UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN

MARCOS

FACULTAD DE QUIMICA E INGENIERÍA QUÍMICA

DEPARTAMENTO ACADÉMICO DE QUÍMICA

INORGÁNICA

LABORATORIO DE SÍNTESIS INORGÁNICA

INFORME

TECNICAS EN LABORATORIO-CROMATOGRAFÍA

PROFESOR: Angulo Cornejo, Jorge Reynaldo

ALUMNO: Huaman Lopez, Manuel David 16070081
Jimenez Zarate, Angelica Jasmin 16070084

Fecha de realización de la práctica: 26/11/2021

LIMA-PERÚ
¿QUÉ ES LA CROMATOGRAFÍA?
La Cromatografía es una técnica de separación en la que los componentes de una muestra
se separan en dos fases: una fase estacionaria de gran área superficial, y una fase móvil.
El objetivo de la fase estacionaria es retrasar el paso de los componentes de la muestra.
Cuando los componentes pasan a través del sistema a diferentes velocidades, estos se
separan en determinados tiempos. Cada componente tiene un tiempo de paso
característico a través del sistema, llamado tiempo de retención. La separación
cromatográfica se logra cuando el tiempo de retención del analito difiere del resto de
componentes de la muestra.
La cromatografía puede ser preparativa y analítica.
 La cromatografía preparativa se refiere a la separación de los componentes de una
mezcla para su posterior procesamiento, y se puede considerar un método de
purificación.
 En la cromatografía analítica generalmente se hace con una pequeña muestra
permitiendo para cuantificar la proporción relativa de los componentes en la
mezcla.
La cromatografía es uno de los principales métodos analíticos y permite la separación y
cuantificación de sustancias muy similar en estructura y propiedades químicas.
TIPOS DE CROMATOGRAFÍA

Dependiendo de la tecnología utilizada, de la naturaleza del soporte (fase estacionaria) y

de la sustancia móvil (fase móvil), se pueden diferenciar los siguientes tipos de
cromatografía:

• Cromatografía en papel. La fase estacionaria está formada por una tira de papel
de filtro. La muestra para analizar se coloca en forma de gota sobre un extremo
del papel. Luego se sumerge la tira de papel en un recipiente donde se encuentra
la fase móvil, teniendo en cuenta que el extremo donde está colocada la muestra
quede en la parte de abajo del papel. La fase móvil asciende por capilaridad
arrastrando consigo la muestra y separando cada componente según su afinidad
por la fase estacionaria. Este tipo de cromatografía se emplea principalmente
cuando cada componente de la muestra tiene un color diferente, entonces se puede
ver el despliegue de colores sobre el papel para identificarlos.

• Cromatografía en capa fina. El funcionamiento de esta técnica es parecido al de

la cromatografía en papel, pero en este caso la fase estacionaria se construye
depositando una resina polar (casi siempre sílica gel), sobre una placa de vidrio o
aluminio. Se coloca cierta cantidad de la muestra a 1cm del borde inferior de la
placa. Luego se sumerge esta placa, teniendo en cuenta que el extremo que
contiene la muestra debe quedar hacia abajo, en un recipiente que contiene la fase
móvil. La fase móvil asciende por capilaridad separando los componentes de la
muestra.
 • Cromatografía en columna. La fase estacionaria se coloca dentro de una
columna que puede ser de vidrio o acero inoxidable, entre otros materiales. La
fase móvil puede ser líquida o gaseosa. La muestra se coloca en el extremo
superior de la columna y se deja descender con la fase móvil utilizando la
gravedad. De este modo, la cromatografía en columna se puede clasificar como:

a. Cromatografía sólido-líquido. La fase estacionaria es sólida y la móvil

es líquida.
b. Cromatografía líquido-líquido. Ambas fases son líquidas.
c. Cromatografía líquido-gas. La fase estacionaria es líquida y la móvil es
gaseosa.
d. Cromatografía sólido-gas. La fase estacionaria es un sólido y la móvil es
gaseosa.

Por otro lado, atendiendo al tipo de interacción del analito entre las fases estacionarias y
móviles, tenemos los siguientes tipos de cromatografía:

• Cromatografía de adsorción. En este tipo de cromatografía la fase estacionaria

es un sólido, mientras que la fase móvil es un líquido. La sustancia que forma la
fase estacionaria puede ser alúmina (Al2O3), sílice (SiO2) o resinas de intercambio
iónico (matrices que tienen sitios electrostáticamente activos, debido a lo que el
analito se retiene en ellas por interacción electrostática). La fase móvil puede estar
formada por un solvente o una mezcla de solventes. Algunos componentes de la
mezcla serán retenidos con mayor fuerza que otros, de esta forma ocurre la
separación.
• Cromatografía de partición. Se da cuando la separación de los analitos de la
mezcla se produce por diferencias de sus solubilidades o polaridades entre la fase
estacionaria y la fase móvil, siendo ambas fases líquidos inmiscibles. La
tecnología de las fases estacionarias ha avanzado y ya existen variedades de
líquidos embebidos en sólidos y resinas que se utilizan con este fin. En este sentido
existen dos tipos de cormatografía dependiendo de la polaridad de la fase
estacionaria y la fase móvil:
o En fase normal. La fase estacionaria es polar y la fase móvil es apolar.
o En fase reversa. La fase estacionaria es apolar y la fase móvil es polar.
• Cromatografía de intercambio iónico. Cuando la fase estacionaria es sólida y
posee grupos funcionales ionizables, es decir, con carga, que son capaces de
intercambiar su carga con el analito. Puede clasificarse en:
o Cromatografía de intercambio catiónico. La fase estacionaria contiene
grupos funcionales cargados negativamente, por lo que retiene cationes
(cargados positivamente).
o Cromatografía de intercambio aniónico. La fase estacionaria contiene
grupos funcionales cargados positivamente, por lo que retiene aniones
(cargados negativamente).
• Cromatografía de exclusión molecular. La fase estacionaria es un material
poroso a través del que eluyen los analitos, dependiendo de sus tamaños. En este
tipo de cromatografía no existe ningún tipo de interacción física o química entre
los analitos y la fase estacionaria. Los analitos de mayor tamaño eluyen primero,
es decir, no son retenidos en la fase estacionaria. Mientras que los analitos de
menor tamaño quedan atrapados en los poros de la fase estacionaria y van saliendo
de ella a medida que se pasa la fase móvil (líquida).
Con el avance del conocimiento y la tecnología, las técnicas cromatográficas fueron
perfeccionándose y cada vez se han podido separar, identificar y cuantificar de manera
más exacta las sustancias presentes en una mezcla. Dos ejemplos de cromatografías
avanzadas son la HPLC (Cromatografía Líquida de Alta Eficacia) y la GC (Cromatografía
Gaseosa).

• HPLC. Consiste en un tipo de cromatografía en columna, pero cuya fase móvil

se bombea a altas presiones a través de la fase estacionaria dentro de la columna.
La aplicación de una presión alta reduce la difusión de los analitos por la fase
estacionaria, logrando así mejores resultados, además de disminuir los tiempos de
trabajo.
• GC. La fase móvil es un gas y la fase estacionaria puede ser un sólido o un líquido.
La muestra se volatiliza antes de inyectarla en la columna cromatográfica, pues
debe ser gaseosa para que el gas portador la transporte.

¿QUÉ SIGNIFICA EL RF?

La relación entre las distancias recorridas por el soluto y por el eluyente desde el origen
de la placa se conoce como Rf, y tiene un valor constante para cada compuesto en unas
condiciones cromatográficas determinadas (adsorbente, disolvente, tamaño de la cubeta,
temperatura, etc.).
EXPLIQUE LA SIGUIENTE FIGURA

Una placa de CCF es una lámina de vidrio, metal o plástico recubierta con una capa
delgada de un sólido adsorbente (gel de sílice o alúmina). Se deposita una pequeña
cantidad de la muestra problema en disolución en un punto en la parte inferior de la placa.
Entonces la placa se introduce en una cubeta cromatográfica, de forma que sólo la parte
inferior de la placa queda sumergida en el líquido. Este líquido o eluyente es la fase móvil
y asciende por la placa de CCF por capilaridad.

A medida que el eluyente pasa por el lugar donde está la mancha de la mezcla problema
se establece un equilibrio entre las moléculas de cada uno de los componentes en la
mezcla que son adsorbidas y las que se encuentran en disolución.

En principio, los componentes se diferenciarán en solubilidad y en la fuerza de su

adsorción, de forma que unos componentes se desplazarán más que otros. Cuando el
eluyente llega a la parte superior de la placa, esta se saca de la cubeta, se seca, y los
componentes separados de la mezcla se visualizan.
CROMATOGRAFIA EN COLUMNA
En las cromatografías en columna, se usa como soporte un tubo
de vidrio que contiene en su interior una fase estacionaria sólida
finamente molida (sacarosa, silicagel, alúmina, resinas activas) o
bien un tubo de vidrio relleno con un sólido inerte finamente
molido, lo que en conjunto actuará como soporte de una fase
estacionaria líquida absorbida en ese sólido. También pueden
utilizarse columnas capilares en las cromatografías que tienen
FM gaseosa.
Las cromatografías en columna se suelen denominar según la
naturaleza de la fase móvil: “Cromatografía líquida” y
“Cromatografía gaseosa”. En las cromatografías en columna la
fase móvil se desplaza sobre la fase estacionaria por acción de la
gravedad y/o por aplicación de una presión para que sea posible
la circulación del fluido por el interior de la columna de diámetro
pequeño.
Las cromatografías en columna se realizan generalmente utilizando un equipo
denominado cromatógrafo, el que permite obtener un registro de la cromatografía
realizada que se denomina cromatograma.
PREPARACION DE LA COLUMNA
Se llena la columna hasta un tercio de su altura con eluyente. A continuación, se prepara
una suspensión del adsorbente (fase estacionaria) en el eluyente (fase móvil) y se vierte
lentamente (para evitar la formación de burbujas) en el interior de la columna. Esta
operación se puede realizar en varias adiciones, añadiendo más eluyente a la suspensión
a medida que sea necesario. Con el fin de favorecer una distribución más uniforme del
adsorbente en la columna, así como eliminar las pequeñas burbujas que se puedan haber
formado, se puede golpear suavemente la pared externa de la columna con un tubo de
goma. La columna se llena hasta aproximadamente la mitad
de su altura, reservándose la parte superior para la fase
móvil. Se abre la llave de la columna y se deja fluir el
eluyente hasta que la altura de éste en la columna quede
aproximadamente un milímetro por encima del adsorbente.
La superficie de la fase estacionaria debe presentar un
aspecto uniforme, liso y perpendicular al eje longitudinal de
la columna. NOTA: a lo largo del proceso cromatográfico
la columna nunca debe “secarse”, esto es, la fase
estacionaria debe encontrarse en todo momento cubierta por
la fase móvil, ya que de lo contrario la fase estacionaria se
contraería y agrietaría.
Decantación
Esta técnica de separación de un sólido del seno de la
disolución en que se ha formado, la más sencilla de todas,
consiste en el vertido cuidadoso de un líquido sobrenadante.
Como paso previo es necesario dejar reposar la mezcla hasta que el precipitado se separe
de una forma nítida en el fondo del recipiente, quedando transparentes las aguas madres.
Conviene realizarla en un recipiente que facilite el vertido (por ejemplo, en un vaso de
precipitados) y en una etapa que, realizada previamente a otras técnicas más finas como
la filtración, supone un ahorro considerable de tiempo en la purificación de sustancias
insolubles.
El tapón y la llave, que deben estar bien ajustados, se lubrican con una grasa adecuada
antes de cada uso. El embudo de decantación debe manejarse con ambas manos; con una
se sujeta el tapón asegurándolo con el dedo índice o con la palma de la mano y con la otra
se manipula la llave. Se invierte el embudo y se elimina la presión de su interior; se agita
con suavidad durante uno o dos segundos y se abre de nuevo la llave. Cuando deja de
aumentar perceptiblemente la presión en el interior, se aseguran tapón y llave y se agita
enérgicamente durante uno o dos minutos. Se pone de nuevo en contacto con la atmósfera
a través de la llave, se vuelve a cerrar ésta y se apoya, ya en posición normal, en un aro
metálico con unos trozos de tubo de goma que lo protegen de las roturas. Se destapa y se
deja en reposo hasta que sea nítida la separación entre las dos capas del líquido. En la
parte inferior debe tenerse siempre un vaso de precipitados de gran tamaño con objeto de
poder recoger todo el líquido en caso de que el embudo se rompiese por accidente.
BIBLIOGRAFÍA
Tipos de extracción. [Link]. [Internet]. [Recuperado el 28 de noviembre del 2021].
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Cromatografía. [Internet]. [Recuperado el 28 de noviembre del 2021]. Disponible en:
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