FOSFATASA ALCALINA Liquiform Ref.

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Instrucciones de Uso

Finalidad . Sistema para determinación en modo cinético de la Metodología . Bowers y Mc Comb modificado.
Fosfatasa Alcalina en el suero.
Reactivos
[Solamente para uso diagnóstico in vitro]
1. 1 - Reactivo 1 - Conservar entre 2 - 8 ºC.
Principio . La fosfatasa alcalina (FALC) del suero en pH alcalino Contiene tampón pH 10,4, HEDTA 2,0 mmol/L, sulfato de zinco
hidrolisa el p-nitrofenilfosfato liberando p-nitrofenol y fosfato inorgánico, 1,2 mmol/L, acetato de magnesio 2,5 mmol/L, azida sódica 8 mmol/L.
según la reacción expuesta a continuación:
2. 2 - Reactivo 2 - Conservar entre 2 - 8 ºC.
FALC Contiene p-Nitrofenilfosfato ≥60 mmol/L y fenol ≥50 mmol/L.
p-Nitrofenilfosfato + H2O p-Nitrofenol + fosfato
Cuando almacenados en las condiciones indicadas, los reactivos no
abiertos son estables hasta la fecha de caducidad impresa em el rótulo.
La cantidad producida de p-nitrofenol, que tiene elevada absorbancia en
Durante el manejo, los reactivos están sujetos a contaminaciones de
405 nm, es directamente proporcional a la actividad enzimática de la
naturaleza química y microbiana que puedem provocar reducción de la
fosfatasa alcalina en la muestra.
estabilidad.
Características del sistema . El substrato p-Nitrofenil fosfato fue
seleccionado porque es prontamente hidrolisado por la fosfatasa alcalina.
Rastreabilidad del sistema - La absortividad molar del
p-Nitrofenol, producto de la reacción es usado como sistema de
El producto de la hidrólisis posee elevada absortividad molar, permitiendo
referencia para la calibración del ensaio.
utilizar pequeño volumen de muestra y corto tiempo de reacción, porque
utiliza un tampón transfosforilante que aumenta la velocidad del sistema.
Precauciones y cuidados especiales
El sistema se basa en el método de referencia de la AACC, que optimiza
todas las condiciones de la reacción, incluyendo temperatura, pH, Se deben aplicar cuidados habituales de seguridad en el manejo del
concentración de los reactivos y volumen fraccional de la muestra. Este reactivo.
método, con pequeñas modificaciones, está siendo considerado por
El Reactivo 1 contiene azida sódica, que es tóxica. Se debe tomar cuidado
varias organizaciones nacionales e internacionales, interesadas en
para evitar la ingestión y en caso de contacto con los ojos lavar
establecer un método de referencia para la fosfatasa alcalina.
inmediatamente con gran cantidad de agua y procurar auxilio médico. La
Las sustancias utilizadas en la reacción se encuentran distribuidas azida puede formar compuestos altamente explosivos con tuberías de
adecuadamente en dos reactivos, al objeto de ofrecer mayor estabilidad plomo y cobre. Así siendo, se deben utilizar grandes volúmenes de agua
en la forma líquida original y mantener las condiciones óptimas de la para deshacerse del reactivo.
reacción, de modo a permitir la utilización directa de los reactivos en
No utilizar el Reactivo de Trabajo cuando su absorbancia, medida contra
sistemas automáticos.
el agua en 405 nm, sea igual o mayor que 1,2 o cuando se muestre turbio
La metodología monorreactiva puede ser aplicada utilizando un Reactivo o con señales de contaminación.
de Trabajo estable por 30 días bajo refrigeración obteniéndose
desempeño adecuado incluso en situaciones de baja demanda de la Materiales necesarios y no suministrados
prueba. El sistema también permite preparar el volumen de Reactivo de
Trabajo necesario para solamente una medición de la actividad 1. Fotómetro con cubeta termostatizada capaz de medir con exactitud la
enzimática de la fosfatasa alcalina. absorbancia en 405 nm.
2. Pipetas para medir muestras y reactivos.
El sistema es sencillo y utiliza medidas en modo cinético continuado, 3. Cronómetro.
pudiendo ser fácilmente aplicado en ana-lizadores automáticos y
semiautomáticos capaces de medir absorbancia en 405 nm.
Muestra
Se debe crear una instrucción de trabajo que establezca procedimientos
adecuados para la recogida, preparación y almacenamiento de la
muestra. Subrayamos que los errores debidos a la muestra pueden ser
mucho más grandes que los errores acaecidos durante el procedimiento
analítico.

01 Español - Ref.: 79
La muestra de sangre debe ser obtenida después de como mínimo 8 El Reactivo de Trabajo contiene tampón pH 10,4, sulfato de zinco
horas en ayunas. 1,0 mmol/L, fenol ≥10 mmol/L, HEDTA 1,6 mmol/L, acetato de magnesio
Suero o plasma (heparina). La muestra es estable 7 días entre 2 - 8 ºC. 2,0 mmol/L, p-nitrofenil fosfato ≥12 mmol/L, azida sódica 6,4 mmol/L.
Cuando la muestra es almacenada a temperatura ambiente, se obtienen
resultados falsamente elevados.
Procedimiento
Como ninguna prueba conocida puede asegurar que muestras de sangre
no transmiten infecciones, todas deben ser consideradas como
1. En un tubo rotulado Prueba pipetear 1,0 mL del Reactivo de Trabajo.
potencialmente infectantes. Así siendo, al manejarlas se debe seguir las
normativas establecidas para bioseguridad. 2. Añadir 0,02 mL de la muestra, homogeneizar y transferir
inmediatamente para la cubeta termostatizada a 37±0,2 ºC. Esperar
Para deshacerse de los reactivos y el material biológico sugerimos aplicar 1 minuto.
las normativas locales, regionales o nacionales de protección ambiental.
3. Hacer la lectura de la absorbancia inicial (A1), disparando
Interferencias simultáneamente el cronómetro. Repetir la lectura después de 2 minutos
(A2).
Citrato, fluoruro, oxalato y EDTA son inhibidores de la actividad de la
fosfatasa alcalina porque forman complejos con el magnesio. Para evaluar la linealidad de la reacción verificar si las absorbancias
medidas en intervalos de 1 minuto son comparables.
Valores de Bilirrubina de hasta 32 mg/dL no interfieren en la reacción. Calcular el (∆A/minuto) restando A1 de A2 y dividiendo por 2.
Muestras ligeramente hemolisadas con hemoglobina de hasta 30 mg/dL
pueden ser toleradas, pero hemólisis más acentuadas no se deben Cálculos . Ver linealidad.
aceptar porque producen resultados falsamente disminuidos.
Es práctica habitual calcular los resultados de la actividad enzimática
Valores de Triglicéridos por encima de 1800 mg/dL producen resultados utilizando un factor obtenido en condiciones óptimas de reacción las que
falsamente elevados. incluyen:
Longitud de onda: 405 nm ± 0,2 nm.
Para evaluar la concentración aproximada de la hemoglobina en una Cubeta termostatizada a 37 ± 0,2 ºC con 1,0 cm de espesor de solución.
muestra hemolisada se puede proceder como expuesto a continuación: Ancho medio de banda ≤8 nm.
Diluir 0,05 mL de la muestra en 2,0 mL de NaCl 150 mmol/L (0,85%) y Luz espuria ≤0,1 %.
medir la absorbancia en 405 ó 415 nm, ajustando el cero con agua
desionizada o destilada. Como en la mayoría de las veces no es posible trabajar bajo estas
condiciones, las buenas prácticas de laboratorio recomiendan realizar la
Hemoglobina(mg/dL) ≅ Absorbancia405 x 601 calibración del ensayo utilizando un calibrador de enzimas indicado por el
Hemoglobina(mg/dL) ≅ Absorbancia415 x 467 fabricante del reactivo. Labtest recomienda la línea Calibra para
calibración del sistema Fosfatase Alcalina Liquiform.
Preparo del reactivo de trabajo . El conjunto de un frasco de A2 - A1
Reactivo 1 y un frasco de Reactivo 2, permite preparar el Reactivo de
∆A Prueba =
Trabajo. Transferir el contenido de un frasco de Reactivo 2 a un frasco de 2
Reactivo 1 y homogeneizar por inversión. Apuntar la fecha de expiración.
Actividad de la Fosfatasa Alcalina = ∆A Prueba x 2764.
Estable por 5 días entre 15 - 25 ºC y 30 días entre 2 - 8 ºC, cuando no
ocurra contaminación química o bacteriana. Identificar el frasco del El factor 2764 fue calculado para las condiciones propuestas arriba.
Reactivo de Trabajo para evitar confusión con otros frascos del Recalcular el factor cuando sea efetuada cualquier modificación en uno
Reactivo 1. Para preservar el desempeño, el Reactivo de Trabajo debe de los parámetros utilizados para calcularlo.
permanecer fuera del frigorífico solamente el tiempo necesario para Ver método para cálculo del factor.
obtenerse el volumen a ser utilizado. Evitar exposición a la luz solar
directa. Ejemplo
Opcionalmente, se puede preparar menos cantidad del Reactivo de A1 Prueba = 0,610
Trabajo utilizando la proporción 4 volúmenes del Reactivo 1 y 1 (un)
volumen del Reactivo 2. A2 Prueba = 0,660

Ejemplo: Para preparar 1 mL del Reactivo de Trabajo mezsclar 0,8 mL del 0,660 - 0,610
Reactivo 1 com 0,2 mL del Reactivo 2. Para evaluar la linealidad de la ∆A/minuto = = 0,025
reacción verificar se las absorbancias medidas en intervalos de 1 minuto 2
son comparables.
Fosfatasa Alcalina (U/L) a 37 ºC = 0,025 x 2764 = 69

02 Español - Ref.: 79
Método para cálculo del factor 37 ºC
Adultos (U/L) 27 - 100
VT x 1000 Niños* (U/L) 75 - 390
Factor =
ε x VA x d *(Incluyendo adolescentes de hasta 16 años)
VT = volumen total del ensayo (1,02 mL) Conversión de U/L para Unidades SI: µkat/L = U/L x 0,0167
VA = volumen de la muestra (0,02 mL)
1000 = conversión de U/mL para U/L
d = espesor de la solución (1 cm) Temperatura . La tabla expuesta a continuación permite convertir la
ε = absortividad milimolar del p-nitrofenol en 405 nm (18,45) actividad medida a una determinada temperatura para el valor que sería
obtenido en la medición realizada a otras temperaturas.
Ejemplo
Temperatura Factores de corrección de la temperatura
1,02 x 1000
Factor = = 2764 de trabajo
25 ºC 30 ºC 37 ºC
18,45 x 0,02 x 1 25 ºC 1,45 2,08
30 ºC 0,69 1,43
Calibración 37 ºC 0,48 0,70

Calibraciones manuales
Usar calibradores de la línea Calibra - Labtest. Ejemplo: la actividad enzimática obtenida a 37 ºC debe ser multiplicada
por 0,70 para obtenerse la actividad a 30 ºC o por 0,48 para obtenerse la
Intervalo de calibraciones actividad a 25 ºC.
Calibración en 2 ó 3 puntos al cambiar de lote;
Calibración en 2 ó 3 puntos cuando el control interno de calidad lo indique. 7
Características del desempeño
Sistemas automáticos
Blanco de reactivos: agua desionizada o solución de cloruro de sodio Exactitud . En 2 muestras con concentraciones de Fosfatasa Alcalina
150 mmol/L (0,85%); iguales a 59 y 200 U/L se añadieron cantidades diferentes del analito
Usar calibradores de la línea Calibra - Labtest. obteniéndose recuperación de entre 94 y 102%.

Intervalo de calibraciones Especificidad . El método propuesto fue comparado con método

Calibración en 2 ó 3 puntos al cambiar de lote; similar utilizando 40 muestras de suero con valores situados entre
Calibración en 2 ó 3 puntos cuando el control interno de calidad lo indique.
47 y 707 U/L. La evaluación estadística de los resultados resultó en la
ecuación de la regresión: y = 1,091x-10,926 y un coeficiente de
Linealidad correlación (r) igual a 0,999. El error sistemático total (constante y
proporcional) verificado en el nivel de decisión (100 U/L), fue igual a 2 U/L
La reacción es lineal hasta 1500 U/L. Para valores mayores, diluir la
ó 2,0%. Como las muestras fueron seleccionadas aleatoriamente en
muestra 1:10 con NaCl 150 mmol/L (0,1 mL de suero + 0,9 mL de NaCl
pacientes de ambulatorio y pacientes hospitalizados, se puede inferir que
150 mmol/L), repetir la determinación y multiplicar el resultado obtenido
el método tiene una especificidad metodológica adecuada.
por 10.
Sugerimos la verificación de la linealidad metodológica y fotométrica
como mínimo a cada seis meses, utilizando muestras con actividades de Repetitividad - Imprecisión intra-ensayo
hasta 1500 U/L.
N Media DP CV (%)
Control interno de la calidad . El laboratorio debe mantener un Muestra 1 10 92 1,1 1,2
programa de control interno de calidad que defina con claridad los Muestra 2 10 174 1,6 0,9
reglamentos aplicables, objetivos, procedimientos, criterios para Muestra 3 10 451 2,4 0,5
especificaciones de la calidad y límites de tolerancia, acciones
correctivas y registro de las actividades. Controles deben ser utilizados Reproducibilidad - Imprecisión Total
para evaluar la imprecisión e desviaciones de calibración. Se sugiere que
N Media DP CV (%)
las especificaciones para el coeficiente de variación máximo y el error
5,6
total sean basados en los componentes de la variación biológica (VB) . Muestra 1 10 89 2,0 2,2
Muestra 2 10 175 2,8 1,6
Intervalo de referencia . Estos valores pueden ser usados tan Muestra 3 10 447 6,3 1,4
solamente a modo de orientación.
Se recomienda que cada laboratorio establezca su propia banda de Sensibilidad metodológica . Una muestra proteica que no
valores de referencia de la población atendida. contenía fosfatasa alcalina fue utilizada para calcular el límite de
detección del ensayo, habiendo sido encontrado un valor igual a 2,4 U/L,
equivalente a la media de 20 ensayos más dos desviaciones estándar.

03 Español - Ref.: 79
Efectos de la dilución de la matriz . Una muestra con valor Referencias
igual a 850 U/L fue utilizada para evaluar la respuesta del sistema en las
diluciones de la matriz con NaCl 150 mmol/L. Usando factores de dilución 1. IFCC Methods for the measurement of catalytic concentration of
que variaron de 2 a 8 se encontraron recuperaciones de entre 101 y enzymes-Part 5, IFCC method for Alkaline Phosphatase. J Clin Chem
104%. Clin Biochem 1983;21:731-47.

2. McComb RB, Bowers GN, Upretti A. Clin Chem 1981;27:135-41.

Significado clinico . La fosfatasa alcalina es producida por muchos
tejidos, principalmente por los huesos, hígado, intestinos y placenta, y es 3. Tietz NW, Burtis CA, Ducan P et al. Clin Chem 1983;29: 751-761.
excretada por la bilis. El dosaje sérico de esta enzima es particularmente
útil en la investigación de las enfermedades hepatobiliares y óseas. 4. Tonks DB Quality Control in Clinical Laboratories, Warner-Chilcott
Laboratories, Diagnostic Reagents Division, Scarborough, Canada,
Niveles elevados de fosfatasa alcalina aparecen en pacientes con 1972.
enfermedades óseas caracterizadas por el aumento de la actividad
5. http://www.westgard.com/biodatabase1.htm (acceso en 25/10/07).
osteoblástica como la osteítis deformante, raquitismo, osteomalacia,
hiperparatiroidismo, metástasis ósea, sarcoma osteogénico y 6. Sociedad Española de Bioquímica Clínica y Patología Molecular,
enfermedad de Paget. B a s e d e D a t o s d e Va r i a c i ó n B i o l ó g i c a . D i s p o n í v e l
em:<http://www.seqc.es/ar ticle/ar ticleview/330/1/170>
Niveles elevados de fosfatasa alcalina se dan también en pacientes con
(acceso en 04/2006).
enfermedades obstructivas de las vías biliares, metástasis hepáticas,
dolencias granulomatosas y en la cirrosis hepática. En las enfermedades 7. Labtest: Dados de Arquivo.
hepatocelulares como la hepatitis viral aguda, en general se observa un
ligero aumento de la enzima.
Presentación
Niveles disminuidos de la fosfatasa alcalina se encuentran en la
desnutrición crónica, en la hipofosfatasemia y, ocasionalmente, en el Producto Referencia Contenido
hipotireoidismo y anemia perniciosa. Fosfatasa Alcalina 1 4 x 24 mL
79-4/30
Liquiform 2 4 x 6 mL
Observaciones
Están disponibles las aplicaciones para sistemas automáticos.
1. La limpieza y secado adecuadas del material utilizado son factores
fundamentales para la estabilidad de los reactivos y obtención de El número de pruebas en aplicaciones automáticas depende de los
resultados correctos. parâmetros de programación.

2. El laboratorio clínico tiene como objetivo fornecer resultados exactos Informaciones al consumidor
y precisos. La utilización de agua de calidad inadecuada es una causa
potencial de errores analíticos. El agua desionizada o destilada utilizada [Términos y Condiciones de Garantia]
en el laboratorio debe tener la calidad adecuada para cada aplicación. Así,
para preparar reactivos y usar en las mediciones y para su uso en A Labtest Diagnóstica garantiza la correcta performance del equipo
enjuague final de la vidrería, debe tener resistividad ≥1 megaohm.cm o hasta su fecha de vencimento se ha sido conservado de acuerdo a las
conductividad ≤1 microsiemens/cm y concentración de silicatos instrucciones que figuram en el rótulo.
<0,1 mg/L. Cuando la columna desionizadora está con su capacidad
saturada, se produce agua alcalina con liberación de varios iones,
silicatos y sustancias con gran poder de oxidación o reducción que
deterioran los reactivos en pocos días o incluso horas, alterando los
resultados de modo imprevisible. Por lo cual es fundamental establecer Labtest Diagnóstica S.A.
un programa de control de la calidad del agua. CNPJ: 16.516.296 / 0001 - 38
Av. Paulo Ferreira da Costa, 600 - Vista Alegre - CEP 33400-000
3. Como ocurre en toda medición de la actividad en-zimática, la rigurosa Lagoa Santa . Minas Gerais Brasil - www.labtest.com.br
observación del tiempo y de la temperatura de incubación es de gran Servicio de Apoyo al Consumidor e-mail: [email protected]
importancia para la calidad de los resultados obtenidos.

4. Para una revisión de las fuentes fisiopatológicas y medicamentosas Revisión: Mayo, 2011 Copyright by Labtest Diagnóstica S.A.
Ref.: 280113 Reproducción bajo previa autorización
de interferencia en los resultados y en la metodología, se sugiere
consultar Young DS, Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests, 3ª
edición, Washington: AACC Press, 1990.

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05 Español - Ref.: 79
 Símbolos utilizados com produtos diagnósticos in vitro
Símbolos usados con productos diagnósticos in vitro
Symbols used with ivd devices

Conteúdo suficiente para < n > testes Risco biológico

Contenido suficiente para < n > tests Riesgo biológico
Contains sufficient for < n > tests Biological risk

Data limite de utilização (aaaa-mm-dd ou mm/aaaa) Marca CE

Estable hasta (aaaa-mm-dd o mm/aaaa) Marcado CE
Use by (yyyy-mm-dd or mm/yyyy) CE Mark

Material Calibrador Tóxico

Material Calibrador Tóxico
Calibrator Material Poison

Material Calibrador Reagente

Material Calibrador Reactivo
Calibrator Material Reagent

Limite de temperatura (conservar a) Fabricado por

Temperatura limite (conservar a) Elaborado por
Temperature limitation (store at) Manufactured by

Representante Autorizado na Comunidade Europeia Número do lote

Representante autorizado en la Comunidad Europea Denominación de lote
Authorized Representative in the European Community Batch code

Consultar instruções de uso Controle

Consultar instrucciones de uso Control
Consult instructions for use Control

Número do catálogo Controle negativo

Número de catálogo Control negativo
Catalog Number Negative control

Adições ou alterações significativas Controle positivo

Cambios o suplementos significativos Control positivo
Significant additions or changes Positive control

Produto diagnóstico in vitro Controle

Dispositivo de diagnóstico in vitro Control
In vitro diagnostic device Control

Liofilizado Corrosivo
Liofilizado Corrosivo
Lyophilized Corrosive

Período após abertura

Período post-abertura Ref.: 201112
Period after-opening

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