INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL
UNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE
BIOTECNOLOGÍA
TAREA 6. “ESTIMACIÓN DE LA ESTABILIDAD DE LA ENZIMA LIBRE Y DE LA
ENZIMA INMOVILIZADA”
TRABAJO ESCRITO CORRESPONDIENTE AL PROGRAMA
MAESTRÍA EN CIENCIAS EN BIOPROCESOS
EN LA ASIGNATURA
BIOCONVERSIONES
PRESENTA:
GEMMA ALELÍ RAMOS MARTÍNEZ
COORDINADOR:
DR. ENRIQUE DURÁN PÁRAMO
México, 11 de Enero de 2021
Contenido
RESULTADOS.......................................................................................................................3
DISCUSIÓN...........................................................................................................................8
CONCLUSIONES..................................................................................................................9
REFERENCIAS......................................................................................................................9
Figura 1. Tiempo vs. Actividad invertasa libre.................................................................3
Figura 2. Tiempo vs. Actividad invertasa inmovilizada..................................................4
Figura 3. Tiempo vs. Actividad invertasa específica libre..............................................5
Figura 4. Tiempo vs. Actividad invertasa específica inmovilizada...............................6
Figura 5. Tiempo vs. Actividad invertasa.........................................................................7
Figura 6. Tiempo vs. Actividad invertasa específica......................................................7
RESULTADOS
Durante el desarrollo de este trabajo, se estimó la estabilidad de la enzima libre y
la enzima inmovilizada. En la figura 1 se observa la estimación de la actividad
invertasa libre respecto al tiempo, los datos obtenidos se pueden visualizar en la
tabla recapitulativa consiguiente (tabla 1).
2500
2000
(unidades de invertasa/L)
Actividad invertasa libre
1500
1000
500
0
0 5 10 15 20 25 30 35
Tiempo (días)
Figura 1. Tiempo vs. Actividad invertasa libre
Tabla 1. Velocidades iniciales de reacción y actividad de invertasa libre a
diferentes tiempos
Tiempo Velocidad inicial de reacción (Vo) Actividad invertasa libre
(días) con invertasa libre
(μmol sacarosa/min*L) (unidades de
invertasa/L)
0 2116.7 2116.7
10 1086.6 1086.6
20 663.22 663.22
30 465.67 465.67
En la figura 2 se observa la estimación de la actividad invertasa inmovilizada
respecto al tiempo, los datos obtenidos se pueden visualizar en la tabla
recapitulativa consiguiente (tabla 2).
1600
1400
Actividad invertasa inmovilizada
1200
(unidades de invertasa/L)
1000
800
600
400
200
0
0 5 10 15 20 25 30 35
Tiempo (días)
Figura 2. Tiempo vs. Actividad invertasa inmovilizada
Tabla 2. Velocidades iniciales de reacción y actividad de invertasa inmovilizada a
diferentes tiempos
Tiempo Velocidad inicial de reacción (Vo) Actividad invertasa
(días) con invertasa inmovilizada inmovilizada
(μmol sacarosa/min*L) (unidades de
invertasa/L)
0 1474.6 1474.6
10 1270 1270
20 1199.4 1199.4
30 1164.2 1164.2
Una vez que se estimó la actividad invertasa (libre e inmovilizada), se procedió a
calcular la actividad invertasa específica, los resultados se muestran a
continuación, en la figura 3 se observa la estimación de la actividad invertasa
específica libre respecto al tiempo, los datos obtenidos se pueden visualizar en la
tabla recapitulativa consiguiente (tabla 3).
A ctiv id ad in v er tasa esp ecífi ca lib r e (u n id ad es d e in v er tasa/m g p r o tein a)
60.00
50.00
40.00
30.00
20.00
10.00
0.00
0 5 10 15 20 25 30 35
Tiempo (días)
Figura 3. Tiempo vs. Actividad invertasa específica libre
Tabla 3. Actividad invertasa específica libre a diferentes tiempos
Actividad invertasa Actividad invertasa
[Proteín
Tiempo libre específica libre
a]
(días) (unidades de (unidades invertasa/mg de
(mg/L)
invertasa/L) proteína)
0 2116.7 37.46 56.50
10 1086.6 37.46 29.00
20 663.22 37.46 17.70
30 465.67 37.46 12.43
Respecto a la enzima inmovilizada, en la figura 4 se observa la estimación de la
actividad invertasa específica inmovilizada respecto al tiempo, los datos obtenidos
se plasman en la tabla 4.
45.00
Actividad invertasa iespecífica inmovilizada
40.00
(unidades de invertasa/mg de proteína)
35.00
30.00
25.00
20.00
15.00
10.00
5.00
0.00
0 5 10 15 20 25 30 35
Tiempo (días)
Figura 4. Tiempo vs. Actividad invertasa específica inmovilizada
Tabla 4. Actividad invertasa específica inmovilizada a diferentes tiempos
Actividad invertasa Actividad invertasa
[Proteín
Tiempo inmovilizada específica inmovilizada
a]
(días) (unidades de (unidades invertasa/mg
(mg/L)
invertasa/L) de proteína)
0 1474.6 37.46 39.36
10 1270 37.46 33.90
20 1199.4 37.46 32.01
30 1164.2 37.46 31.08
Finalmente se realizó la comparación entre la actividad invertasa libre y la
actividad invertasa inmovilizada, esta comparación se visualiza en la figura 5. De
igual forma se realiza la comparación con la actividad invertasa específica, la cual
se visualiza en la figura 6.
2500
(unidades de invertasa/L)
2000
Actividad invertasa
1500
1000
500
0
0 5 10 15 20 25 30 35
Tiempo (días)
Invertasa libre Invertasa inmovilizada
Invertasa libre Invertasa inmovilizada
Figura 5. Tiempo vs. Actividad invertasa
60
Actividad invertasa específica
50
(unidades de invertasa/L)
40
30
20
10
0
0 5 10 15 20 25 30 35
Tiempo (días)
Invertasa libre Invertasa inmovilizada
Figura 6. Tiempo vs. Actividad invertasa específica
DISCUSIÓN
En el campo de investigación de la biocatálisis el estudio de la inmovilización de
enzimas resulta de gran importancia, ya que estudios previos reportan que esta
práctica permite la mejora significativa en la estabilidad de la actividad enzimática,
lo que hace posible su empleo en la producción industrial (Vallejo et al., 2007;
Arroyo,1998).
Durante el desarrollo de este trabajo se evaluó la estabilidad de la actividad
enzimática utilizando enzima libre y enzima inmovilizada. Como se puede observar
en la figura 5, la actividad enzimática libre se reduce en un 78% ya que en el día
cero presenta una actividad correspondiente a 2116.7 unidades de invertasa/L y
para el día 30 esta actividad se redujo hasta 465.67 unidades de invertasa/L; en
cuanto a la actividad enzimática inmovilizada a pesar de que existe una reducción,
esta solo es del 21%, ya que en el día cero presenta una actividad
correspondiente a 1474.6 unidades de invertasa/L y para el día 30 esta actividad
se redujo hasta 1164.2 unidades de invertasa/L.
En cuanto a la actividad enzimática específica se obtuvo un comportamiento
similar ya que como se visualiza en la figura 6, la actividad enzimática específica
libre se reduce en un 78% ya que en el día cero presenta una actividad
correspondiente a 56.49 unidades de invertasa/mg de proteína, para el día 30
esta actividad se redujo hasta 12.42 unidades de invertasa/mg de proteína; en
cuanto a la actividad enzimática específica inmovilizada a pesar de que existe una
reducción, esta solo es del 21%, ya que en el día cero presenta una actividad
correspondiente a 39.36 unidades de unidades de invertasa/mg de proteína y para
el día 30 esta actividad se redujo hasta 31.07 unidades de invertasa/mg de
proteína.
El comportamiento de una mayor estabilidad para invertasa inmovilizada
presentado anteriormente se ha atribuido por algunos autores (Martínez y Morales,
2007; Illanes, 2008) a las restricciones difusionales que presenta la invertasa
inmovilizada, ya que no permiten que se inhiba su actividad por el sustrato, existe
una mayor rigidez gracias a los puntos de contacto entre la enzima y el soporte, lo
que genera una mayor estabilidad térmica y química, brinda una protección contra
las proteasas presentes en la reacción y no permite la alteración de la actividad
enzimática mediada por el microambiente.
Segura et al., 2009 reporta que al inmovilizar invertasa en cera de candelilla y
evaluar su actividad por varios ciclos, observada que ésta presenta una mayor
estabilidad que en su forma libre; ya que después de 6 ciclos seguidos de uso
mantiene su actividad un 66%; y al ser almacenada a temperaturas de - 4 °C por
16 días, pierde solo el 18% de su actividad.
CONCLUSIONES
La estabilidad de la enzima está relacionada con la forma en la que se presenta, la
estabilidad en la enzima inmovilizada es mayor respecto a la estabilidad de la
enzima libre.
Utilizar invertasa libre mantiene el 21% de la actividad invertasa durante una
evaluación de 30 días.
Utilizar invertasa inmovilizada mantiene el 78% de la actividad invertasa durante
una evaluación de 30 días.
REFERENCIAS
Arroyo, M. (1998). Inmovilizacion de enzimas. Fundamentos, metodos y
aplicaciones. Ars Pharmaceutica, 39(2).
Segura Elda, Mendoza Damaris, Valdés Ma. Auxiliadora, Iliná Anna (2009).
Evaluación de la actividad de invertasa libre e inmovilizada en cera de candelilla.
XIV Congreso Nacional de Biotecnología y Bioingeniería
Illanes, Andrés. Ed (2008). Enzyme Biocatalysis: Principles and Applications.
United Kingdom; Springer.
Martínez Limón Jonás y Morales Godo Francisco (2007). Caracterización cinética
del hidrólisis de sacarosa con invertasa libre e inmovilizada. Instituto Politécnico
Nacional.
Vallejo-Becerra Vanessa, Vásquez-Bahena Jazmín M, Santiago-Hernández
Alejandro, Hidalgo-Lara Ma. Eugenia. (2007), Inmovilización de la invertasa inv b
recombinante de Zymomona mobilis en nylon – 6. XII Congreso Nacional de
Biotecnología y Bioingeniería
