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Examen Parcial

Este documento presenta los resultados de dos experimentos para medir la actividad enzimática de la fosfatasa ácida y la tripsina. 1) La actividad de fosfatasa ácida es mayor en el hígado de pollo que en el hígado de pescado. 2) La actividad de tripsina es mayor a 70°C, que es cercana a la temperatura óptima de 60°C, en comparación con 37°C y 40°C. Se recomienda realizar más repeticiones para mejorar la precisión de los ensayos.

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Examen Parcial

Este documento presenta los resultados de dos experimentos para medir la actividad enzimática de la fosfatasa ácida y la tripsina. 1) La actividad de fosfatasa ácida es mayor en el hígado de pollo que en el hígado de pescado. 2) La actividad de tripsina es mayor a 70°C, que es cercana a la temperatura óptima de 60°C, en comparación con 37°C y 40°C. Se recomienda realizar más repeticiones para mejorar la precisión de los ensayos.

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UNALM Dpto.

Química

Primer Examen de Prácticas de Enzimología 2020-I

1. Se ha preparado un extracto crudo de hígado de pescado (M1) y otro de hígado de pollo


(M2). En ambos casos con 2g de tejido homogenizados en 12ml de buffer acetato. Después
de centrifugar el volumen obtenido en ambos casos fue de 8ml. Se ha preparado el siguiente
protocolo para medir la actividad enzimática de la fosfatasa ácida (No se consideran las
repeticiones de las muestras por que el CV fue 0):

BM M BM M
Pollo Pollo Pescado Pescado
Buffer 2.5 2.5 2.5 2.5
pNFF 0.2 0.2 0.2 0.2
5 minutos A 37⁰C
Extracto crudo 0.1 0.1
10 minutos A 37⁰C
NaOH 1M 1 1 1 1
Extracto crudo 0.1 0.1
A 410nm 0.112 0.672 0.110 0.420
Coeficiente de extinción molar = 18400

A) Determine la actividad enzimática de fosfatasa ácida en hígado de pollo y pescado, exprese


en U/g hígado.

B) Qué conclusión puede sacar al comparar los resultados en las dos muestras de hígado con
respecto a la enzima fosfatasa ácida.
La actividad fosfatasa acida es mayor en la muestra de hígado de pollo a comparación de la
del pescado. Esto nos puede indicar que hay una mayor concentración de esta enzima en el
tejido proveniente del pollo.

2. Se realizó el siguiente ensayo para determinar el efecto de la temperatura sobre la


actividad de tripsina. Los valores de A de las muestras 1, 2 y 3 son obtenidos como
promedio de 2 repeticiones cuyo CV fue menor de 3%.
BM1 M1 BM2 M2 BM3 M3
Bapna 2 2 2 2 2 2
Agua 1 1 1 1 1 1
Incubar 2 min a 37°C 2 min a 40°C 2 min a 70°C

Tripsina 0.5 0,5 0,5

Incubar 2 min a 37°C 2 min a 40°C 2 min a 70°C

Acético 35% 0,5 0.5 0,5 0.5 0,5 0.5


Tripsina 0,5 0,5 0,5
A410nm 0,03 0.35 0,03 0.43 0,03 0.67

a) Determine la actividad de tripsina en las 3 muestras.

b) En un ensayo previo de efecto de la temperatura sobre la actividad de tripsina se obtuvo


que la temperatura óptima para la enzima es 60°C. Considerando este hecho, explique las
posibles razones de las diferencias entre las 3 muestras.
Si la temperatura optima para la tripsina es 60°C entonces esto lo que nos indica que es que
cercanos a esta temperatura, la enzima tendrá mayor actividad enzimática, es por ello que
observamos que hay mayor UE en la tercera muestra (64 UE), ya que es la temperatura más
cercana a la temperatura óptima a la que trabaja la enzima.

3. ¿Qué implementaría para medir la exactitud y precisión en la pregunta 1?


Para poder tener mayor precisión en los experimentos de cada muestra, se tendría que
realizar mayor número de repeticiones. Y así luego evaluar el coeficiente de variación para
poder afirmar que nuestro ensayo está elaborado correctamente

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