[Link]
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Khalid et al. (2018) realizaron un estudio en el que inmovilizaron un consorcio de bacterias
conformado por Pseudomonas kilonensis, Serratia marcescens, Bacillus pumilus,
Achromobacter xylosoxidans y Klebsiella sp., los cuales tienen la característica de degradar
clorpirifós, un peligroso pesticida que contamina el agua. Para la inmovilización de las células,
utilizaron como matriz al alginato de calcio en forma de macrocápsula recubierta con un
polímero sintético de polisulfona. Su preparación comenzó con la disolución de alginato de
sodio en agua destilada para obtener una solución al 2% (p / v). Seguido a esto, el consorcio
bacteriano se cultivó a 35 °C en caldo nutritivo hasta su fase de crecimiento exponencial,
obteniendo un sedimento celular después de la centrifugación del medio con las bacterias. El
sedimento celular obtenido se resuspendió en agua desionizada y se mezcló con la solución de
alginato de sodio, para luego verter esta mezcla en una solución de cloruro de calcio (CaCl2).
Luego de 30 seg. se formaron perlas esféricas de alginato de calcio, las cuales se sumergieron
en fosfato monopotásico (KH2PO4) al 5% para que endurezcan y se elimine el CaCl2 sobrante.
Después de varios lavados para eliminar el CaCl2 y los fosfatos adicionales, las esferas de
alginato de calcio se recubrieron con una solución de polisulfona durante 30 seg., obteniendo un
recubrimiento de polímero blanco sobre la superficie de las esferas, las cuales, fueron
denominadas macrocápsulas de alginato de calcio. Finalmente, estas macrocápsulas se secaron y
se inocularon en un medio que contenía 100 mg/L de clorpirifós durante 12 horas a 35°C,
obteniendo como resultado una degradación completa del pesticida. Además, determinaron que
estas macrocápsulas podrían ser reutilizadas más de 13 veces y aún así obtener un porcentaje de
degradación mayor al 96%. Esto debido al refuerzo de polisulfona, el cual permite alargar la
vida útil de las esferas de alginato de calcio y aumentar su reutilización.
En medios sintéticos, se logró la biodegradación completa de PC (100-600 mg L-1) usando
macrocápsulas (MC) en 18 h. Las CAM se podrían reutilizar de manera efectiva solo hasta 5
ciclos, contrariamente a esto, las MC podrían usarse 13 veces para lograr una degradación de
CP superior al 96%. Los estudios de vida útil y reutilización realizados para CM indicaron una
retención de biomasa inalterada y una actividad de biodegradación de la PC (95%) durante 16
semanas de almacenamiento. Los MC lograron la biodegradación completa de PC (536 mg L −
1) en aguas residuales industriales reales y se reutilizaron varias veces de manera efectiva. Se
trazaron los metabolitos (3,5,6-tricloro-2-piridinol (TCP), 3,5,6-tricloro-2-metoxipiridina (TMP)
y dietiltiofosfato (DETP) mediante GC-MS y se construyó una posible vía metabólica El estudio
indicó que los CM podrían usarse para la limpieza de aguas residuales contaminadas con PC de
manera repetida, segura y eficiente durante un período de tiempo más largo.
El pH del medio se ajustó a 7 y se complementó con CP 100 mg L-1 como fuente de carbono y
se inoculó con MC. El tiempo de incubación fue de 12 ha 150 rpm y 35 ° C. Se recolectaron
muestras para el análisis de la concentración residual de CP.
Se disolvió alginato de sodio (SA) en 100 ml de agua destilada hirviendo (100ºC) para preparar
una solución al 2% (p / v). Las bacterias se cultivaron en NB hasta la fase de crecimiento
exponencial a 35ºC. El medio se centrifugó y se descartó el sobrenadante. El sedimento celular
se resuspendió en agua desionizada y se mezcló completamente con solución SA. Esta mezcla
se agitó magnéticamente para lograr una solución homogénea. Se preparó una solución al 4%
p / v de cloruro de calcio (CaCl2) en agua desionizada esterilizada. La mezcla de alginato de
sodio se vertió en una solución de CaCl2. En 30 s se formaron perlas casi esféricas. A
continuación, estas CAM se sumergieron en una solución de KH2PO4 al 5% para endurecer y
eliminar el CaCl2 excesivo. Después de la fosforilación, las CAM se transfirieron a agua
desionizada y se agitaron magnéticamente para eliminar el CaCl2 y el fosfato adicionales (Tsai
et al., 2013). Después de repetidos lavados y secados, las CAM se almacenaron a 4 ° C. Para el
recubrimiento polimérico, se preparó una solución de polisulfona (PSf) al 10% (p / v) en N-
metil-2-pirrolidona (NMP). Esta solución se dejó durante la noche en un agitador magnético a
80 ° C para completar la mezcla. La perla de SA se sumergió en una solución de PSf durante 30
s. Después de 30 s apareció un recubrimiento de polímero blanco sobre la superficie de la
perla. Las CAM se retiraron y se sumergieron en agua durante 1 h. Después de 1 h, se sumergió
de nuevo en una solución de PSf para un segundo recubrimiento. Se retiró después de 30 s. Las
macrocápsulas se lavaron repetidamente con agua desionizada, se secaron para eliminar la
solución orgánica tóxica y se almacenaron a 4 ° C (Kim et al., 2015).
La inmovilización de células bacterianas ofrece ventajas considerables
sobre los sistemas de biotratamiento tradicionales que utilizan células
libres. La matriz de alginato de calcio que se utiliza habitualmente para
la inmovilización bacteriana es susceptible de biodegradación en
entornos hostiles. El estudio actual tuvo como objetivo producir y
caracterizar macrocápsulas estables (MC) de consorcio bacteriano
degradante de clorpirifos (CP) utilizando una matriz de alginato de
calcio biocompatible junto con polisulfona ambientalmente estable. En
el estudio actual, un consorcio bacteriano capaz de biodegradación de
CP se inmovilizó utilizando alginato de calcio en forma de
microcápsula (MC) reforzada al ser recubierta con un polímero
sintético de polisulfona (PSf) mediante inversión de fase. El consorcio
compuesto por cinco cepas bacterianas se inmovilizó utilizando una
concentración optimizada de alginato de sodio (2,5 g L − 1), cloruro de
calcio (6 g L − 1), biomasa (600 mg L − 1) y polisulfona (10 g L − 1). Se
ha observado que los MC tienen una alta estabilidad térmica, química
y de pH que los CAM. En medios sintéticos, se logró la biodegradación
completa de PC (100-600 mg L-1) usando macrocápsulas (MC) en 18
h. Las CAM se podrían reutilizar de manera efectiva solo hasta 5
ciclos, contrariamente a esto, las MC podrían usarse 13 veces para
lograr una degradación de CP superior al 96%. Los estudios de vida útil
y reutilización realizados para CM indicaron una retención de biomasa
inalterada y una actividad de biodegradación de la PC (95%) durante
16 semanas de almacenamiento. Los MC lograron la biodegradación
completa de PC (536 mg L − 1) en aguas residuales industriales reales
y se reutilizaron varias veces de manera efectiva. Se trazaron los
metabolitos (3,5,6-tricloro-2-piridinol (TCP), 3,5,6-tricloro-2-
metoxipiridina (TMP) y dietiltiofosfato (DETP) mediante GC-MS y se
construyó una posible vía metabólica El estudio indicó que los CM
podrían usarse para la limpieza de aguas residuales contaminadas con
PC de manera repetida, segura y eficiente durante un período de
tiempo más largo.
En este estudio, se utilizó un consorcio bacteriano compuesto por
cinco cepas diferentes que tienen la capacidad de degradar bien el
clorpirifos, que fue aislado en nuestro estudio anterior (Khalid et al.,
2016). El consorcio bacteriano se inmovilizó utilizando alginato de
calcio en forma de microcápsula (MC) reforzada al ser recubierta con
un polímero sintético de polisulfona (PSf) mediante inversión de fase.
Este refuerzo permitió alargar la vida útil y aumentar la reutilización. Se
buscó un método eficaz para la preparación de MC y se investigó la vía
de biodegradación del clorpirifos mediante análisis GC-MS y GC-ECD.
Se identificaron los efectos de las condiciones ambientales sobre la
degradabilidad del clorpirifos. Además, se evaluó el efecto de varios
productos químicos normalmente presentes en la corriente de aguas
residuales de la industria agroquímica sobre el rendimiento de los
microbios encapsulados.
CP, TCP, DETP Grado analítico de Sigma Aldrich Corporation, EE. UU. El
TMP se adquirió en Tokyo Chemical Industry Co. Ltd., Tokio, Japón. Se
compró CP de calidad comercial en el mercado local. La polisulfona
(PSf) se adquirió de Merck, EE. UU. Consorcio de bacterias
degradantes de CP formado por Pseudomonas kilonensis (KT013088),
Serratia marcescens (KT013089), Bacillus pumilus (KT013091),
Achromobacter xylosoxidans (KT013092) y Klebsiella sp. (KT013093)
aislados en nuestro estudio anterior (Khalid et al., 2016). El consorcio
bacteriano se cultivó hasta la fase de crecimiento exponencial tardía
en caldo nutritivo (NB) que contenía CP. Después de 24 h, el medio se
centrifugó a 8000 xg durante 15 min, se eliminó el sobrenadante y se
resuspendió el sedimento celular en agua desionizada (DI)
esterilizada. La densidad óptica de la suspensión celular se ajustó a
2,5 a 600 nm usando agua desionizada o solución salina (0,85%)
(Khalid et al., 2016). Para medir la DO se utilizó un espectrofotómetro
(DR2010, HACH, EE. UU.). Las CAM se prepararon siguiendo el método
de Parasad y Suresh (2015). Se disolvió alginato de sodio (SA) en 100
ml de agua destilada hirviendo (100ºC) para preparar una solución al
2% (p / v). Las bacterias se cultivaron en NB hasta la fase de
crecimiento exponencial a 35ºC. El medio se centrifugó y se descartó
el sobrenadante. El sedimento celular se resuspendió en agua
desionizada y se mezcló completamente con solución SA. Esta mezcla
se agitó magnéticamente para lograr una solución homogénea. Se
preparó una solución al 4% p / v de cloruro de calcio (CaCl2) en agua
desionizada esterilizada. La mezcla de alginato de sodio se vertió en
una solución de CaCl2. En 30 s se formaron perlas casi esféricas. A
continuación, estas CAM se sumergieron en una solución de KH2PO4
al 5% para endurecer y eliminar el CaCl2 excesivo. Después de la
fosforilación, las CAM se transfirieron a agua desionizada y se
agitaron magnéticamente para eliminar el CaCl2 y el fosfato
adicionales (Tsai et al., 2013). Después de repetidos lavados y
secados, las CAM se almacenaron a 4 ° C. Para el recubrimiento
polimérico, se preparó una solución de polisulfona (PSf) al 10% (p / v)
en N-metil-2-pirrolidona (NMP). Esta solución se dejó durante la noche
en un agitador magnético a 80 ° C para completar la mezcla. La perla
de SA se sumergió en una solución de PSf durante 30 s. Después de
30 s apareció un recubrimiento de polímero blanco sobre la superficie
de la perla. Las CAM se retiraron y se sumergieron en agua durante 1
h. Después de 1 h, se sumergió de nuevo en una solución de PSf para
un segundo recubrimiento. Se retiró después de 30 s. Las
macrocápsulas se lavaron repetidamente con agua desionizada, se
secaron para eliminar la solución orgánica tóxica y se almacenaron a 4
° C (Kim et al., 2015).
El efecto de la concentración de alginato de sodio (SA) se examinó
usando 1, 1,5, 2, 2,5, 3, 3,5, 4% (p / v). La concentración de CaCl2 varió
de 2, 3, 4, 5, 6%. Se utilizó la concentración de biomasa 300, 600, 900,
1200 mg 100 mL − 1 para evaluar su efecto sobre la inmovilización
celular y su actividad. La concentración de polisulfona se varió entre 5,
10 y 15%. La actividad residual de los MC en términos de
biodegradación de la PC se investigó en HSH. El pH del medio se
ajustó a 7 y se complementó con CP 100 mg L-1 como fuente de
carbono y se inoculó con MC. El tiempo de incubación fue de 12 ha
150 rpm y 35 ° C. Se recolectaron muestras para el análisis de la
concentración residual de CP.
[Link]
[Link]
Bibliografía
Botello, W., Ortiz, J., & Peña, S. (2016). Inmovilización microbiana en polímeros sintéticos para
el tratamiento de aguas residuales. Revista NOVA, 14(26), 93 - 100. Obtenido de
[Link]
Khalid, S., Han, J., Hashmi, I., Hasnain, G., Ajaz, M., Jamal, S., & Arshad, M. (2018).
Strengthening calcium alginate microspheres using polysulfone and its performance
evaluation: Preparation, characterization and application for enhanced biodegradation
of chlorpyrifos. Science of the Total Environment, 632, 1046 - 1058.
doi:[Link]
