UNIVERSIDAD NACIONAL PEDRO
RUIZ GALLO
FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS
CURSO:
Citogenética
TEMA:
Cromatina Sexual
DOCENTE:
MSC. Marco Antonio Guzmán Tello
ESTUDIANTE:
Guerrero Mestanza, Lisbeth Yajaira
CICLO:
VIII Ciclo
FECHA DE ENTREGA:
15 de enero 2022
PRÁCTICA DE LABORATORIO NO PRESENCIAL N° 2:
“Cromatina Sexual”
I. CAPACIDADES
1. Desarrolla técnicas para la observación de los corpúsculos de cromatina
positivos en núcleos femeninos de las hembras de mamíferos.
2. Distingue formas de presentación de la cromatina sexual.
3. Valora su aplicación como prueba de estimación rápida de cromosomas
accesorios X.
4. Comprender la importancia de la cromatina sexual en aquellos síndromes que
cursan con problemas de diferenciación sexual.
II. INTRODUCCIÓN
Pasaron muchos años antes de que pudiera establecerse una diferencia entre las células
masculinas y las femeninas durante la interfase, un hecho importante fue en 1923 con
Painter quien demostró citológicamente la existencia de los cromosomas X y Y en el
humano (Dario, 2005). Hoy en día es bien sabido que las mujeres poseen dos cromosomas
X y los hombres solo tienen uno. Durante la mayor parte de este siglo sabemos que el
cromosoma X contiene muchos genes codificadores de proteínas importantes. Así, las
mujeres tienen dos copias de cada gen ligado al cromosoma X, mientras que los hombres
únicamente poseen una copia (LAZO, 2021).
Pero es en 1949, con trabajos en neurofisiología de Murray L. Barr y Ewart G. Bertram
que se observó por primera vez una diferencia morfológica entre las células nerviosas de
las gatas y los gatos (Dario, 2005); así mismo los estudios posteriores de Keith Moore y
Barr en la especie humana, demostraron un mecanismo genético en mamíferos que
compensaban la expresión de los genes ligados al cromosoma “X” en ambos sexos, al
observar un cuerpo que se teñía de oscuro en la interfase de células nerviosa de gatas, que
no se encontraban en células similares del gato (Barriga Acero & Bonilla Sánchez, 2015;
Klug, 2006)
Uno de los grandes hechos en citogenética contemporánea es la comprobación de la
hipótesis de Mary Lyon, conocida como “Hipótesis de Lyon”, la cual estable que uno de
los cromosomas “X” en las hembras de mamíferos se inactiva en etapas muy tempranas
del desarrollo embrionario. Esta inactivación se manifiesta por la presencia de la
cromatina “X” y ocurre en el trofoblasto al décimo día después de la fecundación y, en el
embrión propiamente dicho, al décimo sexto día (Barriga Acero & Bonilla Sánchez,
2015).
Para que pueda ocurrir la inactivación en cualquiera de los cromosomas X que se
encuentren en la célula, se necesita de un segmento específico del cromosoma X: el
Centro de Inactivación del X (XIC). Esta región se localiza en: Xq13 donde están los
genes específicos para este proceso. Los XIC tienen genes como: XIST que sin este gen
no ocurriría la inactivación, TSIX este gen se encuentra en la cadena de ADN; y así
muchos genes más al momento de llevarse a cabo la inactivación (Martínez Medina &
Flores Hernández, 2017).
La cromatina sexual o también llamada corpúsculo de Barr es una minúscula masa de
cromatina, forma bajo la cual el ADN está presente en el núcleo de las células, que
encontramos únicamente en las hembras de los mamíferos. Se forman por el equilibrio
génico que se realiza por la diferencia de 2 alelos presentes en cromosoma sexual mujer
(CsexH) y un solo alelo en CsexM, que se inactiva debido al proceso llamado lionización,
proceso por el cual una de las copias del cromosoma X presente en mamíferos hembra
está inactivada, en animales donde el sexo se determina con la presencia del cromosoma
Y (De la Torre Navarro et al; 2017).
El estudio de la cromatina sexual, en especial de células de la mucosa oral, nos permite
identificar la presencia del cromosoma X en recién nacidos con genitales externos no
definidos para obtener el diagnóstico de sexo en un individuo. En donde el número de
masas de Barr se determina por la fórmula B = X – (P/2), donde P simboliza la ploidía de
la célula. Así pues, el número de cuerpos de Barr que se observan en una célula somática
normal femenina humana será B = X – (1). Una célula humana femenina normal tiene un
único Cuerpo de Barr por célula (Barriga Acero & Bonilla Sánchez, 2015).
III. MATERIAL Y MÉTODOS
MATERIALES
➢ Algodón
➢ Alcohol al 70%
➢ Papel filtro Nº 2
➢ Lancetas desechables
➢ Colorante de Wright
➢ Frasco gotero
➢ Solución amortiguada tamponada
MÉTODOLOGIAS
1. ANALISIS DE LA CROMATINA SEXUAL EN NEUTRÓFILOS
POLINUCLEOLARES
OBTENCIÓN DE SANGRE CAPILAR (MUÑOZ & MORÓN, 2005)
Procedimiento:
1. La sangre capilar se obtiene de la cara lateral del dedo medio o anular en los
adultos y del dedo gordo del pie o talón en los niños.
2. Desinfectar la zona con alcohol al 70%, secar con algodón estéril.
3. Punzar la piel con una lanceta estéril desechable (2 mm de profundidad).
4. Usar gasa estéril para desechar la primera gota y recoger las siguientes en tubos
capilares. Evitar comprimir la extremidad para obtener sangre porque se altera la
composición sanguínea.
OBTENCIÓN DE FROTIS SANGUÍNEO (MUÑOZ & MORÓN, 2005)
Procedimiento
1. Una vez extraída la sangre, se coloca una pequeña gota de sangre (5mL) (aprox.
3 mm de diámetro) sobre un portaobjeto a 2 cm aproximadamente de uno de los
extremos.
2. Colocar el canto de otro portaobjeto esmerilado sobre la superficie del primer
portaobjeto (en la que se encuentra la gota de sangre) formando un ángulo de 45º.
3. Deslizar suavemente y a velocidad moderada el portaobjeto sobre el otro en
sentido longitudinal, hasta que la gota de sangre quede bien extendida sobre la
superficie del primer portaobjeto. El grosor del frotis sanguíneo puede variar
según sea el ángulo que formen entre sí ambos portaobjetos. Así, si es superior a
45º, la extensión obtenida será gruesa y corta, si es inferior a 45º será larga y fina.
El secado del frotis es a temperatura ambiente y en posición horizontal.
TINCIÓN CON COLORANTE DE WRIGHT (MUÑOZ & MORÓN, 2005)
El colorante de Wright va a permitir suministrar un medio para estudiar la sangre y
determinar las variaciones y anormalidades de estructura, forma y tamaño de los
eritrocitos, su contenido de hemoglobina y sus propiedades de coloración. La información
obtenida de un frotis de sangre periférica depende en gran parte de la calidad del
extendido y la coloración.
Procedimiento
1. Una vez obtenido el frotis sanguíneo, se le dejará secar entre 15 y 20 minutos.
2. Luego se coloca la preparación en un soporte y se cubre con el colorante de
Wright, dejándolo por espacio de 5 minutos.
3. Posteriormente se añade solución amortiguada tamponada en partes iguales hasta
obtener un brillo metálico, dejando 6 minutos adicionales.
4. Finalmente se lava con agua corriente y se deja secar.
5. Se coloca en el microscopio y, con pequeño aumento, se revisa la calidad de la
coloración, la cantidad aproximada de glóbulos blancos y se escoge el sitio para
iniciar la observación de neutrófilos polinucleolares. Se coloca una gota de aceite
de inmersión y se enfoca a un aumento de 100x.
2. ANALISIS DE LA CROMATINA SEXUAL EN CELULAS DE LA MUCOSA
BUCAL
PROCEDIMIENTO 1 (Descailleaux, 1979)
1. Obtener un raspado de la mucosa bucal y realizar un frotis sobre una lámina limpia
seca y debidamente rotulada.
2. Inmediatamente sumergir las láminas en un recipiente que contenga alcohol
absoluto 20 minutos mínimo a temperatura ambiente.
3. Sumergir las láminas en un frasco coplin que contenga HCl 1N calentando a 60°
en baño maría durante 10 minutos. Lavar luego las láminas con agua de caño y
secar a estufa a 37 ° C.
4. Colorear las láminas con fucsina por un tiempo de 15 minutos.
5. Lavar las láminas con agua destilada.
6. Decolorar las láminas en un recipiente que contenga alcohol al 70% por 10
minutos agitando la lámina suavemente.
7. Lavar las láminas con agua destilada y secar a estufa a 37 °C.
8. Observación microscópica.
PROCEDIMIENTO 2 (De Azevedo, 1973)
1. Obtener un raspado de la mucosa bucal y realizar un frotis sobre una lámina porta
objeto.
2. Fijar inmediatamente en alcohol-éter de 30 a 24 horas.
3. Hidratar con pasajes de alcohol 70% y 50% dos minutos cada uno.
4. Colorear durante 30 minutos con una solución acuosa de violeta de cresilo 1%.
5. Deshidratar en alcohol de 95% (Dos baños de dos minutos), en alcohol absoluto
(2 pasajes rápidos), diafanizar en xilol (2 pasajes de 5 minutos) y montar en
bálsamo de Canadá.
6. Observación microscópica.
PROCEDIMIENTO 3 (Stine, 1973)
1. Obtener un raspado de la mucosa bucal y realizar una extensión celular.
2. Inmediatamente sumergir en éter etílico-alcohol etílico 1:1.
3. Remover la placa de la solución e incluirla en alcohol al 95% por espacio de 2
horas para la fijación.
4. Después de la fijación, incluir las láminas en agua destilada por 5 minutos.
5. Colorear con violeta de cresilo por 7 minutos.
6. Sumergir las láminas en alcohol al 95% por 4 minutos.
7. Sumergir las láminas en alcohol absoluto por 5 minutos.
8. Sumergir las láminas en xileno por 15 minutos.
9. Secar y observar al microscopio.
PROCEDIMIENTO 4. (CÁRDENAS & GALLARDO, 2012)
Reactivos:
3 gr. Fucsina básica 50 ml Alcohol éter 96%
100 ml Alcohol etílico 100 ml Éter etílico
90 ml. Fenol (Extra puro al 5%) 100 cc Agua destilada
10 ml Ácido acético glacial QP 10 ml Formal al 40 %
PROCEDIMIENTO
1. Hacer un suave raspado, con el borde de una lámina o bajalengua en la zona de
los carrillos y realizar una extensión en un portaobjeto.
2. Fijar en alcohol éter por 10 minutos (puede extenderse a 24 horas).
3. Secar las láminas.
4. Colorear con carbol Fucsina por 7 a 8 minutos.
5. Eliminar el exceso de colorante sumergiendo las láminas en un Kopling
conteniendo alcohol de 96% por 10 a 12 minutos.
6. Secar las láminas.
7. Observar al microscopio con objetivos de 10X y 100X.
Nota: Contar corpúsculos de Barr en 100 células, no considerar las que tienen gránulos,
melladuras, muescas, ni sobrepuestas. Sacar el porcentaje.
IV. RESULTADOS
ANALISIS DE LA CROMATINA SEXUAL EN CELULAS DE LA MUCOSA
BUCAL (De la Torre Navarro et al; 2017)
En el proceso de transcripción de los mamíferos hembras, solo un cromosoma realiza tal
función debido a que se inactiva uno de los dos. Este cromosoma X inactivo (Xi) se
caracteriza por ser rápidamente observado durante la interfase de la célula ya que este
nunca se descondensa por completo, en cambio se apreciará como una mancha densa en
el interior del núcleo, la cual se diferenciarán en micronúcleos o nucléolos debido a la
propiedad de la heterocromatina para unirse especialmente a las fibras de la lámina
nuclear. A este cromosoma Xi se le llama Corpúsculo de Barr, los cuales se estudia en
células somáticas, por ejemplo: en neuronas, células epiteliales y leucocitos
polimorfonucleares: el epitelio de la mucosa bucal es el tejido más adecuado para la
demostración de la cromatina sexual.
Figura 1: Corpúsculo de Barr observado en una célula masculina (Izquierda) y
en una femenina (derecha) Corpúsculo
de Barr
Figura 2: Células de la mucosa epitelial sin teñir, T1 a 40X y T2 a 100X en contraste
con las células teñidas, tan solo se puede observar la membrana celular y el núcleo en
el centro
En los resultados obtenidos se observó el corpúsculo dentro del núcleo en las células
epiteliales de la mucosa bucal, las cuales las podemos ver en las imágenes 3, 4 y 5; las
cuales aparecen más intensamente teñido que el resto de los cromosomas por la calidad
de la heterocromatina el cual se encontrara inactivado, solo durante los primeros 16 días
de gestación propiamente en humanos, ambos cromosomas X están activos.
Figura 3: Células epiteliales teñidos con colorante Wright B1 trío de células
observadas con el objetivo de 40X. B2 cúmulo de células epiteliales con un aumento de
100X.
Por otra parte, cuando el individuo presenta una formación cromosómica anormal, en la
que está incluido el Xi supernumerarios, se observaran anomalías fenotípicas; por
ejemplo: Síndrome de Klinefelter, a pesar de que todos ellos están inactivados formando
cuerpos de Barr unidos a la lámina en el córtex nuclear. Esto los podemos observar en la
figura 5.
Figura 4: B3. Célula epitelial con presencia de corpúsculo de Barr imperceptible por la
impregnación de tinte; B4. Edición de la imagen y acercamiento al núcleo de la célula
mostrando el corpúsculo de Barr (círculo rojo) dentro del él y en la periferia se observa RE, y
un micronúcleo.
Figura 5: Corpúsculo de Barr encontrado más de una vez en una misma célula
provocando distintos síndromes en el humano.
En esta imagen, en la figura A se observa a la célula sin corpúsculo de Barr,
considerándose una célula normal de hombre con 46 cromosomas (XY); la imagen B se
encuentra una célula con un sólo corpúsculo de Barr, considerándose una célula normal
de mujer 56 cromosomas (XX); en la imagen C se aprecia dos corpúsculos, los cuales
provocan la trisomía en el cromosoma X (47 cromosomas, XXX); en la D se observa una
célula con tetrasomía X derivado de la aparición de tres corpúsculos de Barr (48
cromosomas, XXXX); en la imagen E se aprecia una célula con cuatro corpúsculos de
Barr (49 cromosomas, XXXXX) y por último en la imagen F se observarían las células
híbridas Humano-Hámster línea 8121 (con cromosomas humanos X inactivos).
Figura 6: B7. Acercamiento de célula epitelial bucal mostrando un núcleo principal y en su periferia
encontrándose micronúcleos. La imagen de la derecha se presenta un blanco positivo que muestra el
desarrollo de micronúcleos en una célula
Finalmente, se encontraron diversas malformaciones en las células epiteliales,
confirmando así que se trataban de micronúcleos, ya que estos se teñían con la misma
intensidad que el núcleo principal. En la mitosis los micronúcleos son considerados
marcas anormales de la célula, lo cual incluye la ruptura cromosómica y cromatina
segregada. Diferentes laboratorios han reportado una frecuencia normal de aparición de
micronúcleos en células epiteliales de la mucosa bucal en humanos.
ANALISIS DE LA CROMATINA SEXUAL EN NEUTRÓFILOS EN LOS
POLIMORFONUCLEARES (Maya, 2008)
Normalmente, algunos neutrófilos de mujeres tienen, como se observa en la figura 9, un
apéndice, también conocido como cuerpo de Barr o cromatina sexual, de más o menos
1,5 µm de diámetro que está unido al resto del núcleo por un pequeño filamento que
representa el cromosoma X inactivo de la mujer. La posibilidad de observar los apéndices
cromosómicos disminuye cuando hay desviación izquierda y aumenta cuando han
desviación derecha. Los cuerpos de Barr no se observan en los neutrófilos de los hombres
normales, ni en los hombres con síndrome de feminización testicular, que
fenotípicamente son mujeres, pero genotípicamente son hombres (XY), ni en mujeres con
síndrome de Turner, en donde sólo hay un cromosoma X (X)
Figura 7: Polimorfonuclear neutrófilo
fagocitando un gametocito de Plasmodium vivax. Figura 8: Polimorfonuclear neutrófilo
Además, se observa eritrofagocitosis fagocitando pigmento malárico.
Figura 9: Cromatina de Barr en la sangre Figura 10: Cromatina de Barr en un hombre con
periférica de una mujer. Coloración de Wright síndrome de Klinefelter. Coloración de Wright
V. CONCLUSIONES
➢ Por los estudios realizados existen dos tipos de análisis que permiten observar al
corpúsculo de Barr, las cuales son los neutrófilos polinucleares y las células de
tejido bucal. Se debe de tener en cuenta que este cuerpo es una condensación de
alguno de los cromosomas X y que se presenta en las hembras de algunas especies
dado que en los machos este cromosoma se encuentra activo y por ello no es
visible.
➢ Así mismo la tinción de Wright es una técnica que permite una mejor
visualización de los corpúsculos, al ser estas muestras teñidas fuertemente, lo cual
indica mejor la zona en donde se encuentra el corpúsculo, pero se debe de tener
especial cuidado al momento de hacer la tinción puesto que satura la muestra y,
con ello, afectar la observación con el microscopio porque impiden el paso de luz.
➢ Por otra parte, la observación de esta estructura cromática, sirvió de mucha ayuda
al momento de poder caracterizar las enfermedades genéticas, entre ellas tenemos
la de Klinefelter y muchas más.
➢ En una célula debido a las anomalías fenotípicas se pudo observar más de un
corpúsculo de Barr de las células bucales como al mismo tiempo se puede
observar los diferentes neutrófilos polimorfonucleares.
VI. REFERENCIAS
Barriga Acero, S., & Bonilla Sánchez, R. (2015). CROMATINA SEXUAL "X" O
CORPÚSCULO DE BARR. En Citogenética humana: Manual de laboratorio
para BQD (págs. PP. 58-62). México: CUAUTITLAN.
Cárdenas F., Gallardo B. (2012). Examen de Cromatina Sexual en Mucosa Oral. Guía de
procedimiento. Ministerio de Salud. Instituto Nacional de Salud del Niño.
MINSA.
Dario. (29 de Noviembre de 2005). Obtenido de IDENTIFICACIÓN DE LA
CROMATINA SEXUAL : [Link]
[Link]
De Acevedo J.L., Da Costa S.O. (1973). Excercicios práticos de genética. Editora da
Universidade de Sao Paulo. 288 pp
Descailleaux J. et al. (1979). Manual de Técnicas de Citogénetica Humana y de
mamíferos. Imprenta Universidad Nacional Mayor de San Marcos. Lima.
De la Torre Navarro , A., Hernández Aguilera , J., Monjaraz Carrillo, N., Pineda Robles,
J., Ramírez Frausto , B., & Ramos Guerrero , M. (2017). StuDocu. Obtenido de
“Cromatina sexual X en células de la mucosa bucal de humano”:
[Link]
celular/r5-cromatina-sexual-x-en-celulas-de-la-mucosa-bucal-de-
humano/2875451
Klug WS. (2006). Conceptos de genética, 8a Edición. Editorial Pearson. España. pp. 199,
200.
LAZO, J. D. (2021). ESTUDIO DE LA CROMATINA SEXUAL. En CITOGENETICA:
MANUAL DE GUIAS DE LABORATORIO (págs. pp.6-8). Universidad
Continental.
Martínez Medina , M., & Flores Hernández, J. (31 de Agosto de 2017). Obtenido de
Corpúsculo de Barr:
[Link]
ulo_de_barr.pdf
Maya, G. C. (2008). Utilidad del extendido de sangre periférica:los leucocitos. Medicina
& Laboratorio, Volumen 14, Números 9-10.
MUÑOZ M. MORÓN C. (2005). MANUAL DE PROCEDIMIENTOS DE
LABORATORIO EN TÉCNICAS BÁSICAS DE HEMATOLOGÍA.
MINISTERIO DE SALUD INSTITUTO NACIONAL DE SALUD CENTRO
NACIONAL DE SALUD PÚBLICA. LIMA.
Stine G. (1973). LABORATORY EXERCISES IN GENETICS, Macmillan. Co., New
York. 287pp.
