Bloque Bacteriología
APO 3
Bloque Bacteriología – Marcha bacteriológica
MUESTRA
“Parte de un todo que se toma para representar el conjunto”
La confiabilidad de un diagnóstico depende en gran medida
de la MUESTRA.
MUESTRA
CANTIDAD CONSERVADA
REPRESENTATIVA SUFICIENTE ADECUADAMENTE DE
CALIDAD
MUESTRAS CLÍNICAS
1* PASO
•Áreas normalmente estériles (sangre, orina renal y vesical,
LCR, líq. sinovial y peritoneal, hígado, corazón, pulmón, cerebro)
•Áreas normalmente colonizadas (tracto respiratorio,
digestivo, genital, piel, auditivo)
TOMA DE MUESTRA CLÍNICAS
Elementos o instrumentos Recipientes adecuados para el
para la toma de muestra transporte y acondicionamiento
clínicas
¿Qué entienden por?
“Cultivo de microorganismos”
Se llama cultivo al proceso que consiste en
propagar microorganismos brindándoles el medio
y las condiciones ambientales adecuadas.
Finalidades del cultivo
Aislamiento de microorganismos en colonias
puras.
Estudio de características culturales.
Estudios de actividades metabólicas.
Preparación de vacunas y antígenos.
Conservación de gérmenes en colección.
Obtención de grandes masas microbianas.
Obtención de gérmenes con fines industriales.
¿Qué entienden por…?
“Medios de cultivo”
Los medios de cultivo son una mezcla equilibrada
de componentes nutricionales, que reúnen las
condiciones para permitir la multiplicación In
Vitro de los gérmenes que allí se siembran.
Cultivo de microorganismos
¿Qué condiciones se requieren para que un
microorganismo pueda ser multiplicado
In Vitro?
•Relacionadas con el medio de cultivo
Nutrientes: esenciales y no esenciales.
pH (7,2- 7,4)
Humedad: Actividad del agua
Esterilidad (121*C 15 min)
Osmoralidad
Relacionadas con las condiciones de
incubación. Temperatura
Tiempo de incubación
Condición atmosférica
Cultivo de microorganismos
Componentes básicos de los medios de cultivo
Peptona: fuente de nutrientes esenciales (N, C)
ClNa: mantener la presión osmótica
Fuente de C y N PEPTONA 10 grs
Presión osmótica Cl NA 5grs
Agua destilada 1000 ml
Cultivo de microorganismos
Las bacterias nutricionalmente exigentes,
necesitan la presencia de nutrientes esenciales
y no esenciales para su crecimiento.
Extracto de levadura
Sangre
Suero
Aminoácidos
Vitamina
Factor X (hemina) Factor V (NAD)
CURVA DE CRECIMIENTO BACTERIANO NORMAL
A- FASE DE LATENCIA O ADAPTACIÓN
B- FASE EXPONENCIAL
C-FASE PRE-ESTACIONARIA
D-FASE ESTACIONARIA
E- FASE DE MUERTE
Preparación medio de cultivo comercial
Medios de cultivo - Clasificación
Según origen
Según consistencia
Según finalidad
En función de su origen
NATURALES: son de composición química indefinida,
preparados a partir de sustancias naturales de origen
animal o vegetal.
SINTÉTICOS: contienen una composición química
definida.
SEMISINTÉTICOS: son los medios sintéticos a los
que se añaden factores de crecimiento bajo la forma de
un extracto orgánico complejo, [Link].: extracto de
levadura.
En función de su consistencia
Líquido: también denominado caldo.
Semisólido o agar blando: su consistencia es
gelatinosa y se obtiene agregando agar al caldo
en concentración del 0,7%.
Sólido: llamado también agar estría, agar duro o
agar placa, obtiene su consistencia por el
agregado de una mayor cantidad de agar al caldo
original, generalmente el 2%.
En función de su utilidad o finalidad
•Medios de transporte
•Medios simples o comunes
•Medios mejorados o enriquecidos
•Medios diferenciales
•Medios selectivos
•Medios especiales
Medio deTransporte
Permite el mantenimiento de muestras clínicas sin
modificaciones en cuanto a calidad y cantidad de
microorganismos presentes, hasta su procesamiento
en el laboratorio.
No tiene nutrientes sino agua, sales
y un amortiguador de pH (Stuart).
Medio Común o simple
Es aquel que reuniendo los
elementos mínimos permite
el desarrollo de la mayor
parte de las bacterias
nutricionalmente no
exigentes.
Medio Mejorado o Enriquecido
Es un medio simple con el agregado de sustancias que
aumentan su poder nutritivo (sangre, suero, extracto de
levadura, vitaminas) en proporción del 1 al 10%.
Agar sangre
Agar chocolate
Medio Selectivo
Es el medio que permite seleccionar ciertos
microorganismos frenando el desarrollo de
otros, mediante el agregado de sustancias
inhibidoras.
– antibióticos
– ciertos colorantes
– azida de sodio
– sales biliares
– cloruro de sodio 7,5 %
Les images ont été réalisées par Pascal Fraperie. Lycée Saint Louis. Bordeaux.
Medio Diferencial
Es el medio que permite diferenciar bioquímicamente a las
bacterias por su actividad metabólica.
•EMB
•Agar MacConkey
•Agar Hektoen Entérico
•Agar Manitol Salado
•TKT
Medio Especial
La constitución de este medio presenta sustancias
especiales que cumplen con las exigencias de algunas
bacterias por lo que permite que se desarrollen en forma
óptima.
Medios de cultivo selectivos y diferenciales para
aislamiento de enterobacterias
•Agar Eosina Azul de Metileno
•Agar MacConkey
•Agar Hektoen Entérico
Eosina Azul de Metileno Agar MacConkey
(EMB)
Lactosa (sustrato) y rojo
Lactosa y sacarosa como sustratos, neutro (indicador);
y como indicadores azul de metileno cristal violeta y sales
y eosina. biliares (inhibidores)
Medios de cultivo selectivos y diferenciales para
aislamiento de estafilococos
•Agar Manitol Salado (manitol, rojo de fenol, ClNa 7 %)
•Agar Staphylo 110
•Agar Baird Parker (telurito de potasio)
Medios de cultivo selectivos y diferenciales para
aislamiento de estreptococos
•Agar CNA (colistina y ácido nalidíxico)
•Agar Edwards Modificado (sulfato de talio,
cristal violeta, esculina, sangre)
¿En qué tenemos que pensar cuando elegimos el
medio de cultivo para sembrar la muestra?
• Posibles agentes etiológicos
• Requerimientos nutricionales
• Origen de la muestra (área
normalmente estéril o colonizada)
Tipo de muestra Requerimiento Tipo de medio de
nutricional del agente cultivo
etiológico presuntivo
Normalmente No exigente Medio selectivo y
colonizada diferencial
Normalmente Exigente Medio enriquecido y
colonizada selectivo
Normalmente estéril No exigente Medio simple
Normalmente estéril Exigente Medio enriquecido
SIEMBRA
La técnica por la cual se inocula o introduce artificialmente
una porción de muestra (inóculo) en un medio adecuado, con el
fin de iniciar un cultivo microbiano, para su desarrollo y
multiplicación
Técnica de
siembra
Condiciones de incubación
TIEMPO
TEMPERATURA
CONDICIÓN ATMOSFÉRICA
Fisión binaria
Tiempo de generación
Tiempo de
incubación
Clasificación en base a tiempo de
crecimiento
Menos de 7 días
Más de 7 días
E. coli Mycobacterium 12 hs
20´
DESARROLLO BACTERIANO
Colonia Población
Desarrollo en medio líquido
Desarrollo en medio sólido
Las colonias tienen características especiales
según el tipo bacteriano que las conforma.
Observar: forma, pigmentación, dimensiones,
elevación, contorno y superficie.
ELEVACIÓN O PERFIL
Plana Convexa Convexa Plato o
baja alta meseta
BORDE
Entero Irregular Crenado
Morfología y aspecto de las colonias
CULTIVO DE MICROORGANISMOS
Desarrollo de microorganismos en función de la
presencia de oxígeno atmosférico.
AEROBIO ANAEROBIO MICROAEROFILO
AISLAMIENTO DE BACTERIAS AEROBIAS
POR DILUCIÓN
Se preparan diluciones en base 10 y por
cada una se emplea una placa de Petri.
POR DISEMINACIÓN
Se utilizan varias placas de Petri o una sola
placa, según el método y técnica a emplear.
Dilución (conteo viable)
¿Cuál sería el UFC/ml en una muestra de una
autovacuna si el recuento de colonias teniendo en
cuenta los resultados de las diluciones 10-3 (n= más
de 300, incontables), 10-4 (n=150) y 10-5(n=20).
UFC/ml = 150 (N° UFC) x 104 (dilución) x 10 (para llevar
a ml)= 1,5 x 107 UFC/ml
Nota: se debe calcular con el recuento de la dilución que
tenga entre 30 y 300 colonias.
Cultivo de anaerobios
Las bacterias anaerobias desarrollan en
atmósferas sin oxígeno libre que contienen:
»5-10% de H2
»5-10% de CO2
»80-90% de N2
Obtención de atmósfera anaeróbica
Métodos físicos
•Producción de vacío
•Ebullición
•Reemplazo de gases
Métodos químicos (Reductores)
•Atóxicos
•Tóxicos
Métodos combinados (jarra)
Métodos físicos
»Producción de vacío
»Ebullición
»Reemplazo de gases
Sustancias reductoras atóxicas
Se agregan al medio de cultivo pues no son
tóxicas para los microorganismos.
»Tejidos animales.
»Glucosa.
»Tioglicolato de sodio.
»Cisteína.
»Ácido ascórbico.
Sustancias reductoras tóxicas
»En desuso (fósforo amarillo, ácido
sulfúrico, mostaza nitrogenada)
Métodos combinados: jarra de anaerobios
Indicadores de anaerobiosis
Indicadores físicos: sensores
Indicadores químicos (colorantes que en
anaerobiosis se reducen a su leucobase)
»azul de metileno al 0,5%
»resazurina 0,01 g/l
Indicadores biológicos
»Clostridium haemolyticum
