UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERIA

FACULTAD DE INGENIERÍA AMBIENTAL

COLORACION DE BACTERIAS

SEGUNDO LABORATORIO DEL

CURSO MICROBIOLOGÍA –
SA323K

Fernandez Mendoza Araceli – 20161296C

DOCENTE: ING. JORGE GILBERTO

TELLO CEBREROS

Lima, Perú
2018
 INDICE

RESUMEN.......................................................................................................1

INTRODUCCION……………………………………………………………………2

1. Objetivos………………………………………………………………….3
1.1 Objetivo general……………………………………………………..3
1.2 Objetivos específicos………………………………………………..3
2. Marco teórico……………………………………………………………...3
3. Resultados……………………………………………………………….13
3.1 Procedimiento A…………………………………………………….13
3.2 Procedimiento B ……………………………………………………14
3.3 Procedimiento C…………………………………………………… 15
4. Discusión de resultados………………………………………………..19
4.1 Procedimiento A…………………………………………………….19
4.2 Procedimiento B ………………………………………………… 21
4.3 Procedimiento C…………………………………………………… 21
5. Conclusiones…………………………………………………………….22
5.1 Procedimiento A…………………………………………………….22
5.2 Procedimiento B ……………………………………………………24
5.3 Procedimiento C…………………………………………………….24
6. Recomendaciones………………………………………………………25
6.1 Procedimiento A…………………………………………………….25
6.2 Procedimiento B…………………………………………………….26
6.3 Procedimiento C…………………………………………………….26
7. Cuestionario……………………………………………………………...26
8. Fuentes de información…………………………………………………35
9. Anexos…………………………………………………………………….36
10. Apéndice………………………………………………………………….41
10.1 Diagrama de flujos
10.2 Datos originales y observaciones
10.3 Fotografías del laboratorio
 UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERÍA
Facultad de Ingeniería Ambiental

RESUMEN

El laboratorio siguiente es de la coloración de bacterias, la tinción de Gram es una

prueba útil y de fácil realización que permite diferenciar las dos principales clases de
bacterias con el objeto de instaurar un tratamiento. Se colocan sobre un portaobjetos
bacterias fijadas por calor o secadas de algún otro modo y se tiñen con cristal violeta a
continuación, se añade una solución yodada que actúa como mordiente y luego se
realiza un lavado con un agente decolorante (acetona) y agua con el fin de eliminar el
colorante no fijado. Posteriormente se cubre con un colorante de contraste, safranina,
para teñir de rojo las células que no hayan retenido el cristal violeta. Todo este
proceso tiene una duración inferior a 10 minutos.

Los resultados obtenidos por cada grupo, fueron apuntados, analizados y luego
repartidos por los estudiantes.

MICROBIOLOGÍA SANITARIA 1
 UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERÍA
Facultad de Ingeniería Ambiental

INTRODUCCION

La tinción de Gram es uno de los métodos de tinción más importantes en el laboratorio

bacteriológico y con el que el estudiante debe estar perfectamente familiarizado. Su
utilidad práctica es indiscutible y en el trabajo microscópico de rutina del Laboratorio
de Microbiología las referencias a la morfología celular bacteriana (cocos, bacilos,
positivos, negativos, etc.) se basan justamente en la tinción de GRAM. Esta tinción se
denominada así por el bacteriólogo danés Christian Gram, quien la desarrolló en 1844.
Sobre la base de su reacción a la tinción de Gram, las bacterias pueden dividirse en
dos grupos, Gram positivas y Gram negativas (en este caso, los términos positivo y
negativo no tiene nada que ver con carga eléctrico, sino simplemente designan dos
grupos morfológicos distintos de bacterias). Las bacterias Gram-positivas y Gram-
negativas tiñen de forma distinta debido a las diferencias constitutivas en la estructura
de sus paredes celulares

Las células Gram positivas, a causa de sus paredes celulares más espesas (tienen
más peptidoglicano y menos lípido), no son permeables al disolvente ya que éste
deshidrata la pared celular y cierra los poros, disminuyendo así el espacio entre las
moléculas y provocando que el de complejo cristal violeta-yodo quede atrapado dentro
de la pared celular .Para poner de manifiesto las células Gram negativas se utiliza una
coloración de contraste .Habitualmente es un colorante de color rojo, como la
safranina o la fucsina básica. Después de la coloración de contraste las células Gram
negativas son rojas, mientras que las Grampositivas permanecen azules.

El carácter de Gram positivo no es siempre un fenómeno del todo o nada. Algunos

organismos son más Gram positivos que otros y algunos son Gram-variables, es decir,
unas veces Gram positivos y otras Gram negativos

Es por eso que buscaremos en este laboratorio llevar a la practica el método Gram,
con los microorganismos (bacterias y hongos) cultivados en el primer laboratorio.

MICROBIOLOGÍA SANITARIA 2
 UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERÍA
Facultad de Ingeniería Ambiental

1. OBJETIVO

1.1 General:
Mostrar lo importante que es una tinción para la diferenciación de bacterias
basándose en las propiedades estructurales de la pared celular, aplicando el
mecanismo de la coloración de Gram, con microorganismos conocidos y
desconocidos.

1.2 Específicos:
- Analizar y comparar los resultados obtenidos en cada grupo.

2. MARCO TEÓRICO

o Tinción o coloración de bacterias

Los microorganismos excepto las algas, son por lo general incoloros y muy
ligeramente refractantes por lo tanto son difíciles de estudiar tal como se les
encuentra en la naturaleza. Para poder hacerlos visibles es necesario colorarlos o
teñirlas previamente antes de observarlos al microscopio. La coloración hace
resaltar también algunas características morfológicas que de otra manera no son
visibles por que las distintas partes de una célula tienen afinidad por diferentes
colorantes. Los colorantes más comunes son aquellos derivados de la anilina como
la fucsina, violeta de gencia, azul de metileno y otros.

La coloración se usa también para diferenciar a los organismos y parte de ellos que
de otra manera no son muy semejantes; el proceso se conoce entonces con el
nombre de diferenciación por coloración. La diferenciación por coloración se puede
hacer empleando un tinte policromado en cuyo caso algunos organismos o partes
de un mismo organismo retienen un color mientras que otro retiene otro color. Sin
embargo, la diferenciación de bacterias por coloración generalmente depende de la
habilidad de un organismo o parte de el de retener un colorante especifico después
de que ha sido tratado con un agente decolorante. Los pasos fundamentales para
hacer una diferenciación de bacterias por coloración son:

MICROBIOLOGÍA SANITARIA 3
 UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERÍA
Facultad de Ingeniería Ambiental

a. Coloración.
b. Decoloración.
c. Contra coloración.

2.1. Tipos de Tinción

 Tinción Simple: Utiliza un solo colorante.

 Tinción acidorresistente: Las bacterias acidorresistentes son las que retiene la
carbolficsina, aun cuando intente descolorarlas con una mezcla de alcohol y ácido
clorhídrico. Las bacterias acidorresistentes se tiñen de color rojo; el resto adquiere
el color del colorante de contraste en este caso el verde o azul.
 Tinción negativa: Este procedimiento consiste en la tinción de fondo con un
colorante ácido para dejar las células incoloras en contraste. Comúnmente se
utiliza el colorante negro llamado nigrusína.
 Tinción de los flagelos: Los flagelos son estructuras demasiado finas para poder
ser visibles en el microscopio de luz. Sin embargo, si se tratan con una
suspensión coloidal inestable de sales de ácidos tánico para formar un precipitado
denso en la pared celular y en los flagelos, se pueden poner de manifiesto su
presencia y disposición en las células.
 Tinción de la cápsula: La cápsula se pone de manifiesto mediante una
coloración negativa o una modificación de esta. Uno de los métodos de tinción de
la cápsula incluye el tratamiento de las bacterias con una solución caliente de
cristal violeta seguido por un lavado con una solución de sulfato de cobre. El
sulfato de cobre también imparte color al fondo y esto resulta en que la célula y el
fondo aparezcan teñido en color azul oscuro mientras la cápsula aparece de color
azul pálido.

 Tinción del núcleo: Los núcleos se pueden teñir por la tinción de Feulgen la cual
es específica para el ADN.

 Tinción de las esporas: Las esporas se observan de la manera más simple

como cuerpos refringentes intracelulares en suspensiones de bacterias sin teñir, la
parte de las esporas relativamente impermeable, las esporas comúnmente se
tiñen con verde de malaquita y carbolfucsina o carbolfucsina.

MICROBIOLOGÍA SANITARIA 4
 UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERÍA
Facultad de Ingeniería Ambiental
 Tinción de Giensa: El colorante se aplica a un frotis de sangre y se utiliza
cuando se sospeche de protozoos en la sangre para observar materias

2.2. Tinción Gram

Tipo de coloración de las bacterias que constituyen un carácter sistemático; según

tomen o no color, aplicando este método, se distinguen los grupos Gram positivos y
Gram negativos.

La tinción de Gram o coloración Gram es un tipo de tinción diferencial empleado en

microbiología para la visualización de bacterias, sobre todo en muestras clínicas.
Debe su nombre al bacteriólogo danés Christian Gram, que desarrolló la técnica en
1884. Se utiliza tanto para poder referirse a la morfología celular bacteriana como
para poder realizar una primera aproximación a la diferenciación bacteriana,
considerándose Bacteria Gram positiva a las bacterias que se visualizan de color
violeta y Bacteria Gram negativa a las que se visualizan de color rosa.

La base de la reacción diferencial de Gram es la estructura de la pared celular. Esta

técnica diferencial es una de las de uso más común en microbiología. El frote
bacteriano teñido se somete a las soluciones siguientes en el orden en que se
indica: cristal violeta, alcohol y safranina o alguna otra solución de contraste
conveniente.

2.3. Causas que alteran la tinción de Gram

 Edad de la bacteria.
 Errores del operador.
 Uso de antibióticos.

2.4. Bacterias resistentes a la tinción Gram

Las siguientes bacterias de naturaleza gram positiva, tiñen como gram negativas:

 Mycobacterias (están encapsuladas).

 Mycoplasmas (no tienen pared).
 Formas L (pérdida ocasional de la pared).

MICROBIOLOGÍA SANITARIA 5
 UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERÍA
Facultad de Ingeniería Ambiental
 Protoplastos y esferoplastos (eliminación total y parcial de la pared,
respectivamente).

2.5. Características de la célula bacteriana

COCO

  Proviene del griego kókkos, lo que se traduce como grano, es de forma esférica.

Estas se clasifican en:

Figura 2.1 Clasificación de los cocos

BACILO

 Proviene del latín baculus, lo que significa “varilla”, tienen forma de bastoncillo.

 
  

MICROBIOLOGÍA SANITARIA 6
UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERÍA
Facultad de Ingeniería Ambiental

Figura 2.2 Clasificación de los bacilos

MICROBIOLOGÍA SANITARIA 7
 UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERÍA
Facultad de Ingeniería Ambiental

3. RESULTADOS

3.1 Coloración de bacterias de cada grupo

MUESTRA GRAM
GRUPO UTILIZADA CARACTERISTICAS FORMA AGRUPACION
 Tamaño :4 mm
 Borde: Lobular
Placa nº1
 Elevación: plana Cocos Estreptococos Negativo
(grupo 2)  Pigmentación: blanca
 C.optica: Opaca
Biblioteca
1  Tamaño :1 mm
 Borde: lobular
Placa nº1
 Elevación: plana Cocos Estreptococos Negativo
(grupo 2)  Pigmentación: blanca
 C.optica: Opaca
Biblioteca
Placa nº1  Tamaño :4 mm
 Borde: ondulante Coco
(grupo 2)  Elevación: convexa Estreptococos Negativo
 Pigmentación: anaranjada
Biblioteca  C.optica: Opaca
2
Placa nº1  Tamaño :3 mm
 Borde: liso
(grupo 2)  Elevación: plana Bacilos Estreptobacilos Positivo
 Pigmentación: amarillo
Biblioteca  C.optica: Opaca

Centro de  Tamaño :4 mm
estudiantes  Borde: liso
 Elevación: convexa Cocos Estreptococos Positivo
(placa 1)
del grupo 4  Pigmentación: amarillo
C.optica: Opaca
3  Tamaño :1 mm
Biblioteca  Borde: liso
(placa 1)  Elevación: convexa Cocos Estafilococos Negativo
del grupo 2  Pigmentación: blanco
 C.optica: Opaca

MICROBIOLOGÍA SANITARIA 10
 UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERÍA
Facultad de Ingeniería Ambiental

MUESTRA GRAM
GRUPO UTILIZADA CARACTERISTICAS FORMA AGRUPACION
 Tamaño :3 mm
Placa del  Borde: liso
grupo N° 4  Elevación: plano Cocos Estafilococos Negativo
Centro de  Pigmentación: rojo-
estudiantes rosados
 C.optica: Opaca
4  Tamaño :2 mm
Positivo
Placa del  Borde: liso Bacilos Estreptobacilos
grupo N° 4  Elevación: plano
Biblioteca  Pigmentación: amarilla
 C.optica: Opaca

 Tamaño :3 mm Positivo
Placa del  Borde: lobular
grupo N° 4  Elevación: plano Cocos Estreptococos
Centro de  Pigmentación: crema
estudiantes  C.optica: Opaca
5
 Tamaño :2 mm Negativo
Placa del  Borde: ondular
grupo N° 4  Elevación: plano Bacilos Bacilos
Centro de  Pigmentación:
estudiantes anaranjado
 C.optica: Opaca

4. DISCUSIÓN DE RESULTADOS

4.1 Grupo 1
El grupo uno pudo observar en ambos resultados estreptococos gran
negativos de la placa n°1 (biblioteca) del grupo número dos. Si
observamos bien, ambas presentan las mismas características menos el
mismo tamaño por lo que pudo influir en el resultado.

4.2 Grupo 2

MICROBIOLOGÍA SANITARIA 11
 UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERÍA
Facultad de Ingeniería Ambiental
El grupo dos pudo observar estreptococos, Gram negativo de la placa n°1 del
grupo 2 y estreptobacilos, Gram positivo de la placa n°1 del grupo 2.

Si observamos bien, ambas presentan diferentes características, es decir

diferente tamaño, elevación, borde y pigmentación por lo que pudo influir en
el resultado

4.3 Grupo 3

El grupo tres pudo observar estreptococos, Gram positivo de la placa n°1 del
grupo 4 (centro de estudiantes) y estafilococos, Gram negativo de la placa n°1
del grupo 2 (biblioteca).
Si observamos bien, ambas presentan diferentes características, es decir
diferente tamaño, elevación, borde y pigmentación por lo que pudo influir en el
resultado.

4.4 Grupo 4

El grupo cuatro pudo observar estafilococos, gram negativos de la placa n° 1

del grupo 4 (centro de estudiantes) y estreptobacilos, Gram positivo de la placa
n°1 del grupo 2, esta colonia presenta características como borde liso
,elevación plana y pigmentación amarilla.

4.5 Grupo 5

El grupo cinco pudo observar estreptococos, Gram positivo de la placa del

grupo 4 (centro de estudiantes) y bacilos, Gram negativo de la misma placa.
Si observamos bien, ambas presentan diferentes características, es decir
diferente tamaño, elevación, borde y pigmentación por lo que pudo influir en el
resultado.

5. CONCLUSIONES

 El grupo 1 obtuvo de la colonia cuyas características son borde plano,

elevación plana y pigmentación blanca, estreptococos gram negativo y de la
colonia cuyas características son borde lobular, elevación plana y pigmentación
blanca, estreptococos gram negativo.

MICROBIOLOGÍA SANITARIA 12
 UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERÍA
Facultad de Ingeniería Ambiental
 El grupo 2 obtuvo de la colonia cuyas características son borde ondulante,
elevación convexa y pigmentación naranja, estreptococos gram negativo y de
la colonia cuyas

características son borde liso, elevación plana y pigmentación amarillo,

estreptobacilos gram positivo.
 El grupo 3 obtuvo de la colonia cuyas características son bordes lisos,
elevación convexa y pigmentación amarilla, estreptococos gram positivo y de la
colonia cuyas características son borde liso, elevación convexa y pigmentación
blanca, estafilococos gram negativo.
 El grupo 4 obtuvo de la colonia cuyas características son borde liso, elevación
plana y pigmentación rojo-rosado , estafilococos gram negativo y de la colonia
cuyas características son borde liso, elevación plana y pigmentación amarilla,
estreptobacilos gram positivo.
 El grupo 5 obtuvo de la colonia cuyas características son borde lobular,
elevación plana y pigmentación crema, estreptococos gram positivo y de la
colonia cuyas características son borde ondular, elevación plana y
pigmentación anaranjada, bacilos gram negativo.
 De todos los resultados que se obtuvieron, los que se obtuvieron mas fueron
los cocos, específicamente los estreptococos

6. RECOMENDACIONES

 Debemos utilizar una gota de aceite para realizar la observación con el objetivo de
inmersión 97X.
 Al acercar la lente del objetivo a la preparación, debemos mirar directamente y no a través
del ocular, ya que se corre el riesgo de incrustar el objetivo en la preparación pudiéndose
dañar alguno de ellos o ambos.
 Se debe tener cuidado al momento de pasar el portaobjetos en el mechero y evitar
 quemaduras o rupturas del material, además de la conservación de las colonias.

 Se debe tener en cuenta la edad de las bacterias, así como la debida esterilización de
los instrumentos.

MICROBIOLOGÍA SANITARIA 13
 UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERÍA
Facultad de Ingeniería Ambiental
7. CUESTIONARIO

1.- Hacer una tabla en relación a las enfermedades microbianas que son
transmitidas por el aire, agua y alimento.

Tabla 7.1 Enfermedades microbianas que son transmitidas por el aire

Factor Enfermedad Agente Modo de transmisión

causante
Es una infección bacteriana contagiosa que
compromete principalmente a los pulmones,
Micobacterium
pero puede propagarse a otros órganos.
tuberculosis
Tuberculosis
Se propaga cuando una persona infectada
estornuda, tose o habla

Se alojan en el sistema respiratorio humano

fijándose primeramente al epitelio ciliado del
Tos ferina Bordetella
tracto respiratorio y después en los alvéolos
pertussis
pulmonares causando necrosis.
Se propaga cuando una persona infectada
estornuda, tose o habla

Es causado por un virus de la familia de los

paramixovirus y normalmente se suele
transmitir a través del contacto directo y del
sarampión Virus del aire.
sarampión
El agente causal del sarampión se encuentra
aire en secreciones nasofaringeas y
traqueobronquiales y en la sangre a los
pacientes

Es una enfermedad muy contagiosa que

ataca a los niños y se parece a la viruela en
algunos aspectos el agente etiológico es un
Varicela Varicela zoster virus de dermotrópico que produce lesiones
en la piel menos graves causadas por la
viruela y que se distribuyen por todo el
cuerpo.
se transmite por el aire

MICROBIOLOGÍA SANITARIA 14
 UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERÍA
Facultad de Ingeniería Ambiental
Esto es una de las especies género
mycoplasma que se encuentra en el aparato
respiratorio humano
Neumonía por Mycoplasma
La neumonía por mycoplasma se caracteriza
mycoplasma pneumoniae
por la aparición gradual de síntomas
constitucionales (cefalea ,escalofríos, fiebre,
malestar y tos con esputo sanguinolento
mucoide) que predominan sobre los síntomas
pulmonares.

Tabla 7.2 Enfermedades microbianas que son transmitidas por los alimentos

Factor Enfermedad Agente Modo de transmisión

causante
Listeriosis Listeria Alimentos refrigerados, listos para
monocytogenes consumir (carne de res, pollo, pescados
y mariscos, y lácteos — leche sin
pasteurizar y productos lácteos o
alimentos elaborados con leche sin
pasteurizar).
Salmonelosis Salmonella Huevos crudos o que no estén bien
enteritidis cocidos, carne de res, pollo, pescados y
mariscos crudos, leche cruda, productos
lácteos y productos frescos.
Disentería Shigella Ensaladas, productos lácteos, ostras
dysenteriae crudas, carne molida de res, pollo y
alimentos agua sucia.
Vibriosis Vibrio vulnificus Pescados y mariscos crudos, en
especial, ostras crudas.
Gastroenteritis Norovirus (Virus Ostras/mariscos crudos, ensalada de
aguda del tipo Norwalk) repollo, ensaladas, productos
horneados, glaseados, agua
contaminada y hielo.

Factor Enfermedades Agente transmisión

Fiebre Salmonella Por agua contaminada con heces,
paratifoidea paratyphi orinas de personas infectadas
Fiebre tifoidea Salmonella typhi Agua contaminada

MICROBIOLOGÍA SANITARIA 15
 UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERÍA
Facultad de Ingeniería Ambiental
Shigelosis Shigella Directa o indirecta fecal- oral
Infecciones por Shigella Agua y fonites contaminados
Agua
E.Coli (reservorio)
Cólera Vibrio cholerae Heces o vomitos de individuos
infectados

2.-Responde:
a) ¿Cuáles son las diferencias entre las paredes celulares de las bacterias
gram positivas y las gram negativas?

BACTERIAS GRAM POSITIVAS BACTERIAS GRAM NEGATIVAS

Poseen una pared celular interna y una Poseen una pared celular más compleja:
pared de peptidoglucano.
-pared celular interna
*Peptidoglucano: es un exoesqueleto
-pared de peptidoglucano
que da consistencia y forma esencial
para replicación y supervivencia de la - bicapa lipídica externa
bacteria.

b) ¿Afecta la edad del cultivo a la reacción tinción de Gram?

Si bien los organismos gram negativos son constantes en cuanto a su reacción

al gram, en ciertas circunstancias los organismos gram positivos muestran
variación en la respuesta. Cultivos viejos de algunas bacterias gram positivas

MICROBIOLOGÍA SANITARIA 16
 UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERÍA
Facultad de Ingeniería Ambiental
pierden la facultad de retener el cristal violeta y se tiñe con la safranina. Un
efecto similar es a veces debido a cambios en el medio o a pequeñas
modificaciones en la técnica de tinción. Así, es necesario apegarse a los
procedimientos establecidos.

3.-Hacer una lista de cinco bacterias gram positivas y gram negativas con
las enfermedades que provocan:

Bacteria Enfermedad

Abscesos, endocarditis,
Gram Positivo Staphylococcus aureus
gastroenteritis.

Streptococcus Pyogenes Faringitis, fiebre reumática,

mionecrosis
Streptococcus Agalactiae Meningitis Neonatal, Sepsis,
Endometritis
Streptococcus Faecalis Infecciones de vías urinarias
y biliares
Clostridium tetani Tétanos

Gram Negativo Neisseria meningitides Meningitis y

meningococemia
Neisseria gonorrhoeae Gonorrea

Escherichia coli Diarrea

Salmonella Typhi Fiebre tifoidea

Vibrio cholerae Cólera

8. FUENTES DE INFORMACION

MICROBIOLOGÍA SANITARIA 17
 UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERÍA
Facultad de Ingeniería Ambiental
 Pelczar Michael J. Microbiología, editorial McGraw – Hill cuarta edición, México
1982. (Microscopio – Tinción de Gram).Consultado el 13 de Setiembre
 Lamanna, C., M.F. Mallette, y L.N. Zimmerman: Basic Bacteriology. Its
Biological and Chemical Background, 4ª. Ed., Williams and Wilkins, Baltimore,
1973. Consultado el 13 de Setiembre

 Biología de los microorganismos Brock- Michael T. Madigan (Estructura y

función celular- Microscopio). Consultado el 13 de Setiembre
 Lennette, E.H., E.H. Spaulding, y J.P. Traunt (eds.): Manual of clinical
Microbiology, 2ª. Ed., American Society for Microbiology, Washington, 1974.
 Gram, C. (1884). The differential staining of Schizomycetes in tissue sections
and in dried preparations. Fortschritte der Medizin, 2, 185-9. Disponible:
http://www.asmusa.org/ccLibraryFiles/FILENAME/0000000235/1884p215.pdf:,
Consultado el 13 de Setiembre
 Aulton Michael E. (2004): Ciencia y diseño de formas farmacéuticas.
España:Elsevier, segunda edición, 2004. Consultado el 13 de Setiembre
 Bergey, David H.; Holt, John G.; Krieg, Noel R.; Sneath, Peter H. A.
(1994): Bergey's manual of determinative bacteriology. Lippincott Williams &
Wilkins, novena edición, 1994, Consultado el 13 de Setiembre

9. ANEXOS

9.1 Procedimiento:

COLORACION DE BACTERIAS:

1. Usar laminas limpias y pasarla varias veces cortando la llama del mechero.

2. Dejar enfriar la lámina y colocar una gotita de agua destilada con el inoculador
esterilizado.

3. Con el inoculador estéril, tocar ligeramente el cultivo que ha de ser examinado

(cultivos de 18-42 h) y transferir un poco de él sobre la gotita de agua en el
portaobjetos.

MICROBIOLOGÍA SANITARIA 18
 UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERÍA
Facultad de Ingeniería Ambiental
4. Frotar el cultivo con el inoculador hasta extenderlo hasta la parte central del
portaobjetos, cuidado que se forme una película muy delgada.
5. Fijar el extendido sobre el portaobjeto pasándola sobre la llama del mechero 3
veces. Dejar enfriar.

6. Cubrir la película con el colorante cristal violeta (gram #1) y dejar cubierto por
espacio de 1-2 minutos

7. Lavar con agua hasta retirar el exceso.

8. Se añade solución Lugol (gram #2) y se deja reposar durante 1 minuto.

9. Decolorarla con alcohol-acetona (gram #3) durante 5 a 15 segundos.

10. Lavar la lámina con agua.

11. Se tiñe con safranina (gran #4) por un espacio de 20-30 segundos.

12. Lavar la lámina con agua durante 2 segundos

13. Dejar secar y examinar al microscopio la preparación. Un organismo Gram

positivo retendrá el color cristal violeta y aparecerá teñido de azul o morado y
un organismo Gran negativo tendrá el color rosado o rojo safrina.

MICROBIOLOGÍA SANITARIA 19
 UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERÍA
Facultad de Ingeniería Ambiental

10. APÉNDICE

10.2 Diagrama de flujos

MICROBIOLOGÍA SANITARIA 20
UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERÍA
Facultad de Ingeniería Ambiental

Figura 10.1 Coloración de bacterias

MICROBIOLOGÍA SANITARIA 21