DIAPOSITIVA 1

Buenos días profesor Enrique y compañeros

Mi nombre es Adriana Vanesa Murcia Borda y el seminario de hoy hablará de cromatografía.

DIAPOSITIVA 2. INDICE

Tocaremos los siguientes temas en el orden a mencionar.

Primero, qué es y en qué consiste la cromatografía

Segundo, tipos de cromatografia: puede ser de placa, preparativa, centrifuga, bidimensional y de

columna

Tecero, su Operatividad, es decir qué equipos se emplean en su ejecución

Cuarto, Desarrollo de las mismas

Quinto, Detección de muestras, haciendo énfasis en la identificación de la fase estacionaria

Sexto y por último, Aplicaciones y usos dentro y fuera de la industria de estos 5 tipos de
cromatografías.

DIAPOSITIVA 3. CROMATOGRAFIA historia

Haré un pequeño paréntesis para hablar un poquito de la historia de la cromatografia

LEER EN PPT

En 1944 se logró separar mezclas complejas de aminoácidos en papel, lo cual fue premiados con
el Nobel.

DIAPOSITIVA 4. CROMATOGRAFIA

Introduciré de manera general el tema para posteriormente centrarnos en cada uno de los tipos
de cromatografías y las generalidades en el orden mencionado en el índice.

Bien,

La cromatografía es una técnica empleada no solo para separar los componentes de una mezcla,
sino también como criterio de pureza e identificación bajo circunstancias a estudiar. Esta, se basa
en el principio general de distribución de un compuesto entre dos fases, una fija y una móvil.

DIAPOSITIVA 5. GIF

El Galagovsky nos dice que se la puede ver como la remoción selectiva de los componentes de una
mezcla por acción de la fase móvil que fluye a través de la fase estacionaria

DIAPOSITIVA 3. TIPOS

Ahora, a grandes rasgos, la cromatografía de placa también conocida como de capa delgada
consiste en una placa inmersa verticalmente en una fase móvil.
La preparativa refiere a la separación de los componentes de una mezcla para su posterior
procesamiento o purificación.

La cromatografia centrifuga es también preparativa, se usa una centrifugadora

La cromatografía bidimensional es el proceso por el que se obliga a los componentes a emigrar

primero en una dirección, y luego en otra.

La cromatografía de columna es usada para aislar un único compuesto químico de una mezcla.

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¿Qué es?
La CCF es una técnica analítica que tiene como objetivo el análisis de una mezcla de componentes.
¿En qué consiste la fase estacionaria?
En la cromatografía en capa fina (CCF) la fase estacionaria consiste en una capa delgada de un
adsorbente (como por ejemplo gel de sílice, alúmina o celulosa) depositada sobre un soporte
plano como una placa de vidrio, o una lámina de aluminio o de plástico.

DIAPOSITIVA 5
DESARROLLO Y OPERATIVIDAD
• La CCF o CPD es una técnica estándar en el laboratorio de química orgánica.
• Una placa de CCF es una lámina de vidrio, metal o plástico recubierta con una capa
delgada de un sólido adsorbente (gel de sílice o alúmina).

PROCEDIMIENTO CROMATOGRAFIA EN CAPA DELGADA

Se deposita una pequeña cantidad de la muestra problema en disolución en un punto en la parte

inferior de la placa. Entonces la placa se introduce en una cubeta cromatográfica, de forma que
sólo la parte inferior de la placa queda sumergida en el líquido. Este líquido o eluyente es la fase
móvil y asciende por la placa de CCF por capilaridad.

En principio, los componentes se diferenciarán en solubilidad y en la fuerza de su adsorción, de

forma que unos componentes se desplazarán más que otros. Cuando el eluyente llega a la parte
superior de la placa, esta se saca de la cubeta, se seca, y los componentes separados de la
mezcla se visualizan

• Si los compuestos no son coloreados se pueden visibilizar sus manchas usando luz
ultravioleta o vapores o líquidos de yodo. [2]

DIAPOSITIVA 6
APLICACIONES EN INDUSTRIA
Dado que es un método bastante barato y rápido suele usarse separar, para determinar, y para
caracterizar diversos colores de los componentes en productos cosméticos.  Bien manejada
permite determinar la pureza e identificación de materias primas de numerosos medicamentos de
acuerdo a las especificaciones de la farmacopea. [2]  Pese a ser muy económica, fácil de ejecutar
y transportar una de sus desventajas es la limitada especificidad y la baja sensibilidad en
comparación con otras técnicas analíticas. [3]
DIAPOSITIVA 7. PREPARATIVA
¿Qué es?
Es un proceso o una técnica de purificación cualitativa.
Se denomina método preparativo al momento en el que se recolectan las fracciones que se ha
separado tras la aplicación del método cromatográfico. Cuando no se recolectan sino
simplemente se analizan, se denomina método analítico y este sí es cuantitativo. [1]

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DESARROLLO Y AFINIDAD
Aquí se tienen en cuenta procesos previos de síntesis o extracción. Esta cromatografia se basa
en el equilibrio de las dos fases, estacionaria y móvil, que ira filtrando el paso de las fracciones.
Basándose en tal equilibrio se llega a la afinidad, se tienen componentes polares compatibles o
miscibles con fases polares, y componentes no polares compatibles con otros no polares, de ahí
que se use una mezcla de disolventes para poder llevar a cabo la separación disminuyendo o
aumentando la polaridad. Teniendo en cuenta que componentes polares nunca vana estar cerca
de componentes no polares

Diapositiva 9
Bueno, retomando un poco, se denomina método preparativo al momento en el que se
recolectan las fracciones que se ha separado tras la aplicación del método cromatográfico.
Cuando no se recolectan sino simplemente se analizan, se denomina método analítico.
El Galagovsky nos dice que:
Cuando se tienen menos de 300 mg de muestra y quieren separarse por cromatografía de
adsorción, puede emplearse una cromatografía en capa preparativa. Una vez elegido el
adsorbente, deberá recurrirse a la C.C.D. para la elección del solvente apropiado a emplear en la
escala preparativa. [1]

DIAPOSITIVA NO NOMBRADA APLICACIONES 10

Dentro de las diferentes modalidades cromatográficas, en los últimos 40 años ha emergido con
fuerza la cromatografía preparativa. Fundamentalmente en el campo industrial: purificación de
biomoléculas, en el rango de miligramos Y para moléculas sintéticas en el de 5 a 50 gramos. La
industria farmacéutica hace un uso extensivo de esta técnica, para la purificación de biomoléculas,
péptidos, proteínas, anticuerpos, etc.

Diapositiva 10. CROMATOGRAFIA DE PARTICION

 ¿Qué es?
La Cromatografía de Partición Centrífuga es una técnica cromatográfica líquido-líquido. Como ya
lo mencionamos, esta se basa en
en las características de solubilidad relativa de los solutos entre la fase móvil y una fase
estacionaria de un líquido no polar. La fase líquida se impregna a un soporte inerte de
sílice.
El Cronógrafo de Partición Centrífuga Rápida (FCPC), que mide el tiempo, funciona basándose en
los principios de la cromatografía de partición liquido-líquido: dos fases líquidas inmiscibles se
mezclan para formar un sistema bifásico y se separan múltiples veces. Los solutos individuales
se aíslan en base a los diferentes coeficientes de reparto de cada compuesto en este sistema de
doble fase. El coeficiente de reparto es el cociente o razón entre las concentraciones de esa
sustancia en las dos fases de la mezcla formada por dos disolventes inmiscibles en equilibrio

DIAPOSITIVA 11. OPERATIVIDAD

La era moderna de CCC comenzó con el desarrollo de la centrífuga planetaria por, que se
introdujo por primera vez en 1966 como un tubo helicoidal cerrado que giraba sobre un eje
"planetario" como gira sobre un eje "solar". Y la cromatografía de partición centrífuga se introdujo
en Japón en 1982.
DIAPOSIYIVA 12. DESARROLLO
Las celdas de extracción constan de cuerpos huecos con entradas y salidas de conexión de líquido.
Las células se llenan primero con el líquido elegido para ser la fase estacionaria. En rotación, se
inicia el bombeo de la fase móvil, que ingresa a las celdas desde la entrada. Al entrar en la fase de
flujo de móviles se forman pequeñas gotas de acuerdo con la ley de Stokes, que describe la fuerza
de arrastre y fricción ejercida en objetos esféricos. Estas gotas caen a través de la fase
estacionaria, creando un área de interfaz alta, que se llama extracción. Al final de las células, estas
gotas se unen debido a la tensión superficial, que se denomina sedimentación.

DIAPOSITIVA 13. APLICACIONES

La cromatografía de partición centrífuga se ha utilizado ampliamente para el aislamiento y

purificación de productos naturales durante 40 años. Debido a la capacidad de obtener una
selectividad muy alta y la capacidad de tolerar muestras que contienen materia particulada,
es posible trabajar con extractos directos
de biomasa, a diferencia de la cromatografía líquida tradicional, donde las impurezas degradan
la fase estacionaria Sólida, haciendo imposible la separación. [5]
Cromatografía de partición centrífuga es un método optimo y asequible para la
producción de cannabidiol puro. [6]

DIAPOSIYIVA 14. BIDIMENSIONAL

La primera aplicación del método cromatográfico bidimensional a la cromatografía de

papel fue reportada en 1944 por Consden, Gordon y Marti, Los ganadores del nobel que
les mencione al principio.

Es un procedimiento en el que todos los componentes separados de la muestra, o

parte de ellos, se someten a una etapa adicional de separación.
En cromatografía en plano, cromatografía bidimensional es el proceso por el que se obliga a los
componentes a emigrar primero en una dirección, y seguidamente en otra, en ángulo recto con
la primera. Las dos eluciones se llevan a cabo con eluyentes diferentes. [5]

DIAPOSITIVA 15. DESARROLLO Y OPERATIVIDAD

• Como el principio de separación es el mismo que en una cromatografía en capa delgada

tradicional, la cromatografía en capa delgada bidimensional va a tener las mismas
consideraciones que su homologa en una sola dimensión o dirección. La elección de
solventes y el manejo y siembra de muestras se realizará de manera análoga que su
contraparte. [2]
• Si los compuestos no son coloreados se pueden visibilizar sus manchas usando luz
ultravioleta o vapores o líquidos de yodo. [8]

Cabe aclarar que esta técnica permite cambiar la solución eluyente cuando se realiza
la segunda elución, dando la posibilidad de alterar la capacidad de solvatación del
sistema y mejorando la capacidad de separación de muestras complejas. [7]

DIAPOSITIVA 16. USOS Y APLICACIONES

El poder de resolución del método en 2D tiene una gran aplicación, especialmente en las áreas
de la bioquímica, la biología, los productos naturales, los productos farmacéuticos y el análisis
medioambiental.
Otra de ventajas de las TLC bidimensionales es que son útiles para determinar si
su compuesto es estable en sílice o para muestras que contienen un
gran número de componentes. [7]
DIAPOSITIVA 17. LO QUE DICE AHÍ
Diapositiva 18. Lo que dice ahí
DIAPOSITIVA 19
Cromatografía en columna es una de las técnicas más útiles para purificar compuestos. Esta
técnica utiliza una fase estacionaria, que se embala en una columna, y una fase móvil que pasa
a través de la columna. Esta técnica aprovecha las diferencias de polaridad entre compuestos,
permitiendo que las moléculas suelen estar separado. [9]

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La cromatografía en columna utiliza una columna de vidrio vertical que se llena con un soporte
sólido adsorbente la muestra que se quiere separar se deposita en la parte superior de este
soporte. El resto de la columna se llena con el eluyente (disolvente que constituye la fase móvil)
que, por efecto de la gravedad, hace mover la muestra a través de la columna. Debido a que
cada uno de los componentes de una mezcla establecerá interacciones diferentes con la fase
estacionaria y la móvil, serán transportados a diferentes velocidades y se conseguirá su
separación.

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La polaridad del eluyente afecta las velocidades relativas con las que los diferentes componentes
de la mezcla se mueven en la columna. Un disolvente polar desplazará las moléculas, incluyendo
las más polares, rápidamente a través de la columna. Si el disolvente es muy polar la elución
será muy rápida y generalmente habrá poca separación de los componentes de la mezcla. Si por
el contrario el disolvente es muy apolar, no eluirán los compuestos de la columna. Por lo tanto,
la elección del eluyente es crucial para el éxito de la cromatografía en columna.

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LEER LO QUE HAY AHÍ

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Es utilizada en la industria farmacéutica en el análisis de fármacos, como la aspirina, el ibuprofeno,
y el paracetamol. Además de la identificación en la orina de agentes dopantes, como anfetaminas,
cocaína, LSD, cannabis, etc. [10]

MUCHAS GRACIAS POR SU ATENCIÓN