LABORATORIO # 4
TECNICAS DE CONCENTRACION EN EL
EXAMEN COPROPARASITOLOGICO
OBJETIVO DE LA PRACTICA
► Realizar métodos de concentración y comparar el rendimiento con el método
coproparasitologico directo y seriado
FUNDAMENTO TEORICO
► Los métodos de concentración tienen como finalidad , el aumentar el numero de parásitos en el volumen
de materia fecal que se examina , mediante procedimientos de sedimentación o flotación. Estos
volúmenes de materia fecal que se examina , mediante procedimientos de sedimentación o flotación.
► Estos métodos deben realizarse de rutina en el examen coproparasitologico en aquellas muestras en las
que no se encontraron parásitos mediante el examen coproparasitologico simple y seriado. En el material
concentrado se encuentran mas parásitos que en el resto del material fecal.
► Tiene como desventajas que los trofozoitos son destruidos por ambos procedimientos , excepto cuando
están conservadas en Mif (martiolate , iodo, formol).
METODOS DE CONCENTRACION POR
SEDIMENTACION
► TECNICA DE RITCHIE O DE CENTRIFUGACION CON FORMOL ETER
Es el procedimiento mas utilizado para concentrar quistes de protozoo , huevos y larvas de helmintos ya que
todas sedimentan , están en buenas condiciones de preservación y son mas abundantes. El método es el
siguiente:
► Si la materia fecal es dura, agregue solución isotónica y mezcle hasta que quede liquida. En cantidad
aproximada de 10ml.
► Pase por una gasa doble y húmeda, aproximadamente 10ml de la materia fecal liquida , a un tubo cónico
de centrifuga de 15ml.
► Centrifugue a 1500-2000 rpm por 2 minutos.
► Decante el sobrenadante ( siempre sobre un desinfectante que puede ser formol concentrado o
lavandina).
► Diluya el sedimento en solución salina , centrifugue como antes y decante. Realizar la misma operación
hasta que el sobrenadante este limpio.
► Agregue al sedimento aproximadamente 10ml de formol al 10% , mezcle bien y deje reposar por
5 min. En este paso se mata y preserva protozoarios , larvas y la mayoría de los huevos de
helmintos.
► Agregue 3ml de éter , tape el tubo y mezcle fuertemente duramente 30 segundos. Destape
cuidadosamente ya que al salir el vapor de éter puede salpicar restos fecales. Este paso extrae
las grasas de las heces y reduce el volumen.
► Centrifugue a 1500rpm por 2 min.
► Se forman cuatro capas distribuidas asi: un sedimento pequeño que contiene los huevos ,
quistes , etc. Una capa de formol salino: un anillos con restos fecales y el éter en la superficie.
► Con un palillo afloje de las paredes del tubo del anillo con restos de materias fecales y
cuidadosamente decante ( en desinfectante , puede ser formol o lavandina) las tres capas
superiores.
► Mezcle el sedimento con la pequeña cantidad de liquido que baja por las paredes del tubo y
haga preparaciones en fresco y con lugol , para ver en el microscopio.
TECNICA SIMPLIFICADA CON FORMOL-ETER
► Es similar a la anterior en todos sus aspectos , pero mas rápida y sencilla.
► Tome en un frasco de plástico de boca ancha ( de los utilizados para recolectar muestras) en partes
iguales de solución salina isotónica y formol al 10% , aproximadamente 10ml.
► Agregue mas o menos 1gr de materia fecal y mezcle bien.
► Filtrar por gasa doble previamente humedecida.
► Agregar 3ml de éter , agite fuerte y destape con cuidado ( el éter puede remplazarse por gasolina ,
que es menor costo , con resultados iguales).
► Centrifugue 2min. A 2000rpm.
► Decante las tres primeras capas ( éter , restos de material fecal y formol salino).
► Estudiar el sedimento como en la técnica anterior.
TECNICAS DE CONCENTRACION POR FLOTACION
► TECNICA DE FAUST O DE FLOTACION CON ZNSO4
Este es un método en el cual la materia fecal se diluye en un liquido de alta densidad y los parásitos , que
proporcionalmente son mas livianos , van a la superficie. Para esta técnica se utiliza sulfato de zinc al 33% con
densidad 1.18 o 1.20 ( esta ultima es preferible cuando se examinan muestras fecales tratadas con formol).
Es importante notar que con este método no se obtienen con facilidad los huevos operculados ni los infértiles de
Áscaris. Además la alta densidad causa distorsión de otros huevos frágiles los de Hymenolepis nana. Por estas
razones , es recomendable que si se utiliza un solo procedimiento de concentración con formol – éter .
► Esta técnica es mejor para quistes de protozoo que para huevos y larvas de helmintos. El éxito depende de la
exactitud en la densidad de sulfato de zinc. Cuando la materia fecal esta fijada en formol al 5% y al 10% ,
debe usarse el sulfato de zinc con densidad de 1.20.
► La técnica utilizada es la siguiente:
► Se diluye 1 gr de materia fecal en 10ml de agua y se filtra por gasa doble o cuadrupie.
► Centrifugar a 2500 rpm un minuto.
► Descartar el sobrenadante. Si la muestra es muy grasosa se repite el centrifugado cambiando de agua y
mezclando nuevamente.
► Resuspender el sedimento con sulfato de zinc o reactivo de faust (densidad 1.18), luego se completa hasta
llegar a 1cm del borde del tubo y se centrifuga a 2500 rpm durante un minuto , sin frenar la centrifuga.
► Colocar el tubo cuidadosamente en una gradilla y recoger el sobrenadante con un asa de platino o una
pipeta y se lleva al portaobjetos.
► También puede elevarse el nivel del liquido hasta formar un menisco , añadiendo sulfato de zinc por las
paredes del tubo , para no alterar la película superficial. En este caso se coloca un cubre-objetos sobre el
menisco y se deja en esta posición durante 10min , de modo que en su cara interior quede adherida la gota
que contiene huevos , larvas y quistes.
► Las preparaciones se montan en el lugol y en solución salina y se llevan al microscopio para buscar
parásitos.
► Como los huevos y quistes de parásitos se flotan a la superficie de la solución vuelven a descender al cabo
de una hora , se deben hacer las preparaciones en porta-objetos , tan pronto como termine la
concentración. El contacto prolongado con el sulfato de zinc , puede deformar los quistes y dificultar su
identificación , por lo tanto estas preparaciones deben ser examinadas lo antes posible.
TECNICA DE WILLIS Y MALLOW CON SOLUCION SATURADA
DE CLORURO DE SODIO
► Esta técnica no quiere centrifuga y es útil , principalmente para huevos de uncinaria e hymenolepis , que
flotan fácilmente; pero también sirve para los otros parásitos. Se utiliza con mucha frecuencia en
parasitología veterinaria , por la facilidad de relazarse en el campo. El método no es indicado para
evidenciar protozoarios y larvas de helmintos en heces.
► El procedimiento es como sigue:
► En una cubeta o en vasito de unos 250ml de capacidad , colocar una pequeña cantidad del reactivo de
Willis ( solución saturada de cloruro de sodio).
► Con paleta de madera tomar mas o menos 1gr de materia fecal y mezclar con la solución saturada con
movimientos rotatorios.
► Colocar mas solución saturada de manera que la superficie del liquido tenga el borde superior o menisco.
► Colocar un portaobjeto numerado con el numero de muestra sobre la boca de cubeta (sobre el menisco)
apoyando primero un lado de la boca de la cubeta y dejarla en esta situacion Durante 5 o 10 min.
► Levantar la lamina , invirtiendo rápidamente su posición para evitar la caída de los huevos , colocarle un
portaobjeto y examinar al microscopio todo el material así obtenido.
► Tomar en cuenta no rebalsar la cubeta porque en este caso se pierden muchos huevos , en estas
circunstancias es necesario repetir la operación.
CUESTIONARIO
1. ¿Que ventajas tiene realizar métodos de concentración?
2. ¿Cuál es el fundamento de las técnicas de concentración por flotación?
3. ¿Por qué el uso de gasolina o éter en las técnicas de sedimentación?
4. ¿Para que tipo de parásitos es útil la técnica de Ritchie?
5. ¿Cuáles son las ventajas de la técnica de Willis Malow?
6. ¿En caso de emplearse una técnica de concentración cual eligiria y porque?
7. ¿ Que reactivo utilizamos en la técnica de faust o de flotación?
8. ¿Qué se encuentra en la técnica de faust o de flotación?
9. ¿Cuál de las técnicas no requiere centrifuga?
10. ¿Qué se encuentra en la técnica de Ritchie o de centrifugación con formol-eter?
GRACIAS POR SU ATENCION
