PRÁCTICA Nº 11
DETERMINACION DE TRANSAMINASA GLUTAMICO OXALACETICA(TGO) Y
TRANSAMINASA GLUTAMICO PIRUVICA(TGP)
1. OBJETIVOS
Determinar las concentraciones de Transaminasas.
Interpretar las diferentes alteraciones que pueden presentarse en el Dosaje del Perfil
Hepático.
2. FUNDAMENTO
Las Transaminasas son enzimas que participan tanto en el Anabolismo como el Catabolismo
del Nitrógeno. Se conoce de dos Enzimas, la Transaminasa Glutámico Oxalacetica (GOT) y
la Transaminasa Glutamico Piruvica (GPT), presentes en el interior de diversas células; en
especial en las Células Hepáticas, aunque también se encuentran en las Células Musculares.
La cuales escapan en grandes cantidades desde tejidos Muertos o Moribundos y entran al
Torrente Sanguíneo, siendo importante su presencia en muestras de Sangre para propósitos
Médicos Diagnósticos.
FUNDAMENTO DEL MÉTODO
La determinación de la Transaminasa Glutámico Oxalacetica (TGO) se basa en la siguiente
reacción:
TGO
L-Aspartato + Glutamato Oxalacetato + Glutamato
La determinación de la Transaminasa Glumatico Piruvica (TGP) se basa en la siguiente
reacción:
L-Alanina + A. cetoglutarato Piruvato + Glutamato
El Piruvato u Oxalacetato formado reacciona con el 2,4-Dinitrofenilhidrazina, generando en
medio Alcalino una Hidrazona coloreada que absorbe a 505 nm.
3. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
3.1. DETERMINACIÓN DE TRANSAMINASAS
a. Reactivos
Sus componentes son:
SUSTRATO GPT
Buffer fosfato ph 7,4 100 mM
L-alanina 1000 mM
Z-oxoglutarato 2 mM
SUSTRATO GOT
Buffer fosfato ph 7,4 100 mM
L-aspartato 1000 mM
Z-oxoglutarato 2 mM
REACTIVO COLOR
2.4–DINITROFENILHIDRAZINA 1 mM
HCl 1 mM
STANDARD
Piruvato 2 mM
b. Equipos
Espectrofotómetro capaz de leer a 505 nm (rango 500-550 nm)
Baño termorregulador
Pipetas
c. Muestra
Suero libre de Hemolisis.
d. Procedimiento
Curva de calibración
Mezclar e incubar por 20 minutos a Temperatura ambiente (sobre 20º C).
NaOH 0.4 N 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0
(mL)
Mezclar, esperar 5 minutos y leer absorbancias a 505 nm (rango 500-550 nm) contra
Blanco Reactivo (tubo 1).
Graficar en papel milimetrado las unidades de Transaminasa en las Absisas (eje X ),
y las absorbancias en las ordenadas (eje Y).
Ensayo
BLANCO TGO TGP
Sustrato TGO (mL) 0.5 0.5 -
Sustrato TGP (mL) - - 0.5
Incubar por 3 minutos a 37°C.
Agua destilada (mL) 0.1 - -
Muestra (mL) - 0.2 0.1
Incubar por 30 minutos a 37°C.
Reactivo color (mL) 0.5 0.5 0.5
Incubar por 20 minutos a temperatura ambiente (sobre 20°C).
NaOH 0.4 N (mL) 5.0 5.0 5.0
Mezclar por inversión y leer las absorbancias a 505 nm (500-550 nm) contra el
Blanco Reactivo. El Color resultante es estable 30 minutos.
e. Cálculos
Determinar la actividad de las Transaminasas por interpolación de las absorbancias
obtenidas en la Curva de Calibración.
f. Rango de referencia
TGO (37º C) : 5 – 40 U/L
TGO (37º C) : 5 – 45 U/L
4. RESULTADOS
4.1. CURVA DE CALIBRACIÓN
TGO U/L Abs TGP U/L Abs
0 0 0 0
22 0.06 25 0.055
55 0.098 50 0.095
95 0.116 83 0.127
150 0.158 126 0.157
215 0.189
CURVA DE CALIBRACIÓN TGO
0.25
0.189
0.2
0.158
Absorbancia
0.15
0.116
0.098
0.1
0.06
0.05
0
0
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200 210 220
TGO (U/L)
CURVA DE CALIBRACIÓN TGP
0.18
0.157
0.16
0.14 0.127
0.12
Absorbancia
0.095
0.1
0.08
0.055
0.06
0.04
0.02
0
0
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140
TGP (U/L)
MUESTRA Nº 1
ABSORBANCIA U/L
TGO 0.025 9
TGP 0.022 8
𝑇𝐺𝑂 9
𝐶𝑜𝑐𝑖𝑒𝑛𝑡𝑒 𝑑𝑒 𝐷𝑒𝑟𝑖𝑡𝑖𝑠 = = = 1.125
𝑇𝐺𝑃 8
MUESTRA Nº 2
ABSORBANCIA U/L
TGO 0.129 105
TGP 0.070 33
𝑇𝐺𝑂 105
𝐶𝑜𝑐𝑖𝑒𝑛𝑡𝑒 𝑑𝑒 𝐷𝑒𝑟𝑖𝑡𝑖𝑠 = = = 3.18
𝑇𝐺𝑃 33
MUESTRA Nº 3
ABSORBANCIA U/L
TGO 0.099 52
TGP 0.217 173
𝑇𝐺𝑂 52
𝐶𝑜𝑐𝑖𝑒𝑛𝑡𝑒 𝑑𝑒 𝐷𝑒𝑟𝑖𝑡𝑖𝑠 = = = 0.3
𝑇𝐺𝑃 173
CONCLUSIONES
La primera muéstranos el valor 3.18, este valor excede a la unidad por lo que se
diagnostica: por tanto se puede presumir que puede ser, cirrosis hepática hepatitis
carcinoma, hígado con metástasis.
En la muestra 2 el valor 1.125, este excede al rango permitido
En la muestra 3 el valor es 0.3, esto está por debajo del rango.
5. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
Bakker AJ, Mücke M. Gammopathy interference in clinical
chemistry assays: mechanisms, detection and prevention.
ClinChemLabMed 2007;45(9):1240-1243
ANÁLISIS CLÍNICOS, ¿COMO ENTENDERLOS E INTERPRETARLOS? -
Hans Peter Seelig, Marion Meiners (2011)
CUESTIONARIO Nº 11
1. DefinirTransaminasas.
Las transaminasas son enzimas que se localizan en el interior de células de órganos como el
hígado, el corazón o de algunos músculos y que cumplen una función metabólica en el cuerpo.
Cuando se detectan niveles elevados en sangre, puede traducirse en problemas de salud,
principalmente en el hígado, causando un daño hepático que debe tratarse.
Existen dos tipos comunes de esta enzima que son el glutamato oxalacetato (GOT), presente
en el hígado y en otros órganos como músculos, riñones o corazón, y el glutamato piruvato
(GPT), más propio del hígado que el anterior.
2. Enumerar las transamínasa conocidas y determinar su localización.
Las transaminasas principales son dos:
AST o GOT
ALT o GPT. La GGT (Gamma-glutamil transpeptidasa) que se encuentra en riñón,
hígado, bazo y páncreas.
3. Numerar los trastornos que alteran los valores normales de las Transaminasas TGO y
TGP.
TGO
• Lesión hepática
• Lesión muscular o cardíaca
• Fármacos tóxicos para el hígado
• Abuso de drogas o alcohol
• Pancreatitis
• Infarto
• Embarazo
• Ejercicio de alta intensidad
• Factor estresante como una cirugía
• Un gran quemado
TGP
• Lesión hepática (es más útil que AST para detectar enfermedades hepáticas)
• Lesión muscular o cardíaca
• Fármacos tóxicos para el hígado
• Abuso de drogas o alcohol
• Obstrucciones de los conductos biliares
• Cirrosis.
4. Describir el anabolismo y catabolismo del nitrógeno por las transaminasas.
Flujo global del nitrógeno en el catabolismo de los aminoácidos. Las transaminaciones confluyen
el nitrógeno amídico al glutamato, desde el cual se lo extrae (exit door) por desaminación para
ser transportado en sangre (amoniaco libre, glutamina, asparagina y alanina) hasta el hígado para
sintetizar urea y ser excretada luego por el riñón.
5. Definir embolia pulmonar e infarto pulmonar.
La embolia pulmonar es una obstrucción en una de las arterias de los pulmones. En la mayoría
de los casos, la embolia pulmonar es causada por coágulos sanguíneos que viajan a los
pulmones desde las venas profundas de las piernas o, raramente, desde las venas de otras
partes del cuerpo (trombosis venosa profunda).
El infarto pulmonar es una lesión isquémica del parénquima que acontece en el contexto de
un tromboembolismo pulmonar cuando la obstrucción arterial priva de perfusión a dicha zona
y la circulación bronquial adyacente no aporta el flujo necesario.
6. Indicar la proporción entre TGO y TGP.
