UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

FACULTAD DE CIENCIAS AGRÍCOLAS

INGENIERÍA AGRONÓMICA

BIOLOGIA APLICADA
PRACTICA DE LABORATORIO: CROMATOGRAFIA EN PAPEL

ANGGI MOGOLLÓN

CAMILA SOFÍA LÓPEZ CAMINO

KATHERINE QUILUMBA
BRAYAN DAVID MACAS MENDOZA
DENIS AARON MULLO GUASHPA

CURSO: A1-003
GRUPO G
FECHA: 02/08/2021
DOCENTE: ING. JAIME HIDROBO
 CONTENIDO.

I. INTRODUCCIÓN…………………………………………………………………

II. OBJETIVOS………………………………………………………………………..

II.I. OBJETIVO GENERAL………………………………………………………….

II.II. OBJETIVOS ESPECÍFICOS………………………………………………….

III. REVISIÓN DE LITERATURA…………………………………………………..

IV. MATERIALES Y REACTIVOS…………………………………………………

V. MÉTODO (PROCEDIMIENTO)…………………………………………………

VI. RESULTADOS Y DISCUSIÓN…………………………………………………

VII. ANÁLISIS DE RESULTADOS…………………………………………………

VIII. CONCLUSIONES……………………………………………………………….

IX. CUESTIONARIO………………………………………………………………….

BIBLIOGRAFÍA……………………………………………………………………….
 I. INTRODUCCCION
La cromatografía es una técnica de separación de los componentes de una
mezcla, por distribución de éstos entre dos fases, una estacionaria y otra
móvil. La fase estacionaria puede ser un sólido, un líquido sobre un soporte
sólido o un gel, y la móvil un líquido o un gas. Cada compuesto posee una
diferente constante de reparto, que es la cuantificación de su distribución
entre las dos fases, lo que condiciona su tiempo de residencia o avance en
el lecho cromatográfico que permite separar los distintos componentes de
una mezcla facilitando su identificación y cuantificación (Reis & Andrade,
2016).
De entre los numerosos tipos de cromatografía existentes, en esta práctica
nos limitaremos a la cromatografía en papel, basada en los distintos tipos
de afinidad de los productos químicos por, en este caso, el papel y el
disolvente. Inicialmente, se utiliza un disolvente adecuado para llevar
sustancias problema (a separar) al papel, donde son adsorbidas. Luego, al
pasar a través del mismo el disolvente se irán separando cada uno de los
componentes de la mezcla, siendo los que menos migren los que mayor
afinidad tienen con el papel, mientras que los más susceptibles de migrar
serán los compuestos menos afines con dicho soporte. Como resultado, se
originan zonas coloreadas bien diferenciadas, obteniendo así un
cromatograma y dando por terminado el desarrollo del mismo (Domínguez,
& Alegandro, 2002).
Separación de pigmentos de las plantas superiores están representados
por las clorofilas a y b con un amplio grupo de sustancias denominadas
carotenoides que se dividen en carotenos y xantofilas. Las clorofilas
presentan una estructura molecular de gran tamaño de tipo porfirinico,
estando formada en su mayor parte por carbono e hidrógeno;
constituyendo un anillo tetrapirrolico ocupado en el centro por un único
átomo de magnesio, rodeado por un grupo de átomos que contienen
nitrógeno. Del anillo parte una larga cadena de 20 átomos de carbono,
denominada fitol que constituye el punto de anclaje de la molécula de
clorofila a la membrana interna del cloroplasto, el orgánulo celular donde
tiene lugar la fotosíntesis.
- La clorofila A constituye de manera aproximada el 75% de toda la clorofila
de las plantas verdes, estando presente también en las algas
verdeazuladas y en células fotosintéticas más complejas.
- La clorofila B es un pigmento accesorio presente en vegetales y otras
células fotosintéticas complejas; absorbe luz de una longitud de onda
diferente y transfiere la energía a la clorofila A, que se encarga de
transformarla en energía química (Taiz, 2002).
 II. OBJETIVOS
II.I OBJETIVO GENERAL
- Identificar los pigmentos vegetales presentes en el extracto de las
hojas.
II.II OBJETIVOS ESPECIFICOS
- Separar los pigmentos presentes en el extracto de las hojas.
- Elaborar un cromatograma en papel

III. REVISIÓN BIBLIOGRAFICA

La cromatografía es una técnica de separación basada en el principio de

retención selectiva, que permite separar los distintos componentes de una
mezcla facilitando su identificación y cuantificación En este proceso los
componentes de la mezcla interaccionan de diversa manera con la fase
estacionaria y debido a esto atraviesan la fase estacionaria a distintas
velocidades, por lo cual se van separando. La cromatografía en papel es
un proceso muy utilizado en los laboratorios para realizar análisis
cualitativos ya es sencilla de implementar y no requiere de equipamiento
sofisticado. En esta técnica la fase estacionaria está constituida
simplemente por una tira o circulo de papel de filtro. La muestra se
deposita en un extremo colocando pequeñas gotas de una solución de la
muestra. La destilación sencilla es una técnica para mover un solvente,
soltar componentes de una mezcla líquida o para la separación y
purificación de sólidos disueltos en líquidos, y se utiliza siempre que se
pretende separar un fluido de sus impurezas no volátiles. La destilación
como proceso, consta de dos fases: en la primera el líquido pasa a vapor y
en la segunda el vapor se condensa, pasando de nuevo a líquido en un
matraz diferente al de destilación.
DESTILACIÓN SIMPLE Y CROMATOGRAFÍA EN PAPEL
La cromatografía permite separar, aislar y muchas veces identificar
componentes estrechamente relacionados presentes en mezclas
complejas; De forma general, la cromatografía es un método físico de
separación de mezclas complejas, la cual tiene grandes aplicaciones en
muchas ciencias. Las técnicas cromatografías están basadas en el
principio de retención selectiva, cuyo objetivo es separar los distintos
componentes de una mezcla permitiendo identificar y determinar las
cantidades de dichos componentes.
La cromatografía puede cumplir dos funciones básicas que no se excluyen
mutuamente:
• Separar los componentes de la mezcla, para obtenerlos más puros y que
puedan ser usados posteriormente (etapa final de muchas síntesis).
• Medir la proporción de los componentes de la mezcla (finalidad analítica).
En este caso, las cantidades de material empleadas son pequeñas.

Constante Rf
La constante Rf (Factor de retención) es simplemente una manera de
expresar la posición de un compuesto sobre una placa como una fracción
decimal y mide la retención de un componente. Se define como:
Rf= distancia del compuesto desde el origen/distancia de la muestra desde
el origen.
Clasificación
Las distintas técnicas cromatográficas se pueden dividir según como esté
dispuesta la fase estacionaria:
▪ Cromatografía plana. La fase estacionaria se sitúa sobre una placa plana
o sobre un papel.
▪ Cromatografía en papel
▪ Cromatografía en capa fina

Cromatografía en columna.
La fase estacionaria se sitúa dentro de una columna. Según el fluido
empleado como fase móvil se distinguen:
▪ Cromatografía de líquidos
▪ Cromatografía de gases
▪ Cromatografía de fluidos súper-críticos
La cromatografía en papel se ha convertido en una práctica para la
separación de mezclas complejas de aminoácidos, péptidos, hidratos de
carbono, esteroides, purinas, y una larga lista de compuestos orgánicos
simples. Los iones inorgánicos también pueden ser fácilmente separados
en el papel. Consiste en la aplicación de una solución en un punto cercano
a la hoja de papel filtro.
Se crea una fase liquida estacionaria cuando el papel se impregna con un
poco de disolvente adecuado.
Un borde del papel cerca del lugar donde se coloca la muestra se sumerge
en otro disolvente en el que los componentes de la mezcla son solubles en
diversos grados.
El disolvente penetra en el papel por la acción capilar y al pasar por el
punto de la muestra, se lleva los diversos componentes de ésta. Los
componentes se mueven con el disolvente que fluye a velocidades que
dependen de sus solubilidades en los disolventes estacionario y móvil. La
separación de los componentes se produce si hay diferencias en sus
solubilidades relativas en los dos disolventes.
El disolvente que fluye llega lo más lejos del borde del papel, ambos
disolventes se evaporan, y la ubicación de los componentes separados se
identifica generalmente por aplicación de los reactivos que forman
compuestos coloreados con las sustancias separadas. Los componentes
separados aparecen como manchas individuales sobre el camino del
disolvente. Si el disolvente fluye en una dirección en la cual no es capaz de
separar todos los componentes de forma satisfactoria, el papel se puede
girar 90 ° y el proceso se repite utilizando otro disolvente.

IV. MATERIALES Y REACTIVOS

MATERIALES PARA USAR EN CASA

❖ Lupa
❖ Tabla de madera
❖ Porta y cubre objetos
❖ Bisturí o navaja
❖ Pinza
❖ Aguja de disección
❖ Servilletas
MATERIAL EXPERIMENTAL

❖ Papel filtro

❖ Alcohol
❖ 1 lápiz

❖ 1 regla
❖ Mortero
❖ Alcohol
❖ Caja Petri

MATERIAL VEGETAL HOJAS DE:

❖ Acelga (Beta vulgaris; Amarantácea)

❖ Perejil (Petroselium crispum; Apiacea)

❖ Espinaca (Spinaca oleraceae; Amarantácea)

V. PROCEDIMIENTO

Obtención del extracto de hojas:

1. Tomar las suficientes hojas frescas de espinaca, acelga y perejil.

2. Cortar en trozos finos, quitando los tallos de las hojas de cada vegetal.
3. Colocar los trozos obtenidos en un mortero, tritúralos hasta obtener la
cantidad necesaria, así repitiendo el mismo procedimiento para los 3
vegetales.
4. Agregar una gota de alcohol etílico cuando aparezca la pigmentación.
5. Depositar el extracto en vasos o caja Petri, para esto se podía utilizar un
colador.
6. Colocar papel filtro en los tres vasos, este debió ser más pequeño que el
vaso, cada uno con sus respectivos nombres.
7. Mantenerlos en un solo lugar durante 20 o 25 minutos para medir el índice
de cantidad de clorofila de las diferentes hojas.
8. Sacar el papel filtro con mucho cuidado y dejar secar, si es posible encima
de una hoja de papel boom.
9. Rotular las fases reflejadas de los tres vegetales.
10. Observar cual tiene mayor concentración de clorofila A, B.

VI. RESULTADOS Y DISCUSIÓN

La cromatografía. Es la separación de dos o más compuestos con

propiedades física diferentes que les permite repartirse en dos fases: una
estacionaria y otra móvil. La estacionaria: es una fase fija que puede ser el
papel filtro o una lámina de aluminio cubierta con polvo de sílice o bien
partículas de sílice dentro de un soporte rígido de vidrio o de metal conocido
como columna. La fase móvil: en esta fase se mueve o arrastra la mezcla de
compuestos a través de la fase estacionaria y del todo el sistema
cromatográfico (García, s.f.).

ESPINACA
(Spinaca oleracea)
Cromatografía. (s. f.).
[Fotografía]. Cuaderno de
ciencias.
https://cuadernodeciencias.blogspot.co
m/2012/03/practica-separacion-
de pigmentos.html

Carotenos:
Son tetraterpenos constituidos por unidades múltiples de isoprenos con un
anillo de ciclohexano sustituido e insaturado en cada uno de los extremos.
Existen dos tipos de carotenoides los que no contienen oxígeno en sus anillos
terminales y las xantofilas que si los tienen (María, María, & Peréz, 2011).
Clorofila a:
Se utiliza para estimar la biomasa planctónica todas las plantas verdes la
tienen y constituye el 1 y 2% del peso del peso seco de las algas plactónicas.
Clorofila b: se caracteriza por los plastos en las algas verdes y terrestres
(Manrique, 2003).

Remolacha (Beta vulgaris)

Cromatografía. (s. f.). [Fotografía].
Cuaderno de ciencias.
https://cuadernodeciencias.blogspot.co
m/2012/03/practica-separacion-
de pigmentos.html
En la práctica sobre la cromatografía en papel utilizamos materiales
vegetales Espinaca (Spinacia oleraceavegetal), Perejil (Petroselinum
crispum) y Acelga (Beta vulgaris var. cicla), también utizamos como reactivo
alcohol. En las prácticas echas por otros estudiantes en la que se utilizó
Remolacha (Betabel) y Espinaca (Spinacia oleraceavegetal) que vendría a
ser el material vegetal y en el caso de reactivo se utilizó éter etílico y la
pigmentación que se pudo observan en el papel fue de color morado
característico de la remolacha (Adriano, Cuevas, Cornejo, Alvares, &
Mendoza, 2016) (Vidal, Moreno, Arredondo, Leslie, & Ramírez, 2016).

VII. ANÁLISIS DE RESULTADOS

En la cromatografía en papel mediante un adecuado proceso podremos

observar las diferentes clorofilas que tiene cada uno de los materiales
vegetales mencionados anterior mente, también es importante conocer que
estos pigmentos son denominados clorofila B, clorofila A, xantofila y
carotenos. Como podemos ver en la muestra de la Acelga podremos
observar la presencia de carotenos, xantofila y la presencia de clorofila B
como la muestra en las evidencias a continuación.

Nombre: Acelga. Nombre: Acelga.

Nombre científico: Beta vulgaris var. Nombre científico: Beta vulgaris var. Cicla
Cicla
Reactivo: Alcohol.
Reactivo: Alcohol.
Tomo: Macas Brayan.
Tomo: Camila López.
Como se puede apreciar a continuación a pesar de ser la misma especie no
se puede apreciar los mismos pigmentos en la primera imagen se puede
observar carotenos xantofila y clorofila B pero en pequeñas cantidades,
mientras que la segunda imagen se puede apreciar solo clorofila A y clorofila
B en grandes y notables cantidades. En el caso de espinaca.

Nombre común: Espinaca

Nombre Científico: Spinacia Oleracea

Pigmentación:

Carotenos

Xantofila

Clorofila A

Clorofila B

Tomado: Anggi Mogollón.

Nombre común: Espinaca

Nombre Científico: Spinacia Oleracea

Reactivo: Alcohol

Tomado: Denis Mullo

En las imágenes observadas anteriormente se puede decir que no existe

gran diferenciación en el aspecto de los pigmentos, se puede ver que
contiene colores claros en el primero y
pequeños, colores obscuros en el caso de la segunda imagen se puede
observar que existe pigmentación muy oscura y dificulta la diferenciación de
los pigmentos.

En el caso del vegetal perejil podremos observar la presencia también de los

pigmentos antes mencionados. Los pigmentos son de gran importancia e los
vegetales los cuales permitirán observar el color intenso en las hojas de dicha
planta, también cabe mencionar que es relevante utilizar el alcohol de manera
moderada para evitar que los pigmentos no se los pueda apreciar de manera
correcta.

Material vegetal: Perejil,

Nombre científico: Petroselinum

crispum,

Reactivo: alcohol etílico.

Tomado: Katherine Quilumba

VIII. CONCLUSIONES
- Con el desarrollo de esta práctica, se comprendió a través de la
cromatografía en papel los distintos pigmentos presentes en una muestra en
este caso de los vegetales usados.
Así como la afinidad con la fase móvil y la polaridad que presente está última,
ya que es el factor crucial para que pueda realizarse una separación
cromatográfica apta. A pesar de que es una técnica muy sencilla de realizar,
existen inconvenientes que alteran los resultados de esta como, la
distribución de las muestras sobre el papel, afectando a otras tintas en sus
corrimientos o los factores ambientales (p. ej. Calor, el viento, el movimiento,
la cantidad de alcohol, etc.) que afectan a la fase móvil, disminuyendo su
cantidad al vaporizarse. Sin embargo, controlando estos factores, esta
técnica puede desarrollarse y arrojar resultados favorables.
- Se pudo ver que, en el experimento, el extracto de cada planta puesta sobre
el papel filtro, al secarlo arrojó resultados donde se evidenciaba que la mayor
parte contenía clorofila (A) y clorofila (B).
- Los distintos pigmentos extraídos del material vegetal presentaban una
coloración más intensa según su índice de clorofilo, como pudimos apreciar
en la práctica de laboratorio; donde la acelga presentaba mayor coloración
verde oscuro a comparación del perejil.

IX. CUESTIONARIO

1. ¿Por qué empleamos alcohol para extraer la clorofila?

El éter etílico es un solvente orgánico por lo cual la clorofila tiene un

alto nivel de solubilidad en solventes orgánicos, esto nos lleva a que la
clorofila se disolverá en el éter creando una solución homogénea.

2. Mencione y explique 3 clases de cromatografía

- Cromatografía preparativa
Si necesitas identificar de forma espectroscópica las sustancias de una
mezcla, debes proceder a la cromatografía preparativa. Este método
consiste en recoger la muestra con una jeringa o tubo capilar para
distribuirla sobre la placa del cromatógrafo.
Seguido de eso, el absorbente fragmenta los componentes y el analista
los extrae con una espátula sobre un papel filtro. Cada componente
debe ser sumergido de forma individual en el disolvente y repetir el
proceso todas las veces que sea necesario para lograr la separación
final.
Actualmente, es considerado uno de los mejores tipos de
cromatografía que existen, debido a que logra separar los
componentes de una mezcla de forma precisa y obteniendo un mejor
resultado de pureza.
- Cromatografía líquida en alta resolución
Este tipo de cromatografía se utiliza en el ámbito de la química
analítica y la bioquímica. En él se procede a separar los componentes
mediante las interacciones químicas entre la sustancia y la columna del
cromatógrafo.
Durante el proceso de separación, el tubo se llena de partículas
minúsculas bombeadas mediante un líquido de alta presión. Y si bien
se considera uno de los métodos más completos, es también el más
complicado de realizar, ya que se necesita un detector para lograr los
mejores resultados.
- Cromatografía de gases
En ocasiones, un investigador cree que una sustancia está compuesta
por una sola partícula debido a su aspecto homogéneo. Pero en
realidad, suele contener otras sustancias que interactúan entre sí y se
complementan para formar la mezcla de un producto.
A modo de detectar la ausencia o presencia de un compuesto químico,
es necesario examinar la mezcla con la técnica de la cromatografía de
gases. Esta consiste en la vaporización de una muestra, la cual es
transportada con ayuda de un flujo de gas a través de la columna de
un cromatógrafo.
Debido a sus particularidades, la cromatografía de gases es una de las
técnicas más utilizadas para detectar la pureza del gas natural. Sin
embargo, a diferencia de otros

tipos de cromatografías, este método tiende a presentar limitaciones

ante los cambios de temperatura o sustancias poco volátiles.
3. ¿A qué grupo de compuestos pertenecen los pigmentos?

Carotenoides, xantofilas y betalaína.

4. ¿A qué se debe que sean coloridos?

Carotenoides: son los responsables de la gran mayoría de los colores
amarillos,
anaranjados y rojos presentes en los alimentos vegetales.
Entre mayor sea la intensidad del color, mayor será el contenido de
carotenoides.
Xantofilas: son compuestos químicos pertenecientes al grupo de los
carotenoides que poseen uno o más átomos de oxígeno en su
estructura. Se encuentran de forma natural en muchas plantas y
presentan también acción fotosintética.
Estos pigmentos, más resistentes a la oxidación que las clorofilas,
proporcionan sus tonos amarillentos y parduzcos a las hojas secas.
Betalaínas: son metabolitos secundarios nitrogenados de las plantas
que actúan como pigmentos rojos y amarillos.
BIBLIOGRAFÍA