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Actividad Antifúngica en Plantas Medicinales

Este documento describe la actividad antifúngica de plantas medicinales. Explica que los hongos son organismos que incluyen mohos, setas y levaduras, muchos de los cuales son patógenos. Las infecciones por hongos (micosis) se clasifican en superficiales, cutáneas, subcutáneas y sistémicas. También discute el problema de la resistencia a los antifúngicos y cómo las plantas medicinales son una fuente potencial de nuevos compuestos antifúngicos. Finalmente, resume protocolos para evalu

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Actividad Antifúngica en Plantas Medicinales

Este documento describe la actividad antifúngica de plantas medicinales. Explica que los hongos son organismos que incluyen mohos, setas y levaduras, muchos de los cuales son patógenos. Las infecciones por hongos (micosis) se clasifican en superficiales, cutáneas, subcutáneas y sistémicas. También discute el problema de la resistencia a los antifúngicos y cómo las plantas medicinales son una fuente potencial de nuevos compuestos antifúngicos. Finalmente, resume protocolos para evalu

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101

CAPÍTULO 4
ACTIVIDAD ANTIFÚNGICA

David Gilberto García-Hernández,


Catalina Rivas-Morales, Catalina Leos-Rivas

Laboratorio de Química Analítica, Facultad de Ciencias Biológicas,


Universidad Autónoma de Nuevo León, México.
[Link]@[Link], [Link]@[Link],
[Link]@[Link]

[Link]

García-Hernández, D.G., Rivas-Morales, C., & Leos-Rivas, C. (2016). Acti-


vidad antifúngica. En Rivas-Morales, C., Oranday-Cardenas, M.A., & Ver-
de-Star, M.J. (Eds.). Investigación en plantas de importancia médica. Barcelona,
España: OmniaScience. 101-128.
102 INVESTIGACIÓN EN PLANTAS DE IMPORTANCIA MÉDICA

Resumen

Los hongos constituyen un numeroso grupo de organismos, diverso y variado,


que incluye a los mohos, las setas y las levaduras. Un extenso número de hon-
gos son parásitos de plantas, causando enfermedades con relevancia económica
en plantíos cultivados. Algunos son responsables de enfermedades en animales,
incluyendo al hombre. Todos los hongos son microorganismos eucariontes y
cada célula fúngica posee al menos un núcleo y membrana nuclear, retículo en-
doplásmico, mitocondrias y aparato secretor. La mayoría son aeróbicos obligados
o facultativos. Las infecciones producidas por hongos son las micosis; la mayor
parte de los hongos patógenos son exógenos; las de mayor incidencia son cono-
cidas como candidiasis y dermatofitosis, son causadas por hongos que forman
parte de la flora microbiana normal o están muy adaptados para sobrevivir en
el huésped humano. Estas enfermedades pueden clasificarse: por conveniencia,
superficiales, cutáneas, subcutáneas, sistémicas y oportunistas. La medicina tra-
dicional como alternativa de salud nos ha brindado una cobertura muy amplia
en el tratamiento de diversas enfermedades y más aún en el desarrollo de nuevas
fuentes de fármacos, sin embargo, sus aplicaciones en el campo de la industria
nos han permitido el desarrollo de nuevos productos. La diversidad química de
los productos naturales es complementaria a la diversidad encontrada en las bi-
bliotecas sintéticas. Sin embargo, los productos naturales son estéricamente más
complejos y poseen una diversidad de sistemas de anillos mayores debido al largo
proceso evolutivo de la selección natural. Por lo tanto, las estrategias para explo-
tar las fuentes naturales y el desarrollo de metodologías para tener bibliotecas que
faciliten la síntesis de productos naturales. Algunos de los grupos funcionales con
actividad biológica son: compuestos fenólicos, alcaloides, terpenos, cumarinas,
entre otros. Para determinar la actividad biológica sobre hongos se siguen pro-
tocolos estandarizados por la Clinical and Laboratory Standars Institute (CLSI,
antes NCCLS) disponibles en las principales bases de datos científicas.

Palabras clave

Antifúngica, Plantas Medicinales, Concentración Mínima Inhibitoria y Concen-


tración Mínima Fungicida.
ACTIVIDAD ANTIFÚNGICA 103

4.1. Introducción

Los hongos constituyen un gran grupo de organismos, diverso y muy extendido,


que incluye a los mohos, las setas y las levaduras. Se han descrito aproximada-
mente 100 000 especies de hongos y se estima que podrían existir hasta 1.5 mi-
llones de especies. Se agrupan filogenéticamente separados de otros organismos,
estando más íntimamente relacionados con los animales. Un gran número de
hongos son parásitos de plantas, causando enfermedades con relevancia econó-
mica en plantíos cultivados. Algunos cusan enfermedades en animales, incluyen-
do al hombre. Los hongos también pueden establecer asociaciones simbióticas
con muchas plantas, participan también en la síntesis de antibióticos y procesos
fermentativos con alta importancia económica para el hombre (Madigan, Mar-
tinko, Dunlap & Clark, 2009).

Todos los hongos son microorganismos eucariontes y cada célula fúngica po-
see al menos un núcleo y membrana nuclear, retículo endoplásmico, mitocon-
drias y aparato secretor. La mayoría son aeróbicos obligados o facultativos.
Las infecciones producidas por hongos son las micosis; la mayor parte de los
hongos patógenos son exógenos; las de mayor incidencia son conocidas como
candidiasis y dermatofitosis, son causadas por hongos que forman parte de la
flora microbiana normal o están muy adaptados para sobrevivir en el huésped
humano. Estas enfermedades (Tabla 1) pueden clasificarse por conveniencia:
superficiales, cutáneas, subcutáneas, sistémicas y oportunistas (Brooks, Butler
& Morse, 2005).

Una complicación que se presenta en el tratamiento de las micosis es la re-


sistencia a los antibióticos, esta se define como la capacidad adquirida de un
organismo para resistir los efectos de un agente quimioterapéutico al que es
sensible habitualmente (Madigan et al., 2009). Ésta es causada por mutaciones
en el cromosoma bacteriano, plásmidos o transposones que pueden transferir
determinada resistencia a diversas especies de microorganismos más rápido que
los nuevos fármacos que se desarrollan para combatirlos (Kimpe, Decostere,
Martel, Devriese & Haesebrouck, 2003; Salipante, Barlow & Hall, 2003; Shahid,
Malik & Sheeba, 2003). Ésta constituye un problema serio de salud pública en
el mundo el cual se ha agudizado durante los últimos años, especialmente en los
países subdesarrollados donde su uso indiscriminado ha propiciado la aparición
de cepas multiresistentes a éstos.
104 INVESTIGACIÓN EN PLANTAS DE IMPORTANCIA MÉDICA

Tipo de Agentes causantes Micosis


micosis

Especies de Malassezia Pitiriasis versicolor


Hortaea werneckii Tiña negra
Superficial
Especies de Trichosporon Piedra blanca
Piedraia hortae Piedra negra

Especies de Microsporum, Trichophyton y Dermatofitosis


Epidermophyton floccosum
Cutánea
Candida albicans y otras especies de Candida Candidiasis de piel,
mucosa o uñas.

Sporothrix schenckii Esporotricosis


Phialophora verrucosa, Fonsecaea pedrosoi y Cromoblastomicosis
otros
Subcutánea
Pseudallescheria boydi, Madurella mycetomatis y Micetoma
otros
Exophiala, bipolar, exserohilum y otros Faohifomicosis

Coccidioides immitis, C. posadasii Coccidioidomicosis


Endémica
Histoplasma capsulatum Histoplasmosis
(primaria,
Blastomyces dermatitidis Blastomicosis
sistémica)
Paracoccidioides brasiliensis Paracoccidioidomicosis

Candida albicans y otras especies de Candida Candidiasis sistémica


Cryptococcus neoformans Criptococosis
Aspergillus fumigatus y otras especies de Aspergilosis
Oportunista Aspergillus
Especies de Rhizopus Absidia, Mucor y otros Mucormicosis
cigomicetos (cigomicosis)
Penicillium marneffei Peniciliosis

Tabla 1. Principales micosis y hongos causantes en el hombre (Brooks et al., 2005)

Numerosas son las investigaciones enfocadas a la búsqueda de nuevos com-


puestos con actividades biológicas a partir de fuentes naturales, dentro de
ellos un gran número de estudios han sido dirigidos hacia la evaluación
de actividades antimicrobianas en extractos y aceites esenciales de plantas
medicinales y aromáticas. Para ello, se han empleado técnicas in vitro dada la
ACTIVIDAD ANTIFÚNGICA 105

sencillez y la reproducibilidad de las mismas (Hernández Díaz & Rodríguez


Jorge, 2001).

La medicina tradicional como alternativa de salud nos ha brindado una cobertura


muy amplia en el tratamiento de diversas enfermedades y más aún en el desarro-
llo de nuevas fuentes de fármacos, sin embargo sus aplicaciones en el campo de
la industria nos han permitido el desarrollo de nuevos productos.

Según la OMS la medicina tradicional es todo el conjunto de conocimientos,


aptitudes y prácticas basados en teorías, creencias y experiencias indígenas de
las diferentes culturas, sean o no explicables, usados para el mantenimiento de la
salud, así como para la prevención, el diagnóstico, la mejora o el tratamiento de
enfermedades físicas o mentales (WHO, 2016).

Podemos asumir que el trabajo en la investigación en la Química de Productos


Naturales que se realiza en muchos lugares del mundo será precisamente el de
evaluar, aislar del extracto de la planta a través de diferentes tipos de obtención,
moléculas biológicamente activas. Con éstos estudios se beneficia no sólo el
campo de la medicina, ya que «las plantas» acumulan sustancias o metabolitos
secundarios que pueden ser extraídas y utilizadas en aplicaciones científicas, tec-
nológicas y comerciales, especialmente aquellos compuestos con actividad farma-
cológica considerados de importancia biológica e industrial (Hernández-Morales
et al., 2004).

4.2. Actividad biológica

(Arif et al., 2009; Domingo & López-Brea, 2003)

Las plantas medicinales han sido fuente de una amplia variedad de compuestos
biológicamente activos por muchos siglos y se ha utilizado sea como material
crudo (extractos, infusiones, tinturas, entre otras) o como compuestos puros
para el tratamiento de enfermedades. Relativamente del 1-10% de las plantas son
usadas por los humanos, se estiman que existen entre 250 000- 500 000 especies
de ellas en la tierra. La diversidad química de los productos naturales es comple-
mentaria a la diversidad encontrada en las bibliotecas sintéticas. Sin embargo, los
productos naturales son estéricamente más complejos y poseen una diversidad
de sistemas de anillos mayores debido al largo proceso evolutivo de la selección
106 INVESTIGACIÓN EN PLANTAS DE IMPORTANCIA MÉDICA

natural. Por lo tanto, las estrategias son importantes para explotar las fuentes
naturales y el desarrollo de metodologías para tener bibliotecas que faciliten la
síntesis de productos naturales. La medicina convencional está siendo cada vez
más receptiva hacia el uso de antimicrobianos y otros fármacos derivados de
las plantas, por ejemplo: Taxol, Vincristina, Vinblastina, entre otros, ya que los
fármacos tradicionales son inefectivos. Un número de compuestos aislados de
las plantas como la dimetil pirrola, hidroxidihidrocornin-agliconas, derivados de
índoles, entre otros, han sido reportados con actividad antifúngica.

4.3. Plantas con actividad antifúngica

La medicina tradicional ofrece una alternativa ya sea oral o escrita, para benefi-
ciar la calidad de vida de la humanidad a través del uso de las plantas. En años
recientes se ha incrementado el interés científico en el aislamiento, purificación e
identificación de nuevas moléculas que posean actividad biológica relevante, en
la Tabla 2 se presenta una revisión de plantas desde 1999 a la fecha, las cuales
asumen la validación científica de que poseen actividad antifúngica para microor-
ganismos patógenos para el hombre como para las plantas.

4.4. Determinación de la actividad antifúngica

4.4.1. Método para dermatofitos

Para el estudio in vitro de dermatofitos se debe tener en cuenta que estos mi-
croorganismos tienen un lento crecimiento y los métodos de propagación para
los hongos filamentosos se deben de modificar según cada microorganismo; el
Instituto de Estándares Clínicos y de Laboratorio (CLSI, por sus siglas en inglés),
recomienda utilizar medio de cultivo sólido (Pakshir, Bahaedinie, Rezaei, Sodaifi
& Zomorodian, 2009; Rex et al., 2001) para la propagación y el ensayo de fár-
macos potenciales.

Se prepara el inoculo de la cepa a evaluar por picadura en medio Lactrimel, se


incuba por 7-15 d. a 25 °C para la formación de micro y macroconidias. Se co-
sechan las conidias en tubo cónico estéril con agua destilada estéril; se cuentan
las conidias en un hematocitómetro y se ajusta la densidad a 1x106 conidias/mL.
Se inoculan placas de medio sólido Mueller-Hinton con ayuda de un hisopo, se
ACTIVIDAD ANTIFÚNGICA 107

Nombre de la planta Microorganismos Referencia

Anchusa strigosa, Asphodelus


microcarpus,
A. luteus, A. aravensis, Capparis spinosa,
Clematis cirrhosa, E. creticum, Inula
viscosa, Juglans regia, Lycium europeum, M. canis,
(Ali-Shtayeh &
Micromeria nervosa, Parietaria difusa, T. mentagrophytes,
Ghdeib, 1999)
Paronchya argentea, Phagnalon rupestre, T. violaceum
Pistacia lentiscus, Plumbago europaea,
Ruscus aculeatus, Ruta calapensis, Retema
reatam, Solanum nigrum, Salvia fruticosa,
Ziziphus spina-christi

Laurus nobilis, allium neapolitanum, Candida albicans, (Digrak, Alma &


Nicotiana rustica C. tropicalis Ilçim, 2001)

(Hernández Díaz
Ocimum basilicum, O. tenuiflorum, C. albicans,
& Rodríguez Jorge,
Cymbopogon citratus T. mentagrophytes
2001)

Portulaca quadrifida, Agerantum C. albicans, (Hoffman et al.,


conyzoides, Newbouldia laevis A. fumigatus 2004)

(Mahomoodally,
Antidesma madagascariense Aspergillus niger Gurib-fakim, &
Subratty, 2005)

Vitex negundo, Zanthoylum alatum,


A. alternata, (Guleria & Kumar,
Ipomea carnea, Thuja orientalis,
C. lunata 2006)
Cinnamomum camphora

Ambrosia confertiflora, A. indica, (Suárez-Jiménez


F. verticillioides
Baccharis glutinosa, Larrea tridentata et al., 2007)

Cestrum nocturnum, Annona cherimola,


Origanum majorana, , Citrus aurantium, (Hernández-Albíter,
C. aurantifolia, Bougainvillea spectabilis, Barrera-Necha,
C. gloeosporioides
Justicia spicigera, Petroselinum sativum, Bautista-Baños &
Parthenium hysterophorus, Schinus molle, Bravo-Luna, 2007)
Ricinus communis, Cartica papaya

Continúa
108 INVESTIGACIÓN EN PLANTAS DE IMPORTANCIA MÉDICA

Continuación
Nombre de la planta Microorganismos Referencia
Candida albicans,
Syzygium jambolanum, Cassia siamea,
C. glabrata, C. tropicalis, (Prabhakar et al.,
Odina wodier, Momordia charantia,
C. krusei, C. parapsilosis, 2008)
Melia azedarach
C. guilliermondii
Aspalathus linearis, Cyclopia genistoides Botrytis cinerea (Coetzee et al., 2008)
Anthemis arvensis subsp arvensis,
A. cotula, Cychorium intybus,
Jasonia glutinosa, Santonila
Rhizopus stolonifer var
chamaecyparissus subsp squarrosa, (López et al., 2008)
stolonifer
Tussilago farfara, Achillea millefolium
subs millefolium, Tanacetum parthenium,
Anagallis arvensis, A. foemina
(Nair & Chanda,
Piper betel C. tropicalis
2008)
Capparis erythocarpos, Cussonia arborea,
Dracaena steudneri, Lannea schimperi, Candida albicans,
(Kisangau et al.,
Rauvolfia vomitoria, Rumex Cryptococcus neoformans,
2009)
usambarensis, Sapium ellipticum, Aspergillus niger
Zehneria scabra
Trichophyton mentagrophytes,
T. simii, T. rubrum, (Duraipandiyan,
Azima tetracantha, Bauhinia tomentosa,
Epidermophyton floccosum, Muthu, &
Biophytum sensitivum, Diospyros ebenum
Curvularia lunata, Ignacimuthu, 2009)
Magnethophora sp.
A. solani, Botryodiplodia
theobromae, C. gloesporioides,
F. graminearum, F. oxysporum
f. sp. Cucumericum,
F. oxysporumf. Sp. Lycopersici,
Zanthoxylum bungeanum (Gong et al., 2009)
F. oxysporum f. sp. Niverum,
F. oxysporum f. sp. Vasinfectum,
Bipolaris maydis, Leptoshaeria
maculans, Magnaporthe grisea,
R. cerealis, R. solani
ACTIVIDAD ANTIFÚNGICA 109

Nombre de la planta Microorganismos Referencia

M. grisea, R. solani, B. cinerea,


Phytophthora infestans, Puccinia
Magnolia obovata (Choi et al., 2009)
recondita, Erysiphe graminis f.
sp. hordei. C. coccodes

A. niger, A. terreus,
Laserpitium garganicum subsp
C. globosum, P. chrisogenum, (Tirillini et al., 2009)
garganicum
P. pinophilum, T. viride

Tectona grandis, Semecarpus anacardium,


Candida albidus, Aspergillus
Holoptelea integrifolia, Pithecellobium (Singh et al., 2010)
spinulose, A. niger
dulce, Strychnos nux-vomica

Magnifera indica, Prosopsis chilensis,


Candida albicans, C. albidus (Singh et al., 2010)
Cedrella toona

(Batool Sadeghi-
A. flavus, A. niger, Penicillium
Nejad, Shiravi,
Satureja khuzestanica sp, Fusarium sp, Alternaria sp,
Ghanbari, Alinejadi,
Rhizopus sp, Mucor sp
& Zarrin, 2010)

A. solani, B. maydis,
B. theobromae, F. graminearum,
F. oxysporum f. sp.
cucumerinum, F. oxysporum
Illicium verum (Huang et al., 2010)
f. sp. lycopersici, F. oxysporum
f. sp. vasinfectum, M. oryzae,
Pythium aphanidermatum,
R. cerealis, R. solani

B. cinerea, R. solani,
F. oxysporum, R. solani, (Bajpai & Kang,
Metasequoia glyptostroboides
S. sclerotiorum, C. capsici, 2010)
F. solani, P. capsici

M. canis, M. gypseum,
(B Sadeghi-Nejad &
Pogostemon parviflorus E. floccosum, T. rubrum,
Deokule, 2010)
T. mentagrophytes
Continúa
110 INVESTIGACIÓN EN PLANTAS DE IMPORTANCIA MÉDICA

Continuación
Nombre de la planta Microorganismos Referencia

Allium sativum, Zingiber officinalis,


C. albicans, A. niger,
Glycyrrhiza glabra, Curcuma longa,
F. oxysporum F. sp. ciceri,
Mentha piperita, Azadirachta indica,
M. phaseolina, Dreschlera (Meena et al., 2010)
Withania somnifera, Acorus calamus,
oryzae, A. tenuis, F. solani,
Piper betel, Adhatoda vasica, Solanum
C. coccodes
xanthocarpum, A. vera, O. sanctum

Acacia karroo, Trichilia emetica, Cassia


abbreviata, Plumbago auriculata,
C. glabrata, (Kolaczkowski et al.,
Pittosporum tobira, Schefflera actinophylla,
C. albicans 2010)
C. ambrosioides, Anacardium occidentalis,
Litogyne gariepona

Zea mays, Cynara scolymus, Salvia (Dellavalle et al.,


Alternaria sp
sclarea, Lippia alba 2011)

(Velmurugan et al.,
Clerodendrum inerme A. flavus, A. niger
2011)

T. mentagrophytes, T. rubrum,
Mycrosporum canis,
Andrographis paniculata (Sule etal., 2012)
C. albicans, C. krusei,
C. tropicalis, A. niger

Achillea biebersteinii, Anthemis


pseudocotula, A. tinctoria var tinctoria,
Artemisia austriaca, Crepis foetida,
C. albicans,C. tropicalis,
Cydonia oblonga, Hedera helix, Lantana (Orhan, Özçelİk,
C. parapsilosis, C. krusei,
camara, Nepeta italica, Ononis spinosa, Hoşbaş & Vural,
T. rubrum, E. floccosum,
Paliurus spina-christi, Plantago lanceolata, 2012)
M. gypseum
P. major, Primula vulgaris, Rosa canina,
Rubus sanctus, Salvia fruticosa, S.
verticillata, Teucrium polium, Urtica dioica

C. albicans, C. krusei,
C. glabrata, A. niger, (Otang, Grierson &
Arctotis arctotoides, Gasteria bicolor
A. fumigatus, T. mucoides, Ndip, 2012)
M. canis
ACTIVIDAD ANTIFÚNGICA 111

Nombre de la planta Microorganismos Referencia

(Kalaskar, Karande,
Acanthus licifolius A. fumigatus Bannalikar & Gatne,
2012)

Anvillea radiata, Halimium umbellatum,


Ceratonia siliqua, Cistus villosus,
Geotrichum candiudum (Talibi et al., 2012)
Pistacia atlantica, Rubus ulmifolius,
H. antiatlanticum, I. viscosa

(Yildirim, Paksoy,
Bellevalia gracilis, Muscari aucheri,
Coryorlus versicolor Yuce & Yildirim,
Tulipa armena var lycica
2013)

Croton pullei C. albicans, C. parapsilosis (Peixoto et al., 2013)

(Butu, Dobre,
Arctium lappa, Thymus vulgaris, Aspergillus ochraceus,
Rodino, Butu &
Xanthium strumarium Acremonium chrysogenum
Lupuleasa, 2013)

Aspergillus solani, Fusarium


verticilloides, F. semitectum,
F. culmorum, F. proliferatum,
F. graminearum,
(Kordali, Usanmaz,
F. chlamydosporium,
Nepeta Meyeri Cakir, Cavusoğlu &
F. sambucinum, F. scirpi,
Ercisli, 2013)
F. equiseti, Nigrosporaoryzae,
Phytophthora capsici, Phoma sp,
Sclerotinia sclerotiorum, S. sp,
S. rolfsii

Botrytis cinerea, (Vitoratos, Bilalis,


Origanum vulgare, Thymus vulgaris,
Penicillium italicum, Karkanis &
Citrus limon
P. digitatum Efthimiadou, 2013)

(Zambuzzi-Carvalho
Eugenia uniflora Paracoccidioides
et al., 2013)

C. albicans, C. krusei, (Souza-Moreira et


Plinia cauliflora
C. parapsilosis, C. tropicalis al., 2013)
Continúa
112 INVESTIGACIÓN EN PLANTAS DE IMPORTANCIA MÉDICA

Continuación
Nombre de la planta Microorganismos Referencia

Inula viscosa, Asteriscus graveolens,


Bubonium odorum, Thymus leptobotrys,
Penicillium italicum (Askarne et al., 2013)
A. radiata, Hammada scoparia,
Ighermia pinifolia, H. umbellatum

(Ajaib, Wahla, &


Firmania simplex A. niger, A. oryzae
Khan, 2014)

(Vargas-Días,
Acalypha gaumeri, Bonellia flammea, Gamboa-Angulo,
Alternaria chrysanthemi
Calea urticifolia Medina-Baizabal, &
Pérez-Brito, 2014)

Azadirachta indica, Datura alba,


Eucalyptus sp, A. alternata (Anwar et al., 2014)
Melia azedarach

C. albicans, C. tropicalis,
C. laurentii, C. guilliermondii,
(Dulger & Dulger,
Hypericum havvae C. krusei, C. glabrata,
2014)
C. parapsilosis,
Cryptococcus neoformans

Phyllanthus emblica Aegle marmelos,


Ricinus communis, Lawsonia inermis,
Malassezia furfur, M. globosa,
Hibiscus rosa-sinensis, Trigonella (Sibi, Alam, Shah, &
M. obtusa, M. restricta,
foenum-graecum, A. indica, Sapindus Razak, 2014)
M. slooffiae, M. sympodialis
mukorossi, Acacia concinna, Murraya
koenigii

(Elfadil, Fahal,
Boswellia papyrifera, Acacia nubica,
Madurella mycetomatis Kloezen, Ahmed, &
Nigella sativa
van de Sande, 2015)

Terminalia chebula, T. arjuna,


(Sakander, Akhilesh,
Persea americana, T. tomentosa, S. [Link], M. canis,
& Koteshwara,
jambos, Terminalia catappa, Polyalthia M. gypseum
2015)
longifolia, Psorelea corylifolia
ACTIVIDAD ANTIFÚNGICA 113

Nombre de la planta Microorganismos Referencia


Colletotrichum gloesporioides,
(Singburaudom,
Piper betel C. capsici, F. oxysporum f. sp.
2015)
cubense, Sphaceloma ampelinum
Ocimum sanctum, Calotrips procera, (Gupta, Chakraborty,
Macrophamina phaseolina
Astragalous tribuloide & Mittal, 2015)
Andrographis paniculata, Butea
monospera,
A. niger, A. flavus,
Callistemon lanceolatus, Canthium
Fusarium crookwellense, F.
parvilorum, Cissus quadrangularis, (Kavitha & Satish,
sporotrichioides, F. verticillioides,
Cordia dichrotoma, 2016)
C. albicans,
Ficus religiosa, Vitex negundo,
M. canis, M. gypseum
Moringa oleifera, Sphaeranthus indicus,
Streblus asper

Tabla 2. Compendio de plantas con actividad antifúngica

espera a que se seque la superficie del medio, se adicionan 10 μL del agente a


evaluar sobre un disco de papel filtro estéril de 6 mm de diámetro; una vez seco
el disco, con ayuda de pinzas se coloca sobre la superficie del agar, se incuba
bajo las condiciones antes mencionadas. Al concluir el período de incubación se
observa la presencia de un halo de inhibición alrededor del disco y se mide su
diámetro. (Figura 1).

Figura 1. Método de difusión en placa con disco, halos de inhibición y resistencia


de diferentes fármacos vs T. rubrum (Pakshir et al., 2009)
114 INVESTIGACIÓN EN PLANTAS DE IMPORTANCIA MÉDICA

4.4.2. Método para levaduras

Se sigue la metodología del documento M27-A2 de la CLSI(NCCLS, 2002), para la


preparación del inóculo se realiza un subcultivo en agar dextrosa Sabouraud o agar
papa dextrosa, se incuba a una temperatura 35°C, por un período de tiempo depen-
diendo del microorganismo a prueba. Posteriormente se prepara una suspensión
en solución salina 0.85% o agua estéril con 0.5-2.5 × 102 UFC/mL. Se preparan
placas con medio de cultivo RPMI-1640 adicionado con ácido 3-morfolinopro-
pano-1-sulfónico (MOPS) 0.165 M a pH 7.0 ± 0.1; los agentes antimicrobianos
a evaluar, se preparan a diferentes concentraciones y se agregan 0.1 mL de esta
soluciones en medio a tubos de ensayo estériles; después se agregan 0.9 mL de la
solución de dilución, se incuba bajo las condiciones mencionadas anteriormente.
Para la interpretación de los resultados se observa la turbidez de los tubos contras-
tándolos con los controles.

4.4.3. Concentración Mínima Inhibitoria (CMI) y Concentración


Mínima Fungicida (CMF) para dermatofitos

Para la determinación de la CMI se sigue el método de microdilución establecido


por la LCSI M38-A para hongos filamentosos. Se prepara un inóculo de conidias
a una densidad óptica de 0.08-0.1 UA, se realiza la lectura en un espectrofotóme-
tro a 625 nm, de esta solución se toma una alícuota y se hace una dilución 1:50
en medio RPMI-1640, por otra parte se preparan una serie de diluciones del

Figura 2. Concentración mínima inhibitoria de anfotericina B vs un aislado clínico


de C. parapsilosis. CMI = 0.5 μg/mL (Bonifaz, 2012)
ACTIVIDAD ANTIFÚNGICA 115

fármaco a evaluar. En una placa de 96 pocillos se colocan 100 μL de la solución


diluida de conidias más 100 μL de la dilución de los fármacos y controles. Pos-
teriormente se incuban a las mismas condiciones antes mencionadas por 7 d.
Al término de éste se observan los pocillos para verificar el crecimiento de los
microorganismos, la CMI es la última concentración donde hay inhibición del
crecimiento; de éstos pocillos se toma una asada y se inocula en medio sólido
Mueller-Hinton y se incuba bajo las mismas condiciones por 7 d; la CMF corres-
ponde a la concentración donde no hay crecimiento.

4.4.4. Principales grupos funcionales con actividad antifúngica

Las plantas cuentan con la habilidad de sintetizar sustancias aromáticas de dife-


rentes grupos funcionales, la mayoría de los cuales son fenoles o sus derivados
oxigenados. Los metabolitos secundarios son utilizados como mecanismos de
defensa de las plantas contra depredadores: microorganismos, insectos y herbí-
voros. Algunas plantas de las que se explotan su esencia (terpenoides), pigmentos
(quinonas y taninos), su sabor (terpenoide capseisina del pimientón dulce) en
donde se han encontrado que poseen propiedades medicinales. Algunas de las
hierbas y especias que se utilizan para dar sazón a los alimentos también contie-
nen compuestos con usos medicinales (Arif et al., 2009).

[Link]. Compuestos fenólicos

Los compuestos fenólicos aislados de fuentes naturales han sido reportados con
actividad antifúngica. Se ha visto que los sitios y el número de grupos hidro-
xilos en el grupo fenólico está íntimamente relacionado con la toxicidad hacia
los microorganismos, es decir a mayor número de grupos hidroxilos, mayor la
toxicidad (Figura 3). Los mecanismos responsables de esta acción incluyen
la inhibición enzimática por oxidación de compuestos, posiblemente a través de
la reacción con grupos sulfidrilos o a través de otras interacciones no específicas
con proteínas.

Otros estudios en mecanismos de acción de compuestos diterpénicos y fenólicos


aislados de especies de Euphorbia muestran que estos compuestos modulan a di-
ferente grado la resistencia de fármacos de tipo azol regulados por Pdr5, Snq2p
y Cdr1p.
116 INVESTIGACIÓN EN PLANTAS DE IMPORTANCIA MÉDICA

Figura 3. Estructura de algunos compuestos fenólicos

[Link]. Flavonoides

Las Flavonas (Figura 4) son estructuras fenólicas que contienen un grupo


carbonilo y la adición de un grupo hidroxilo en el carbono número 3 lo hace
un flavonol. Algunos ejemplos de este grupo son: la amentoflavona, extraída
de Selaginella tamariscina la cual tiene actividad antífúngica (IC50= 18.3 mg/
mL) contra cepas patógenas de hongos y un bajo efecto hemolítico en eri-
trocitos humanos. Inula viscosa es comúnmente utilizada en la medicina tradi-
cional por sus efectos terapéuticos. Compuestos como flavonoides, azulenos,
sesquiterpenos y aceites esenciales de ésta mostraron una actividad antifún-
gica significativa en contra de especies de dermatofitos en concentraciones
bajas (10 mg/mL). La actividad antifúngica es mayor en los compuestos cuya

Figura 4. Variedad estructural de flavonoides


ACTIVIDAD ANTIFÚNGICA 117

molécula está completamente metilada, como es el caso de la tangeretina de


los cítricos, y disminuye dramáticamente cuando se remueve el grupo metilo
de la posición 5. Los flavonoides inhiben una numerosa variedad de enzimas
entre las que se encuentran: hidrolasas: ß-glucoronidasa, hialuronidasa, fos-
fatasa alcalina, aril-sulfatasa, ATPasa H+ de las membranas lisosomal y gra-
nular. Liasas: DOPA decarboxilasa. Transferasas: catecol o metiltransferasa
Hidroxilasas: aril hidroxilasa. Oxidoreductasas: aldosa reductasa. Quinonas:
hexoquinasas.

[Link]. Cumarinas

Las cumarinas han sido reportadas que estimulan a los macrófagos, los cuales
tienen un efecto negativo indirecto en las infecciones. Estas son sustancias fenó-
licas compuestas de anillos de benceno y α-pirano (Figura 5). Su fama ha venido
creciendo ya que se conocen algunas actividades biológicas como antitrombótica,
antiinflamatoria y vasodilatadora.

El mecanismo de acción de la cumarinas se debe a su actividad fotosensibilizante


sobre las células, la cual se manifiesta como fototoxicidad que altera y desorgani-
za numerosos procesos biológicos en diferentes tipos de células. Podemos expli-
car su actividad debido a la reactividad del estado triplete en las furanocumarinas

Figura 5. Diversidad estructural de cumarinas


118 INVESTIGACIÓN EN PLANTAS DE IMPORTANCIA MÉDICA

que se genera cuando éstas interactúan con la radiación UV, y cuyas posibles
reacciones se pueden agrupar en dos categorías:

• Los fotoenlaces directos con macromoléculas como el ADN, el ARN y las proteínas.
• Las fotomodificaciones indirectas a los sustratos biológicos a través de formas
reactivas del oxígeno.

[Link]. Quinonas

Las quinonas (Figura 6) están compuestas por anillos aromáticos disustituidos


con el grupo cetona y altamente reactivos. Pueden cambiar entre sus formas
difenol y diacetona fácilmente a través de reacciones de óxido-reducción. Éstos
compuestos, siendo de color, son responsables de la reacción de obscurecimiento
en las frutas y vegetales cortados o dañados. Además de proporcionar una fuente
de radicales libres estables, las quinonas son conocidas por formar complejos
irreversibles con aminoácidos nucleófilos en proteínas. Por lo tanto, las quinonas
inactivan la proteína y entorpece su función. Las quinonas se unen con adhesi-
nas superficiales expuestas, polipéptidos de la pared celular, enzimas unidos a la
membrana y forma complejos que inactivan las enzimas.

[Link]. Xantonas

Las Xantonas son un grupo restringido de polifenoles de plantas, biosintéticamente


relacionados con los flavonoides. Son moléculas planares de seis carbonos en siste-
mas de anillos conjugados de la cadena principal y varios grupos químicos unidos a

Figura 6. Algunos ejemplos de quinonas


ACTIVIDAD ANTIFÚNGICA 119

Figura 7. Estructura de caledonixantona

ella. La cadena principal de las Xantonas consiste en dos anillos de benceno unidos
a través de un grupo carbonilo y un oxígeno que no permite la libre rotación entre
los enlaces C-C. La cadena principal, la posición y tipo de los grupos químicos que
posee, define las propiedades específicas de estas moléculas. Poseen actividad bio-
lógica variada, incluyendo la actividad antifúngica. Por ejemplo la Caledonixantona
aislada de la corteza de Calophyllum caledonicum. (Figura 7).

[Link]. Alcaloides

Los alcaloides son un grupo de compuestos nitrogenados heterocíclicos (Figura 8)


el primero del que se tiene uso con fines medicinales es la Morfina aislada del opio
Papaver somniferum. La Walterione A, un alcaloide tipo quinolinona de las hojas de
Meloquia odorata, ha exhibido actividad antifúngica contra un amplio espectro de
hongos patógenos. Los mecanismos de acción de los alcaloides parecen ser pri-
mordialmente modificaciones del ADN-ARN (mutaciones), alquilación, efecto
negativo en la ADN o ARN polimerasa, también en inhibición de la traducción
protéica, se ha observado que afectan las membranas dando efectos negativos

Figura 8. Estructura de alcaloides


120 INVESTIGACIÓN EN PLANTAS DE IMPORTANCIA MÉDICA

en los transportadores de iones y por efecto en la estabilidad de la membrana y


cuentan con la inhibición enzimática de hidrolasas y adenilato ciclasa.

[Link]. Saponinas

Las saponinas son metabolitos secundarios que se producen en un amplio rango


de especies de plantas (Figura 9) se encuentran almacenadas en las células vegetales
como precursores inactivos listos para ser transformados en antibióticos activos vía
enzimática en respuesta a un patógeno. Son compuestos glicosilados ampliamente

Figura 9. Diversidad estructural de saponinas


ACTIVIDAD ANTIFÚNGICA 121

distribuidos en el reino vegetal y pueden ser divididos en tres grandes grupos:


triterpenoides, esteroideos y alcaloides esteroideos glicosilados. Su mecanismo de
acción es sobre la membrana afectando la integridad de las células fúngicas.

4.5. Conclusión

Las plantas nos brindan una nueva fuente de moléculas con actividad biológica
significativa, la medicina tradicional ha llegado hasta nuestra vida con el paso de
generaciones brindándonos un conjunto de conocimiento considerado patrimo-
nio para la humanidad, con la cual la calidad de vida de muchas personas se ha
visto beneficiada. Los hongos representan para el hombre una fuente de pérdidas
a nivel económico de muy alto nivel, además las enfermedades causadas por estos
(micosis) son recurrentes en los pacientes, ya que su tratamiento es prolongado,
costoso y con altos efectos secundarios. El aislamiento de moléculas de las plan-
tas constituye una vía para disminuir el uso de aquellos fármacos de patente en
los cuales estos efectos son notorios, ya que debido a la naturaleza química de los
metabolitos secundarios pueden ejercer varias actividades a la vez, por ejemplo
fungicida y antioxidante. Grupos de metabolitos como las quinonas, xantonas,
cumarinas, alcaloides, entre otros, nos ofrecen éstos beneficios. Ya que sus meca-
nismos de acción nos brindan un amplio espectro de dianas para llevar a cabo su
efecto. En conclusión el estudio de las plantas en esta última década ha llevado a
la medicina nuevas moléculas con posibilidad de ser en algún momento nuevos
fármacos para la aplicación en humanos y compuestos para combatir plagas.

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