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FÓSFORO TOTAL EN AGUAS
LABORATORIO Encantia 01
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1. PRINCIPIO
Dado que el fósforo se puede presentar en combinación con materia orgánica, un método de digestión
para la determinación del fósforo total debe ser capaz de oxidar la materia orgánica eficazmente para
liberar el fósforo como ortofosfato. El método del ácido perclórico es el más drástico y lento, se
recomienda para muestras especialmente difíciles, como los sedimentos. El método del ácido nítrico -
ácido sulfúrico se recomienda para la mayoría de las muestras. El método más sencillo, con diferencia,
es la técnica de oxidación con Persulfato, no recomendable para muestras como sedimentos. Tras la
digestión, determínese el ortofosfato liberado por el método de cloruro estagnoso.
El análisis de fósforo involucra dos pasos generales:
a. Conversión de la forma de fósforo de interés a ortofosfato disuelto
b. Determinación colorimétrica de ortofosfato disuelto
La filtración a través de membrana de 0,45 mm separa las formas disueltas de las suspendidas del
fósforo. Es solamente una técnica analítica conveniente para hacer una separación gruesa. Realizar
una pre-filtración a través de fibra de vidrio para incrementar la velocidad de filtración.
Los fosfatos que responden a las pruebas colorimétricas sin hidrólisis preliminar o digestión oxidativa
de la muestra son llamados “fósforo reactivo”. El fósforo reactivo es en general una medida de
ortofosfato, una pequeña fracción de cualquier fosfato condensado presente usualmente es hidrolizado
inevitablemente en el procedimiento. El fósforo reactivo se encuentra en forma suspendida y disuelta.
La hidrólisis ácida a temperatura de ebullición del agua convierte las formas de fosfatos disueltos y
particulados a ortofosfato disuelto. La hidrólisis inevitablemente libera algunos fosfatos de compuestos
orgánicos, pero esto puede reducirse al mínimo por una selección cuidadosa de la concentración del
ácido, el tiempo y la temperatura de hidrólisis. El término “fósforo ácido-hidrolizable” es más
conveniente que “fosfato condensado” en esta fracción.
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Las fracciones de fosfato que son convertidas a ortofosfato solamente por la oxidación que destruye la
materia orgánica presente son considerados como” fósforo orgánico”.
La severidad de la oxidación requerida para esta conversión depende de la forma y la magnitud de la
concentración del fósforo orgánico presente. Todas las formas del fósforo se hallan en formas
precipitadas o disueltas.
2. ALCANCE
El fósforo se encuentra en las aguas naturales y residuales casi exclusivamente en forma de fosfatos,
clasificados en ortofosfatos, fosfatos condensados, (piro, meta y otros polifosfatos) y los ligados
orgánicamente. Se presenta en solución en partículas o detrito, o en los cuerpos de organismos
acuáticos.
Los fosfatos orgánicos se forman principalmente en procesos biológicos. Son aportados al
alcantarillado por residuos corporales y de alimentos y también se pueden formar a partir de los
ortofosfatos durante los procesos de tratamiento biológico o por recibir la carga biológica del agua.
Los fosfatos también se hallan en sedimentos y en lodos biológicos, ambos como formas inorgánicas
precipitadas e incorporados en compuestos orgánicos.
3. INTERFERENCIAS
Sílice y arseniato interfieren positivamente sólo cuando se calienta la muestra. Arseniato, fluoruro,
Torio, bismuto, sulfuro, tiosulfato, tiocianato o exceso de molibdato producen interferencias negativas.
El hierro ferroso produce un color azul, pero no afecta los resultados si su concentración es inferior a
100 mg/L. Las interferencias de sulfuro se pueden eliminar con agua de bromo, existen numerosos
iones que no interfieren si su concentración es inferior a 1000 mg/L (Consultar SM 4500-P. C. 1b). Si
en la prueba se usa ácido nítrico el cloro como cloruros interfiere por encima de 75 mg/L.
4. SENSIBILIDAD
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La concentración mínima detectable es de 3 g P/L aproximadamente. La sensibilidad a 0,3010 de
absorbancia es de unos 10 g P/L para un cambio de absorbancia de 0,009.
Este es uno de los métodos más sensibles y utilizando celda de mayor ancho de diámetro se pueden
determinar hasta 7 g/L de fósforo. Por debajo de 100 g P/L, se puede aumentar la fiabilidad y
reducir las interferencias con un paso de extracción (SM 4500-P. D. 4d).
5. MATERIAL E INSTRUMENTAL
Plancha de calentamiento
Erlenmeyer
Celdas de Vidrio
Balones aforados de diferentes volúmenes
Probetas de diferentes volúmenes
Pipetas aforadas de diferentes volúmenes.
Espectrofotómetro Visible (rango de 300 a 900 nm)
Frasco lavador
Papel suave
6. REACTIVOS
Agua destilada.
Solución indicadora de fenolftaleína.
Persulfato de amonio (NH4)2SO8 Sólido
Hidróxido de sodio. NaOH 2,5 N
Solución de ácido fuerte. Ácido sulfúrico, (H2SO4) Añádase cuidadosamente 300 mL de H2SO4
concentrado a 600 mL de agua destilada y posteriormente diluya a 1 L.
Reactivo de Molibdato de Amonio I. Disolver 25 g (NH 4)6Mo7O24.4H2O en 175 mL de agua
destilada. En otro recipiente añadir con precaución 280 mL de H2SO4 concentrado a 400 mL de
agua destilada. Enfríe, añada la solución de molibdato y diluya a 1 L.
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Reactivo de cloruro estagnoso I. Disolver 2,5 g de SnCl2·2H2O en 100 mL de glicerol, calentar
en baño de agua y agitar con varilla de vidrio hasta disolver, este reactivo es estable, no requiere
preservantes o condiciones especiales de almacenamiento.
Solución patrón de fosfatos. Disolver 219,5 mg de KH 2PO4 anhidro en agua destilada y diluir a
1000mL. 1 mL = 50,0 g de PO4−3 - P.
Solución de trabajo de fósforo. Tomar 5 mL de solución patrón y completar a 100 mL en balón
aforado con agua destilada. 1 mL = 2,5 g de PO4−3 - P.
7. PROCEDIMIENTO
7.1. Precauciones generales
No guardar las muestras con bajas concentraciones de fósforo en botellas plásticas.
Lavar todos los recipientes de vidrio de almacenamiento de muestras y reactivos con ácido
clorhídrico diluido caliente, y enjuagar varias veces con agua destilada.
Nunca usar detergentes comerciales que contengan fósforo para lavar el material usado en el
análisis.
7.2. Preparación de la muestra
7.2.1. Filtración preliminar
Filtrar las muestras para la determinación de fósforo reactivo disuelto, fósforo ácido hidrolizable
disuelto y fósforo disuelto total a través de membranas de 0,45 µm.
Se puede usar un filtro de fibra de vidrio para realizar una pre-filtración.
Lavar las membranas con agua destilada debido a que estas pueden contribuir en cantidades
significativas de fósforo en muestras que contengan bajas concentraciones de fosfato.
Poner en remojo 50 membranas en 2 L de agua destilada por 1 hora, cambie el agua y deje en
remojo por 3 horas adicionales.
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7.2.2. Determinación de fósforo hidrolizable por ácido (polifosfatos y otros)
7.2.2.1. Hidrólisis ácida preliminar. El contenido de fósforo hidrolizable en la muestra es
definido como la diferencia entre la medida del fósforo reactivo en la muestra no tratada
y el fósforo encontrado después de una hidrólisis ácida ligera. Generalmente esto incluye
fosfatos condensados como piro, tripoli y especies de peso molecular alto como el
hexametafosfato.
Además en algunas aguas naturales existen compuestos de fosfato orgánico que son hidrolizados
a ortofosfato bajo las condiciones de la prueba. Los polifosfatos generalmente no responden a la
prueba de fósforo reactivo pero pueden ser hidrolizados a ortofosfato por ebullición con ácido.
Después de la hidrólisis determine el fósforo reactivo por el método colorimétrico.
A 100 mL de muestra o porción diluida a 100 mL agregar 1 gota de fenolftaleína. Si se desarrolla
un color rosado agregue una gota de solución ácida fuerte para que desaparezca el color.
Agregue 1 mL adicional.
Llevar a ebullición suavemente por mínimo 90 minutos, agregando permanentemente agua
destilada para mantener un volumen entre 25 y 50 mL. Enfriar, neutralizar a color rosado con
NaOH y retorne el volumen original con agua destilada.
Preparar una curva de calibración corriendo una serie de patrones que contengan ortofosfato
con el paso de hidrólisis. No usar patrones de ortofosfatos sin hidrólisis debido que las sales
agregadas en la hidrólisis pueden causar un aumento en la intensidad del color en algunos
métodos.
Determinar el fósforo reactivo en las porciones tratadas. En este procedimiento se obtiene la
suma de polifosfatos y ortofosfatos en la muestra. Para calcular el contenido de fósforo
hidrolizable por ácido en la muestra, determine el fósforo reactivo en una porción de muestra
que no ha sido hidrolizada usando el mismo método colorimétrico que para la muestra tratada
y réstelo del resultado.
7.2.3. Determinación de fósforo total
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7.2.3.1. Digestión
A una alícuota de 50 mL o una porción adecuada de muestra bien mezclada, añadir una gota
de fenolftaleína 0,5%.
Si da positivo a la fenolftaleína añadir ácido sulfúrico (solución de ácido fuerte) gota a gota hasta
desaparición de color rosado.
Añadir cuidadosamente 1 mL de solución de ácido fuerte y 0,4 g de persulfato de amonio sólido.
Calentar hasta ebullición suavemente durante 30 a 40 minutos hasta alcanzar un volumen de
10mL.
Enfriar y adicionar 20mL de agua destilada.
Adicionar una gota de fenolftaleína y neutralizar, hasta color rosa pálido con NaOH 1N.
Transferir cuantitativamente a un balón aforado de 50 mL y completar a volumen.
Nota: En algunas muestras se puede formar un precipitado en este paso pero no filtre. Para
subsiguientes subdivisiones de la muestra agite completamente. El precipitado (posiblemente
fosfato de calcio) se redisuelve bajo las condiciones ácidas de la prueba colorimétrica.
Muestras con salinidad alta: Las mediciones de fósforo en aguas altamente salinas pueden
tener dificultades debido a la precipitación de grandes cantidades de sales como resultado de
la drástica reducción del volumen de la muestra en las técnicas de digestión. Para el análisis de
fósforo total en tales muestras determine el fósforo disuelto total y el fósforo suspendido total y
sume los resultados. Para determinar el fósforo suspendido total digiera el filtro con ácido nítrico
y luego con ácido perclórico.
7.2.3.2. Desarrollo de color
Agregar, mezclando 2,0 mL de reactivo de molibdato y agitar.
Adicionar 5 gotas de cloruro estagnoso y mezclar.
Nota: La velocidad del desarrollo de color y su intensidad dependen de la temperatura de la
solución final, cada incremento en 1°C produce aproximadamente 1% de aumento en el color.
Mantenga la diferencia de temperatura entre muestras, patrones y reactivos en un rango de
temperatura entre 20 y 30°C ± 2 °C entre soluciones
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7.2.3.3. Medición del color
.
Luego de 10 minutos y antes de 12, medir el color fotométricamente a 690 nm y comparar
frente a curva de calibración, utilizando un blanco de reactivos.
Debido que el color se desarrolla progresivamente al inicio y se decolora posteriormente,
mantenga iguales condiciones de tiempo para muestras y patrones.
Preparación curva de calibración: Tome alícuotas de 0, 1, 2, 6, 10, 14 y 18 mL de solución
de trabajo de fósforo de 2,5 mg P/L en balones de 50 mL y complete a volumen con agua
destilada. Realice el procedimiento descrito anteriormente para las muestras. Con los datos
obtenidos elabore un gráfico de concentración en mg P/L vs. Absorbancia
El espectrofotómetro PHARO almacena las curvas de calibración y por lo tanto reporta
directamente la concentración de la solución leída. De igual manera reporta la absorbancia
interpolada en la curva, y la desviación estándar de los duplicados.
8. MÉTODO DE CÁLCULO
mg P / L: Concentración leída * Factor de dilución
El resultado se expresa en mg de P/L.
9. INFORME DE ENSAYO
Ver xxxx
10. PARÁMETROS DE CALIDAD DEL MÉTODO
Ver xxxx
11. CONTROL DE CALIDAD ANALÍTICO
12. BPL Y SEGURIDAD INDUSTRIAL
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12.1. Aspectos de salud ocupacional
13. BIBLIOGRAFÍA
APHA- AWWA- WEF (2012) Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater 22th
Edition. New York. Método S.M. 4500-P. B y D.
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