Preguntas Fermenta:
1. ¿Por qué la actividad enzimática se mide a tiempos cortos?
=1 -> La actividad de la enzima no se ha reducido por la inmovilización.
2. ¿Cuáles son los parámetros de RDI y RDC en un proceso reactivo
con enzimas inmovilizadas? <1 -> Se ha perdido parte de la actividad durante la inmovilización y por
los efectos de partición y difusionales.
RD externas:
>1 -> Al romper células inmovilizada, cuando hay división celular,
α : ( numero de Damkheler ) cuando los inhibidores se excluyen selectivamente, aumento de
temperatura, cuando la enzima inmovilizada es más estable.
η=( factor de efectividad ) : f ¿
Resultan como consecuencia de la existencia (en la vecindad de la
partícula catalítica) de una zona de líquido estanco donde hay sólo RD internas:
difusión molecular y no transporte convectivo.
Si la limitación es muy fuerte, la velocidad de la reacción es la velocidad ∅= ( modulo de Thiele ) , β=f ( z , ∅ )
de difusión.
Estas restricciones disminuyen aumentando la agitación para mejorar el η:f ¿
mezclado.
En una situación ideal de mezcla sin limitación de la difusión, la
reacción tendrá los parámetros cinéticos idénticos a los de la enzima Se deben al tamaño y tortuosidad de los poros del soporte.
libre. Efecto más complejo porque la difusión se produce simultáneamente
con la reacción, creando gradientes de concentración alrededor de las
Módulo de Damkholer () partículas.
Número adimensional que expresa la relación entre la velocidad El efecto sobre la Km es el mismo que para la limitación difusional
máxima de una reacción enzimática y la velocidad máxima de externa (K´m> Km)
transferencia de sustrato en las proximidades de una enzima La disponibilidad de sustrato es más difícil y siempre se tendrán valores
inmovilizada de V´max < Vmax porque la enzima ubicada en el centro de la partícula
Indica los factores que limitan la actividad de la enzima inmovilizada permanecerá inactiva.
y cuanto se aleja del máximo posible. Es importante controlar la cantidad de enzima inmovilizada.
Módulo de Thiele ()
Método para cuantificar las restricciones difusionales internas y
externas.
Incidencia del fenómeno de transporte de
sustrato en la expresión del potencial catalítico Relación entre velocidad de reacción química y proceso difusivo en
de la enzima. los poros.
Los valores pequeños: no influye el proceso difusivo (mayor factor
Si es pequeño -> baja incidencia de RDE de efectividad); y los valores altos: tienen mayor influencia de
Si es grande -> alta incidencia de RDE difusión en los poros (menor factor de efectividad)
Factor de Efectividad ()
La definición sólo es válida para una ecuación cinética concreta
Expresa los efectos combinados de los factores que afectan a (primer orden).
las propiedades intrínsecas de la enzima.
L = Espesor medio de la partícula.
[E] = Contenido en enzima de la
partícula.
De = Difusividad efectiva del
3. Porque es fundamental el K y Vmax de enzimas como
biocatalizadores en un reactor.
K es la constante de velocidad o también constantes microscópicas
de velocidad
En estas condiciones (las condiciones óptimas de pH,temperatura,
presencia de cofactores, etc, y se utilizan concentraciones
saturantes de sustrato), la velocidad de reacción observada es la
velocidad máxima (Vmax). La velocidad puede determinarse bien
midiendo la aparición de los productos o la desaparición de los
reactivos.
Al seguir la velocidad de aparición de producto (o de
desaparición del sustrato) en función del tiempo se
obtiene la llamada curva de progreso de la reacción,
o simplemente, la cinética de la reacción. 4. Defina UI.
UNIDAD INTERNACIONAL DE ACTIVIDAD ENZIMÁTICA: Es la
cantidad de enzima que cataliza la transformación de 1 micromol de
substrato por minuto, bajo condiciones bien definidas (condiciones
estándar). Esta es la expresión básica de la velocidad de la reacción.
Se ha sugerido que la temperatura debe ser, en lo posible, de 30°C
y que las otras condiciones, tales como pH y concentraciones de
substratos, debieran ser las óptimas para la actividad enzimática.
5. Mencione las ventajas de usar biorreactores con enzimas
inmovilizadas.
Biorreactores con Enzimas Inmovilizadas
CREADO EL MARZO 30, 2011 POR AMARIN
ARCHIVADO COMO BIOTECNOLOGÍA Y ECONOMÍA, PRODUCTOS
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Las enzimas son macromoléculas de carácter proteico que poseen
capacidad catalítica. Esto quiere decir que hacen que las reacciones
químicas se produzcan más rápidamente. Esta extraordinaria propiedad
junto con otras, como por ejemplo la especificidad de sustrato o la
esteroselectividad, justifican el gran interés que han suscitado en el mundo
de la química. Cada día se intentan encontrar más y más procesos que se
puedan llevar a la práctica por vía enzimática. Pero el empleo de esta En el caso de enzimas inmovilizadas es frecuente observar un
tecnología genera problemas derivados principalmente de su alto coste y de aumento de su estabilidad y su resistencia a la desnaturalización
la imposibilidad de reutilizarlos cuando se trata de reacciones con enzimas y proteolisis.
solubles. Es por ello por lo que se han desarrollado diversos tipos de Permite reducir los efectos de contaminación accidentales del
inmovilización para estas enzimas. proceso en las células; dado que la población de células contaminantes
se encuentran en suspensión y en concentración mucho menor que la
población de células inmovilizadas, ésta puede ser eliminada mucho
La inmovilización de enzimas presenta una serie de ventajas clave que más fácilmente del reactor.
justifican su utilización en la industria, pero esta técnica no esta exenta
también de algún que otro inconveniente. Entre las ventajas podemos 6. ¿Cómo se mide la actividad de una enzima?
destacar que la inmovilización de enzimas permite la reutilización de las
mismas, a la vez que aumenta su estabilidad frente a un abanico más amplio Se mide mediante la siguiente ecuación:
de valores de temperatura y pH. También posibilita su operación en continuo
así como el diseño de reactores enzimáticos de más fácil manejo y control. V × S0
Por otro lado, entre las desventajas podemos mencionar que el proceso de v=
inmovilización puede bloquear centros activos de la enzima, haciendo que la K + S0
actividad global disminuya. Y también la proteína puede ver modificada su
conformación con respecto al estado nativo. Otra desventaja es el coste de
la inmovilización, pero este se ve compensado por la reutilización de la 7. En el rango de linealidad de la invertasa ¿Cuál fue el objetivo de
enzima [1]. emplear un blanco?
Existen distintos tipos de reactores que operan con enzimas inmovilizadas. El blanco es una muestra cultivada de la célula sin las sustancias que se
Entre otros, destacan los reactores que utilizan enzimas inmovilizadas en quiere emplear, y el objetivo es que permita saber si el comportamiento
partículas porosas con forma esférica. En el interior de dichos poros, las del cultivo se debe a la sustancia que le añadiste o si simplemente se
enzimas pueden quedar fijadas por métodos físicos y químicos, que aquí no debe a otro factor distinto de la sustancia.
se detallan. Los reactores que operan con este tipo de partículas lo pueden
hacer bien en lecho fijo [2], lecho fluidizado [3] o suspendidas en el seno del
8. ¿Por qué la determinación de experimental de rango de linealidad
líquido (tanque agitado o CSTR). También existen otro tipo de reactores que
de la invertasa soluble se tuvo que ensayar a diferentes diluciones
utilizan enzimas incluidas en una membrana semipermeable [5]. Un
del extracto enzimático de levadura?
esquema de este tipo de reactor se muestra en la Figura 1
Permite la utilización continua del biocatalizador, dado que éste
queda fácilmente retenido en el interior del reactor utilizado, mientras se
mantiene en flujo continuo de entrada y salida de líquido.
Favorece la re-utilización del biocatalizador en el caso de reacciones K et
9. ¿Para qué es útil obtener el perfil X vs ?
en discontinuo. K
Con la inmovilización se puede aumentar sensiblemente
la concentración de biocatalizador, con respecto a un proceso en el que
el mismo se encuentre en suspensión.
En cuanto a sistemas operando en continuo, éstos permiten
un aumento en las productividades de los correspondientes 10. Porque es indispensable en el experimento determinar los valores
biorreactores, dado que permiten operara a mayor concentración de los parámetros de una enzima soluble e inmovilizada en tu
decatalizador, (mayor conversión de substrato) y con caudales más experiencia de catálisis de la invertasa inmovilizada podrías intuir
altos.
que sus valores fueran equivalentes o semejantes a las obtenidas
con invertasa soluble ¿por qué?
11. ¿Cuál es el verdadero parámetro cinético que determina la
eficiencia de la enzima?
12. ¿Cuál es el procedimiento para obtener el rango de linealidad y
enzima inmovilizada?
