TALLER DE MICROBIOLOGIA

ARIEL JAVIER MERDANO MARTINEZ

ISMAEL DAVID VERGARA VILORIA

DOCENTE
HECTOR IVAN CONTRERAS MARTINEZ

MATERIA
MICROBIOLOGIA ACUATICA LABORATORIO L1

UNIVERSIDAD DE CORDOBA
FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
DEPARTAMENTO DE CIENCIAS ACUICOLAS
2020
1: ¿Cuál es la prueba rápida usada en laboratorio para discriminar entre
familia Micrococcaceae y genero Streptococcus?
R/:
la prueba rápida que se usa en el laboratorio para discriminar entre familia
Micrococcaceae y genero Streptococcus es la prueba de catalasa
2: ¿Cuál es el principio bioquímico de la prueba o ensayo que me permite
diferenciar entre familia Micrococcaceae y genero Streptococcus?
PRUEVA DE CATALAZA
Se usa con mucha frecuencia para diferenciar miembros de la familia
Micrococaceae de miembros de la familia Streptococcaceae. micrococcaceae •
Micrococcus • Staphylococcus
• Planococcus Streptococcaceae • Streptococcus • Pediococcus • Aerococcus •
Planococcus CATALASA + CATALASA –
ESTA PRUEVA SE REALIZA:
Con un asa o palillo de madera, transferir parte del centro de una colonia a la
superficie de un portaobjetos* Agregar 1 gota de Peróxido de Hidrógeno al 3% y
observar la producción de burbujas
TENDREMOS COMO RESULTADO:
La producción rápida y sostenida de burbujas o efervescencia constituye una
reacción positiva. Importante: Los eritrocitos poseen catalasa, por lo cual se debe
evitar tomar colonias de agar sangre para evitar falsos positivos.

3: ¿Cuál es el procedimiento usado para la identificación de Staphylococcus

aureus Coagulasa positivos a través de series bioquímicas?
R/:
Para la identificación de S. aureus es necesario utilizar algunas pruebas
bioquímicas y medios de cultivo especiales que permitan su fácil determinación.
Esta identificación se basa en las enzimas y las toxinas que produce el
microorganismo (Guadalupe Socorro, Zendejas-Manzo; 2014 Microbiología
general de Staphylococcus aureus: Generalidades, patogenicidad y métodos
de identificación)

El S. aureus coagula el plasma descalcificado debido a la producción de una

enzima conocida por estafilocoagulasa que actúa como un agente activo en la
coagulación capaz de convertir el fibrinógeno en fibrina. Existe una correlación
positiva entre la presencia de la misma y la virulencia del patógeno en
humanos. 11, 12

La enzima se encuentra presente en dos formas. 3

-. Coagulasa libre: Es una proteína extracelular, que se encuentra presente en
los filtrados de cultivos, la misma reacciona con el factor reactivo de la coagulasa
(FRC) presente en el plasma, para formar una sustancia similar a la trombina
(estafilotrombina), actúa indirectamente en la conversión del fibrinógeno en fibrina.
-. Coagulasa ligada: La coagulasa ligada o factor de aglutinación no está
presente en filtrado de cultivos. Convierte el fibrinógeno en fibrina insoluble de
forma directa sin intervención de los factores plasmáticos.

La función de la coagulasa in vivo no ha sido todavía aclarada y aún queda en el

campo especulativo, aunque está bien esclarecido, que esta enzima está
implicada en el desarrollo de los abscesos, mediante la formación de una capa de
fibrina alrededor de la lesión, lo que impide la localización y fagocitosis del agente
patógeno. 

Se identificaron otros factores que intervienen en la patogenicidad del mismo

mediante el mecanismo de la coagulación. La expresión de estos factores
empleando las técnicas de recombinación genética en microorganismos poco
patógenos como Lactococcus lactis, permitió conocer que los mismos se
encuentran directamente asociados a su patogenicidad.

Entre los más estudiados aparecen:

Proteína A de unión a la fibronectina (fnbA): tiene afinidad por el receptor de
las inmunoglobulinas con lo que evita de modo eficaz la eliminación inmunológica
mediada por anticuerpos, jugando un papel importante en las infecciones
endovasculares, incrementa la adherencia del S. aureus a los ligandos específicos
y por consiguiente la liberación de toxinas que causan la patología. 
Factor de unión celular A (clfA): Conocida como coagulasa ligada, se encuentra
en la superficie externa de los S. aureus. El 95 % de las cepas contiene este
factor, lo que permite diferenciarlos de otras especies del género. Este factor está
estrechamente ligado a infecciones como la endocarditis. 
Factor de unión al fibrinógeno extracelular (Efb): Es secretado por el germen,
se une a la cadena de fibrinógeno de forma divalente,  esta proteína, junto a otras,
median la adherencia con las proteínas del tejido hospedero como:
fibrinógeno/fibrina, vitronectina, fibronectina, y el colágeno. Recientemente se
identificó un Efb que interfiere con las plaquetas, no obstante, debe señalarse que
esta proteína aún no está bien caracterizada en los Staphylococcus provenientes
de aislamientos clínicos. 

4: ¿Cuál es el principio bioquímico de la prueba de Coagulasa, en la

identificación de Staphylococcus aureus Coagulasa positivo?
R/:
La coagulasa es un enzima capaz de desnaturalizar la fibrina del plasma. El
objetivo es buscar un factor de aglutinación de los microorganismos cuando estos
se mezclan con plasma. Esta prueba se utiliza para diferenciar microorganismos
del género Staphylococcus.
los resultados esperados para de Los Staphylococcus aureus siempre da positivo,
las demás especies no. Para obviar esta posible fuente de error, se recomienda
utilizar plasma en el cual se ha utilizado EDTA como anticoagulante.

8: ¿Qué géneros bacterianos pueden ser diferenciados mediante la prueba

de la catalasa?
R/:

La prueba de la catalasa es un método rápido y fácil para la diferenciación

de Streptococcus y Staphylococcus.

En esta prueba Todas las especies de Streptococcus son catalasa negativa

y Staphylococcus son catalasa positiva
9: Explique en qué consiste la prueba de la β-galactosidasa
R/:

se utilizan para determinar, en forma cualitativa, la presencia o ausencia de la

enzima beta galactosidasa, utilizando el reactivo o-nitrofenil-D-galactopiranósido
(ONPG); para poder diferenciar, de esta manera, entre los microorganismos con
reacción retardada a la lactosa de los lactosa negativos

10: Explique en qué consiste la prueba de la ureasa y que microorganismos

pueden ser identificados mediante esta prueba.

R/:

Determina la capacidad de un organismo de desdoblar la urea formando una

molécula de dióxido de carbono y dos moléculas de amoniaco por acción de la
enzima ureasa. Esta actividad enzimática es característica de todas las especies
de Proteus y se usa sobre todo para diferenciar este género de otras
enterobacterias que dan negativo o positivo retardado. Se cultiva el
microorganismo en slant en agar urea de Christensen. Este medio se
complementa después del autoclavado con 50 ml/l de urea. Ésta será degradada
por aquellos microorganismos capaces de producir la enzima ureasa. Esta
degradación produce amoniaco que hará variar el color del indicador de amarillo a
rojo, poniéndose así de manifiesto la actividad ureasa.
11: Esquematice un modelo de detección de Edwardsiella tarda basado en
series Bioquímicas, partiendo del aislamiento.
R/:

14. ¿Cuál es el fundamento de la prueba de oxidación-fermentación (O/F) y,

cual es la ¿Composición del medio de cultivo?
R/:
Fundamento: Las bacterias pueden utilizar los carbohidratos por la vía
fermentativa o por la vía oxidativa. Las bacterias anaerobias los fermentan; las
facultativas pueden fermentarlos o degradarlos oxidativa mente; las aerobias
estrictas sólo pueden oxidarlos.

Para detectar si las bacterias utilizan los carbohidratos por la vía oxidativa o
fermentativa se utiliza el agar OF, que contiene agar, peptona y azul de
bromotimol como indicador de pH. Inicialmente el medio es de color verde (pH 7,1)
y vira a amarillo cuando el medio se acidifica (pH de 6 a 7,6) producto de la
fermentación u oxidación del carbohidrato.

Procedimiento: para esta prueba se inoculan 2 tubos, ejemplo: si se quiere hacer

la prueba de OF glucosa, se inoculan dos tubos de OF glucosa; después de
inocular los tubos, a uno se le coloca un tapón de parafina y se rotula con la letra F
y al otro no se le añade parafina y se le coloca la letra O. El tubo que tiene la letra
F  mide la fermentación (en anaerobiosis porque tiene parafina) y el tubo con la
letra O mide la oxidación, no se coloca parafina, hay contacto con el oxígeno.

15/¿Cuál es la composición del medio Hierro-Lisina (LIA) y cuál es el

fundamento de la prueba?
R/:
El agar LIA (Lisina Hierro) es una prueba bioquímica utilizada para la identificación
de bacterias de la familia Enterobacteriaceae. Originalmente esta prueba era un
caldo que contenía peptonas, extracto de levadura, glucosa, L-lisina, púrpura de
bromocresol y agua destilada.

La prueba consiste básicamente en demostrar la presencia de la enzima lisina

descarboxilasa, capaz de reaccionar con el grupo carboxilo del aminoácido L-
lisina. También puede ocurrir una desaminación del aminoácido por la presencia
de la enzima lisina desaminasa.
Adicionalmente, la composición del medio permite evidenciar la capacidad de
algunos géneros bacterianos de producir sulfuro de hidrógeno. Finalmente,
también es posible observar la generación o no de gas en el medio.
17: parte del método de pruebas bioquímicas, ¿qué otros métodos son
usados en el laboratorio para la identificación de microrganismos? (Explique
detalladamente en que consiste cada uno).
R/:

18. Explique detallada mente que es un marcador molecular.

R/:
Un marcador genético o marcador molecular es un segmento de ADN con una
ubicación física identificable (locus) en un cromosoma y cuya herencia genética se
puede rastrear. Un marcador puede ser un gen, o puede ser alguna sección del
ADN sin función conocida.
19. Explique de qué manera puede ser usado un marcador molecular para la
identificación de un determinado microrganismo.
R/:
Esta sección describe las técnicas moleculares más importantes que se están
utilizando y desarrollando actualmente para evaluar la diversidad genética y para
estudiar la variación funcional. El Recuadro 73 describe cómo se extrae el ADN y
ARN del material biológico y su preparación para el análisis. Los atributos de los
marcadores moleculares más utilizados se describen en el Recuadro 74, y la toma
de muestras (aspecto sumamente importante de los estudios moleculares) en el
Recuadro 75. Los polimorfismos proteicos fueron los primeros marcadores
utilizados en estudios genéticos de ganado. Sin embargo, el número de loci
polimórficos que se pueden analizar, y el nivel de polimorfismos observados en
dichos loci suelen ser bajos, lo cual limita mucho su aplicación a estudios de
diversidad genética. Con el desarrollo de nuevas tecnologías, los polimorfismos
del ADN han pasado a ser los marcadores de elección en las encuestas de
variación genética basadas en datos moleculares (Recuadro 74). 3.1 Técnicas que
utilizan marcadores de ADN para evaluar la diversidad genética Marcadores de
ADN nuclear Existe un conjunto de marcadores ya disponibles para detectar
polimorfismos del ADN nuclear. En los estudios de diversidad genética, los
marcadores más utilizados son los microsatélites. Microsatélites Actualmente, los
microsatélites (Recuadro 74) son marcadores más populares en los estudios de
caracterización genética del ganado (Sunnucks, 2001). Su alta tasa de mutación y
naturaleza codominante permiten la estimación de la diversidad genética dentro y
entre razas, así como la mezcla genética entre razas incluso si están
estrechamente emparentadas.
19: Explique de qué manera puede ser usado un marcador molecular para la
identificación de un determinado microrganismo.
La tecnología de marcadores moleculares se está utilizando exitosamente en los
programas de biotecnología de palma de aceite. Por ejemplo, en estudios de
diversidad. Barcelos et al. (2002) encontraron que la divergencia genétic a entr e
E. guineensis y E. oleífera era muy baja y de la misma magnitud que la encontrada
entre miembros de E. oleífera. Estos resultad o s sugiriero n que , en término s
evolutivos, estas dos especies poseen un origen común y un genoma conservado
para el género Elaeis (Barcelos et al. 2002; Barcelos 1998). Dicha conclusión
resalta la importancia de llevar a cabo acciones para explorar la diversidad de E.
oleífera (Rey et al. 2003) y evidencia las posibilidades reales para incorporarla en
el acervo genético de E. guineensis. Mediante estudios de mapeo llevados a cabo
en el MPOB [Malaysian Palm Oil Board) se han generado tres mapa s de palma
de aceite. Se han identificados loci para el contenido de carotenos y
anormalidades clonales (Rajinder et al. 2001). Adicionalmente, está n en proceso
alguna s investigaciones para mapea r los loci que afectan el contenido de
tocoferoles y tocotrienoles. Por su parte, estudios llevados a cabo en el CIRAD
(Centre de Coopératíon Internationale en Recherche Agronomique pour le
Dévélopment, Francia), ha n mapeado la característica de grosor de cuezco (Sh)
empleand o AFLP y microsatélite s (Billotte et al. 2001b).
20: Explique qué es la sub unidad 16s del RNA ribosomal (RNAr 16s) y por
qué es de gran importancia para la identificación de bacterias
R/:
Es uno de los genes que codifican el ARN que constituyen con las proteínas de los
ribosomas procariontes (bacterias y arqueas). Es un gen presente a todos los
procariontes.

BIBLIOGRAFIA
 ARIAS. D. 2003. Asistencia para la identificación de marcadores
moleculares asociados con la resistencia al Complejo Pudrición de Cogollo
en palma de aceite (Elaeis guineensis Jacq.). Universidad d Pedagógica y
Tecnológica de Colombia. Tunja. 82p. Tesis de pregrado.

 BARCELOS. E.: AMBLARD. P.; BERTHAUD. J.: SEGUIN. M. 2002. Genetic

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(Brasü) v.37 no.8. p. 1105-1114.

 BARCELOS. E. 1998. Etud e de la diversit é génétiqu e d u genr e Elaeis

(E. oleífera (Kunth) Cortés et al E. guineensis Jacq.) par markeurs
moléculaires (RFLP et AFLP). Université Montpellier II, Francia. 137p. Tesis
PhD.

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Ferrand, N., Jordana, J., Laloe, D., Moazami-Goudarzi, K., Sanchez, A. y
Cañon, J. 2003. Genetic characterization of southwestern European bovine
breeds: a historical and biogeographical reassessment with a set of 16
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