UNALM Dpto.
Química
Primer Examen de Prácticas de Enzimología 2020-II
Nombre: Karen Geraldinne Felix Chanduvi
1. Un grupo de estudiantes de enzimología realizan un estudio de fostasa ácida en hígado.
Para ello se ha preparado un extracto crudo de hígado de oveja (M1) y otro de hígado de
pescado (M2). En ambos casos con 3g de tejido homogenizados en 12ml de buffer acetato.
Después de centrifugar el volumen obtenido en ambos casos fue de 8ml. Se ha preparado el
siguiente protocolo para medir la actividad enzimática de la fosfatasa ácida (No se
consideran las repeticiones de las muestras por que el CV fue 0):
BM M BM M
Oveja Oveja Pescado Pescado
Buffer 2.5 2.5 2.5 2.5
pNFF 0.2 0.2 0.2 0.2
5 minutos A 37⁰C
Extracto crudo 0.1 0.1
10 minutos A 37⁰C
NaOH 1M 1 1 1 1
Extracto crudo 0.1 0.1
A 410nm 0.112 0.712 0.110 0.410
Coeficiente de extinción molar = 18400
A) Determine la actividad enzimática de fosfatasa ácida en hígado de oveja y pescado, exprese
en U/g hígado.
B) Los estudiantes necesitan extraer la enzima del hígado y purificarla y para ello deben
escoger la muestra apropiada (hígado de oveja o de pescado), considerando que durante el
proceso de purificación se perderá cierta cantidad de enzima, ¿cuál de las muestras
escogería? Explique
2. Un tesista realizó el siguiente ensayo de actividad del inhibidor de tripsina (AIT) en una
muestra de harina de camote. La extracción del inhibidor se realizó de la siguiente
manera: a 1g de harina de camote se agregó 50ml de NaOH 0.001M, se reguló el pH a 9.4
y se dejó en reposo por 16 horas. Luego se filtró y el filtrado se enrazó en una fiola a 100
ml. Con este extracto del inhibidor se prepararon varias diluciones (M1y M2). Para
preparar las muestras diluidas se tomó la cantidad indicada (0.5; 0.75) en una fiola de
25ml que se enrazó a volumen con agua destilada. Los valores de A de las muestras son
obtenidos como promedio de 2 repeticiones cuyo CV fue menor de 3%.
BST ST RST BM1 M1 BM2 M2
0.5/25 0.75/25
Dilución
Bapna 2 2 2 2 2 2 2
Agua 1 1 1
Muestra 1 1 1 1
diluida
5 minutos a 37ºC
Tripsina 0.5 0.5 0.5 0.5
10 minutos a 37ºC
Acético 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
35%
Tripsina 0.5 0.5 0.5
A410nm 0.02 0.48 0.46 0.003 0.28 0.003 0.1935
a) Determine la actividad del inhibidor de tripsina por miligramo de harina.
b) Llene el siguiente cuadro y analice o explique los resultados obtenidos
M1 M2
Dilución 0.5 0.75
GI % 38.44 57.67
UTI/mg harina 86.5 86.5
c) El tesista sospecha que si realiza un ensayo con una dilución mayor a 0.75/25 (como
1.5/25), probablemente podría encontrar un resultado (UTI/mg de harina) menor al
obtenido en cualquiera de las diluciones realizadas. ¿Podría usted explicar en que se basa el
tesista para tal suposición?
