el
método de doble emulsión- evaporación de disolvente. ...................... 43
Figura 12. Diagrama de tipos de formulación, bases, diferencias tecnológicas y
controles realizados. ............................................................................ 47
Figura 13. Sistema de montado para la medición de la relación temperatura-
viscosidad de geles termosensibles. .................................................... 50
Figura 14. (A) Melanina materia prima preformada sin tratamiento; (B) Melanina
materia prima pulverizada. ................................................................... 53
Figura 15. Espectro UV-visible de la melanina materia prima en NaOH.............. 54
Figura 16. Espectro IR de melanina materia prima. ............................................. 55
Figura 17. Distribución del tamaño de partícula del lote 7 de NP’s de melanina
obtenidas por el método de doble emulsión-evaporación de disolvente.
............................................................................................................. 58

iv
Figura 18. Distribución del potencial Z del lote 4 de NP’s de melanina obtenidas
por el método de doble emulsión-evaporación de disolvente. ............. 59
Figura 19. Diagrama de Ishikawa para protectores solares con nanopartículas de
melanina como activo cosmético. ........................................................ 66
Figura 20. Relación temperatura sol-gel de gel termosensible ............................ 75
Figura 21. Curva de calibración de la melanina de origen recombinante como
materia prima. ...................................................................................... 91

v
 ÍNDICE DE TABLAS

Página

Tabla 1. Funciones de la piel ............................................................................ 05

Tabla 2. Tipos de radiación ultravioleta, longitud de onda y su efecto
sobre la piel ........................................................................................ 08
Tabla 3. Fototipos cutáneos.............................................................................. 09
Tabla 4. Sistema de protección solar recomendado dependiente del
índice UV ............................................................................................ 10
Tabla 5. Afecciones en la piel y su tratamiento ................................................ 11
Tabla 6. Factores de protección solar ajustados según la NOM-141-
SSA1/SCFI-2012 ................................................................................ 22
Tabla 7. Relación entre el efecto eritemogénico y la intensidad de la
radiación de cada longitud de onda.................................................... 26
Tabla 8. Clasificación de las nanopartículas basada en sus
dimensiones ....................................................................................... 27
Tabla 9. Condiciones de medición de talla de nanopartículas de
melanina por dispersión dinámica de luz ........................................... 44
Tabla 10. Condiciones de medición del PZ de nanopartículas de
melanina ............................................................................................. 44
Tabla 11. Niveles de riesgo de Parámetros Críticos De Proceso y
Materiales ........................................................................................... 46
Tabla 12. Relación entre el efecto eritemogénico y la intensidad de
la radiación de cada longitud de onda para el Método
Mansur, determinada por Sayre ......................................................... 52
Tabla 13. Perfil de producto objetivo para protectores solares con
nanopartículas de melanina. .............................................................. 60
Tabla 14. Perfil de Calidad de Producto Objetivo (QTPP) para
protectores solares con nanopartículas de melanina. ........................ 61
Tabla 15. Propuesta de formulación y materiales aplicables para
emulsión cosmética (loción) que contenga nanopartículas
de melanina. ....................................................................................... 63

vi
Tabla 16. Propuesta de formulación y materiales aplicables para gel
termosensible que contenga nanopartículas de melanina. ................ 64
Tabla 17. Propuesta de formulación y materiales aplicables para
aceite fluido que contenga nanopartículas de melanina. ................... 65
Tabla 18. Escala del nivel de riesgo que suponen las variables
propuestas para los Atributos Críticos de los Materiales
(CMA’s) y Parámetros Críticos de Proceso (CPP’s) .......................... 67
Tabla 19. Atributos Críticos de los Materiales (CMA’s) para
formulación de la emulsión propuesta ................................................ 67
Tabla 20. Atributos Críticos de los Materiales (CMA’s) para
formulación del gel termosensible propuesta ..................................... 69
Tabla 21. Atributos Críticos de los Materiales (CMA’s) para
formulación del aceite fluido propuesta .............................................. 70
Tabla 22. Selección de excipientes para las formulaciones de
protectores solares que contienen MNP’s como activo
cosmético ........................................................................................... 71
Tabla 23. Estudio de estabilidad de las formulaciones candidatas
para su uso como vehículo de MNP’s. ............................................... 74
Tabla 24. Factor de protección solar de protectores solares con
MNP’s como activo cosmético............................................................ 76
Tabla 25. Absorbancias a diferentes concentraciones para curva de
calibración de melanina preformada .................................................. 90
Tabla 26. Exactitud del método. ....................................................................... 91
Tabla 27. Precisión del método……………………………………………………..92
Tabla 28. Determinación del límite de cuantificación y detección. ................... 92

vii
 ABREVIATURAS

µg Microgramos
 Media
l Longitud de onda
0D Cero dimensión
1D Unidimensional
2D Dimensional
3D Tridimensional
BET Brunauer-Emmett-Teller
ºC Grados Celsius
CMA’s Parámetros Críticos De Materiales
cm Centímetros
CPP’s Parámetros Críticos De Proceso
CVD Deposición química en fase de vapor
C.V. Coeficiente de variación
CQA’s Atributos Críticos de Calidad
DCM Diclorometano
DE Doble emulsión – Evaporación de disolvente
DLS Dispersión de luz dinámica
DRS Espectrómetro de reflectancia difusa UV/vis
EDX Rayos X de energía dispersiva
FDA Administración de Fármacos y Alimentos
FPS Factor de Protección Solar
G.E. Gravedad específica
h Hora
HCl Ácido clorhídrico
HLB Balance Hidrofílico- Lipofílico
I.C. Intervalo de confianza
IR Infrarrojo
L.C. Límite de cuantificación
LCVD Técnica de deposición de vapor químico con láser
L.D. Límite de detección
mg Miligramos
mL Mililitros
MNPs Nanopartículas de melanina
N Concentración Normal
NaOH Hidróxido de sodio
nm Nanómetros
NPs Nanopartículas
NSMs Efectos de tamaño novedoso de materiales
nanoestructurados
PDI Índice de polidispersión
PL Fotoluminiscencia
viii
PNP Nanopartículas de polímero
POM Microscopía óptica polarizada
PVA Alcohol polivinílico
PZ Potencial zeta
QbD Calidad por Diseño
QTPP Perfil de Calidad del Producto Objetivo
r2 Coeficiente de determinación
rpm Revoluciones por minuto
s Segundos
SEM Microscopio electrónico de barrido
SERS Espectroscopia Raman mejorada en superficie
TEM Microscopio electrónico de transmisión
TPP Perfil de Producto Objetivo
UV Ultra Violeta
UVA Rayos Ultravioleta A de onda larga
UVB Rayos Ultravioleta B de onda corta
UVC Rayos Ultravioleta C de onda corta
Vis Visible
W/O Emulsión agua/aceite
W/O/W Emulsión agua/aceite/agua
XPS Espectroscopia de fotoelectrones de rayos X
XRD Difracción de rayos X

ix
 RESUMEN
La piel es el órgano más grande que posee el cuerpo humano, la cual se encuentra expuesta
constantemente a factores externos químicos, mecánicos o físicos que pueden llegar a producirle daño.
Tal es el caso de la radiación solar, causante directa de afecciones como quemaduras solares,
fotoenvejecimiento, y en los casos más extremos, melanomas. A pesar de que la piel cuenta con
mecanismos que la ayudan a protegerse de la radiación solar, siendo la melanina un polímero presente
en ella que actúa frente a este tipo de emisiones, los casos de problemas relacionados con la radiación
solar continúan en aumento debido a que año con año la capa de ozono que protege a la Tierra de la
entrada de radiaciones perjudiciales se encuentra en una constante pérdida de volumen a causa de la
contaminación y emisión de gases arrojados hacia la atmósfera de manera descontrolada, haciendo que
cada vez sea más necesaria la protección extra que debemos tener ante este factor como lo es el uso de
los protectores solares.
Estos productos están a la venta en diferentes presentaciones y contienen diversos filtros que les confieren
la característica de proteger frente a la radiación solar mediante la absorción de fotones, la reflexión de la
radiación solar o con el impedimento de la formación de radicales libres, sin embargo, estos son difíciles
de formular debido a la gran cantidad de filtros e ingredientes necesarios para su manufactura,
repercutiendo sobre la potencial toxicidad que poseen al tener un uso constante de estos. En la búsqueda
de una alternativa viable frente al uso de los protectores solares convencionales, se propone el uso del
polímero presente en la piel que funge con esta misma función: la melanina.
Gracias a los avances en la biotecnología, ha sido posible obtener moléculas en un ambiente controlado
que normalmente se encuentran de forma natural en el cuerpo humano, como el caso de la melanina de
origen recombinante. Este polímero candidato a activo cosmético por sus propiedades, resulta tener
características poco convenientes para su uso en cualquier tipo de formulación puesto que tiene una baja
solubilidad. Con la innovación de la nanotecnología, en este trabajo fue posible llevar este material hasta
un tamaño nanométrico con tallas de 275.33 ± 83.62 nm con el método de doble emulsión evaporación
de disolvente, mejorando así su solubilidad y aumentando el área superficial de las partículas, esperando
ofrecer una mayor protección frente a la radiación solar con su uso.
Para contenerlas se realizaron 3 formulaciones con diferentes bases: una emulsión, un gel y un aceite
fluido, cada uno pasando por una evaluación de Calidad por Diseño con el fin de evitar en gran medida
los problemas resultantes que podrían provocar un fallo en la manufactura, encontrando los materiales
adecuados y hallando los factores de riesgo que pudiesen afectar negativamente al producto final, lo que
facilitó la integración de las nanopartículas a los diferentes medios propuestos. Obtenidas estas
formulaciones, se utilizó la metodología de Mansur para poder calcular el factor de protección solar,
utilizando como referencia un simulador para conocer el FPS del control positivo a utilizar.
Los resultados sugieren que las nanopartículas de melanina de origen recombinante pueden fungir como
activo cosmético, ya que confieren protección solar con FPS arriba de 6 cuando se utilizan en porcentajes
que van arriba del 1% w/v, siendo la formulación del aceite fluido la que presentó mayor capacidad de
protección.

x
1. INTRODUCCIÓN
La piel es el órgano más grande que posee el cuerpo humano y con el que
mayormente nos mantenemos en contacto en nuestra vida cotidiana y por tanto se
encuentra meramente expuesta a diferentes factores externos como
microorganismos, sustancias químicas, variaciones de temperatura y la misma
radiación solar. Para tales efectos cuenta con diferentes mecanismos que la
protegen, como la membrana celular que ayuda a permear sustancias exógenas o
la melanina que es un componente importante para su coloración y el resguardo de
los efectos potenciales que se presentan en la piel al permanecer por tiempos
prolongados al sol. La melanina es producida por un grupo de células presentes en
la piel llamadas melanocitos, quienes la distribuyen en gránulos que son
incorporados a los queratinocitos, otro tipo de células que conforman la capa
externa de la piel, obteniendo así el color que podemos ver en cada individuo,
siendo más o menos oscuro dependiendo de la genética de las personas y de las
condiciones en las que se encuentre la persona, ya que la melanina se produce en
mayor o menor medida dependiendo de la cantidad y el tiempo a la que estemos
sometidos al efecto de la luz o radiación. [1]

A pesar de que la piel cuenta con este mecanismo de protección es necesario contar
con un cuidado adicional ya que con el auge de la contaminación, el uso de sistemas
de refrigeración y sobre todo la utilización de sustancias químicas que contienen
cloro como los clorofluorocarbonos han contribuido a que la capa de ozono,
encargada de la protección contra la radiación solar, comenzando con un proceso
de deterioro. Esta capa se encuentra en la estratósfera y tiene como función el
absorber o reflejar la radiación ultravioleta emitida por el sol mediante mecanismos
de dispersión generada por gases y vapor de agua. La protección a los diferentes
tipos de radiación, evita o reduce algunos efectos negativos contra la piel, como
manchas, quemaduras, fotoenvejecimiento y, en el peor de los casos el cáncer de
piel. [2] Para lograr coadyuvar en este cuidado adicional, la ciencia del cuidado de
la piel ha propuesto diferentes sistemas para contrarrestar los fotoefectos negativos
a través de diferentes cosméticos, por lo que la industria de los protectores solares
ha ido creciendo a lo largo de las últimas décadas, incluso la generación de este
tipo de productos no cuenta con más de cien años siendo utilizados por las
personas.

En la época de la Segunda Guerra Mundial los soldados que trabajaban en cubiertas

de portaaviones o en balsas, y que se encontraban en zonas sumamente calurosas
como África o Filipinas, las Fuerzas Aéreas de los Estados Unidos de América
distribuían el llamado aceite de parafina rojo, un derivado del petróleo que fue
utilizado como el primer protector solar de manera no comercial [3]. En contraste a
esto, el estilista y perfumero francés Jean-Alexandre Patou en el año de 1927 creó
el primer protector solar denominado Huile de Chaldée o aceite de caldea, siendo
utilizado para cumplir con los requerimientos estéticos de aquellos tiempos dado
que comenzaba la moda de las pieles bronceadas [4], iniciando así la industria
dedicada a la venta de los primeros productos cosméticos dedicados al cuidado de
la piel frente a la luz emitida por el sol. Actualmente se prevé que la industria
dedicada al cuidado de la piel llegue a ser valuada en cerca de $54 mil millones de
dólares estadounidenses para el año de 2025, donde se incluyen los productos
dedicados a la protección solar, siendo América Latina una de las regiones con
mejor potencial de crecimiento en esta área. [5] En México hay gran variedad de
productos para la protección solar, diversas marcas, diferentes tipos de protección,
múltiples formas cosméticas, precios y distintos factores de protección,
proporcionando así al mercado una complejidad enorme al momento de la elección
de un bloqueador que se ajuste mejor a la economía y necesidades de cada
individuo.

El gran problema con los protectores solares convencionales es que para generar
una formulación que sea eficaz, eficiente y que cumpla con los requerimientos
normativos, es necesario utilizar grandes porcentajes de los compuestos que
otorgan el impedimento del paso de los rayos solares a la piel dentro de las cremas,
geles, aceites o cualquier otra forma cosmética que se encuentre a la venta en el
mercado. Recientemente, ha habido un auge importante en el uso de filtros
químicos que han presentado irritabilidad, toxicidad o absorción sistémica, lo que
no es propio de los cosméticos, pues se utilizan altas concentraciones para lograr
el efecto deseado. [6] Los filtros físicos presentan una menor toxicidad, como es el
uso de dióxido de titanio o zinc, sin embargo presentan sensoriales no tan bien
apreciados como el “efecto payaso”, donde la zona de aplicación del producto se
aprecia de un color blanco intenso, debido a su insolubilidad o gran tamaño de
partícula, mismos que han sido modificados para mejorar aspectos tecnológicos de
dichos productos haciendo uso de nanomateriales con el fin de combatir problemas
tanto en su formulación, como en la aceptación del cliente. [1] Por otro lado, en
2019 la FDA aprobó un medicamento llamado Scenesse® el cual favorece la
producción de melanina en la piel, independientemente de la exposición a la luz
solar o fuentes de luz artificial UV [6], sin embargo, es un tratamiento farmacológico
y sistémico que tendría implicaciones biológicas y otros problemas que podrían
tener repercusiones sobre la salud del paciente.

Para resolver situaciones como la anterior, los grandes avances en la biotecnología

e ingeniería genética han permitido que moléculas biológicas que anteriormente
solo se conseguían mediante métodos en animales puedan ser producidas en
laboratorio y a escala industrial, de manera que esto sea una ventaja para poder ser
empleadas para el uso humano con resultados más precisos y mayormente
controlados. Ejemplo de estos materiales es la melanina recombinante, la cual al
tener el efecto de protección solar de manera natural en la piel, se podría aprovechar
para poder ser usada en productos cosméticos al ser aplicada de forma externa y
2
poder mejorar la protección contra los diferentes tipos de radiación ultravioleta que
existen. Así, con un material biocompatible es posible reducir complicaciones con la
piel y disminuir la incidencia de enfermedades en este órgano. Sin embargo, la
melanina de origen recombinante es obtenida en forma sólida con un aspecto similar
a piedras o gránulos pequeños e irregulares, lo que haría difícil crear una
formulación que pudiera contenerla de manera segura y estable, es por ello que ha
surgido el interés de autoensamblarla para producir una nanopartícula para
potenciar sus efectos de superficie y cuánticos, y entonces evaluar su efecto
fotoprotector UV, ya que debido a su tamaño nanométrico se podría potenciar su
efecto protector y crear además una suspensión que es transparente al aplicarse.
Por lo que el reto es poder buscar la mejor formulación y forma cosmética, que sea
estable y con propiedades tecnológicas para emplearse como protector solar.

3
2. MARCO TEÓRICO Y ANTECEDENTES

2.1 La piel

2.1.1. Anatomía y estructura.

La piel es el órgano de mayor tamaño que posee el ser humano contando con una
superficie de aproximadamente 1,8 m2 con un 16% del peso corporal (alrededor de
3,6 kg para una persona promedio), protegiendo al cuerpo de su exterior y al mismo
tiempo permitiendo la interacción con su ambiente. Es una estructura compleja
conformada por tres capas que contienen distintos tipos de células que cumplen con
distintas funciones, siendo estas la epidermis, dermis e hipodermis (Figura 1). Estas
divisiones son unidades funcionales e interdependientes que dependen de tejido
circundante y su conexión para regular y modular la estructura y función normal de
la piel.
Los melanocitos se encuentran en la epidermis [7], y se diferencian de otras células
del estrato basal por la posesión de procesos dendríticos por los cuales transfieren
el pigmento por un grupo de queratinocitos, formando una unidad epidérmica de
melanina. El rasgo característico de los melanocitos es un orgánulo citoplasmático
especial conocido como melanosoma en el cual se forma la melanina por acción de
la enzima tirosinasa. Los melanosomas aparecen como vesículas esféricas,
limitadas por membranas, en la zona del aparato de Golgi [8], los cuales se mueven
al final de las dendritas de los melanocitos que se encuentran más cerca de la
superficie de la piel y se transfieren a los queratinocitos [9], confiriéndole a la piel
las tonalidades que la caracterizan, dependiendo del tipo de melanina que el cuerpo
produzca, como se explicará más adelante.

Figura 1. Capas de la piel y sitio de alojamiento de los melanocitos. [Imagen tomada y

adaptada de la referencia 1]

4
2.1.2 Capas de la piel y sus funciones
Algunas de las funciones que cumple la piel y que nos brindan las diferentes células
de las que está formada, son la protección contra agentes físicos, químicos y
biológicos que se encuentran de manera externa al cuerpo, permeabilidad ante todo
tipo de sustancias, termorregulación y protección contra rayos ultravioleta, entre
otras, sintetizado en la Tabla 1.
Tabla 1. Funciones de la piel [10]
Capa de la Células encargadas y/o
Función
piel sitio de alojamiento
Fabricación y almacenamiento de
queratina, dando dureza al cabello,
piel y uñas.
Queratinocitos; estrato Previene la penetración de
corneo. microorganismos y la deshidratación
de los tejidos subyacentes, y
proporciona una protección mecánica
contra la abrasión.
Papilas dérmicas; estrato Aumentan la fuerza de la conexión
Epidermis basal. entre la epidermis y la dermis.
Célula de Merkel; estrato Estimula los nervios sensoriales que el
basal. cerebro percibe como tacto.
Produce melanina, que da color al
cabello y la piel, y protege el ADN en
Melanocitos; estrato
los núcleos de las células vivas de la
basal.
epidermis del daño de la radiación
ultravioleta (UV).
Células de Langerhans; Macrófago, engulle bacterias,
estrato espinoso. partículas extrañas y células dañadas.
Ayudan a combatir las bacterias u
Fagocitos; capa papilar. otras infecciones que han penetrado la
piel.
Tejido conectivo irregular
Atribuye flexibilidad a la piel.
denso; capa reticular.
Fibras de elastina; capa Aportan elasticidad a la piel,
Dermis reticular. permitiendo el movimiento.
Proporcionan estructura y resistencia
a la tracción, con hebras de colágeno
Las fibras de colágeno; que se extienden tanto a la capa
capa reticular. papilar como a la hipodermis.
Además, el colágeno se une al agua
para mantener la piel hidratada.

5
 Tejido conectivo areolar Almacenamiento de grasa,
vascularizado y tejido proporciona aislamiento y
adiposo amortiguación para el tegumento.
Hipodermis Envoltura gruesa de tejido conectivo
que rodea los músculos esqueléticos,
Fascia
anclándolos a los tejidos circundantes
e invirtiendo grupos de músculos.

2.2. Melanina

2.2.1 Estructura y melanogénesis

La melanina es el principal componente que determina el color de la piel, siendo
esta un grupo de polímeros quinoides presentes en distintos reinos que se generan
mediante la polimerización oxidativa de compuestos indólicos o fenólicos, que
puede presentarse en diferentes colores distintos como parte de un proceso
evolutivo en respuesta de los organismos para su supervivencia.
A partir de la evolución, surgieron los siguientes tipos de melanina conocidos:
o Eumelanina. Es un pigmento de color negro o café, la cual se
encuentra en diversos organismos, siendo el humano uno de ellos. Se
encuentra distribuida en varios tejidos como retinas, cabello, hígado y
sobre todo en la piel. Tiene como precursor la (L)-Tirosina o DOPA
(3,4 dihidroxifilalanina) o fenilalanina. [11]
o Feomelanina. Se asocia principalmente con el color amarillo y rojo, y
al igual que la eumelanina tiene como precursor la fenilalanina o
tirosina. Se encentra en mayor proporción en personas que presentan
colores de pelo rojizo. [12]
o Piomelanina. Al igual que la eumelanina, esta es de un color negro o
café, que de igual manera tiene como precursor a la tirosina, con
características hidrofílicas. Se ha encontrado en hongos como un
polímero del ácido homogentísico. [12]
o Alomelanina. Este grupo es el más heterogéneo de melaninas, que de
igual manera presentan un color negro o café. Se diferencia de las
anteriores debido a que en su composición química no contienen
nitrógeno ni azufre. [13]
[Link]. Melanogénesis.
Para que pueda llevarse a cabo la melanogénesis, es necesaria su síntesis dentro
del melanocito, al interior de los melanosomas (feomelanosomas si contiene
feomelanina y eumelanosomas si contienen eumelanina) y a partir de la tirosina.
Una sucesión de oxidaciones de tirosina catalizada por la tirosinasa conduce a la
síntesis de DOPA (dihidroxifenilalanina) para producir, a continuación, un
compuesto intermediario común: la dopaquinona. A partir de este punto, dos vías

6
distintas conducen a la formación de las eumelaninas y de las feomelaninas
estructuralmente diferentes [14]. La Figura 2 muestra el proceso de síntesis de la
melanina, en el cual se aprecia cómo a partir de la tirosina y una serie de
oxidaciones, es posible obtener los diferentes tipos de melaninas existentes.

Tirosinasa

Figura 2. Vía de síntesis de la melanina. Dopa: dihidroxifenilalanina; DHI: 5,6-

dihidroxiindol; DHICA: 5,6-dihidroxiindol-2-carboxílico; TRP: proteína relacionada con la
tirosinasa. [Imagen tomada y adaptada de la referencia 15]

2.2.2 Funciones de la melanina

Las melaninas se encuentran en especies de los tres dominios de la vida: Archaea,
Bacteria y Eukarya. Estos pigmentos tienen diversas funciones relacionadas con la
supervivencia de muchas especies en su entorno natural [14] siendo que debido a
su diversidad se le han atribuido distintas funciones como la protección contra
agentes antioxidantes, protección contra el cambio osmótico, temperatura, y sobre
todo la captación de radiación ultravioleta. [16] De hecho, la barrera melánica es el
dispositivo más eficaz contra la radiación solar, en el que el espectro de luz
ultravioleta es la zona que afecta la piel, la cual actúa absorbiendo radiación con
longitudes de onda entre 350-1200 nm. [15].
En humanos, la exposición solar estimula su producción y ello se traduce en
bronceado que se distinguen en dos tipos: uno inmediato y otro retardado, siendo
el primero iniciado a los 30 minutos de la exposición e inducido por los rayos
ultravioleta A de onda larga (UVA). Es bastante transitorio y se atenúa en pocas
horas. Se produce por fotooxidación de la melanina ya formada y almacenada en
los melanocitos, que es transferida a los queratinocitos. Su intensidad va a depender
7
por tanto de la melanina preexistente. El segundo de estos, el bronceado retardado,
se inicia a los 2-3 días de la exposición y dura de días a semanas, y es consecuencia
de un proceso de síntesis de nueva melanina. Los rayos ultravioleta B de onda corta
(UVB) (Tabla 2) son la banda más efectiva para estimular este proceso de
melanogénesis o nueva síntesis de melanina, aunque también puede conseguirse
con exposiciones intensas, a dosis eritematógenas, de UVA (15-50 J/cm2). Este
bronceado sí confiere protección frente a la quemadura solar, sin embargo no
impide el cáncer cutáneo. [16]

Tabla 2. Tipos de radiación solar y su efecto sobre la piel

[15]-[17]
TIPOS LONGITUD
DE DE ONDA EFECTOS SOBRE LA PIEL
RAYOS (nm)
Poca penetración, sensación de calor,
IR 800- 5000 promueve la secreción de ácido
urocánico
Al igual que la IR tiene escaso poder de
Visible 400-800
penetración sobre la piel.
Pigmentación inmediata (oxidación de
UVA 320-380 las melaninas presentes en los
melanocitos)
Pigmentación retardada (bronceado),
UVB 280-320 eritema solar, engrosamiento del estrato
córneo o hiperqueratosis
Retenidos por la capa de ozono
UVC 200-280
atmosférico

La tabla 3 muestra los fototipos cutáneos y el efecto que produce la radiación sobre
el tipo de piel dependiendo del contenido de melanina. Hay que tener en cuenta que
una misma exposición solar sobre el órgano cutáneo no muestra los mismos
cambios en todas las personas y encontramos una enorme variabilidad individual,
sin embrago, para conocer nuestro fototipo de piel de manera rápida se puede
conocer resolviendo dos cuestiones: la primera, sobre la intensidad del eritema a
las 24 horas de una exposición al sol de mediodía de verano durante 45-60 minutos,
y segunda, con la intensidad del bronceado tras dicha exposición después de una
semana. [16] Estos métodos suelen ser incluso dolorosos de realizar, es por eso
que existen métodos espectrométricos y cuestionarios específicos para conocer el
fototipo cutáneo de cada individuo. [67]

8
 Tabla 3. Fototipos cutáneos [16]
Características principales del Rasgos en la piel y
Fototipo
fototipo cabello
Cabello naranja, rojizo.
Piel blanca.
Fototipo I Siempre se quema y nunca se broncea
Usualmente presencia de
pecas.
Cabello rubio.
Casi siempre se quema y a veces se
Fototipo II Piel blanca.
broncea
Sin presencia de pecas.
Fototipo A veces se quema y generalmente se Cabello castaño claro.
III broncea Piel morena clara.
Fototipo Raro que se queme y siempre se Cabello castaño oscuro.
IV broncea Piel morena oscura.
Cabello castaño oscuro o
Fototipo V Razas pigmentadas negro.
Piel morena oscura.
Cabello negro.
Fototipo
Raza negra Piel morena oscura o
VI
negra.

2.3. Radiación solar.

2.3.1 Tipos de radiación solar que llegan a la Tierra

El sol es el cuerpo celeste que emite la luz que podemos ver durante el día y que
permite tener diversos beneficios en el ser humano como la síntesis de vitamina D,
sin embargo la exposición prolongada a ella puede conducir a problemas en la piel,
ya que dicha luz puede llegar hasta la superficie terrestre un amplio espectro de
radiaciones electromagnéticas que no es posible visualizar con el ojo humano [18].
2.3.2 Efecto de las radiaciones sobre la piel
El espectro de radiaciones electromagnéticas es tan amplio que se divide en
distintas regiones dependiendo de la longitud de onda, siendo la mayor parte de
éste la radiación infrarroja, con una longitud de onda entre los 800 y 5.000 nm, que
cuenta con bajo poder energético y un escaso poder de penetración a través de la
piel y que además los efectos de exposición se traducen en una sensación de calor
que estimula la circulación sanguínea, interviene en los fenómenos de
termorregulación y sudación, mediante la cual el organismo secreta el ácido
urocánico que, a su vez, actúa como un protector natural contra la radiación solar.
El espectro IR es el menos peligroso si se tiene en consideración los demás tipos

9
de radiación que emite la luz solar, que son los rayos UV, de los cuales hay tres
tipos, los UVA, UVB y UVC (ver Tabla 4).
Cerca de un 5% de la radiación que llega a la Tierra corresponde a los rayos UVA,
que se caracterizan por tener una gran capacidad para penetrar en el interior de las
capas de la piel. De hecho, se calcula que aproximadamente el 39% de la radiación
UVA alcanza la dermis, siendo responsable del bronceado. Por otro lado la radiación
UVB tiene menor capacidad que la anterior para penetrar en la piel y constituye un
0.1% del total de radiación solar y es la responsable de la quemadura solar y
produce la llamada pigmentación indirecta o retardada de la piel, que desencadena
el cáncer de piel. Por último la radiación UVC, la más energética de las mencionadas
hasta ahora y la más nociva para el ser humano. Esta radiación es absorbida por la
capa de ozono, por lo que no alcanza la superficie terrestre, de la misma manera
que otras radiaciones de longitudes de onda inferiores a 280 nm, que tampoco
llegan a nuestro planeta y que serían incompatibles con la vida humana. [18]
La problemática aquí presente se deriva en que la capa de ozono, a medida que
pasan los años, ha ido disminuyendo debido a la contaminación del medio ambiente.
Evidencia de esto, figura cuando en 1985 se descubrió que tenía un agujero muy
grande en el Polo sur, y que para el año 2018 el tamaño de este alcanzó los 23
millones de km2 según explica la Administración Nacional de la Aeronáutica y del
Espacio de Estados Unidos (NASA) [19,20]. Dicho caso se ve reflejado en el índice
UV solar mundial (IUV), siendo este una medida de la intensidad de la radiación UV
solar en la superficie terrestre expresado como un valor superior a cero, y que en
cuanto a más alto, mayor es la probabilidad de lesiones cutáneas y oculares,
categorizándose de acuerdo con el Sistema de protección solar recomendado
descrito en la tabla 4. [21]

Tabla 4. Sistema de protección solar recomendado dependiente del índice

UV [21]
ÍNDICE TIPO DE
RECOMENDACIONES
UV PROTECCIÓN
1 No necesita
Puede mantenerse en el exterior sin riesgo
2 protección
3
Mantenerse a la sombra durante las horas centrales
4
Necesita del día.
5
protección Usar ropa adecuada, crema de protección y
6
sombrero.
7
8 Evite salir durante las horas centrales del día.
Necesita
9 Buscar la sombra.
protección
10 Imprescindible usar ropa adecuada, crema de
extra
11+ protección y sombrero.

10
Este índice UV solar mundial puede ser consultado en diversas páginas de internet
tal como en la página de la Secretaría de Medio Ambiente para el caso de México
(Disponible en la dirección de internet de dicha Secretaría en
[Link] ya que varía
dependiendo la hora del día y la región, o bien, mediante cálculos matemáticos.
Es por lo anterior que la Organización Mundial de la Salud incluya dentro de sus
recomendaciones el uso de una protección extra como la que ofrecen los
protectores solares o micas, en sus diferentes presentaciones, para disminuir la
incidencia de enfermedades y afecciones en la piel [21].
2.3.3. Tratamientos para el daño por radiación solar
La radiación solar puede causar diversos problemas asociados con la piel, entre los
cuales los más comunes se encuentran en la Tabla 5 mostrando sus características,
síntomas y tratamiento para cada una de las afecciones. Para su diagnóstico en la
mayoría de los casos el médico puede confirmar que tiene la piel dañada por el sol
realizando una inspección en el área afectada. A menudo, se realiza una biopsia
para descartar cáncer de piel en un parche de queratosis actínica.
El enrojecimiento de las quemaduras solares desaparecerá en unos pocos días,
siempre que no vuelva a exponer su piel lesionada al sol sin usar un bloqueador
solar o protector solar. Algunos daños causados por el sol son permanentes, aunque
los medicamentos recetados, los remedios de venta libre y los tratamientos de
rejuvenecimiento de la piel pueden mejorar la apariencia de la piel. [22]

Tabla 5. Afecciones en la piel y su tratamiento [22]

AFECCIÓN

DESCRIPCIÓN SÍNTOMAS TRATAMIENTO

La piel expuesta La piel parece Uso de humectante que

al sol pierde seca, escamosa contenga: glicerina, urea,
humedad y y un poco más ácido piroglutámico,
aceites arrugada que la
Piel seca

sorbitol, ácido láctico y/o

esenciales, lo piel de otras sales de lactato.
que la hace partes del cuerpo
parecer seca, que no han Evitar el uso de ácidos en
escamosa y estado expuestas cualquier piel quemada por
arrugada al sol. Suele el sol.
prematuramente, causar picazón. Evitar los baños calientes.

11
 incluso en Lavarse solo con agua tibia
personas más o fría, usando un jabón sin
jóvenes. perfume que tenga un alto
contenido de aceite o
glicerina.
La quemadura de
Aplicar compresas con un
sol es el nombre
Las quemaduras paño húmedo frío o rociar el
común de la
de sol leves área con agua fría.
lesión cutánea
causan dolor y
que aparece
enrojecimiento en
inmediatamente
la piel expuesta
después de que
al sol. En la
la piel se expone
mayoría de los
a la radiación
casos, existen
Quemadura de sol

ultravioleta. Las
claros límites
quemaduras
donde la piel ha
solares leves solo
sido protegida del El médico puede recetarle
provocan un
sol prendas de medicamentos
enrojecimiento
ropa. Los casos antiinflamatorios si tiene
doloroso de la
más graves de quemaduras solares
piel, pero los
quemaduras extensas con dolor y
casos más
solares producen ampollas intensas.
graves pueden
ampollas
producir
dolorosas, a
pequeñas
veces
protuberancias
acompañadas de
llenas de líquido
náuseas y
(vesículas) o
mareos.
ampollas más
grandes.
Es una pequeña Aparece como Depende de muchos
protuberancia una pequeña factores, incluido el número,
Queratosis actínica

que se siente protuberancia el tamaño y la ubicación de

como papel de que se siente sus queratosis actínicas.
lija o una mancha como papel de Las opciones incluyen:
pequeña y lija o una mancha
escamosa de piel persistente de Fluorouracilo tópico:
dañada por el sol piel escamosa medicamento contra el
que tiene un tinte (descamada) que cáncer, 5-fluorouracilo (5-
rosado, rojo, puede tener una FU) se aplica directamente
amarillo o superficie sobre la piel para eliminar la
marrón. A irregular o incluso queratosis actínica.

12
 diferencia de las afilada y que
Imiquimod tópico: regula los
marcas de tiene un tinte
bronceado o las rosado, amarillo, mecanismos de defensa del
cuerpo para reaccionar contra
quemaduras rojo o pardusco.
solares, una Al principio, una la queratosis actínica.
queratosis queratosis Gel tópico de diclofenaco
actínica no suele actínica puede sódico: se aplica dos veces
desaparecer a tener el tamaño al día durante tres meses
menos que un de un grano. En para tratar la queratosis
médico la raras ocasiones, actínica.
congele, la trate una queratosis
químicamente o actínica puede Crioterapia: la queratosis
la extraiga. Se picar o ser actínica se congela con
desarrolla en levemente nitrógeno líquido.
áreas de la piel sensible.
que han sufrido Exfoliaciones químicas: se
una exposición usa una solución química
repetida o para eliminar la capa
prolongada a la superior de la piel, con la
luz ultravioleta anticipación de que la piel
del sol y es una normal volverá a crecer
señal de más tarde.
advertencia de un
mayor riesgo de Rejuvenecimiento con láser:
cáncer de piel. funciona de la misma
Cerca del 10% al manera que una exfoliación
15% de las química para eliminar la
queratosis capa superior de la piel,
actínicas pero utiliza un rayo láser en
eventualmente se lugar de una solución
convierten en química.
cánceres de Escisión por afeitado: el
células médico rasura
escamosas de la cuidadosamente el área de
piel. piel anormal. Las virutas de
piel también se pueden
utilizar como muestra de
biopsia para detectar
cáncer.
Tratamiento fotodinámico
(TFD): la queratosis actínica
absorbe una solución
sensibilizante a la luz y luego
"activa" la luz, destruyendo la
queratosis actínica.

13
 Debido a que es una señal de
que usted tiene un mayor
riesgo de cáncer de piel, el
médico programará exámenes
cutáneos de seguimiento
regulares para verificar
periódicamente si hay nuevas
áreas de piel anormal.

La piel desarrolla
arrugas y líneas
finas debido a
Fotoenvejecimiento y otros cambios en el colágeno

cambios en el
colágeno de la
dermis. En la
púrpura actínica, No es posible revertir todos
la radiación Líneas finas, los efectos del daño solar a
ultravioleta daña arrugas más largo plazo, pero puede
el colágeno profundas, una mejorar la apariencia de la
estructural que textura de piel piel con tretinoína. Otras
sostiene las más gruesa y opciones incluyen peelings
paredes de los fácil formación de químicos; criocirugía;
diminutos vasos moretones en las rejuvenecimiento con láser;
sanguíneos de la áreas expuestas o dermoabrasión, en la que
piel. En las al sol, la capa exterior de la piel se
personas especialmente el frota con un cepillo giratorio
mayores, este dorso de las especial o una rueda,
daño del manos y los permitiendo que crezca piel
colágeno hace antebrazos. nueva en lugar de la piel
que los vasos dañada por el sol.
sanguíneos sean
más frágiles y es
más probable
que se rompan
después de un
impacto leve.

Para prevenir las afecciones en la piel anteriormente mencionadas causadas por la

radiación solar, existen distintos pasos que pueden seguirse:
• Aplicar protector solar antes de salir al aire libre. Elegir un protector solar
resistente al agua que tenga un SPF de 30 o más, con un amplio espectro de
protección contra los rayos UVA y UVB. Aplicar con frecuencia para evitar
sudar o lavar el protector solar.

14
 • Usar bloqueador solar en los labios. Elegir un producto que haya sido
especialmente formulado para los labios, con un factor de protección solar
de 20 o más.
• Limite su tiempo al aire libre cuando el sol está en su apogeo
(aproximadamente de 10 a.m. a 3 p.m.).
• Usar lentes de sol con protección contra la luz ultravioleta.
• Usar pantalones largos, camisa de manga larga y sombrero.
• Para ayudar a detectar queratosis actínicas y otras anomalías de la piel en
sus primeras etapas, examinar toda la superficie de la piel a fondo cada uno
o dos meses. Buscar manchas en la piel descolorida o escamosa, lunares,
pequeños nódulos nacarados, llagas y otras anomalías de la piel en todas
las partes del cuerpo, incluidos el cuero cabelludo y los genitales. Usar un
espejo para inspeccionar las áreas más difíciles de ver de su espalda,
hombros, brazos, glúteos y plantas de sus pies. Las personas que tienen
numerosas queratosis actínicas deben someterse a un examen de la piel por
parte de un médico al menos dos veces al año. [22]

2.4. Protectores solares.

Los protectores o filtros solares son formulaciones que se aplican sobre la piel con
el fin de reducir los efectos de la radiación solar sobre la misma. Existen diferentes
tipos que se clasifican según su mecanismo de acción, función o forma cosmética.
2.4.1 Clasificación de protectores solares.
[Link]. Clasificación según su mecanismo de acción.

Los protectores solares actúan de dos formas, desviando o reflejando la radiación,

o absorbiéndola; y atendiendo a su composición se les clasifica en tres grupos:
Los filtros físicos, que son sustancias de origen mineral como el dióxido de titanio,
óxido de zinc, carbonato de calcio, carbonato de magnesio, óxido de magnesio,
cloruro de hierro. Estos actúan reflejando o desviando la radiación solar formando
una barrera opaca que actúa a modo de pequeños espejos. Su espectro de
actuación es más amplio, de manera que proporcionan protección frente a los UVA,
UVB, luz visible e infrarrojos. Son partículas minerales que necesitan una capa de
aplicación gruesa, pueden manchar la ropa, aunque cada día se elaboran nuevas
partículas microscópicas cosméticamente más aceptables. Es más raro que
originen reacciones de tipo alérgico o irritativo. Están menos difundidos en el
mercado.
Los filtros químicos, o también denominados orgánicos por su estructura química
son moléculas que absorben los fotones de la radiación solar alterando su estructura
molecular. Cada molécula presenta un espectro de absorción óptimo que permite
clasificarla en filtro UVA o filtro UVB. Los cambios en su estructura molecular

15
pueden traducirse en cambios en su estructura química, de modo que a veces
producen dermatitis de contacto. Son los más difundidos en el mercado porque son
transparentes, no manchan la ropa y necesitan una capa de aplicación de menor
grosor. Cosméticamente son más aceptables. Las sustancias más habitualmente
empleadas son: PABA, salicilatos, ácido cinámico, alcanfor, y bencimidazoles como
filtros UVB; benzofenonas, antranilatos y dibenzoilmetanos como filtros UVA. [16]
Los filtros biológicos, que son sustancias antioxidantes que se encuentran en
sistemas biológicos de manera natural en plantas, semillas y frutas, entre otros, que
evitan la formación de radicales libres, como las vitaminas A (betacarotenos), C y E
(en forma de acetato o palmitato). [23]
[Link]. Clasificación según su función.
En cuanto a su función, existen tres tipos de productos que funcionan para las
diferentes etapas en las que se está expuesto al sol, siendo antes, durante y
después de la exposición, siendo los agentes preventivos, los agentes
bronceadores y los agentes para después de la exposición al sol:
n Los agentes preventivos de quemadura solar. Se definen como filtros
solares que absorben el 95% o más de la radiación ultravioleta dentro de
longitudes de onda 390- 320 µm. Los agentes bloqueantes solares opacos,
cuyo fin es suministrar la máxima protección en forma de barrera física. Con
más frecuencia se utilizan en este grupo son dióxido de titanio y óxido de
zinc. El dióxido de titanio refleja y dispersa prácticamente toda radiación en
las zonas ultravioleta y visible (290-777 µm), de modo que evita o minimiza
tanto la quemadura solar como el bronceado. [1]
n Los agentes bronceadores al sol. Se definen como filtros solares que
absorben al menos el 85% de la radiación ultravioleta dentro del intervalo de
longitudes de onda 290 a 320 µm y producen un ligero bronceado transitorio.
Estos agentes producirán cierto eritema, pero no dolor. Son filtros solares
químicos que absorben una zona específica de radiación ultravioleta. En
alguna circunstancia los mismos filtros solares se pueden emplear en ambos
tipos de productos pero a concentraciones diferentes (menores en un
producto bronceador solar). [1]
n Los agentes para después de la exposición cumplen con la función de aliviar
la piel de los efectos de estar bajo los rayos del sol después de un cierto
tiempo calmando la sensación de irritación en la piel, actuando para
recuperar el manto hidrolipídico produciendo hidratación y emoliencia. [1]
[Link]. Clasificación según su forma cosmética.
La clasificación por su forma cosmética depende de la formulación con la que el
producto esté hecho, dándole las características físicas que se requieren para
cumplir su función sobre la piel. Específicamente para los protectores solares,
existen por lo menos cuatro tipos de formulaciones base, que son las emulsiones,
los aceites, los geles y las espumas.

16
 • Las emulsiones son mezclas de agua con componentes grasos,
estabilizadas por medio de unos compuestos químicos denominados
tensoactivos, siendo las más habituales las que presentan la forma cosmética
de crema. Al llevar a la vez agua y grasas permite la incorporación de
principios activos tanto grasos como acuosos, además, no son demasiado
desengrasantes para la piel, suelen ser bien toleradas, sobre todo por pieles
secas. Principalmente son las cremas y las lociones, y se diferencian en que
la crema (Figura 3.a) es más espesa, viscosa y con mayor contenido en
grasas, lo que las hace menos adecuadas para pieles con exceso de
secreción sebácea. Por su parte, las lociones (Figura 3.b) son más líquidas
y con mayor contenido en agua, con tacto acuoso, y menos grasas por lo que
son mejor toleradas por pieles grasas [24].

A B

Figura 3. (a) Emulsión cosmética tipo crema; (b) Emulsión cosmética tipo loción [Imagen
tomada y adaptada de la referencia 23]

• Los geles (Figura 4) son una forma farmacéutica y cosmética donde el uso
de un polímero se encarga de aumentar la viscosidad hasta transformarlo en
un líquido denso, un semisólido o incluso un sólido. Los sólidos suelen
formarse a partir de disoluciones, es decir, a una mezcla de sustancias le
añado el agente gelificante, que aumentará su viscosidad hasta transformarla
en un gel. [24]

Figura 4. Forma cosmética en gel [Imagen tomada y adaptada de la referencia 23]

17
• Los aceites (Figura 5) son una mezcla de ácidos grasos o grasas de baja
densidad. Es el caso, por ejemplo, de las brillantinas, compuestas por una
mezcla de sustancias aceitosas encargadas de engrasar y fijar el cabello.
Para los protectores solares, esta mezcla de aceites tiene los filtros
necesarios para ofrecer una protección frente a la radiación solar, además,
está comprobado que los aceites son capaces de presentar un Factor de
Protección Solar por sí solos. [25] La desventaja de esta forma cosmética es
que a altas temperaturas en presencia de aire se producen reacciones de
peroxidación lipídica con formación de hidroperóxidos, cuya descomposición
generan productos de oxidación secundarios que incluyen compuestos
volátiles como aldehídos, cetonas, hidrocarburos, ácidos, ésteres, alcoholes
y compuestos aromáticos. [26] Generalmente vienen en una presentación
con spray para su mejor aplicación y son especialmente utilizados para
situaciones que involucren el contacto con el agua por su naturaleza
hidrofóbica.

Figura 5. Forma cosmética de protector solar en forma de aceite corporal [Imagen

tomada y adaptada de la referencia 23]

Las espumas (Figura 6) son formas cosméticas en las que se incorporará,

dentro del excipiente, cierta cantidad de gas en forma de burbujas, para lo
cual existen diversas opciones de proceso. Un tipo habitual de espumas en
la que vienen envasadas a presión; el gas que viene envasado con el resto
del cosmético sale a presión y se forma las burbujas que le dan la típica
morfología a la espuma. [24]

18
 Figura 6. Forma cosmética de protector solar en forma de espuma.

2.4.2. Normatividad nacional e internacional

En México, la producción de protectores solares y otros cosméticos está dada por
referentes como la Norma Oficial Mexicana NOM-059-SSA1-2015, Buenas
prácticas de fabricación de medicamentos, para su producción y pruebas de
estabilidad. [27] Sin embargo estos productos no se encuentran contemplados en
tal normativa. Dentro de la Ley General de Salud en el Capítulo XI se realizó el
Decreto por el que se reforman y adicionan diversos artículos de la Ley General de
Salud, en materia de cosméticos donde se define a los productos cosméticos como
“las sustancias o formulaciones destinadas a ser puestas en contacto con las partes
superficiales del cuerpo humano […] con el fin exclusivo o principal de limpiarlo,
perfumarlo, ayudar a modificar su aspecto, protegerlo, mantenerlo en buen estado
o corregir los olores corporales o atenuar o prevenir deficiencias o alteraciones en
el funcionamiento de la piel sana” [28], entrando los protectores solares dentro de
esta definición. Para efectos de este decreto, se creó el “Acuerdo por el que se
determinan las sustancias prohibidas y restringidas en la elaboración de productos
de perfumería y belleza” con el objetivo de restringir las sustancias de las cuales
existen indicios de que su uso represente un riesgo para la salud, y distinguirlas de
aquellas que por sus cualidades sí constituyen un peligro para la salud, ofreciendo
una lista completa de dichas sustancias, su nombre común, sinónimos,
concentraciones máximas de uso y sus condiciones de uso de cada sustancia. [29]
Por otro lado, en el caso del etiquetado de cosméticos, la Norma Oficial Mexicana
NOM-141-SSA1/SCFI-2012, Etiquetado para productos cosméticos preenvasados.
Etiquetado sanitario y comercial [30] es la única relevante y específica para los
protectores solares, dado que, dentro de esta norma, el contenido está
principalmente dirigido a estos productos, ya que gran parte de ella habla sobre

19
especificaciones de su contenido y etiquetado. Dentro de esta Norma Oficial, los
puntos más relevantes para los protectores solares son:
n Factor de protección solar, es el cociente entre la dosis eritematógena
mínima en una piel protegida por un producto de protección solar y la dosis
eritematógena mínima en la misma piel sin proteger.
n Un producto de protección solar o protector solar es cualquier preparado
como crema, aceite, gel o aerosol entre otros, de aplicación sobre la piel
humana con la finalidad exclusiva o principal de protegerla de la radiación UV
absorbiéndola, dispersándola o reflejándola.
n Deben figurar las instrucciones de uso u otros análogos en la superficie de
información del envase primario o secundario o instructivo anexo en
productos para la piel cuya función primaria sea la protección solar.
n En productos para la piel cuya función primaria sea la protección solar, indicar
mediante las frases siguientes o equivalentes:
o Que se aplique antes de la exposición al sol.
o Que para mantener la protección, se repita con frecuencia la
aplicación del producto, especialmente después de transpirar,
bañarse o secarse.
o Que se aplique a la piel la cantidad suficiente.
n Que se indique el valor del Factor de Protección Solar (FPS), en caso de que
se utilicen las siglas FPS o SPF, señalar su significado
o Que protege contra UVB y UVA.
o Que no permanezca mucho tiempo expuesto al sol, aunque emplee
un producto de protección solar.
o Que se mantenga a los bebés y niños pequeños fuera de la luz solar
directa.
o Que la exposición excesiva al sol es un riesgo importante para la
salud.
o Que suspenda su empleo si se presentan signos de irritación o
salpullido.
o Evite el contacto con los ojos, puede causar irritación
o Se podrá incluir el logotipo del Factor UVA (Figura 7), el cual deberá
indicarse mediante las siglas "UVA" impresas dentro de un círculo
simple y cuyo diámetro no deberá exceder la altura con que se indique
el número FPS.

Figura 7. Logotipo del Factor UVA.

20
n Los productos que ofrezcan protección solar como función secundaria, no se
consideran protectores solares por lo que no les aplican estas leyendas.
o En productos cuya función primaria sea la de broncear estos deben
tener un FPS de 2 a 4 (valor medido 2 a 5.9) y declararlo:
§ Que se indique el valor del Factor de Protección Solar (FPS),
en caso de que se utilicen las siglas FPS o SPF, señalar su
significado.
§ Que suspenda su empleo si se presentan signos de irritación
§ Que no permanezca mucho tiempo expuesto al sol.
§ Que se mantenga a los bebés y niños pequeños fuera de la luz
solar directa.
§ Que la exposición excesiva al sol es un riesgo importante para
la salud.
§ Que no se recomienda para niños y personas con piel sensible
al sol.
n Se establece un plazo de dieciocho meses para ajustar el etiquetado de los
protectores solares, considerando:
o Deben proteger contra ambas radiaciones, UVB y UVA.
o No deben hacerse declaraciones que conlleven las siguientes
características:
§ Protección al 100% frente a la radiación UV (como «bloqueador
o bloqueante solar» o «protección total»).
§ No es necesario repetir la aplicación del producto en ningún
caso (como «prevención durante todo el día»).
o Deben llevar advertencias en las que se indique que no constituyen
una protección al 100%, y consejos sobre las precauciones que
conviene tomar, además de su uso.
o Deben ofrecer un grado mínimo de protección frente a ambas
radiaciones, UVB y UVA.
§ El grado mínimo de protección de los productos de protección
solar debe ser el siguiente:
• Un factor 6 de protección solar frente a la radiación UVB.
• Un factor de protección frente a la radiación UVA de al
menos 1/3 del factor de protección solar UVB.
o Sólo deben hacerse declaraciones de protección frente a la radiación
UVB y UVA cuando la protección sea igual o superior a los niveles
establecidos en la Tabla 7.
o El nivel de protección del producto debe figurar mediante la
clasificación como «baja», «media», «alta» y «muy alta». Cada
clasificación debe equivaler a un grado de protección frente a ambas
radiaciones, UVB y UVA de acuerdo con lo que establece la tabla 6.

21
 Tabla 6. Factores de protección solar ajustados según la NOM-141-
SSA1/SCFI-2012 [30]
Clasificación FPS que FPS Factor mínimo Longitud de
se indica medido de protección onda crítica
en la UVA mínima
etiqueta recomendado recomendada
Protección 6 6 – 9.9
baja 10 10 – 14.9
Protección 15 15 – 19.9
media 1/3 del factor
20 20 – 24.9
de protección
25 25 – 29.9
solar que 370 nm
Protección 30 30 – 49.9
indica en la
alta 50 50 – 59.9 etiqueta
Protección 50+ Igual o
muy alta mayor a
60

o Para la determinación de la eficacia del factor de protección solar

deben utilizar como referencia los siguientes métodos de prueba:
§ ISO24442:2011 In vivo determination of sunscreen UVA
protection.
§ ISO24443:2012 Determination of sunscreen UVA
photoprotection in vitro.
§ Colipa 2011 Method for in vitro determination of UVA protection.
§ FDA 2011 SPF test methods and for the UVA protection. [30]
Para otros países, la regulación es equivalente a la propuesta en México, estando
siempre apegada a lo que dicta la Food & Drugs Administration de los Estados
Unidos de América, el cual lanzó una guía de cumplimiento llamada Labeling and
Effectiveness Testing: Sunscreen Drug Products for Over-The-Counter Human Use
—Small Entity Compliance Guide (Pruebas de etiquetado y eficacia: productos
farmacológicos de protección solar para uso humano de venta libre –Guía de
cumplimiento para pequeñas entidades) [31], en la cual se hace referencia a los
requisitos de etiquetado y prueba para la protección contra la radiación ultravioleta
A (UVA) y la radiación ultravioleta B (UVB) y la cual tiene algunas diferencias
respecto a la normativa mexicana. Esta guía está altamente relacionada con La Ley
Federal de Alimentos, Medicamentos y Cosméticos en la que se pretende eliminar
la adulteración, etiquetado incorrecto alteración, mutilación, destrucción, borrado o
eliminación de la totalidad o parte del etiquetado, o la realización de cualquier otro
acto con respecto a un alimento, medicamento, dispositivo o cosmético. [32] En
concreto, esta ley no contiene especificaciones directas respecto a productos
relacionados con la protección de los rayos solares.

22
2.4.3. Factor de protección solar (FPS)
El sistema de factor de protección solar (SPF) (SPF, sun protection factor) ha sido
desarrollado por Plough Corporation para definir la eficacia relativa de agentes filtros
solares para proteger la piel, definiéndolo como la relación entre la exposición a
rayos ultravioleta requerida para producir un eritema mínimamente perceptible
sobre la piel protegida y la exposición que produciría el mismo eritema sobre la piel
no protegida, definido por la Ecuación 1:
!"#(%&)
𝑉𝑎𝑙𝑜𝑟 𝑑𝑒 𝐹𝑃𝑆 = !"# ()&) Ec. 1

Donde:
(PS): Piel protegida (protected skin)
(US): Piel desprotegida (unprotected skin)

Siendo MED (PS) la dosis de eritema mínimo para la piel protegida después de la
aplicación de 2 mg cm-2 de la formulación final del producto de filtro solar, y MED
(US) la dosis de eritema mínima para la piel no protegida, esto es, la piel a la cual
no se le ha aplicado ningún filtro solar. [1] Según la FDA para la prueba de FPS se
requiere la aplicación de 2 mg/cm2 de protector solar en la piel, pero el espesor de
aplicación real se estima se encuentra entre 0,5 a 1,0 mg/cm2, disminuyendo la
efectividad del FPS. [33]
[Link]. Métodos de determinación
La determinación del FPS puede desarrollarse por diferentes metodologías:
• ISO24442:2011 In vivo determination of sunscreen UVA protection.[34]
o Esta norma internacional especifica el procedimiento para determinar
el factor de protección ultravioleta A (FPUVA) de los productos de
protección solar utilizando el método de oscurecimiento de pigmentos
persistentes de acuerdo con los principios recomendados por la
Asociación de la Industria Cosmética de Japón (JCIA) en 1995 [35], y
está restringida al área de la espalda de sujetos humanos
seleccionados.
o Un área de la piel de cada sujeto se expone a la luz UVA sin ninguna
protección y otra área (diferente) se expone después de la aplicación
del producto de protección solar bajo prueba. Una zona más queda
expuesta después de la aplicación de una formulación de protector
solar UVA de referencia, que se utiliza para validar el procedimiento.
o Para determinar el UVAPF, se administran series incrementales de
exposiciones a UVA a cinco o seis pequeños subsitios de la piel para

23
 inducir respuestas de oscurecimiento. Estas respuestas se evalúan
visualmente para determinar la oscuridad del pigmento de 2 a 24 h
después de la exposición a los rayos UVA, según el criterio de un
evaluador capacitado. La dosis mínima de oscurecimiento del
pigmento persistente (MPPDD) para piel desprotegida (MPPDDu) y la
MPPDD obtenida después de la aplicación de un producto de
protección solar (es decir, MPPDD para piel protegida con producto,
MPPDDp) se determinan en el mismo sujeto el mismo día. Un factor
de protección solar individual (UVAPFi) para cada sujeto evaluado se
calcula como la relación de MPPDDp / MPPDDu. [34]
• ISO24443:2012 Determination of sunscreen UVA photoprotection in vitro.
[36]
o La prueba se basa en la evaluación de la transmitancia UV a través
de una película delgada de muestra de protector solar esparcida sobre
un sustrato rugoso, antes y después de la exposición a una dosis
controlada de radiación de una fuente de exposición UV definida.
Debido a las diversas variables que no se pueden controlar con las
técnicas espectroscópicas de película delgada típicas, cada conjunto
de datos de transmisión de protector solar se ajusta matemáticamente
de modo que los datos de SPF in vitro produzcan el mismo valor de
SPF medido in vivo que se determinó mediante pruebas in vivo. A
continuación, las muestras se exponen a una dosis específica medida
de radiación UV para tener en cuenta las características de
fotoestabilidad del producto de prueba. El procedimiento de modelado
matemático se ha derivado empíricamente para correlacionarlo con
los resultados de la prueba humana in vivo (oscurecimiento
persistente del pigmento). [36]
• Colipa 2011 Method for in vitro determination of UVA protection. [37]
o La metodología COLIPA utiliza al menos diez y no más de veinte
voluntarios, dependiendo de la significancia estadística deseada.
o Sin embargo, para Pissavini, los valores altos de SPF son más difíciles
de medir. Un SPF alto normalmente conduce a una mayor
incertidumbre también en el resultado final in vivo, debido a las
variaciones biológicas de los voluntarios. [37]
o El método in vivo para medir la eficacia del protector solar tiene sus
defectos. Principalmente, el SPF mide la capacidad de bloquear la
respuesta de la piel a la radiación UVB e ignora la radiación UVA y, a
pesar del hecho de que el SPF no proporciona información sobre la
capacidad de los protectores solares para resistir condiciones
acuosas, como sudoración y natación, es una nueva legislación desde

24
 2012 que requiere la determinación de la resistencia al agua de los
filtros solares. [37]
• FDA 2011 SPF test methods and for the UVA protection. [38]
o Para el procedimiento de prueba SPF, es necesario el uso de una
Fuente UV, siendo este un simulador solar, y un espectro de emisión,
ya que es un método in vitro.
o El espectro de emisión debe determinarse utilizando un radiómetro de
mano con una respuesta ponderada. La salida del simulador solar
debe medirse antes y después de cada fotoprueba o, como mínimo,
al principio y al final de cada día de prueba. Este radiómetro debe ser
calibrado usando una comparación lado a lado con el
espectrorradiómetro. [38]
• Determinación del factor de protección solar mediante espectrofotometría
según Mansur. [39]
o Los métodos in vitro son en general de dos tipos: métodos que
involucran la medición de la absorción o la transmisión de radiación
UV a través de películas de productos de protección solar en placas
de cuarzo o biomembranas, y métodos en los que las características
de absorción de los agentes de protección solar se determinan con
base en el análisis espectrofotométrico de soluciones diluidas, siendo
de estos últimos el método propuesto por Mansur y colaboradores,
quienes desarrollaron una ecuación matemática muy simple,
utilizando espectrofotometría UV y la siguiente ecuación:
!"#

𝐹𝑃𝑆 = 𝐹𝐶 × (× 𝐸𝐸(l) × 𝐼(l) × 𝐴𝑏𝑠(l) Ec. 2

"$#

Donde:
FPS: Factor de protección solar
FC: 10 (factor de corrección)
EE (ʎ): Efecto eritemogénico de radiación de longitud de onda ʎ*
I (ʎ): Intensidad del sol en la longitud de onda ʎ*
Abs (ʎ): Absorbancia de la solución en la longitud de onda ʎ

*En donde el efecto eritemogénico de radiación de longitud de onda ʎ* (EE (ʎ)) y la

intensidad del sol en la longitud de onda ʎ* (I (ʎ)) es una constante determinada por
Sayre y Colaboradores, y se desglosa en la Tabla 7.

25
 Tabla 7. Relación entre el efecto eritemogénico y la
intensidad de la radiación de cada longitud de onda. [39]
l (nm) 320 315 310 305 300 295 290
EE(l)xI 0.018 0.1 0.1869 0.3278 0.2874 0.0817 0.015

Para este método, es necesario pesar 1 g de la formulación del

protector solar problema, diluirlo en etanol hasta alcanzar una
concentración de 0.2 mg/ml y realizar una filtración con un tamaño de
poro de entre 5-11 µm. El filtrado debe ser leído en un
espectrofotómetro de 320 a 290 nm en intervalos de 5 nm, para
después aplicar la fórmula propuesta anteriormente, dando como
resultado el valor de FPS del producto.
Se debe dar preferencia a los métodos de prueba in vitro en relación con el método
de prueba SPF COLIPA in vivo como una forma de ratificar la preocupación ética y
con fines de detección, como una forma de minimizar los riesgos relacionados con
la exposición a los rayos UV de sujetos humanos durante el desarrollo de un
producto de protección solar, además, los métodos in vitro están atrayendo cada
vez más atención porque son más rápidos, menos costosos y evitan la participación
de voluntarios humanos en los problemas éticos relacionados. [37]

2.4. Nanotecnología

2.4.1. Nanotecnología aplicada a protección solar

A lo largo de la historia de los productos de protección solar, la industria cosmética
se ha enfocado en la mejora continua de éstos con el fin de ofrecer al mercado
nuevas alternativas que mejoren dichos artículos, ya sea, por ejemplo, en la parte
estética como en la disminución de la tonalidad que dejan como residuo la
característica capa de color blanco de los bloqueadores solares convencionales, o
en la parte tecnológica, en la cual se pretende disminuir el tamaño de partícula de
los activos cosméticos con el fin de aumentar la capacidad de protección que
pueden ofrecer dichos productos, mejorando así el proceso de manufactura e
incluso disminuyendo costos en la producción de los mismos, beneficiando de esta
manera directamente al productor. [1] Estas mejoras son dadas gracias a técnicas
basadas en la nanotecnología, ya que nos permite cambiar el tamaño de las
partículas utilizadas como activo cosmético utilizado en productos de protección
solar con el fin de aprovechar las características que se obtienen a partir de dichos
procesos para incrementar su eficacia y eficiencia al momento de su uso. [40]
2.4.2. Conceptos
La nanotecnología es la ingeniería de los sistemas funcionales a escala molecular,
un área de la ciencia moderna que permite controlar y manipular la materia a una
escala que va desde menos de un nanómetro hasta los 1000 nm. [40].

26
El campo de la nanotecnología implica la creación y utilización de sistemas
químicos, físicos y biológicos con características estructurales entre átomos o
moléculas individuales a dimensiones submicrónicas, y también la asimilación de
nanoestructuras resultantes en sistemas más grandes. Está relacionada con
sistemas y materiales, cuyos componentes y estructuras representan propiedades,
procesos y fenómenos químicos, físicos y biológicos nuevos y significativamente
mejorados debido a su tamaño a nanoescala. Cuando las dimensiones de un
material se reducen por debajo de 100 nm, pueden producirse alteraciones drásticas
en sus propiedades, por lo que pueden reducirse para proporcionar un rendimiento
específico o para proporcionar nuevas propiedades a un material, además de
cambios relacionados específicamente con el tamaño y la estructura. [41] Partiendo
de lo anterior, las nanopartículas (NPs), son una amplia clase de materiales que
incluyen sustancias particuladas, resultan tener una difícil clasificación, a saber, de
sus dimensiones, su origen y su composición química, cada una de estas descrita
a continuación. [42]

2.4.3. Clasificación de las nanopartículas

[Link]. Clasificación de las nanopartículas según sus dimensiones

Esta clasificación se basa en las medidas que pueden tener las nanopartículas en
sus diferentes dimensiones, dividiéndose principalmente en cuatro categorías, que
son la de cero dimensiones (0D), unidimensional (1D), bidimensional (2D) y
tridimensional (3D), descritas en la Tabla 8 [43]:
Tabla 8. Clasificación de las nanopartículas basada en sus dimensiones
[43, 44].
Clasificación Características Imagen representativa

Nanomateriales que presentan

en sus 3 dimensiones tamaños
menores a 100 nm.
0D
Ejemplos: el fullereno, partículas
coloidales, puntos cuánticos y Imagen típica de microscopio
nanopartículas de plata y oro. microscopio electrónico de
transmisión (TEM) de
nanoesferas.

27
 Nanomateriales que presentan
en dos de sus dimensiones
tamaños menores a 100 nm.
1D
Ejemplos: nanocables,
nanotubos, nanofibras y
nanovarillas. Imagen típica de TEM de
nanovarillas

Nanomateriales que presentan

en una de sus dimensiones
tamaños menores a 100 nm.
2D Ejemplos: monocapas,
nanorecubrimientos, películas
poliméricas y películas
multicapa. Imagen típica de SEM y TEM
de nanohojas

Nanomateriales que en ninguna

de sus dimensiones presenta
tamaños menores a 100 nm.
3D
Ejemplos: policristales,
nanobolas, nanobobinas y
nanoflores.
Imagen típica de SEM y TEM
de nanoflores.

2.4.4. Enfoques de manufactura

Se han utilizado con éxito numerosos enfoques en nanotecnología para la obtención
de nanomateriales. Generalmente, los enfoques empleados hasta ahora han sido
dictados por la experiencia previa de los investigadores y la tecnología existente. La
"reorganización de los átomos" para construir diferentes nanoestructuras y
nanodispositivos, y la consideración del "comportamiento de los átomos a escala
nanométrica” representan dos categorías nanotecnológicas, es decir, el enfoque de
arriba hacia abajo (top-down) y la fabricación a escala atómica que representa el
enfoque de abajo hacia arriba (bottom-up).
El enfoque "de arriba hacia abajo" se basa en el ensamblaje de estructuras
mediante la manipulación de componentes de dispositivos mucho más grandes
mediante el procesamiento monolítico, un enfoque que se logra más fácilmente con
la tecnología actual. Por otro lado, el enfoque "de abajo hacia arriba", organiza
átomos o moléculas en nanoestructuras, implica la fabricación de estructuras de
dispositivos a través del autoensamblaje sistemático de moléculas, átomos u otras
unidades básicas de materia. [41]

28
Se han desarrollado muchas técnicas para sintetizar y fabricar nanomateriales con
tamaño, forma, dimensionalidad y estructura controlados. Los métodos físicos o
químicos se utilizan generalmente para sintetizar y fabricar nanomateriales 0D, 1D,
2D y 3D, existiendo una gran variedad de métodos para la obtención de estas
descritos a continuación [44] y como lo muestra la Figura 7, estos enfoques se
dividen aún más en varias subclases basadas sobre el funcionamiento, condiciones
de reacción y protocolos adoptados. [42]

Métodos de preparación de NP's

Síntesis con enfoque Síntesis con enfoque

Bottom- Up Top-Down

Spinning. Vía de sínteis Molienda

Síntesis de soporte de biológica. mecánica.
plantilla. Bacterias, Grabado
Sistema de pulverización de levaduras, químico.
plasma o llama. hongos, algas, Sputtering.
plantas, etc.
Pirólisis láser. Ablación laser.
CVD. Electro-
Condensación atómica o explosión
molecular.

Figura 8. Métodos sintéticos típicos para NP’s para los enfoques de arriba hacia
abajo (top-down) y de abajo hacia arriba (bottom-up). [42]

[Link]. Métodos físicos para la obtención de NPs

Se basan en métodos que involucran cambios físicos en la materia, siendo estos
una vía ecológica para la obtención de NP’s. Actualmente existe gran variedad de
métodos de este tipo para su preparación, de los cuales se describirán con mayor
detalle a continuación.
v Evaporación. Es un método común de deposición de película delgada. Se
utilizan varias técnicas de evaporación, como la evaporación térmica y
asistida por iones, para la síntesis y producción de NP’s 0D, 1D, 2D y 3D. En
esta técnica, los átomos o moléculas evaporados pierden energía a través
de colisiones con los átomos o moléculas de gas y se someten a una
condensación homogénea para formar grupos de átomos en las
proximidades de la superficie de un polvo frío. Para evitar una mayor

29
 agregación o coalescencia, los grupos formados deben eliminarse de la
región de deposición. [44]
v Doble emulsión- evaporación de disolvente. Hace uso de las características
fisicoquímicas de los materiales que forman a las NP’s y de los disolventes
que forman la fase continua y dispersa. La primera condición es saber que la
fase continua de la emulsión primaria sea insoluble en la fase dispersa de la
emulsión primaria y en la fase continua de la emulsión secundaria. Cuando
la doble emulsión se ha formado, el siguiente paso es la eliminación del
disolvente orgánico mediante la aplicación de calor, y si se trata de materiales
termosensibles, serán tratadas con temperaturas moderadas y la aplicación
de vacío. [47]
v Pulverización. Existen diferentes tipos de sistemas de pulverización catódica,
como deposición asistida por iones, haz de iones, reactivo, alta utilización de
objetivo, magnetrón de impulso de alta potencia y pulverización catódica de
flujo de gas, se utilizan para la obtención de NP’s. Un proceso típico de
pulverización catódica generalmente implica la expulsión de átomos o grupos
de materiales designados sometiéndolos a un haz de gas inerte acelerado y
altamente enfocado, como helio o argón. [44,47]
v Procesos de litografía. Es un proceso más versátil y fácil de implementar para
producir el autoensamblado de NP’s 0D, 1D, 2D y 3D en diferentes tipos de
sustratos. También es un método rápido y eficaz para el modelado de
superficies, que es compatible con una gran variedad de materiales. Incluye
muchos tipos diferentes de preparación de superficies en las que un diseño
se transfiere desde una fotomáscara o retícula a la superficie de un sustrato
que permitiría realizar múltiples copias a partir de una exposición. [47]
2.4.4. Caracterización física
Se han practicado diferentes técnicas de caracterización para el análisis de diversas
propiedades fisicoquímicas de las NPs, que dependiendo de estas, pueden ser
caracterizadas mediante técnicas de caracterización morfológica, estructural,
tamaño de partícula y área superficial, y ópticas, descritas en los siguientes
apartados.
[Link]. Caracterizaciones morfológicas
Las características morfológicas de los NP siempre adquieren un gran interés ya
que la morfología siempre influye en la mayoría de las propiedades de estas. Existen
diferentes técnicas de caracterización para estudios morfológicos, pero las técnicas
microscópicas como la microscopía óptica polarizada (MOP), SEM y TEM son las
más importantes de ellas.
[Link]. Caracterizaciones estructurales
Las características estructurales son de primordial importancia para estudiar la
composición y naturaleza de los materiales de unión. Proporciona información
diversa sobre las propiedades generales del material en cuestión. XRD, rayos X de
energía dispersiva (EDX), XPS, IR, Raman, BET y el analizador de tamaño son las
30
técnicas comunes que se utilizan para estudiar las propiedades estructurales de las
NPs. [44]
[Link]. Caracterizaciones del tamaño de partícula y área superficial
Se pueden utilizar diferentes técnicas para estimar el tamaño de las NP. Estos
incluyen SEM, TEM, XRD, AFM y dispersión de luz dinámica (DLS). SEM, TEM,
XRD y AFM pueden dar una mejor idea sobre el tamaño de partícula, pero el
analizador de tamaño de potencial zeta /DLS se puede utilizar para encontrar el
tamaño de NP en un nivel extremadamente bajo. En caso de aglomeración e
hidrofilicidad, el DLS podría resultar incapaz de realizar una medición precisa, por
lo que en ese caso deberíamos confiar en la técnica de alta resolución de
sedimentación centrífuga diferencial.
BET es la mejor técnica para determinar la superficie de los materiales NP,
basándose en el principio de adsorción y desorción y en el teorema de Brunauer-
Emmett-Teller (BET). Normalmente se utiliza gas nitrógeno para este propósito.
BET produce cuatro tipos de isotermas específicamente, que están etiquetados
como Tipo I, Tipo II, Tipo III y Tipo IV. [44]
El potencial zeta es una propiedad de los materiales que miden el potencial
electrocinético en sistemas coloidales, denominándose con la letra griega zeta. [48]
Por el tamaño que presentan las NP’s, las fuerzas de unión en la superficie del
coloide y el líquido son las que determinan su comportamiento. Cada coloide
contiene una carga eléctrica que suele ser de naturaleza negativa, aunque también
puede ser positiva. Si la carga es suficientemente elevada los coloides permanecen
discretos, dispersos y en suspensión. Reduciendo o eliminando estas cargas se
obtiene el efecto opuesto y los coloides se aglomeran y sedimentan fuera de la
suspensión [49], es decir, que el potencial zeta indica el grado de repulsión entre
partículas adyacentes, cargadas en una dispersión. [48] Se usa el modelo de la
doble capa (Figura 9) para visualizar la atmósfera iónica en la proximidad del coloide
cargado y para explicar cómo actúan las fuerzas eléctricas de repulsión. Es posible
entender este modelo como una secuencia de etapas que ocurren alrededor de un
solo coloide negativo, si los iones que neutralizan sus cargas son repentinamente
sacados. Veamos primero el efecto del coloide sobre el ión positivo (llamado contra-
ion) en la solución. Inicialmente, la atracción del coloide negativo hace que algunos
iones positivos formen una rígida capa adyacente alrededor de la superficie del
coloide; esta capa de contra-iones es conocida como la capa de Stern.

31
 A B

Figura 9. (A) Cambio en la densidad de carga alrededor de un coloide; (B)

distribución de iones positivos y negativos alrededor del coloide cargado [Imagen
tomada y adaptada de la referencia 49]

Otros iones positivos adicionales son todavía atraídos por el coloide negativo, pero
estos son ahora rechazados por la capa de Stern, así como por otros iones positivos
que intentan acercarse al coloide. Este equilibrio dinámico resulta en la formación
de una capa difusa de contra-iones. Los contra-iones tienen una alta concentración
cerca de la superficie, la cual disminuye gradualmente con la distancia, hasta que
se logra un equilibrio con la concentración de los contra-iones en el seno de la
disolución. [49]

[Link]. Caracterizaciones ópticas

Las propiedades ópticas son de gran interés en las aplicaciones fotocatalíticas y por
ello, especialistas en el tema adquirieron un buen conocimiento de esta técnica para
revelar el mecanismo de sus procesos fotoquímicos. Estas caracterizaciones se
basan en la famosa ley de Lambert-Beer y los principios básicos de la luz. Estas
técnicas brindan información sobre las propiedades de absorción, reflectancia,
luminiscencia y fosforescencia de los NP. Es ampliamente conocido que las NP,
especialmente las metálicas y semiconductores, poseen colores diferentes y, por lo
tanto, están mejor armonizados para aplicaciones relacionadas con la fotografía. El
ultravioleta-visible (UV-Vis), la fotoluminiscencia (PL) y el elipsómetro nulo son los

32
instrumentos ópticos más conocidos, que pueden utilizarse para estudiar las
propiedades ópticas de los materiales NP. [44]
2.4.5. Biocompatibilidad y toxicidad de las nanopartículas
La biocompatibilidad es definida como “la capacidad de un biomaterial para realizar
su función deseada con respecto a una terapia médica, sin provocar ningún efecto
local o sistémico no deseado en el receptor o beneficiario de esa terapia, pero
generando la respuesta celular o tisular beneficiosa más apropiada en esa situación
específica, y optimizar el desempeño clínicamente relevante de esa terapia”.
[50]. Para efectos de las NP’s, la toxicidad se refiere a la capacidad de las partículas
para afectar negativamente la fisiología normal, así como para interrumpir
directamente la estructura normal de órganos y tejidos de humanos y animales. Está
ampliamente aceptado que la toxicidad depende de parámetros fisicoquímicos
como el tamaño de las partículas, la forma, la carga superficial y la química, la
composición y la posterior estabilidad de las NP. [51]
De acuerdo con los diferentes métodos de síntesis de las NP’s, estas pueden tener
diferentes tamaños, composición química y forma y pueden tener o no un
recubrimiento superficial. Cada uno de estos factores puede afectar las
interacciones entre los nanomateriales y las células o tejidos. Los NP pueden
penetrar las células de la membrana y diseminarse a lo largo de las sinapsis de las
células nerviosas, los vasos sanguíneos y el sistema linfático vascular. Al mismo
tiempo, los NP se acumulan selectivamente en las diferentes células y en cierta
estructura celular. [51] Es a partir de aquí, en donde los biomateriales deben cumplir
ciertas características o ensayos que deben realizarse a las partículas para
asegurar que son biocompatibles:
n Citotoxicidad. Se debe demostrar que la toxicidad es nula o baja,
obteniéndose una respuesta aceptable.
n Actividad celular. Las NP’s no deben influir en la actividad de las células ni
inferir con sus funciones principales, lo que desencadena en su muerte o
inmortalidad.
n Proliferación celular. No deben interferir con los tiempos de duplicación.
n Crecimiento celular. No deben interferir en el tamaño o velocidad de
crecimiento.
n Morfología. Se evalúan cambios en la morfología de las células expuestas al
nanomaterial.
n Ensayos bioquímicos. Los biomateriales no deben interferir en los procesos
bioquímicos de las células. [52]
[Link]. Biocompatibilidad y toxicidad de las MNPs
Un estudio ha revelado que usando una línea celular modificada embrionaria de
riñón humano (HEK293), y utilizando una técnica colorímétrica de MTT para medir
la vialidad en ensayos de proliferación celular en los que las células fueron
sometidas a concentraciones de 0.1, 1, 3, 5, 10, 25, 50 y 100 mg/ml de MNP’s,

33
donde se muestra que para las 8 concentraciones la vialidad promedio no disminuye
de 95.22%, concluyendo que a estas concentraciones, las MNP’s no son citotóxicas
ni afectan a la proliferación celular a estas concentraciones. [12]
En comparación con las partículas de mayor tamaño, las reducidas dimensiones de
las nanopartículas implican que los tejidos pueden captarlas con mayor facilidad.
También puede darles una capacidad poco común de desplazarse en el cuerpo,
incluso de entrar en las células y en los núcleos de éstas, así como atravesar la
placenta y la barrera hematoencefálica, como lo demuestran los estudios realizados
en roedores. [53]
2.4.6. Nanopartículas de melanina
[Link]. Melanina de origen recombinante como materia prima
La melanina puede ser extraída de fuentes naturales, como tejidos animales o
vegetales, siguiendo métodos relativamente económicos. Sin embargo, estas
fuentes generalmente contienen una mezcla de diferentes tipos de melaninas y
sustancias relacionadas, que complican los procedimientos de purificación y pueden
producir un producto de composición variable. [14]
Estos polímeros también se pueden obtener mediante oxidación química o
enzimática de sustratos fenólicos o indólicos. Estas metodologías pueden generar
melaninas con un alto grado de pureza, pero a un costo relativamente alto. Otra
opción para obtener estos polímeros se basa en el cultivo de microorganismos
productores de melanina o que han sido modificados genéticamente para producir
melaninas. Este enfoque tiene el potencial de generar esta clase de productos con
un costo relativamente bajo y un alto rendimiento. [12]
La producción de melanina se ha observado en varias especies de microorganismos
y hongos tanto en su entorno natural como en condiciones de crecimiento de
laboratorio. Las especies de organismos con capacidad melanogénica que se han
empleado para desarrollar procesos de producción incluyen Pseudomonas stutzeri,
Gliocephalotrichum simplex, Rhizobium sp., Brevundimonas sp., Aspergillus
fumigatus, Bacillus safensis, Streptomyces lusitanus, and Streptomyces kathirae.
Se observó una correlación positiva con la producción de polímero al aumentar en
los medios de cultivo la cantidad de L-tirosina o componentes que la contienen. Por
tanto, el polímero producido es probablemente eumelanina. Los medios de cultivo
que incluyen extracto de levadura o hidrolizados de proteínas durante el proceso de
formación de melanina, algunos componentes del medio además de L-tirosina se
pueden incorporar al polímero, produciendo un pigmento que no es eumelanina
pura. Este es un inconveniente importante de la mayoría de los procesos
desarrollados con organismos melanógenos que requieren medios complejos para
su crecimiento y producción. [14]

34
[Link]. Métodos de obtención de MNP’s
Para la obtención de nanopartículas de melanina a partir de melanina de origen
recombinante, Casarrubias y colaboradores en el Laboratorio de Investigación en
Tecnología Farmacéutica han desarrollado principalmente 3 métodos [12]:
1. Método de nanocristalización. Este método se basa en la neutralización de
PVA en HCl con una solución de melanina a concentración de 1 mg/ml en
NaOH 1N en un dosificador que adiciona 14 µl de una solución básica de
melanina, manteniendo una agitación de 600 rpm, por dos horas. Con esta
metodología se obtienen MNP’s de un rango de 160 a 958 nm
aproximadamente y con cargas que varían de -1 a -30mV.
2. Método de doble emulsión evaporación de disolvente. Para este método, se
aprovechó la capacidad de no solubilizarse en solventes orgánicos para
implementarlo. Se basa en generar una emulsión W/O, donde la fase acuosa
fue una solución de melanina 1mg/ml en NaOH 1N que es dispersa en una
fase oleosa compuesta por diclorometano en presencia de Tween 80. Las
mezclas se homogenizan con Ultra Turrax a 12,000 rpm, seguido de añadir
PVA al 1% en HCl a 0.25 N con una agitación de 600 rpm por 30 minutos.
Transcurrido el tiempo, se realiza un calentamiento a una temperatura menor
de 80°C para eliminar el disolvente orgánico. Con esta metodología se
obtienen MNP’s de un rango de 167 a 874 nm aproximadamente y con cargas
que varían de -18 a -40mV. Este método es el más reproducible y genera
MNPs esféricas.
3. Método de homogenización a alta presión o microfluidización. Se utiliza una
solución de 1,5 mg/ml de melanina pulverizada en agua desionizada para
este método con enfoque top-down, donde se utiliza un microfluidizador
empleando presión, y que, dependiendo de esta, variará el tamaño final de
las partículas obtenidas, así como su morfología. [12]
[Link]. Usos en el área médica y cosmética
Existen diversas aplicaciones de las nanopartículas de melanina en el área,
teniendo una finalidad diferente médica según el medio en el que se han obtenido.
Por ejemplo, durante la radioterapia, la irradiación ionizante interactúa con los
sistemas biológicos para producir radicales libres, que atacan varios componentes
celulares. Se reconoce fácilmente que el sistema hematopoyético es radiosensible
y su daño puede ser grave. En este caso las MNP’s actúan como captadores de
radicales libres preparados mediante la polimerización de la dopamina,
demostrando que las MNP’s sintéticas proporcionan una radioprotección
significativa a los tejidos hematopoyéticos. [54]
La protección de la médula ósea contra la radiotoxicidad durante la
radioinmunoterapia y, en algunos casos, la radioterapia de haz externo, permitiría
la administración de dosis significativamente más altas a los tumores, lo que
aumentaría la eficacia y seguridad del tratamiento. La melanina, un pigmento
natural, posee propiedades radioprotectoras. La melanina, que es insoluble, puede
35
ser administrada a la médula ósea mediante nanopartículas administradas por vía
intravenosa, reduciendo así la toxicidad hematológica en ratones tratados con
radiación externa o radioinmunoterapia. [55]
Dentro de las formulaciones cosméticas que ofrecen protección contra la radiación
solar, tales como protectores solares, en los últimos años se han desarrollado
formulaciones que contienen nanopartículas de zinc y titanio que han demostrado
ofrecer un FPS elevado [56], sin embargo dentro del área de la nanotecnología y la
cosmética, el uso de nanopartículas de melanina de origen recombinante aún no ha
sido desarrollado. Existen estudios en donde se han creado versiones sintéticas de
melanosomas, usando dopamina para producir nanopartículas similares a la
melanina con capas y núcleos hechos de polidopamina; cuando se incubaron en
una placa de Petri con queratinocitos humanos, las partículas sintéticas fueron
absorbidas por las células de la piel y distribuidas alrededor de sus núcleos como la
melanina natural, no obstante, es un procedimiento que solo fue realizado de
manera in vitro, además de que no existe aún un protocolo seguro o comprobado
en el que su uso en humanos pueda ser administrado, o alguna forma farmacéutica
o cosmética con la cual aplicarse. [64] De manera similar, se han obtenido
nanopartículas de melanina de origen natural a partir de sacos de tinta de una
especie de molusco llamado Sepia Separdreana, método de obtención poco
sostenible frente a los requerimientos de la industria a pesar de ofrecer una
protección solar frente a radiación, y de la misma forma, sin contar con una forma
farmacéutica viable apta para uso humano. [65]

36
3. JUSTIFICACIÓN.

Día con día la incidencia de contaminación en el ambiente ha ido en aumento,

provocando que la capa de ozono que nos protege de los rayos UV absorba cada
vez menos este tipo de radiación y en consecuencia repercuta sobre la población
provocando diferentes afecciones en la piel que pueden desembocar en
enfermedades tan graves como lo son los diferentes tipos de cáncer que pueden
darse a nivel cutáneo. Existen diversos tipos de productos que protegen a la piel de
la radiación solar con el fin de evitar estas enfermedades cutáneas a largo plazo,
sin embargo, estos productos suelen contener altos porcentajes de filtros químicos
en sus formulaciones, provocando su difícil manufactura además de que pueden
llegar a tener repercusiones toxicológicas sobre el cuerpo.
Se ha demostrado que las nanopartículas de melanina poseen mejores propiedades
de protección frente a radiación solar en comparación con la melanina con tamaño
de partícula mayor; aprovechando estas características, el uso de nanopartículas
de melanina de origen recombinante podría resolver algunas de las cuestiones
mencionadas anteriormente, como la prevención de afecciones en la piel, la
obtención de una formulación estable, con propiedades para la vía tópica, y con
función cosmética no invasiva que facilite su uso sobre la piel, y que sobre todo,
ofrezca una protección contra la radiación solar tal que pueda reducir cantidades de
activo cosmético y pueda ser medible mediante técnicas in vitro.

37
 4. OBJETIVOS

4.1 Objetivo general

Determinar el efecto fotoprotector UV de manera in vitro de nanopartículas de

melanina preformada formuladas en diferentes formas cosméticas

4.2. Objetivos específicos

4.2.1. Caracterizar físicamente la melanina recombinante preformada como

materia prima.

4.2.2. Reproducir el método de doble emulsión- evaporación de disolvente

para la obtención y caracterización física de nanopartículas a partir de
melanina de origen recombinante preformulada.

4.2.3. Desarrollar y validar un método espectrofotométrico para la

cuantificación de melanina y MNP’s.

4.2.4. Definir y desarrollar las formas cosméticas a emplear como vehículos

para la formulación de las nanopartículas de melanina obtenidas.

4.2.5. Realizar la caracterización fisicoquímica de las formulaciones

cosméticas obtenidas para evaluar su calidad, incluyendo estudios
estabilidad física en las formulaciones obtenidas.

4.2.6. Determinar el factor de protección solar (FPS) in vitro para las

nanopartículas de melanina y sus formulaciones, empleando el método de
Mansur.

38
 5. HIPÓTESIS

Las nanopartículas de melanina recombinante preformada generadas

mediante el método de doble emulsión- evaporación presentarán un
efecto de fotoprotección ultravioleta a diferentes concentraciones cuando
sean formuladas en vehículos cosméticos de diferentes bases (emulsión,
aceite y gel), los cuales presentarán estabilidad física y propiedades
tecnológicas para ser aplicados sobre la piel.

39
6. DIAGRAMA DE LA ESTRATEGIA METODOLÓGICA

Caracterización • Identidad por espectrofotometría UV-

fisicoquímica de la Visible
melanina en materia • Identidad por espectrofotometría IR
prima

• Método de doble emulsión-

evaporación
Obtención de
• Recuperación de Nanopartículas de
nanopartículas de melanina
melanina • Caracterización de nanoparticulas

• Enfoque QbD
• Proceso de realización de formas
Formulación de formas cosméticas
cosméticas • Estabilidad física
• Caracterización física

Determinación del factor • Determinación in vitro del FPS mediante

de protección solar la metodología propuesta por Mansur

Figura 10. Diagrama de la estrategia experimental.

40
7. METODOLOGÍA

7.1. Caracterización de la melanina recombinante preformada

como materia prima.

7.1.1. Tratamiento de la materia prima

Los gránulos de melanina preformada donados por el Dr. Guillermo Gosset del
Departamento de Ingeniería Celular y Biocatálisis el Instituto de Biotecnología de la
Universidad Nacional Autónoma de México en Cuernavaca, Morelos, fueron
colocados en pequeñas cantidades en un mortero, pulverizándolos por
aproximadamente 15 minutos hasta obtener un polvo fino. Una vez obtenido, se
almacenó en un tubo con rosca de polipropileno de 50 mL cubierto con su respectiva
tapa, a temperatura ambiente y en un lugar seco.
7.1.2. Identidad por espectrometría UV-Vis

Se preparó una solución de 25 µg/mL de la melanina materia prima en NaOH 1N

para realizar un barrido en la región de luz UV y Visible en un rango de 200 a 800
nm en un espectrofotómetro CaryÒ 60 con una celda de cuarzo con dimensiones de
1x1x5 cm, tomando como línea base la solución de NaOH y así evitar interferencias
de los máximos de absorción entre la melanina y el disolvente, obteniendo con esto
los picos de mayor absorción de luz ultravioleta de la melanina y comparar los
espectros con el de referencia. [6]
7.1.3. Identidad por espectroscopía infrarrojo

Para obtener el espectro IR y confirmar la identidad de la melanina materia prima,

se tomó una muestra de 10 mg de la melanina pulverizada y seca, siendo leída en
un espectrofotómetro IR en un rango de 1000 a 3500 cm-1.

7.2. Método analítico por espectrofotometría UV para la

cuantificación de la melanina

Para conocer la concentración tanto de la melanina de origen recombiante tanto

como de la obtenida de NPs de melanina, se realizó una curva de calibración con
concentraciones de 2.5, 5, 10, 15, 20 y 25 µg/mL con NaOH como matriz acuosa,
replicando por triplicado. A partir del barrido realizado para la identidad
espectrofotométrica UV- visible, se seleccionó uno de los picos de máxima
absorción para hacer las mediciones de absorbancia en un espectrofotómetro CaryÒ
60 UV-V con una celda de cuarzo con dimensiones de 1x1x5 cm, utilizando
l=227nm como referencia.

Para este método, se evaluaron los siguientes parámetros de desempeño:

41
 1. Linealidad. A partir de la curva de calibración, se determinó el coeficiente de
determinación con r2>0.99, la ordenada al origen y la pendiente, obteniendo
la ecuación de la curva.

2. Exactitud. Se realizaron diluciones por sextuplicado a concentraciones de 5

y 25 µg/ml, obteniendo sus absorbancias a l=227 nm., y calculando la
cantidad recuperada a partir de la ecuación de linealidad. Para cada
concentración se determinó el porcentaje de recobro con la siguiente
expresión:

𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝑟𝑒𝑎𝑙 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎

%𝑅𝑒𝑐𝑜𝑏𝑟𝑜 = 𝑥100
𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝑡𝑒ó𝑟𝑖𝑐𝑎

A los resultados obtenidos se les calculó la media, desviación estándar, intervalo de

confianza, límite superior y límite inferior.

3. Límites de cuantificación y detección. Se calcularon mediante las siguientes

expresiones:

LÍMITE DE CUANTIFICACIÓN LÍMITE DE DETECCIÓN

10𝛿 0.33𝛿
𝐿. 𝐶. = 𝐿. 𝐷. =
𝑆 𝑆

δ= Desviación estándar del intercepto

S=Pendiente de la curva de calibración

Una vez cumplidos los parámetros anteriores, para calcular la concentración de

nanopartículas se hizo una dilución 1:100 de la muestra de NPs con NaOH, y se
leyó su absorbancia a 227 nm. Los resultados de las absorbancias se usaron junto
con la ecuación de la curva de calibración para calcular la cantidad de NPs
obtenidas.

7.3. Obtención de nanopartículas de melanina

7.3.1. Método de doble emulsión- evaporación (DE)

Para realizar la fase acosa de la primera emulsión W/O se usaron 10 mL de una

solución de melanina a una concentración de 1 mg/mL completamente disuelta en
NaOH 1 N, que después fue dispersada en 20 mL de diclorometano al que se le
agregó Tween® 80 al 1% para generar la fase oleosa. Esta mezcla heterogénea, fue
homogenizada con un dedo ultrasónico de dispersión marca Ultra Turrax® (IKA T18

42
Digital) a 12,000 rpm por 12 minutos, montando un sistema como lo muestra la
Figura 11.

Figura 11. Sistema de montado para la elaboración de NPs de melanina por el

método de doble emulsión- evaporación de disolvente.

Terminado el tiempo de homogenización, habremos generado la primera emulsión

W/O, que después fue vertida inmediatamente, de manera continua y sin tocar las
paredes, en 40 mL de una solución de PVA al 1% en HCl 0.25 N. Posteriormente,
el sistema se colocó bajo agitación en un homogenizador IKA Eurostar 60 Control a
600 rpm por 30 minutos. Al finalizar, se calentó esta mezcla a no más de 80 ºC con
la finalidad de eliminar por completo el disolvente orgánico, obteniendo así una
suspensión acuosa de NPs de melanina.
7.3.2. Optimización, concentración, lavado y recuperación

Una vez obtenidas las nanopartículas de melanina, las suspensiones se vertieron

en tubos cónicos de 15 o 50 ml para ser centrifugadas a 12,000 rpm por 30 minutos.
Transcurrido este tiempo, se desechó el sobrenadante y el pellet resultante fue
resuspendido con 5 ml de agua destilada, repitiendo este último proceso por
triplicado, finalizando con la resuspensión de las MNP’s con 5 ml de agua destilada
después del último ciclo de lavado.

Para la obtención de las nanopartículas estado sólido, se sometieron a

calentamiento a 70ºC para la evaporación parcial del agua. Al obtener la menor
cantidad de líquido, se utilizó papel filtro dentro de una caja de Petri para ser
depositadas y posteriormente se introdujo en una estufa a 40ºC por una hora

43
7.3.3. Caracterización de nanopartículas de melanina
[Link]. Tamaño de partícula
La medición del tamaño de partícula se realizó mediante la técnica de dispersión
dinámica de luz en un equipo Zetasizer® Nano ZS90 de Malvern Panalytical® con
lascondiciones mostradas en la Tabla 9.

Tabla 9. Condiciones de medición de talla de nanopartículas de

melanina por dispersión dinámica de luz

Parámetro Condición

Índice de refracción del material 1.45

Dispersante Agua

Índice de refracción del dispersante (agua) 1.33

Tiempo de equilibrio 120 s

Resolución 16 lecturas, por triplicado
Temperatura 25º C
Bajo estas condiciones y para su medición, se realizó una dilución 1:10 con el
dispersante, homogenizando en un vortex por 30s y utilizando 1 mL de ésta en una
celda para Zetasizer adecuándola según el reporte de calidad de la medición dada
por el equipo.
[Link]. Potencial zeta

La medición de potencial zeta se realizó en un equipo Zetasizer Nano ZS90 de

Malvern con una celda capilar plegada con electrodos para PZ de Malvern
Panalytical®. Para obtener las lecturas, se hizo una dilución 1:10 con el dispersante
utilizado, en este caso, agua; se añadió 1mL de ésta dentro de la celda, sujetándose
a las condiciones del equipo. El equipo se ajustó para la medición del PZ a las
condiciones siguientes:

Tabla 10. Condiciones de medición del PZ de

nanopartículas de melanina

Parámetro Condición

Dispersante Agua

Tiempo de equilibrio 120 s

Resolución 16 lecturas, por triplicado

Temperatura 25 º C

44
7.4. Obtención de las formulaciones cosméticas para las
nanopartículas de melanina

7.4.1. Establecimiento de las formas cosméticas bajo el enfoque QbD

[Link] Selección de excipientes

Se realizó la ejecución de la fase I del desarrollo cosmético bajo un enfoque de

Calidad por diseño, estableciendo un Perfil de Calidad del Producto (QTPP),
Análisis de Riesgos para definir los Atributos Críticos de Calidad (CQA’s) y la
Identificación de Parámetros Críticos De Proceso y Materiales (CPP’s y CMA’s).
Para cada uno de estos, se usaron tablas y diagramas distintos dependiendo del
objetivo que cada parámetro requiriera con las características siguientes:
§ Perfil de producto objetivo (TPP). Se usó una tabla que contuviera en el eje
vertical los parámetros de ingrediente activo cosmético, forma cosmética, vía
de administración, indicación y régimen de aplicación; esto en relación con el
eje horizontal que contuviera el parámetro del perfil, objetivo y anotaciones
sobre justificación y/o criticidad. Se hizo la relación, búsqueda bibliográfica y
anotaciones correspondientes para que la tabla sea llenada correctamente.
§ Perfil de Calidad de Producto Objetivo (QTPP). Se hizo una tabla que
contuviera en el eje vertical parámetros de atributos físicos, atributos
químicos y atributos fisicoquímicos, los cuales se relacionaran en el eje
horizontal con parámetros del perfil, objetivo y/o especificación, justificación
y si es o no un parámetro de calidad. Se llenó con base en los requerimientos
normativos como fabricante.
§ Propuesta de formulación y materiales. Se usó una tabla contraponiendo el
ingrediente activo, los excipientes y los materiales de empaque en el eje
vertical, contra el material, la justificación y/o función en la fórmula, y el
porcentaje en la fórmula. Para llenar esta tabla, se hizo una investigación
bibliográfica para conocer interacciones, materiales y cantidades. Además,
se utilizó el programa HLB Computagraph para conocer los porcentajes de
tensoactivos a utilizar en las formulaciones que lo requerían.
§ Análisis de Riesgos para definir los Atributos Críticos de Calidad (CQA’s).
Para identificar los elementos que podrían influir en la calidad del producto
final, se tomó en consideración el QTPP y los elementos del Método de las 5
M’s (maquinaria, mano de obra, método, medio ambiente y materia prima)
mediante un diagrama de Ishikawa o de pescado, identificando así los
elementos que presentan un mayor riesgo o impacto sobre los QA’s, para
entonces definirlos como CQA’s.
§ Identificación de Parámetros Críticos De Proceso y Materiales (CMA’s y
CPP’s). Derivado del análisis causa- efecto del diagrama de Ishikawa, se

45
 determinaron los riesgos de las variables que podrían afectar la calidad del
producto mediante las siguientes matrices:
o CMA’s. Mediante una tabla, se introdujeron los datos de manera
horizontal con los materiales, factores de riesgo, si afecta o no a un
CQA’s y a cuál, y su nivel de riesgo calificándolo según la Tabla 11.
o CPP’s. Mediante una tabla, se introdujeron los datos de manera
horizontal con el proceso, parámetro, factor de riesgo, si afecta o no a
un CQA’s y a cuál, y su nivel de riesgo calificándolo según la tabla 11.

Tabla 11. Niveles de riesgo de Parámetros

Críticos De Proceso y Materiales

Nivel de riesgo ¿Requiere investigación?

Bajo B No se requiere

Medio M Puede requerirse

Alto A Alto

Se usaron los anteriores análisis para cada formulación propuesta como vehículo
para las diferentes formas cosméticas del protector solar con MNPs.
[Link]. Procedimiento de manufactura de las formas cosméticas

Para efectos tecnológicos y de comparación, se realizaron diferentes tipos de

formas cosméticas, con diferencias tecnológicas en la formulación, además se
realizaron controles positivos y negativos como lo muestra el siguiente diagrama:

46
 Loción control positivo

Emulsión Loción fluida Loción control negativo

Loción con NP's de melanina

Aceite control positivo

Tipos de Base Aceite con Span 80 ® Aceite control negativo

formulación oleosa
Aceite con NP's de melanina

Gel control positivo

Gel termosensible con 13%

Base agua de polímero
Gel control negativo

Gel con NP's de melanina

Figura 12. Diagrama de tipos de formulación, bases, diferencias tecnológicas y

controles realizados.

[Link]. Realización de emulsiones

Se propuso una crema fluida y una loción debido a que estas presentaciones tienen
una mejor aceptación en el mercado. Para ambas formas cosméticas, se realizaron
controles negativos que solo contuvieran los ingredientes propuestos en el QbD,
controles positivos que contuvieran filtros a sabiendas de que tienen un efecto
protector usando como referencia el simulador de BasfÒ para predecir el FPS de la
formulación; por último, y utilizando la misma formulación que se usó para el control
negativo, se realizaron emulsiones con las NP’s de melanina, sustituyendo en la
formulación la cantidad de agua por las de las NP’s en suspensión en agua con su
concentración conocida. Para conocer la cantidad de NP’s necesarias para obtener
el mayor FPS posible, se utilizó el 1% de NP’s en suspensión como lo marcaban las
referencias [54,55]; para que a partir de ahí hacer ajustes.

Para mantener a las emulsiones estables, se calculó el Balance Hidrofílico- Lipofílico

requerido para la formulación mediante le ecuación siguiente:

% 𝑐𝑜𝑚𝑝𝑜𝑛𝑒𝑛𝑡𝑒 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑓. 𝑜𝑙𝑒𝑜𝑠𝑎
𝐻𝐿𝐵𝑟𝑒𝑞. 𝑒𝑚𝑢𝑙 = ( K ∗ 𝐻𝐿𝐵𝑟𝑒𝑞O Ec. 3
S%𝑓. 𝑜𝑙𝑒𝑜𝑠𝑎

Siendo:

47
 % componente de la f. oleosa. Fracción del componente de la fase oleosa
dentro de la formulación.

S%f. oleosa. La suma de la fracción de los componentes de la fase oleosa.

HLB req. HLB requerido de cada componente en la formulación, dado por

tablas preestablecidas en la literatura.

Con base en el HLB requerido para la emulsión que se obtuvo, se seleccionaron los
emulsificantes a emplear para una mezcla binaria, utilizando el programa HLB
Computagraph para conocer el porcentaje requerido de cada uno de ellos para
mantener su estabilidad. Una vez obtenidos estos porcentajes, se hizo una relación
para establecer la cantidad a utilizar de cada uno de ellos respecto al porcentaje
determinado de estos.
Una vez resueltas estas cuestiones, se procedió a realizar las emulsiones bajo el
siguiente procedimiento:
• Pesar los ingredientes de la formulación según el tamaño de lote que se vaya
a fabricar.
• Fase oleosa. Adicionar todos los componentes lipofílicos incluyendo el
tensoactivo de elección con bajo HLB en un recipiente idóneo. Calentar a 70-
72ºC, agitando hasta su completa incorporación.
• Fase acuosa. En un recipiente distinto, colocar el agua suficiente y calentar
a 70-72ºC Tomar en cuenta para cada formulación:
o El control positivo contendrá en esta fase el filtro a utilizar. Éste debe
ser disuelto antes de agregar los ingredientes hidrofílicos restantes a
la formulación.
o El control negativo contendrá toda la cantidad de agua suficiente
requerida, sin más.
o En la formulación que contenga las NP’s de melanina, sustituir en el
porcentaje que corresponda de agua, la concentración deseada de
NP’s de melanina.
Una vez añadidos todos los componentes hidrofílicos, se añadió el
tensoactivo de la misma naturaleza hasta incorporar por completo.
• Se vertió la fase oleosa en la fase acuosa, ambas a 70-72 °C, agitando y
manteniendo la temperatura durante 5 minutos. Se redujo la velocidad de
agitación hasta enfriar. Se adicionó el aroma agitando hasta su incorporación
total, y se dejó enfriar a temperatura ambiente.
• Se llenó el envase propuesto en el QbD con las formulaciones resultantes.
Se conservaron a temperatura ambiente hasta su utilización.

48
[Link]. Realización de aceites fluidos
Se realizó la mezcla de distintos ingredientes lipofílicos en diferentes proporciones
según la propuesta descrita en el enfoque de Calidad por Diseño. Éstos fueron
pesados en las proporciones sugeridas, posteriormente mezclados y calentados a
40ºC durante 10 minutos hasta su completa incorporación. La mezcla se dejó enfriar
hasta llegar a temperatura ambiente.
Se hicieron pruebas de solubilidad de la mezcla anterior con SpanÒ 40, SpanÒ 60,
TweenÒ 80 y SpanÒ 80. Se seleccionaron dos de los tensoactivos que contaran con
la mejor afinidad a la formulación y se produjeron aceites fluidos conteniendo 1% de
tensoactivo dentro de la formulación, teniendo en cuenta para cada tipo de
formulación propuesta lo siguiente:
o El control negativo contenía solo los ingredientes propuestos en el QbD.
o El control positivo deberá ser agregado a la mezcla durante su calentamiento
hasta estar completamente incorporado a la formulación.
o A la formulación que contenga NP’s de melanina, se le agregará
directamente la cantidad necesaria de la suspensión de NP’s en agua para
que contenga la concentración deseada de éstas. Calentar a 75ºC y
mantener en agitación hasta que el agua se haya evaporado por completo.
Se llenaron los envases propuestos en el QbD con las formulaciones resultantes.
Se conservaron a temperatura ambiente hasta su utilización.
[Link]. Realización de geles
Se propusieron formulaciones con dos diferentes concentraciones del polímero
formador de gel con el fin de presentar viscosidades que demostraran tener
características tecnológicas distintas entre sí.
Para su preparación, a la cantidad de agua suficiente se le agregaron los
ingredientes hidrosolubles propuestos en el QbD y se mantuvo en agitación hasta
su completa incorporación; para la formulación que contuvo las NP’s de melanina y
para el control positivo, este fue el momento en el que se les fue agregado las NP’s
y el filtro en sus proporciones correspondientes. En seguida, esta mezcla se sometió
a refrigeración hasta alcanzar los 12ºC; al llegar a esa temperatura se le fue
agregado el polímero seleccionado y fue llevado nuevamente a refrigeración
durante 1 hora. Terminado el tiempo, se mantuvo en agitación hasta su completa
incorporación.
Las formulaciones se incorporaron a sus respectivos envases y se conservaron a
temperatura ambiente hasta su utilización.
7.4.4. Caracterización de las formulaciones- medición de los Atributos Críticos de
Calidad
Una vez fabricadas todas las formulaciones, se les realizaron diferentes pruebas
fisicoquímicas en distintas etapas, siendo la primera de estas el mismo día de

49
realización del lote; después, las pruebas fueron realizándose cada 7 días a las
formas cosméticas sometidas a estabilidad durante un mes, manteniéndolas a
temperatura ambiente durante 30 minutos antes de realizarlas. Estos ensayos se
llevaron a cabo de la siguiente manera:
n Apariencia. Se tomó nota de la homogeneidad de las formulaciones, si hay
separación de fases, turbidez, solidez y otras características visibles en
cada una de ellas.
n Viscosidad. Se tomó una muestra de 15 ml de cada una de las
formulaciones, vaciándola sobre el tubo para su medición en un
viscosímetro Brookfield DV3TÒ. Una vez calibrado, se midieron las
viscosidades a diferentes revoluciones por minuto y en los casos
requeridos, distintas temperaturas.
n Temperatura sol-gel. En un viscosímetro Brookfield DV3TÒ se montó un
sistema como el mostrado en la Figura 13, ajustando y regulando la
temperatura con ayuda de una parrilla de calentamiento, haciendo pasar
agua a través del tubo que contenía las muestras de gel termosensible.

Figura 13. Sistema de montado para la medición de la relación temperatura-

viscosidad de geles termosensibles.

Con este método, se midió la viscosidad de los geles desde los 12ºC hasta los 40ºC.

50
 n pH. Se calibró un potenciómetro según sus especificaciones, introduciendo
el electrodo dentro de una muestra de las formulaciones hasta la obtención
de un resultado estable por el aparato.
n Gravedad específica. Utilizando un picnómetro, éste se pesó vacío,
después lleno de agua y por último con una cantidad de la muestra de cada
formulación. Con ayuda de la siguiente fórmula, se calculó la gravedad
específica de cada formulación:
𝑚2 − 𝑚0
𝐺. 𝐸. = K O ∗ 𝜌𝑤
𝑚1 − 𝑚0
donde:
m0= masa del picnómetro vacío.
m1=masa del picnómetro con agua
m1=masa del picnómetro con muestra de la formulación
rw= densidad del agua a 25ºC

n Color. Se tomó nota del color obtenido al final del proceso de formulación,
evidenciando esto con una fotografía para hacer una comparación del día 1
contra el día 30, observando si se presentaron cambios significativos.
n Olor. Se describió el olor de cada formulación. Durante el tiempo que se
sometieron a estabilidad se siguió monitorizando para detectar cambios u
olores extraños.
n Estabilidad de las formulaciones. Las formulaciones fueron sometidas a las
condiciones de almacenamiento descritas por las Normas Oficiales
Mexicanas 059 y 073 de Buenas Prácticas de Fabricación de
medicamentos y la de Estabilidad de Fármacos y Medicamentos,
respectivamente. Se usaron los parámetros de la estabilidad acelerada, que
indica condiciones de 40°C ± 2°C con una Humedad Relativa de 75% ± 5%
o 40°C ± 2°C/ no más de 25% HR. Las formas cosméticas se mantuvieron
en una estufa bajo estas condiciones durante un mes, siendo evaluadas y
monitoreadas cada 7 días con las pruebas de caracterización para cada
una de ellas.

7.5. Determinación del factor de protección solar

Para la determinación del factor de protección solar de las diferentes formas

cosméticas y MNP’s, se tomó como referencia el procedimiento descrito por Mansur
[39], haciendo los ajustes necesarios para su optimización. Se pesó 1 gramo de la
formulación bajo estudio en un matraz de 10 ml, añadiendo 5 ml de etanol y
homogenizando por 5 minutos. Recurrido este tiempo, se llevó al aforo y se filtró
con ayuda de un portafiltros Swinnex® y papel filtro. Se tomó una alícuota de esta
51
solución, se depositó en un matraz de 10 ml y se llevó nuevamente al aforo con
etanol. Se realizó una última dilución tomando una alícuota de de 200 µl de esta
solución, homogenizándola en otro matraz aforado de 10 ml y llevando al aforo con
etanol. Se tomó una muestra de la dilución final en una celda de cuarzo con
dimensiones de 1x1x5 cm3 la cual fue llevada a un espectrofotómetro Cary® 60 UV-
V, calibrándolo con etanol y haciendo un barrido de 320 a 290 nm en intervalo de 5
nm para cada caso.
Una vez obtenidas las absorbancias, se utilizó la siguiente fórmula:
!"#

𝐹𝑃𝑆 = 𝐹𝐶 × (× 𝐸𝐸(l) × 𝐼(l) × 𝐴𝑏𝑠(l)

"$#

Donde:
FPS: Factor de protección solar
FC: 10 (factor de corrección)
EE (ʎ): Efecto eritemogénico de radiación de longitud de onda ʎ*
I (ʎ): Intensidad del sol en la longitud de onda ʎ*
Abs (ʎ): Absorbancia de la solución en la longitud de onda ʎ

*En donde el efecto eritemogénico de radiación de longitud de onda ʎ* (EE (ʎ)) y la

intensidad del sol en la longitud de onda ʎ* (I (ʎ)) es una constante determinada por
Sayre y Colaboradores, y se desglosa en la Tabla 12.

Tabla 12: Relación entre el efecto eritemogénico y la intensidad de la radiación de

cada longitud de onda para el Método Mansur, determinada por Sayre

l (nm) 320 315 310 305 300 295 290

EE(l)xI 0.018 0.1 0.1869 0.3278 0.2874 0.0817 0.015

Para el caso del control positivo, se usó benzofenona-4 en sus porcentajes

permisibles y utilizando el simulador de FPS de BASF para que el valor teórico fuese
similar al propuesto en la norma ISO 24443 Determination of sunscreen UVA
photoprotection in vitro. Este control fue utilizado para ajustar los resultados
obtenidos de las demás formulaciones. [36]

52
8. RESULTADOS.

8.1. Caracterización de la melanina recombinante preformada

como materia prima

8.1.1. Tratamiento de materia prima

En la Figura 14 (A) se muestra la melanina de origen recombinante preformada,
teniendo un aspecto brillante, de color negro, amorfo, bordes irregulares y con
gránulos de diferentes tamaños macroscópicos. Después de pulverizarla durante 15
minutos aproximadamente, se obtuvo un polvo fino como el que muestra la Figura
14 (B), obteniendo así la materia prima con la que se realizaría la caracterización
fisicoquímica, la generación de las NP’s de melanina y su cuantificación.

A B

Figura 14. (A) Melanina materia prima preformada sin tratamiento; (B) Melanina
materia prima pulverizada.

Debido a su baja solubilidad [12] y a que en experimentos posteriores sería

necesaria de manera totalmente disuelta, se colocó la cantidad necesaria para una
solución 1N de NaOH en un matraz aforado junto con la melanina requerida para
formar una solución de 1 mg/mL; sin llegar al aforo, se mantuvo en agitación a 40
rpm por 24 horas. Transcurrido el tiempo, se llevó al aforo y se mezcló nuevamente
por 5 minutos. Una vez obtenida la solución, se almacenó en recipientes de vidrio
para su posterior uso.

53
8.1.2. Identidad por espectrofotometría UV-visible
En la Figura 15 se muestra el barrido realizado en un rango de 200 a 400 nm en el
espectro ultravioleta, y de 400 a 800 nm en el espectro visible de la melanina materia
prima en NaOH con una concentración de 25 µg/mL. La línea azul representa el
espectro de la melanina, donde el escaneo de longitud de onda UV-Vis mostró que
la absorción fue más alta en la región UV de 200 a 300 nm y disminuyó hacia la
región visible, presentando un pico máximo de absorción a 227 nm, siendo similar
a lo obtenido por Mbonyiryivuze y Colaboradores [68]; la línea naranja representa el
barrido de 200 a 800 nm del NaOH 1N ya que éste fue utilizado como disolvente de
la melanina, observándose que no presenta una interferencia con la lmax obtenida
de la melanina.

0.8

0.6
Absorbancia

0.4

0.2

0
200 300 400 500 600 700 800

-0.2
Longitud de onda (nm)

¾¾ NaOH ¾¾ Melanina 25µg/ml

Figura 15. Espectro UV-visible de la melanina materia prima en NaOH.

54
8.1.3. Identidad por espectroscopía IR de la melanina materia prima
En la Figura 16 se muestra el espectro IR de la melanina en un rango de 1000 a
3500 cm-1. El espectro coincide con el reportado por Casarrubias [12]; permitiendo
verificar la identidad de la melanina.

2
1
6

4
5

Figura 16. Espectro IR de melanina materia prima y fragmento de la estructura

química de la melanina. [Imagen tomada y adaptada de la referencia 69]

Este espectro reveló contar con 6 bandas de absorción características de la

melanina:
1. 3200 cm-1. La banda ancha corresponde a la extensión N-H y O-H.
2. 2920 cm-1. Señal correspondiente al enlace C-H.
3. 2385 [Link] atribuirse a la amina protonada del DHICA, no siempre
aparece.
4. 1595 cm-1. Señal atribuida al enlace C=O del COOH.
5. 1500 cm-1. Atribuida a enlaces de grupos aromáticos C=C o COO-.
6. 1450 [Link] al enlace C-H. [12]

8.2. Método analítico por espectrofotometría UV para cuantificar

melanina

A partir de las concentraciones propuestas desde 5 hasta 25 µg/ml en intervalos de

5 mg/ml, se obtuvieron las absorbancias mostradas en la Tabla 24 del Anexo 1, a
partir de las cuales se graficó la curva de calibración mostrada en la misma sección
en la Figura 20. Mediante estos resultados, fue posible determinar la ecuación que
representa a la recta, siendo esta:

55
 y=0.0304x-0.0269
Esta fórmula posibilitó su manipulación para la obtención de la fórmula:
y+0.0269
x=
0.0304
Siendo “x” la concentración problema, y “y” la absorbancia obtenida.

8.2.1. Exactitud del método analítico por espectrofotometría UV para cuantificar

melanina
Se realizaron 6 lecturas a 227 nm en un espectrofotómetro UV a concentraciones
de melanina en NaOH 1N de 5 µg/ml y 25 µg/ml. Usando el despeje de la ecuación
de la recta [x=(y+0.0269)/0.0304] fue posible conocer las concentraciones
experimentales, las cuales sirvieron como referencia para conocer el porcentaje de
recobro, usando la fórmula:
𝐶𝑜𝑛𝑐. 𝐸𝑥𝑝𝑒𝑟𝑖𝑚𝑒𝑛𝑡𝑎𝑙
%𝑅𝑒𝑐𝑜𝑏𝑟𝑜 = ∗ 100
𝐶𝑜𝑛𝑐. 𝑇𝑒ó𝑟𝑖𝑐𝑎
Con estos porcentajes, se obtuvieron los siguientes resultados (Anexo 1, Tabla 25):
• Media=100.1612
• [Link].=3.4169
• C.V. %=3.4114
• I.C.= 0.94086271
• Lím. Sup.= 101.1020
• Lím. Inf.= 99.2203
[Link]. Precisión del método analítico por espectrofotometría UV para cuantificar
melanina
Se realizaron lecturas a 227 nm en un espectrofotómetro UV a una concentración
de melanina en NaOH 1N de 15 µg/ml en dos diferentes días por sextuplicado. A
las absorbancias obtenidas se les calculó la media, desviación estándar y el
porcentaje de variación, obteniendo los resultados mostrados en el Anexo 1, en la
Tabla 26.
[Link]. Determinación del límite de cuantificación y detección
Usando las fórmulas para los límites de cuantificación y detección mostradas en la
sección 7.2. Método analítico por espectrofotometría UV para la cuantificación de la
melanina, se obtuvieron los siguientes valores (Anexo 1, Tabla 27):
• Límites de cuantificación: 18.2895 µg/ml.
• Límites de detección: 0.6036 µg/ml.

56
8.2.3 Medición de la concentración de nanopartículas de melanina
Para calcular la concentración de nanopartículas se realizó una dilución 1:100 a
partir del lote obtenido de MNP’s con NaOH, y se leyó su absorbancia a 227 nm.
Los resultados de las absorbancias se usaron junto con la ecuación obtenida de la
curva de calibración [x=(y+0.0269)/0.0304] para calcular la cantidad de NPs
obtenidas, sustituyendo en “y” la absorbancia obtenida, siendo “x” la concentración
obtenida, y realizando los cálculos pertinentes para conocer la concentración real
del lote usando el factor de dilución.

8.3. Obtención de nanopartículas de melanina (MNP’s)

8.3.1. Optimización, concentración, lavado y recuperación

Para la producción de nanopartículas, se llevaron a cabo distintos métodos de
separación para su concentración y recuperación, así como distintos tipos de
lavados para su optimización.
En los lotes 1, 2 y 3 se usaron membranas de nylon de 0.22µm de VWR® para un
volumen de 10 ml de la solución de melanina en NaOH a concentración de 1mg/mL,
utilizando un método de filtrado inverso en el cual los lotes se hicieron pasar por las
membranas para posteriormente ser regresadas por el mismo filtro con agua
destilada. Esta agua contendría las nanopartículas en suspensión, confirmando esto
haciendo una medición en el Zetasizer® con las condiciones mencionadas en la
metodología, realizando la lectura con 1ml de la suspensión directamente en el
aparato.
Para los lotes 4 y 5 se hizo un escalamiento usando 100 mL de la misma solución
de 1mg/ml de melanina en NaOH 1N, usando las mismas cantidades de PVA al 1%
en HCl a 0.25 N obteniendo las NP’s de melanina sin necesidad de utilizar los filtros
de nylon, reiterando la presencia de estas con una lectura a una dilución de 1:10 en
el Zetasizer®. Para este caso en el que no pasaron por el proceso de filtrado inverso,
se optó por realizar lavados para retirar el NaOH. Las NP’s se centrifugaron a 7,000
rpm por 15 minutos, retirando el sobrenadante y agregando 5 mL de agua destilada,
y resuspendiendo el pellet; repitiendo 2 veces más, se obtuvieron las NP’s
suspendidas en agua.
En materia de los lotes 6 y 7, se realizó un escalamiento a 500 ml de la solución de
1mg/ml de melanina en NaOH 1N, con mismas cantidades de disolvente y el mismo
porcentaje de tensoactivo; después del proceso de la obtención de la emulsión
W/O/W y la evaporación del disolvente, estos dos últimos lotes no necesitaron
ningún otro método de separación, ya que se encontraban dispersas en el líquido
que lo contenía, confirmando esto por los resultados obtenidos en el Z-sizer Nano-
2590, utilizando para su medición una dilución 1:10 de las nanopartículas en agua
destilada. Sin embargo, para retirar los residuos de NaOH se hicieron lavados que
consistieron en centrifugar las nanopartículas a 7,000 rpm por 15 minutos;
terminando este tiempo se desechó el sobrenadante y el pellet obtenido fue
57
resuspendido con 10 ml de agua destilada, repitiendo este proceso 3 veces más.
Terminado el proceso de lavado, se procedió a calentar a 70ºC hasta evaporar la
mayor cantidad de agua posible, siendo el resultante vertido en un papel filtro dentro
de una caja de Petri y posteriormente introducido dentro de una estufa a 40ºC por
una hora, obteniendo así un polvo color café fácilmente resuspendible en agua para
reafirmar su tamaño nanométrico y ser utilizado con fines prácticos.

8.3.2. Caracterización de nanopartículas de melanina

[Link]. Tamaño de partícula
Se realizaron 7 lotes distintos bajo el método de doble emulsión-evaporación de
disolventes utilizando los diferentes procesos de separación anteriormente
mencionados para conseguir nanopartículas de melanina en todos los casos.
Para su medición, se requirió de 1ml de la suspensión de los lotes 1, 2 y 3 para ser
introducidos dentro del analizador de tamaño de partícula, mientras que para los
lotes del 4 al 7 fue necesaria 1ml de una dilución de la MNP’s en agua destilada de
1:10; todos los lotes fueron medidos en una celda desechable bajo las condiciones
propuestas en la metodología (índice de refracción del material 1.45; dispersante:
agua; índice de refracción del dispersante (agua): 1.33; tiempo de equilibrio: 120 s;
resolución: 16 lecturas por triplicado y temperatura: 25ºC).
La distribución del tamaño de partícula de la Figura 17 muestra que dentro de los
lotes de nanopartículas existen dos picos, representando el primero al 97.75±2.45%
de la población con un tamaño de 275.33±83.62 nm, y un segundo al restante
2.25±2.44% con un tamaño de partícula de 3938.5± 2443.74nm, resaltando que en
el lote 2 y 6 se obtuvo un porcentaje de 100% de MNP’s.

Figura 17. Distribución del tamaño de partícula del lote 7 de NP’s de melanina
obtenidas por el método de doble emulsión-evaporación de disolvente.

58
[Link]. Potencial Z
Para todos los lotes producidos, se tomó el mililitro de muestra utilizado para cada
caso descrito anteriormente y fue vertido dentro de una celda capilar plegada
desechable con diodos, haciendo una lectura bajo los criterios propuestos en la
metodología.
Empleando este método, se observó un potencial Z negativo que oscilaba entre los
-16 y -24 mV aproximadamente.

Figura 18. Distribución del potencial Z del lote 4 de NP’s de melanina obtenidas
por el método de doble emulsión-evaporación de disolvente.

8.4 Obtención de las formulaciones cosméticas para las MNP’s

8.4.1. Establecimiento de las formas cosméticas bajo el enfoque QbD

[Link]. Perfil de Producto Objetivo (TPP)
Se elaboró un Perfil de Producto Objetivo (TPP) que aplica para el desarrollo de
protectores solares con nanopartículas de melanina con base en la bibliografía
aplicable [1, 14, 28- 30] obteniendo los resultados en la Tabla 13.

59
Tabla 13. Perfil de producto objetivo para protectores solares con nanopartículas
de melanina.
relación
Parámetro del Anotaciones
con
En

Objetivo
perfil Justificación/Criticidad

Usar melanina
cosmético

recombinante con mayor

Activo

Partículas de Ofrecer un efecto

área superficial para
melanina. fotoprotector.
ofrecer un efecto
fotoprotector.
Contener las Forma cosmética mejor
nanopartículas en un aceptada para protectores
Emulsión. medio estable que solares; contiene
pueda aplicarse tensoactivos para
sobre la piel. estabilizar a las MNP’s.
Forma cosmética

Contener las
nanopartículas en un Solidifica a temperatura
Gel
medio estable que corporal, permitiendo una
termosensible.
pueda aplicarse mejor distribución.
sobre la piel.
Contener las
nanopartículas en un A prueba de agua;
Aceite fluido. medio estable que contiene tensoactivos para
pueda aplicarse estabilizar a las MNP’s.
sobre la piel.
Proveer a la piel Uso externo, cumpliendo
adminis-
tración
Vía de

protección extra con la normativa vigente

Cutánea.
frente a los rayos sobre productos
solares. cosméticos.
Bloquear la radiación Evita las quemaduras,
Exposición solar solar durante su enrojecimiento y otras
prolongada. exposición sobre la afecciones en la piel
piel. provocadas por el sol.
Indicación

Ofrecer una
protección extra ante
Evita efectos a largo plazo
la radiación solar
Uso diario. en la piel, como manchas
además de los
o melanomas.
mecanismos
intrínsecos en la piel.
Renovar la capa del
Indicación

aplicación
y régimen

Posterior a la producto después de Reaplicación del producto

de

exposición con el haber tenido que el agua haya podido

agua. contacto con el quitar de la piel.
agua.
60
 Reaplicación del producto
Renovar la capa del
después de la sudoración,
producto después
4 horas después cambios de temperatura,
del contacto con
de su aplicación. aseo personal,
agentes físicos
rozamientos, cambios de
externos.
ropa, etc.

Utilizando esta tabla, se establecieron las características de los productos a

elaborar, tales como el activo cosmético, que en este caso son las MNP’s, las
formulaciones candidatas que actuarán como vehículo del activo, vía de
administración, que sería cutaéa por mera legislación [30], indicaciones de uso y de
aplicación.
[Link]. Perfil de Calidad del Producto Objetivo (QTPP)
Se elaboró un Perfil de Calidad de Producto Objetivo (QTPP) que aplica para el
desarrollo de protectores solares con nanopartículas de melanina con base en la
bibliografía aplicable [1, 14, 28- 30] obteniendo los resultados en la Tabla 14.

Tabla 14. Perfil de Calidad de Producto Objetivo (QTPP) para protectores solares
con nanopartículas de melanina.
relación

¿Es
Parámetro del Objetivo/
con
En

Justificación un
perfil (QA) Especificación
CQA?
Obtención de un
Proporcionar un producto
Apariencia. producto visiblemente homogéneo, con Sí.
aceptable. buena presentación,
consistencia.
Atributos físicos

Presentar un aroma Mejor aceptabilidad

Olor. agradable para el al colocar un aroma No.
consumidor. agradable.
No provocar
Proporcionar un
manchas en la ropa,
producto visiblemente
intervenciones en el
aceptable, que no
Color. color natural de la No.
ensucie ni influya con
piel, ni coloraciones
el color natural de la
no homogéneas
piel.
sobre la misma.

61
 Dar conocimiento Obtención de una
Densidad
sobre la cantidad de densidad optima
(gravedad No.
excipientes utilizados que permita
específica).
en las formulaciones. contener las MNP’s.
Permite conocer el
Conocer el tiempo en tiempo de
el que el producto separación de
Estabilidad
permanezca en un fases, cambios de Sí.
física.
estado físico óptimo apariencia,
de uso. aglomeración,
enranciamiento, etc.
Evita el desbalance
del pH, así como el
Homologar el pH de desarrollo de
pH. las formulaciones con afecciones cutáneas Sí
Atributos Químicos

el de la piel. tales como

dermatitis, rosácea
o prurito.
Permite prevenir
Conocer las
cambios en las
interacciones que hay
formulaciones,
entre los mismos
Estabilidad evitando las
excipientes de las Sí.
química reacciones químicas
formulaciones, o en
que pudiera haber
conjunto con las
entre las materias
MNP’s.
primas.
Conocer las dosis Evita intoxicaciones
que pudieran causar provocadas por el
Toxicidad Sí.
afecciones en el mal uso de los
organismo. productos.
Atributos fisicoquímicos/

Mejorar la aplicación
biofarmacéuticos

de los productos; en
el caso del gel Permite una mejora
termosensible, en la aplicación y
Viscosidad Sí.
permitir que este distribución de las
tenga un cambio de MNP’s sobre la piel.
viscosidad a
temperatura corporal.
Compatibilizar las
cargas de las MNP’s Obtención de una
Carga eléctrica Sí.
con las formulaciones mayor estabilidad.
propuestas.

Bajo este enfoque, se obtuvo que la apariencia, la estabilidad física, el pH, la

estabilidad química, la toxicidad, la viscosidad y la carga eléctrica son Atributos

62
Críticos de Calidad, ya que son de gran importancia para que el producto terminado
tenga el acabado que se busca para cumplir sus funciones sobre su uso en la piel.
[Link]. Propuesta de formulación y materiales
A partir de bibliografía pertinente para el caso de excipientes utilizados en
formulaciones cosméticas, además del uso del programa computacional el HLB
Computagraph para el caso de la emulsión, se propusieron los excipientes y
porcentajes correspondientes, además de los posibles materiales que pudieran
contener las formas cosméticas mostrados en las Tablas 15-17, de emulsión, gel
termosensible y aceite fluido, respectivamente.

Tabla 15. Propuesta de formulación y materiales aplicables para emulsión

cosmética (loción) que contenga nanopartículas de melanina. [29,57]
Justificación / Función Porcentaje en la
Componente Material
en la fórmula fórmula
Estudios han demostrado
que son capaces de
ofrecer una protección
Activo Nanopartículas
ante radioterapia, 1%
cosmético de melanina
proponiendo esta
característica para su uso
como protector solar.
Monoestearato
Emoliente 1%
de glicerilo
Alcohol Agente emulsionante y
1%
estearílico solubilizante
Cera de abejas Agente endurecedor 0.5%
Goma xantana Agente gelificante 0.1%
Aceite mineral Emoliente, lubricante 5%
Antimicrobiano,
Propilenglicol 5%
humectante, estabilizador.
Glicerina Humectante y emoliente 5%
Excipientes Metilparabeno Antimicrobiano 0.10%
Propilparabeno Antimicrobiano 0.05%
Emulsificantes 5% (3.2% y
(Span® 80 y Formadores de emulsión 1.8%,
Tween® 80) respectivamente)
Miristato de
Emoliente 1.50%
isopropilo
Alantoína Cicatrizante 0.3%
DMDM
Conservador 0.6%
hidantoina
Agua Diluyente c.b.p.

63
 Resistente a alcoholes y
disolventes orgánicos
suaves, pared translúcida,
estable entre los - 80° y
Polipropileno los 121 °C.
Materiales
No genera interacciones
del empaque
con las formulaciones.
Degradación a tiempos
prolongados.
Facilita la aplicación de la
Válvula de spray
formulación.

Tabla 16. Propuesta de formulación y materiales aplicables para gel termosensible

que contenga nanopartículas de melanina. [29,57]
Justificación / Función Porcentaje en la
Componente Material
en la fórmula fórmula
Estudios han demostrado
que son capaces de
ofrecer una protección
Activo Nanopartículas
ante radioterapia, 1%
cosmético de melanina
proponiendo esta
característica para su uso
como protector solar.
Estudios demuestran que
forma geles a distintas
Pluronic® F127
temperaturas 20%
(Ploxamero 407)
dependiendo del
porcentaje utilizado.
Glicerina Humectante 3%
Extracto de Aloe
Acondicionador de piel 3%
vera
Propilenglicol Humectante 2%
Excipientes
DMDM
Conservador 0.60%
hidantoina
Estabilizante del
Cloruro de sodio polisacárido formador de 5%
gel
Alantoína Cicatrizante 0.30%
EDTA Quelante 0.10%
Ácido cítrico Regulador de pH c.s.
Agua Disolvente c.b.p.
Materiales Resistente a alcoholes y
Polipropileno
del empaque disolventes orgánicos

64
 suaves, pared translúcida,
estable entre los - 80° y
los 121 °C.
No genera interacciones
con las formulaciones.
Degradación a tiempos
prolongados.
Dispensador Facilita la aplicación de la
dosificador formulación.

Tabla 17. Propuesta de formulación y materiales aplicables para aceite fluido que
contenga nanopartículas de melanina. [29,57]
Justificación / Función Porcentaje en la
Componente Material
en la fórmula fórmula
Estudios han demostrado
que son capaces de
ofrecer una protección
Activo Nanopartículas
ante radioterapia, 1%
cosmético de melanina
proponiendo esta
característica para su uso
como protector solar.
Aceite de
Antioxidante 2%
germen de trigo
Span® 60 Estabilizante de MNP’s 1%
Potenciador de la
penetración en
Ácido oleico 2%
formulaciones
Excipientes
transdérmicas.
Miristrato de
Emoliente 5%
isopropilo
Vitamina E Antioxidante 0.2%
Emoliente, vehículo
Aceite mineral c.b.p.
oleaginoso
Resistente a alcoholes y
disolventes orgánicos
suaves, estable entre los -
Polipropileno 80° y los 121 °C.
Materiales color ambar No genera interacciones
del empaque con las formulaciones.
Degradación a tiempos
prolongados.
Válvula de Facilita la aplicación de la
spray. formulación.

65
[Link]. Análisis de riesgos
Bajo el implemento del método de las 5 M’s (maquinaria, mano de obra, método,
medio ambiente y materia prima) y en consideración con el QTTP, se realizó un
análisis de riesgos a través de un diagrama de Ishikawa para analizar los elementos
que representen un mayor riesgo. En la Figura 19 se observa en color azul todos
los posibles problemas que que pudieran afectar a la realización de los productos
durante la realización de la parte experimental, mientras que en color rojo se
resaltan los problemas de mayor peso sobre la elaboración de los protectores
solares, esto con base en la información que se tenía al momento de reunir los
elementos a partir de los cuales se realizaría la metodología.

MÉTODO MAQUINARIA

Transferencia Uso de diferentes

Accesibilidad
tecnológica Validación centrífugas
limitada

Documentación Uso de diferentes

Metodologías
balanzas Calificación
inexistentes
Protectores
Reproducibilidad solares con
MNPs como
Temperatura de activo
Calificación Compatibilidad cosmético
de materiales manufactura

Precisión Solubilidad Calificación

Capacitación de áreas
Materiales Limpieza del área
Desconoce
poco comunes de manufactura
PNO’s

MANO DE OBRA MATERIALES MEDIO AMBIENTE

Figura 19. Diagrama de Ishikawa para protectores solares con nanopartículas de

melanina como activo cosmético.

[Link]. Identificación de puntos críticos

A partir del Diagrama de Ishikawa anterior, se determinó la estimación de riesgos
mediante el análisis de Atributos Críticos de los Materiales (CMA’s) (Tablas 19- 21)
y Parámetros Críticos de Proceso (CPP’s) (Tablas 22-24), identificando el nivel de
riesgo que supone con la escala mostrada en la Tabla 18.

66
 Tabla 18. Escala del nivel de riesgo que suponen las variables propuestas para
los Atributos Críticos de los Materiales (CMA’s) y Parámetros Críticos de Proceso
(CPP’s)
Nivel de Riesgo ¿Requiere investigación?
Bajo B No se requiere
Medio M Puede requerirse
Alto A Se requiere

Con base en los resultados obtenidos acerca del factor de riesgo que supone cada
material y si afecta o no a los atributos de calidad descritos en Perfil de Calidad de
Producto Objetivo, se muestran en las tablas en color rojo los atributos críticos de
los materiales que pueden presentar un gran compromiso al momento de llevar a
cabo las formulaciones, siendo a estos a los que se les diera un mayor enfoque e
importancia, de los cual requeriría una investigación extra con el fin de obtener un
producto con menores probabilidades de falla. En color amarillo aparecen los
materiales que podrían llegar a afectar al producto, pero en menor medida que los
anteriores; a éstos, se les hizo una búsqueda de información, pero pudo o no haber
cambios dentro de la formulación final. Por último, de color verde, se encuentran los
materiales en los que no se requirió mayor búsqueda de información.

Tabla 19. Atributos Críticos de los Materiales (CMA’s) para formulación de la

emulsión propuesta. [57]
¿Afecta Nivel
Factor de
Material un ¿Cuál? de
Riesgo
CQA? Riesgo
Apariencia,
Nanopartículas
Baja solubilidad Sí Estabilidad Física y A
de melanina
Carga Eléctrica
A temperaturas
altas, aumenta
su índice de
Monoestearato acidez. Apariencia y
Sí M
de glicerilo Requiere Estabilidad Física
cálculo de HLB.
Aumenta la
viscosidad final
Alcohol Requiere Apariencia y
Sí M
estearílico cálculo de HLB Estabilidad Física
Requiere Apariencia y
Cera de abejas Sí M
cálculo de HLB Estabilidad Física
Concentración
Goma xantana Sí Viscosidad B
menor a 1% p/v

67
 pueden verse
afectadas
negativamente
por
temperaturas
superiores a las
ambientales
Requiere Apariencia y
Aceite mineral Sí M
cálculo de HLB Estabilidad Física
Mínimamente
Propilenglicol No N/A B
irritante
Cristaliza a
Glicerina bajas No N/A B
temperaturas
La actividad
antimicrobiana
reduce en
Estabilidad Física y
Metilparabeno presencia de Sí A
Química
tensioactivos no
iónicos, como el
polisorbato 80.
Repercusiones
Propilparabeno Sí Toxicología A
toxicológicas
Cantidades
Emulsificantes
específicas para Apariencia y
(Span 80 y Sí A
la formación de Estabilidad Física
Tween 80)
la emulsión
Miristato de Requiere Apariencia y
Sí M
isopropilo cálculo de HLB Estabilidad Física
Alantoína N/A N/A N/A B
DMDM
N/A N/A N/A B
hidantoina
Agua N/A N/A N/A B
Degradación
Polipropileno No N/A B
prolongada
Producto
Válvula de spray demasiado No N/A B
viscoso

68
Tabla 20. Atributos Críticos de los Materiales (CMA’s) para formulación del gel
termosensible propuesta [57]
¿Afecta Nivel
Factor de
Material un ¿Cuál? de
Riesgo
CQA? Riesgo
Apariencia,
Nanopartículas
Baja solubilidad Sí Estabilidad Física y A
de melanina
Carga Eléctrica
Solubilidad a
temperaturas
Apariencia,
Pluronic® F127 bajas. Baja
Sí Viscosidad y A
(Ploxamero 407) resistencia
Estabilidad Física
mecánica y la
rápida erosión
Cristaliza a
Glicerina bajas Sí Apariencia M
temperaturas
Extracto de Aloe
N/A No N/A B
vera
Mínimamente
Propilenglicol No N/A B
irritante
DMDM
N/A N/A N/A B
hidantoina
Reduce la
Cloruro de
temperatura de Sí Apariencia B
sodio
transición
Alantoína N/A N/A N/A B
Uso de
concentraciones
EDTA Sí Toxicidad M
bajas (0.005
and 0.1%)
Ácido cítrico N/A N/A N/A B
Agua N/A N/A N/A B
Degradación
Polipropileno No N/A B
prolongada
Dispensador Cambio de
No N/A B
dosificador viscosidad

69
Tabla 21. Atributos Críticos de los Materiales (CMA’s) para formulación del aceite
fluido propuesta [57]
¿Afecta Nivel
Factor de
Material un ¿Cuál? de
Riesgo
CQA? Riesgo
Apariencia,
Nanopartículas
Baja solubilidad Sí Estabilidad Física y A
de melanina
Carga Eléctrica
Aceite de
N/A N/A N/A B
germen de trigo
Solubilidad
Span® 60 media en aceite Sí Apariencia M
mineral
Potenciador de
penetración en
Ácido oleico Sí Toxicidad M
formulaciones
transdérmicas
Potenciador de
Miristato de penetración en
Sí Toxicidad A
isopropilo formulaciones
transdérmicas.
Tocoferoles
pueden Estabilidad física y
Vitamina E Sí A
absorberse en Estabilidad Química
plástico.
Palmitato de
N/A N/A N/A B
cetilo
Oxidación en
Aceite mineral exposición al Sí Estabilidad Química B
calor y la luz.
Polipropileno Absorción de Estabilidad Física y
Sí A
color ambar vitamina E. Estabilidad Química
Válvula de Obstrucción de
No N/A B
spray. la formulación

8.4.2. Selección de excipientes

A partir de las tablas obtenidas en los Atributos Críticos de los Materiales (CMA’s),
se realizó la elección de excipientes, disminuyendo los porcentajes de los
excipientes que afectaban los atributos críticos o cambiándolos por otros que
cumplieran una función similar. La elección de excipientes cambió de la original
mostrada en la propuesta de ingredientes y materiales, a lo mostrado en la Tabla
22, donde se observan los ingredientes presentados con anterioridad, pero ahora
ajustados a lo que la bibliografía nos sugiere para no afectar a los Atributos Críticos

70
de Calidad de los productos. La columna que muestra el porcentaje final muestra la
concentración seleccionada como la mejor dentro de estándares bibliográficos
descritos en términos de formulación. [66]
Tabla 22. Selección de excipientes para las formulaciones de protectores
solares que contienen MNP’s como activo cosmético [12, 29, 57- 59]
Formulación

Ingrediente/ Porcentaje
Anotaciones, observaciones y/o justificación
Material final

Por su baja toxicidad se propuso usar

Nanopartículas
porcentajes mayores y menores para 0.1-10
de melanina
conocer el efecto fotoprotector.
Monoestearato
Su uso se mantuvo al porcentaje indicado. 1
de glicerilo
Alcohol Su uso se mantuvo al porcentaje indicado.
1
estearílico
Su uso se mantuvo al porcentaje indicado,
dado que en porcentajes mayores podría
Cera de abejas conferirle a la formulación final una 0.5
viscosidad mayor, dando como resultado
una crema pesada y no una emulsión.
Su uso se mantuvo al porcentaje indicado,
Emulsión (loción)

dado que en porcentajes mayores podría

conferirle a la formulación final una
Goma xantana 0.1
viscosidad mayor, dando como resultado
una crema pesada y no una emulsión.

Su uso se mantuvo en el porcentaje

Aceite mineral 5
indicado.
Su uso se mantuvo en el porcentaje
Propilenglicol 5
indicado.
Su uso se mantuvo en el porcentaje
Glicerina 5
indicado.
Dados los informes de eventos adversos a
cosméticos, el uso de este ingrediente se
Metilparabeno 0
restringió a lo estipulado en la normatividad
vigente en México.
Dados los informes de eventos adversos a
cosméticos, el uso de este ingrediente se
Propilparabeno 0
restringió a lo estipulado en la normatividad
vigente en México.

71
 Su uso se mantuvo en el porcentaje
®
Span 80 indicado según el Sofware HLB 3.2
Computagraph®
Su uso se mantuvo en el porcentaje
Tween® 80 indicado según el Sofware HLB 1.8
Computagraph®
Miristato de Su uso se mantuvo en el porcentaje
1.5
isopropilo indicado.
Su uso se mantuvo en el porcentaje
Alantoína 0.3
indicado.
DMDM Su uso se mantuvo en el porcentaje
0.6
hidantoina indicado.
El porcentaje varía dependiendo de la
Agua c.b.p.
concentración de MNP’s
Se acepta el uso de este material como
envase primario. Debido a la posible
Polipropileno oxidación en exposición al calor y la luz del N/A
aceite mineral, se propone el uso de
polipropileno opaco.
Válvula de Se acepta el uso de este material debido a
N/A
spray la fluidez del producto final.
Por su baja toxicidad se propuso usar
Nanopartículas
porcentajes mayores y menores para 0.1-10
de melanina
conocer el efecto fotoprotector.
Experimentalmente, los resultados
obtenidos con la concentración propuesta
Pluronic® F127
en la literatura no producían cambios
(Poloxámero 13
significativos a cambios de temperatura, por
407)
lo que se realizaron diferentes pruebas para
obtener el resultado deseado.
Gel termosensible

Su uso se mantuvo en el porcentaje

Glicerina 3
indicado.
Extracto de Aloe Su uso se mantuvo en el porcentaje
3
vera indicado.
Su uso se mantuvo en el porcentaje
Propilenglicol 2
indicado.
DMDM Su uso se mantuvo en el porcentaje
0.60
hidantoina indicado.
Se restringió el uso como estabilizante del
polisacárido formador de gel dado que,
Cloruro de sodio 0
según la literatura, para este tipo de
polisacárido no era funcional.
Su uso se mantuvo en el porcentaje
Alantoína 0.30
indicado.
Su uso se mantuvo en el porcentaje
EDTA 0.10
indicado.

72
 El pH final del producto fue el requerido
Ácido cítrico para su uso sobre la piel, por lo que no fue c.s.
necesario su uso.
El porcentaje varía dependiendo de la
Agua c.b.p.
concentración de MNP’s
Se acepta el uso de este material como
Polipropileno N/A
envase primario.
Dispensador Se acepta el uso de este material debido a
N/A
dosificador la fluidez del producto final.
Por su baja toxicidad se propuso usar
Nanopartículas
porcentajes mayores y menores para 0.1-10
de melanina
conocer el efecto fotoprotector.

Aceite de Su uso se mantuvo en el porcentaje

2
germen de trigo indicado.

Por su sedimentación en el medio de

dilución, se propuso cambiar este
Span® 60 tensoactivo de la misma naturaleza lipofílica 1
(Span® 80), conservado el porcentaje
propuesto.
Debido a que es un potenciador de
Ácido oleico penetración en formulaciones 0
Aceite fluido

transdérmicas, se declinó su uso.

Su uso se mantuvo por sus propiedades
tecnológicas, sin embargo, por ser un
Miristato de
potenciador de penetración en 2
isopropilo
formulaciones trasdérmicas, su porcentaje
se redujo

Su uso se mantuvo en el porcentaje

Vitamina E 0.2
indicado.

El porcentaje varía dependiendo de la

Aceite mineral c.b.p.
concentración de MNP’s

Se acepta el uso de este material como

envase primario. Debido a la posible
Polipropileno
oxidación en exposición al calor y la luz del N/A
color ambar
aceite mineral, se propone el uso de
polipropileno opaco.

73
 Válvula de Se acepta el uso de este material debido a
N/A
spray. la fluidez del producto final.

8.4.4. Caracterización de las formulaciones-medición de CQA’s

Se realizó un estudio de estabilidad de las formulaciones durante 4 semanas a cada
una de las formulaciones, las cuales permanecieron en un envase de polipropileno
de 50 ml a 40ºC durante su tiempo de estudio. Cada semana fueron analizadas, en
condiciones de 22ºC, obteniendo los resultados de la Tabla 23, en la cual se
aprecian los cambios que las formulaciones sufrieron a través de las semanas,
iniciando con las características de las mismas en la fecha del 16 de julio, partiendo
como punto base para notar cambios en la apariencia, la viscosidad, el pH, la
densidad, olor y color, como atributos críticos de calidad de los productos. Para los
atributos cuantificables como la viscosidad, pH y densidad, se midieron los valores
iniciales; el pH permaneció tal cual era al momento de la producción del cosmético,
pero la densidad y la viscosidad comenzaron a cambiar debido separación de fases,
en el caso de las emulsiones, y cambios de temperatura en el caso del gel.

Tabla 23. Estudio de estabilidad de las formulaciones candidatas para su uso

como vehículo de MNP’s.
Atributos críticos de calidad (CQA’s)
formulación
Fecha de

Viscosidad
Apariencia
Tipo de
análisis

Densidad

Color
Olor
pH

14,720 0.8979
Emulsión - 5.72 - -
cP g/ml
Gel (Figura 0.7745
16/Julio/2020 - 5.68 - -
termosensible 20) g/ml
0.8847
Aceite fluido - 14,000 N/A - -
g/ml
Emulsión - - - - - -
Gel
24/Julio/2020 + + - - - -
termosensible
Aceite fluido - - N/A - - -
Emulsión + - - + - -
Gel
30/Julio/2020 + + - - - -
termosensible
Aceite fluido + - N/A - + -
07/Agosto/2020 Emulsión + - - + - +

74
 Gel
+ + - - - -
termosensible
Aceite fluido + - N/A - + -
Emulsión + + - + - +
Gel
19/Agosto/2020 + + - - - -
termosensible
Aceite fluido + - N/A + + +
(“-“significa ausencia de alteraciones; “+” significa presencia de alteraciones)

[Link]. Temperatura sol-gel

En el caso del gel termosensible, se llevó a cabo la prueba sol-gel, en la cual el gel
se sometió a temperaturas de 12, 15, 20, 25, 30, 35, 37, 40 y 50ºC con el mecanismo
montado como lo muestra la Figura 13 para la medición de la relación temperatura-
viscosidad del gel. Los resultados obtenidos se muestran en la figura 20, donde se
aprecia que a medida que la temperatura del mecanismo aumentaba, la densidad
de igual manera lo hacía. A temperatura ambiente (25º C) puede permanecer a una
viscosidad de 135.6 cP, siendo líquido y fluido, pero al estar en contacto con la piel
(37º C) se vuelve un gel con menos fluidez y mayor cobertura al aplicarse de forma
cutánea.

800 769

700 645
581 594
600

500
Viscosidad (cP)

440
400

300

200 135.6
105.6
100 31.2 39.6

0
12 15 20 25 30 35 37 40 50
Temperatura (°C)

Figura 20. Relación temperatura sol-gel de gel termosensible

8.5. Determinación in vitro del FPS mediante el método de Mansur

Para la determinación del Factor de Protección Solar conferido por las diferentes
formulaciones propuestas y las nanopartículas en suspensión, se utilizó el simulador
in silico de FPS de BasfÒ para tomar como referencia el FPS teórico del control

75
positivo, siendo esta la benzofenona-4. El software indicó que este filtro a una dosis
de 3 mg/cm2 a una concentración del 10% en la formulación, se obtiene un FPS de
16.2, similar al especificado en la ISO 24443 [36] que es de 16.0. A partir de este
resultado, se optó por analizar una muestra de benzofenona-4 al 10% en agua con
el método propuesto por Mansur [39], obteniendo como resultado un FPS de 4.1654,
siendo este resultado una vertiente para proponer un ajuste, puesto que ambos
resultados, tanto teórico como experimental divergían; para esta cuestión, se toma
en cuenta la normatividad referente a protectores solares, ya que el resultado teórico
entra en la definición tal cual de “protector solar” con un FPS >6, mientras que el
experimental no. Se optó por tomar el resultado del FPS de 16.2 como referencia al
momento de calcular los FPS problema, obteniendo como resultados los mostrados
en la Tabla 24.
En el caso de las emulsiones y el gel, las formulaciones que contenían un porcentaje
de MNP’s mayor al 1% comenzaron a tener un FPS mayor a 6, pudiéndose
considerar protectores solares como lo indica la normativa vigente [30]. Para el caso
de la formulación en aceite, se observa que el producto por sí solo tiene un efecto
fotoprotector, esto porque tiene un valor mayor a 6 incluso cuando existe un nulo
porcentaje de MNP’s dentro de la formulación, lo que indica que los excipientes
utilizados para esta formulación tienen un efecto protector contra radiación tal como
la bibliografía indica [25] y que además, va en aumento junto con las MNP’s que le
otorgan el mismo efecto deseado.

Tabla 24. Factor de protección solar de

protectores solares con MNP’s como activo
cosmético.
Concentración FPS de las formulaciones
de MNP’s Loción Gel Aceite
0.0% 4.3983 3.6733 7.6592
0.1% 5.1314 4.4064 8.3923
1.0% 8.3019 7.5770 11.5628
10.0% 23.1350 22.4100 26.3959

76
9. DISCUSIÓN.

En el trabajo de investigación aquí descrito, se utilizó melanina preformada de

origen recombinante con la finalidad de aprovechar las características propias de
esta para generar nanopartículas que, una vez obtenidas, puedan ser utilizadas no
solo en el área cosmética, sino también en el área farmacéutica y médica.
Debido a la poca información de la melanina de origen recombinante, fue necesaria
una caracterización por espectrofotometría UV-Vis y espectroscopia IR, con la
finalidad de confirmar su identidad. Los resultados obtenidos fueron comparados
con los de referencia, reafirmando la identificación de este polímero. En el caso de
la espectrofotometría UV-Vis, se obtuvo un espectro que coincidía con la referencia,
además de presentar una longitud de máxima absorción (lmáx) a 227 nm; para el
caso de la espectroscopia IR, se observaron bandas propias de los grupos
funcionales de la melanina, tales como CH, NH, C=C, COO-, y OH. [12]
El método de espectrofotometría UV-Vis anterior junto con la realización de una
curva de calibración, la determinación de la exactitud y la precisión del método
también fueron utilizados con la finalidad de cuantificar melanina materia prima, así
como también el de las MNP’s. Resulta útil conocer los parámetros obtenidos bajo
esta metodología, ya que al obtener las nanopartículas en suspensión es necesario
conocer la concentración de ellas en cierto volumen y así tomar la cantidad
requerida de éstas para el uso que se le vaya a dar.
Debido a la baja solubilidad de la melanina, sobre todo en disolventes orgánicos y/o
ácidos, se optó por obtener las nanopartículas bajo el enfoque de doble emulsión-
evaporación de disolventes propuesto por Casarrubias [12], ajustando el método en
el lavado, recuperación y concentración de las MNP’s, puesto que bajo la
metodología que se proponía se obtenía un rendimiento casi nulo de la suspensión
final de nanopartículas. Por lo anterior se recurrió a membranas de nylon de 0.22µm
de VWR®, a un filtrado inverso y a la centrifugación seguido de un calentamiento,
siendo este último el más eficaz para la obtención de las MNP’s según los resultados
obtenidos del método espectrofotométrico UV.
Para analizar el tamaño de partícula de los lotes realizados se utilizó una dilución
1:10 de la suspensión de MNP’s en agua destilada. La distribución obtenida muestra
que dentro de la mayoría de los lotes de nanopartículas existen dos picos,
representando el primero al 97.75±2.45% de la población con un tamaño de
partícula de 275.33±83.62 nm, y un segundo pico representante del porcentaje
restante de 2.25±2.44% con un tamaño de partícula de 3938.5± 2443.74nm, es decir
que este último pico corresponde a partículas que oscilan entre los 1494.76 y
6382.24 nm, que son partículas muy grandes en comparación con las
nanopartículas que se esperaba obtener. Al estar en un porcentaje menor, pueden
retirarse fácilmente con una filtración o con la sedimentación. Empleando la misma

77
dilución, se observó un potencial Z negativo que oscilaba entre los -16 y -24 mV,
aproximadamente. Es importante considerar el tamaño y la superficie de las
partículas ya que son las propiedades de las NP’s que pueden afectar la capacidad
y el mecanismo de absorbancia de la piel. Desempeñan un papel crucial en la
toxicidad de las NP’s que puede estar relacionada con su superficie que interactúa
con el medio biológico. Muchos informes sobre el efecto de la carga de NP’s sobre
la penetración cutánea son contradictorios, por ejemplo, se ha descrito mayor
potencial de absorción cutánea de las emulsiones submicrónicas cargadas
positivamente, y otros experimentos informan más penetración cutánea por
nanocompuestos cargados negativamente, además de que existen distintos
factores que de igual manera pueden afectar la penetración de las NP’s como la
polaridad y los vehículos que las transporten, entre otras. [60] Para el caso de los
protectores solares, estos no deben tener la capacidad de penetrar la piel o que
alguno de los ingredientes propuestos para las formulaciones tengan una entrada
sistémica [28,30], por lo que sería de gran relevancia aunar en estudios de
penetración de MNP’s en la piel.
Se realizó un informe completo de Calidad por Diseño (QbD) con el cual fue posible
conocer las mejores opciones para la manufactura de los vehículos que contendrían
las MNP’s. A partir de ello, se seleccionaron 3 formulaciones con bases y
características tecnológicas distintas, siendo estas una emulsión en forma de loción
como la forma cosmética mayormente aceptada por la población, un gel que al
contacto con la piel cambiara su viscosidad y permitiera una mejor aplicación del
producto, y un aceite fluido que por sus características lipofílicas permitiera repeler
el agua en casos de uso en condiciones de playa. Para cada caso, se obtuvo
información relevante que contribuiría a la mejora del producto; para el caso de la
emulsión, se hizo especial énfasis en las cantidades de tensoactivos para que la
emulsión pudiera formarse, para esto se recurrió a un método in silico, utilizando el
programa HLB Computagraph® para conocer el HLB requerido de la formulación
con respecto a los componentes propuestos. Los parabenos propuestos en esta
formulación fueron retirados, ya que existe una discrepancia frente al uso de estos
excipientes, además de que en las nuevas tendencias en la cosmética se proponen
y se aceptan con mayor facilidad productos que no contienen este tipo de
materiales. La DMDM hidantoina como conservador fue una opción utilizada para
cumplir con la misma función que los parabenos cumplían en esta formulación [58];
para el gel termosensible se enfatizó en el uso del Pluronic® F127 (Poloxámero 407),
el cuál era el polímero base principal para la formación del gel. Según la literatura,
se podría obtener un cambio de viscosidad a concentraciones de 20% en las
formulaciones [59], sin embargo, de forma experimental el gel no presentaba
cambios a diferentes variaciones de temperatura, siendo esto influido por la
temperatura ambiental de manufactura como lo mostrado en la Figura 19, en el
Diagrama de Ishikawa para protectores solares con nanopartículas de melanina
como activo cosmético, en el apartado de medio ambiente. Para resolver este
problema, se optó por dejar en reposo el polímero a 12ºC por 30 minutos, y una vez

78
transcurrido este tiempo, continuar con la manufactura. Se realizaron varias pruebas
a distintas concentraciones de polímero, optando por usar un 13% de este, ya que
a concentraciones mayores o menores no existía un cambio de viscosidad respecto
a los cambios de temperatura aplicados; el aceite fluido contenía ingredientes que
podrían influir en la penetración de la piel, por lo que fueron disminuidos en
porcentaje o retirados de la formulación. Se usó aceite mineral como diluyente para
el resto de los componentes lipofílicos, ya que es un ingrediente que según la
literatura, puede ser utilizado en porcentajes altos para los casos de las formas
cosméticas [57]; el diagrama de Ishikawa de la Figura 19 también muestra que el
reto más grande al momento de la formulación fue la transferencia tecnológica y las
metodologías inexistentes para la obtención de la MNP’s, ya que existían vacíos
argumentales en su manufactura, repercutiendo en la obtención y rendimiento de
las mismas.
Para la caracterización de las formulaciones, se llevó a cabo un estudio de
estabilidad como lo propuesto en la Norma de Buenas Prácticas de Fabricación de
Medicamentos [27] en la que se estipulan las condiciones de almacenamiento, el
sistema contenedor, y los parámetros a evaluar. Con base en esto, las
formulaciones permanecieron un mes en una estufa a 40°C ± 2°C, como lo indica
lo propuesto para la estabilidad acelerada [61] para aumentar la velocidad de
degradación química o cambios en las propiedades físicas en condiciones de
almacenamiento extremas. [62] Todas las formulaciones sufrieron cambios notables
(Tabla 24): la emulsión resultó en la separación de sus fases a partir de la semana
2 presentando, por ende, cambios en su densidad, imposibilitando su medición,
además del cambio de color; el gel termosensible presentó cambios en su
apariencia desde los primeros minutos de la prueba dadas sus características
tecnológicas, para lo cual se le fue aplicada la prueba de temperatura sol-gel,
evaluando con esto los cambios de viscosidad en la formulación con relación a los
cambios de temperatura a los que se sometió, concluyendo que esta forma
cosmética aumenta su viscosidad cuando la temperatura aumenta, y viceversa,
como lo muestra la Figura 20; el aceite fluido comenzó a presentar enranciamiento
debido quizá a la oxidación por la exposición al calor y la luz del aceite mineral, o
especialmente debido a que los tocoferoles pueden absorberse en plástico, siendo
la vitamina E usada como antioxidante absorbida por el polipropileno del envase
primario [57]. Al ocurrir estos cambios significativos en los primeros meses del
estudio de estabilidad acelerada, se propone un periodo de reanálisis basado en los
datos de estabilidad a largo plazo. [61]
El último aspecto para cumplir con los objetivos del proyecto, fue la evaluación del
Factor de Protección Solar de las diferentes formulaciones con MNP’s como activo
cosmético. Se utilizó un método in silico para conocer el FPS teórico del control
positivo de benzofenona-4 mediante el simulador de BASFÒ, obteniendo valores
relativamente distintos a los resultados experimentales; se realizó un ajuste
utilizando el valor arrojado por el software para obtener los valores de las

79
formulaciones con 0, 0.1, 1 y 10 % de MNP’s debido a su baja toxicidad [12],
obteniendo los resultados mostrados en la Tabla 25. Para que un protector solar
sea considerado como tal, es necesario que este tenga un FPS >6 [30], y bajo esta
condición, las formulaciones del aceite fluido cuentan con esta característica aún
sin contener las MNP’s debido a su naturaleza [63]. Para las emulsiones y geles, se
presentó esta característica con la adición de MNP’s por arriba de porcentajes del
1%, concluyendo que las MNP’s tienen la capacidad de ofrecer protección solar, sin
embargo, el ajuste realizado en esta metodología debería ser evaluado ya que
existe una discrepancia al usar este método. Se propone utilizar otras metodologías
con mejor estandarización como la propuesta en la ISO 24443. Determination of
sunscreen UVA photoprotection in vitro [36], no obstante, para realizar esta
metodología requiere de materiales poco comunes (Figura 19) o costosos que
imposibilitan su reproducibilidad en cualquier laboratorio, a menos que se pueda
acceder a estos.

80
 10. CONCLUSIÓN GENERAL.

Se reprodujo el método de doble emulsión- evaporación de disolvente para la

obtención de nanopartículas de melanina de origen recombinante de
275.33±83.62 nm, con las cuales se realizaron 3 distintas formas cosméticas:
una emulsión, un gel termosensible y un aceite fluido capaces de contener a las
nanopartículas. A estas formulaciones se les calculó el Factor de Protección
Solar con el Método in vitro de Mansur, el cuál arrojó como resultado valores
por arriba de 6 para los casos en los que las nanopartículas se encontraban a
concentraciones mayores al 1%, obteniendo como resultado distintos
protectores solares según lo estipulado por la legislación nacional e
internacional.

81
 11. CONCLUSIONES PARTICULARES.

n La melanina de origen recombinante preformada demostró su identidad

mediante su análisis en espectrofotometría UV y espectroscopía IR.

n El método espectrofotométrico UV permitió la cuantificación de la

concentración tanto de la melanina preformada así como de las
nanopartículas de melanina.

n Se obtuvieron nanopartículas de melanina con tallas de 275.33±83.62 nm y

potencial Z con valores de -16 y -24 mV.

n Se realizó el establecimiento de las formulaciones cosméticas, la selección y

propuesta de excipientes, así como el análisis de riesgos e identificación de
puntos críticos bajo el enfoque de Calidad por Diseño.

n Se obtuvo una emulsión, un gel termosensible y un aceite fluido con la

capacidad de contener a las nanopartículas de melanina, las cuales fueron
caracterizadas, con base en su apariencia, viscosidad, pH, densidad, olor y
color.

n Se realizó la determinación del Factor de Protección Solar in vitro de las

formulaciones propuestas mediante el método de Mansur ajustado,
obteniendo valores de FPS mayores a 6 para los casos donde la
concentración de MNP’s era mayor al 1%, a excepción de la formulación de
aceite fluido, puesto que los ingredientes que lo conforman poseen
características que confieren protección solar por sí solos.

82
 12. PERSPECTIVAS.

En el presente trabajo de investigación se ha demostrado la reproducción

satisfactoria de nanopartículas de melanina a partir de melanina preformada de
origen recombinante, sus propiedades físicas, químicas, y su integración en formas
cosméticas con distintos tipos de polaridad, así como el Factor de Protección Solar
proporcionado por las nanopartículas en sus diferentes medios; con todo ello, a
continuación se describen otros factibles alcanzables, previendo ser considerados
como investigaciones complementarias o extensiones del presente trabajo:

v Escalar el proceso de obtención de las nanopartículas de melanina descrito,

con el fin de evaluar el comportamiento y límites permisibles de obtención
utilizando las cantidades definidas a partir del procedimiento optimizado
original.

v Escalar la producción de las formulaciones para obtener una vista más

precisa sobre la apariencia de los protectores solares, realizando un perfil
sensorial con panelistas capacitados, evaluando aspectos como la suavidad,
película residual y sobre todo la aceptabilidad del producto por el color café
que pueden presentar las formulaciones debido a la concentración de MNP’s.

v Realizar estudios de permeabilidad de las nanopartículas que prueben su

aplicación real, con pruebas in vitro e incluso in vivo, que demuestren que las
formulaciones propuestas pueden desempeñar su papel como cosmético
según la regulación nacional e internacional vigente.

v Relativo a su uso como protector solar, desarrollar un método con el cuál sea
posible conocer el tiempo en que las nanopartículas de melanina se
encuentran depositadas sobre la piel, dado que es un producto que exige ser
usado constantemente. Con esto, se puede conocer el tiempo requerido para
realizar una re aplicación del producto, así como la toxicología implicada con
su uso constante.

v Considerando las propiedades de las nanopartículas de melanina, realizar

estudios relacionados con sus posibles usos para las afecciones
relacionadas con la piel como el caso del vitíligo, o casos extremos como el
albinismo, intentando proporcionar una pigmentación en zonas donde la piel
no tiene una producción normal de la melanina.

v Optimizar el método de Mansur sobre la obtención del Factor de Protección

Solar, con el fin de economizar reactivos y mejorar los resultados obtenidos

83
 a través del proceso, obteniendo así mejores y más certeros resultados. Una
vez mejorado, se podría obtener un resultado real del FPS de las
nanopartículas y reformular los productos, obteniendo un protector solar
óptimo.

v Realizar estudios de estabilidad que impliquen el uso de técnicas analíticas

de proceso, permitiendo así conocer el comportamiento de las
nanopartículas y su interacción con los ingredientes propuestos en distintas
formulaciones, permitiendo la mejora de los productos terminados y con ello
garantizar una mayor calidad, ofreciendo medicamentos o cosméticos que
no tengan interacciones químicas que podrían ser contraproducentes.

v Efectuar pruebas de compatibilidad de las nanopartículas de melanina de

origen recombinante en líneas celulares propios del cuerpo humanos, tales
como células sanguíneas, con el fin de poner a prueba otros usos de éstas
como principio activo en medicamentos con diferentes formas farmacéuticas.

84
 13. REFERENCIAS

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89
14. ANEXOS.

Anexo 1. Parámetros de desempeño en la validación de métodos analíticos.

Curva de calibración de melanina en NaOH 1N.

Tabla 25. Absorbancias a diferentes concentraciones para curva de
calibración de melanina preformada
Concentración Absorbancia Promedio Desv. %C.V.
(mg/ml) Std.
2.5 0.1156 0.1151 0.0007234 0.6283
2.5 0.1155
2.5 0.1143
5 0.2176 0.2156 0.0017954 0.8329
5 0.2142
5 0.2149
10 0.3804 0.3807 0.0004359 0.1145
10 0.3812
10 0.3805
15 0.5716 0.5786 0.0061370 1.0606
15 0.5814
15 0.5829
20 0.7629 0.7537 0.0080842 1.0727
20 0.7504
20 0.7477
25 0.946 0.9409 0.0059071 0.6278
25 0.9423
25 0.9344
2
R 0.9996 Promedio 0.7227

90
Figura 21. Curva de calibración de la melanina de origen recombinante como
materia prima.

Curva de calibración de melanina

1
0.9 y = 0.0304x - 0.0269
R² = 0.9991
0.8
0.7
Absorbancia

0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
0 5 10 15 20 25
Concentración (µg/ml)

Tabla 26. Exactitud del método.

Concentración Concentración
Absorbancia %Recobro
(µg/ml) experimental
5 0.1241 4.9671 99.3421
5 0.1359 5.3553 107.1053
5 0.1295 5.1447 102.8947
5 0.1264 5.0428 100.8553
5 0.1169 4.7303 94.6053
5 0.1322 5.2336 104.6711
25 0.7165 24.4539 97.8158
25 0.7268 24.7928 99.1711
25 0.7285 24.8487 99.3947
25 0.7392 25.2007 100.8026
25 0.713 24.3388 97.3553
25 0.7173 24.4803 97.9211
Media 100.1612
[Link]. 3.4169
C.V. % 3.4114
I.C. 0.94086271
Lím. Sup. 101.1020
Lím. Inf. 99.2203

91
Tabla 27. Precisión del método.

Precisión día 1 (15µg/ml) Precisión día 2 (15 µg/ml)

Repetición Absorbancia Repetición Absorbancia
1 0.4628 1 0.4706
2 0.4762 2 0.4602
3 0.4695 3 0.4856
4 0.466 4 0.4498
5 0.4347 5 0.4871
6 0.459 6 0.4692
Media 0.4614 Media 0.4704
Desv. Std. 0.0143 Desv. Std. 0.0144
%C.V. 3.1055 %C.V. 3.0656

Tabla 28. Determinación del límite de cuantificación y detección.

LÍMITE DE CUANTIFICACIÓN LÍMITE DE DETECCIÓN
𝟏𝟎𝜹 𝟎. 𝟑𝟑𝜹
𝑳. 𝑪. = 𝑳. 𝑫. =
𝑺 𝑺
δ= Desviación estándar del δ= Desviación estándar del
intercepto intercepto
S=Pendiente de la curva de S=Pendiente de la curva de
calibración calibración
LC=18.2895 µg/ml LD= 0.6036 µg/ml

92
Anexo 2.

93