Laboratorio de Análisis Químico II INGENIERÍA BIOTECNOLÓGICA

ESPECTROSCOPIA DEL VISIBLE

SELECCIÓN DE LA LONGITUD DE
ONDA ANALÍTICA

I OBJETIVOS
◼ Operar adecuadamente el espectrofotómetro computarizado Shimadzu 160 - A .
◼ Preparar soluciones stock, madre y patrones de Manganeso
◼ Obtener espectros o Curva de absorción
◼ Seleccionar la longitud de onda de trabajo, máxima o analítica

II GENERALIDADES
En cada tipo de sustancias los átomos, iones o moléculas absorben con cierta
preferencia radiación de determinadas longitudes de onda de una determinada
gama de frecuencias; esto hace que los átomos, iones o moléculas puedan
identificarse mediante la longitud de onda a que se da lugar la absorción. En el
análisis espectrofotométrico, las mediciones de absorbancia se realizan
ordinariamente a una longitud de onda que corresponda a un máximo del espectro
de absorción.

Para ello en una determinación espectroscópica en el visible, ultravioleta e

infrarrojo, se deberá obtenerse previamente una curva de absorción o espectro
de absorción para ubicar en ella el pico más alto y seleccionar la longitud de onda
a la cual se produce el máximo de absorción de la radiación electromagnética. A
esta longitud de onda se denomina longitud de onda analítica, de trabajo o
máxima y es la longitud de onda a la cual se realiza la medición cuantitativa de un
analito determinado.

III FUNDAMENTO
Para encontrar la curva de absorción se irradia a la solución coloreada radiación
electromagnética entre 450-600 nm, con energía radiante de una gama de
longitudes de onda de tal manera que a cada longitud de onda se mide su valor
de absorbancia o de % de transmitancia; esta energía absorbida se traduce en un
espectro de absorción que es obtenido en función de los valores de absorbancia
o de % de transmitancia frente a las longitudes de onda. En la curva se hace un
barrido espectral y se ubica el máximo pico o valle más profundo que corresponde
a un máximo de absorbancia a una determinada longitud de onda; a esta longitud
se denomina longitud de onda analítica, óptima o de trabajo. Este espectro de
absorción y longitud de onda es característico para la especie absorbente, lo que
permite identificar a la sustancia responsable de la absorción.

IV ARREGLO EXPERIMENTAL
El esquema del equipo o arreglo experimental es el siguiente:

1
Laboratorio de Análisis Químico II INGENIERÍA BIOTECNOLÓGICA

V APARATOS
◼ Espectrofotómetro Shimadzu 160 - A.
◼ Cubeta: 1cm de trayecto óptico.
◼ Región de trabajo: espectro visible (450 - 600 nm).
◼ Blanco: agua destilada.

2
Laboratorio de Análisis Químico II INGENIERÍA BIOTECNOLÓGICA

VI MATERIALES
◼ Fiolas de 100 y 250 ml.
◼ Buretas de 25ml.
◼ Vasos de precipitación de 250ml.

VII REACTIVOS
◼ Solución Stock de permanganato de potasio 0,1000 N.
◼ Solución de permanganato de potasio con concentración de 100 mg/L (ppm) de manganeso
◼ Soluciones estandares o patrones de Manganeso

VII TÉCNICA
1.- PREPARACIÓN DE SOLUCIONES
A) PREPARACIÓN DE UNA SOLUCIÓN DÍLUIDA DE 100 PPM EN
MANGANESO
Disponer de una solución stock de KMnO4 0.1000 N, previamente valorada. Calcular
su concentración en partes por millón referida a manganeso. Preparar a partir de la
solución stock de 250 ml de una solución de 100 p.p.m. de manganeso

B) PREPARACIÓN DE SOLUCIONES PATRONES O ESTÁNDARES

Preparar por dilución 100 mililitros de los siguientes patrones: 2, 4, 6, 8,10, 12, y 16
ppm.

2.- SELECCIÓN DE MODO BÁSICO DE TRABAJO

Cuando el interruptor de potencia es llevado a “on “, el instrumento es inicializado en 3
minutos, y es el período en que el equipo realiza una verificación de funcionamiento de
sus componentes. Terminado indica en pantalla el menú de modo básico,

MENU DE MODO BASICO

MODO No “ “
1.- Fotómetro
2.- Espectro
3.- Barrido de tiempo
4.- Cinética
5.- Cuantitativo
6.- Multicomponente
7.- Memoria
8.- Señalamiento de condición
9.- Enlace
Para laobtención del espectro de absrción, presione el modo Nro “2 “y luego la
tecla ENTER para seleccionar el modo “ESPECTRO “. El blanco para emplear es
agua destilada.

3.- AJUSTE DE PARÁMETROS ANALÍTICOS

Luego que el modo básico ESPECTRO es seleccionado, es necesario primero
establecer los parámetros analíticos de medición siguientes:

MOSTRARIO DE CAMBIO DE PARAMETRO

Espectro Cambio de parámetros
s/n

1.- λ s = 600,0 nm λ E = 450,0

2.- Medición (ABS / T %) = ABS.

3
Laboratorio de Análisis Químico II INGENIERÍA BIOTECNOLÓGICA

3.- Superior = + 1,00 A Inferior = + 0,00 A

4.- Velocidad de barrido = rápida

5.- Ciclo T = 60 seg. N=1

6.- Cubrir Si

7.- Copiar No

8.- Barrido OBS No

9.- Fila

Si desea cambiar un parámetro presione la tecla “Yes “e ingrese el número del

parámetro correspondiente.
1.- Se ajusta el parámetro de intervalo de longitudes de onda
2.- Se selecciona la unidad de la medición en absorbancia o porcentaje de
transmitancia
3.- Se selecciona el intervalo de valores de absorbancia que este dentro del
intervalo de las mediciones de las concentraciones de las soluciones
4.- Es la velocidad de la medición
5.- Se selecciona el intervalo de tiempo para la medición
6.- Se activa para realizar las superposiciones de las curvas. Ahora si el ingreso
es erróneo presione la tecla “CE “y reingrese el nuevo valor. Cuando el
parámetro indicado por el cursor no será cambiado, presione directamente la tecla
“ENTER “.

Cuando el proceso de cambio de parámetro está completo, presione la tecla “NO

“para terminar el procedimiento.

4.- MEDICIÓN DE STÁNDARES

Una vez ajustados los parámetros de medición y al presionar la tecla “No “para el
cambio de parámetro aparece el mensaje de insertar una muestra y presionar la
tecla “Star / Stop “.El espectro medido es indicado en la pantalla.

5.- PROCESAMIENTO DE DATOS

Cuando la medición termina, se indica el mensaje “PROCESAMIENTO DE DATOS
S/N”.

a) Si no es necesario el procedimiento de datos, presionar “NO” y es posible

indicar la longitud de onda y valor medido a cualquier posición deseada en el
espectro medido, la cual es recogida por el cursor usando la techa ----- o ---
--- .Al espectro medido puede ser grabado en copia con la techa “COPY “.
b) Si es necesario un procesamiento de datos, presionar “SI” y es posible hacer
los siguientes procesamientos de datos:

* Para almacenar el espectro medido en la memoria... presionar 1 ENTER

(número de canal) ENTER.
* Para expandir o comprimir el espectro...presionar 2 ENTER, y entonces
ajustar los parámetros de escala en la abcisa y ordenada de acuerdo con la
indicación del cursor presionando (valores) ENTER, sino hay cambio
necesario, sólo presionar ENTER.

Después de que el espectro es indicado con nuevos parámetros de escala, el

sistema pregunta “VOLVER A LA CURVA ORIGINAL S/ N” .Si presiona “SI” se obtiene

4
Laboratorio de Análisis Químico II INGENIERÍA BIOTECNOLÓGICA

de nuevo el espectro original; si presiona la tecla “NO “ el espectro expandido es

almacenado en la memoria.
• Para hacer una detección de pico...presionar 3 ENTER, y entonces cada
pico y valle son marcados y también sus longitudes de onda y valores son
impresos.
• Para obtener un espectro derivado o espectro suavizado... presionar 4
ENTER y luego ingresar la orden derivada presionando (N) ENTER de
acuerdo con la indicación de la pantalla. Cuando el procedimiento es
terminado, con la escala automáticamente ajustada al valor derivado. El
suavizado corresponde a la orden derivada.
• Para imprimir datos a intervalos de longitud de onda regulares... Presionar
5 ENTER (intervalo de longitud de onda) y presionar ENTER
• Para plotear los datos en el ploteador X-Y, presionar 6 ENTER.

Cuando termine sus procedimientos de datos aparece en pantalla la curva debidamente

suavizada con los parámetros de absorbancia frente a las longitudes de onda en NM.
Con el cursor ubicar el pico más alto de la curva, apareciendo en pantalla los valores de
absorbancia y longitudes de onda que corresponde a ese pico.

VIII INTERPRETACION DE DATOS

El espectro medido puede ser grabado en copia con la tecla de “COPY “. Imprimir las
curvas espectrales en un sistema de coordenadas teniendo en cuenta los siguientes
parámetros:

• ABSORBANCIA FRENTE A LONGITUDES DE ONDA λ

5
 Laboratorio de Análisis Químico II INGENIERÍA BIOTECNOLÓGICA

• PORCENTAJE DE TRANSMITANCIA (%T) FRENTE A LONGITUDES DE

ONDA λ

IX DISCUSION DE DATOS
Señalar las conclusiones que se desprenden de los gráficos obtenidos.

CUESTIONARIO
1.- Defínase brevemente:

La radiación monocromática y policromática

- Luz monocromática: Constituida por radiaciones electromagnéticas

de una sola longitud de onda.
- Luz policromática: La que contiene radiaciones electromagnéticas de
diferentes longitudes de onda. Cada longitud de onda equivale a un
color.
-
a) Espectro de absorción
El espectro de absorción de una materia muestra la fracción de la radiación
electromagnética incidente que un material absorbe dentro de un rango de
frecuencias. Es, en cierto sentido, el opuesto de un espectro de emisión.
b) Porque es importante monocromatizar la radiación policromática
Porque al monocromatizar la luz policromatica no solo seleccionamos un
color de luz sino tambien una longitud de onda de trabajo que permite
mejorar la eficiencies de los analisis y ademas devuelve datos mas
precisos ya que en la longitud de onda de trabajo es donde el material
absorbe mas radiación

2.- describir la diferencia entre un espectrofotómetro y un fotómetro

Un espectrofotometro lee en longitudes de onda que van desde el ultravioleta

hasta
en infrarrojo, se utiliza generalmente para dosar concentraciones en soluciones
o
caracterizar sustancias por su curva de absorcion.

6
Laboratorio de Análisis Químico II INGENIERÍA BIOTECNOLÓGICA

Un Fotocolorimetro es un equipo similar, pero este lee en longitudes de onda del

rango "Visible", se utiliza generalmente para determinar con exactitud el color
de
una substancea, ya sean soluciones o sustratos solidos como tintas o pinturas.

3.- En la longitud de onda de trabajo obtenida en la parte experimental a 525 nm

calcular la cantidad de energía que le corresponde a esa radiación. Compararla
con una longitud de onda de 200 nm que corresponde a la región UV.

La cantidad de energía es de 13,225 N

4.- Que tipo de información proporciona el espectro de absorción.

La interaccion entre las ondas electromagneticas y la materia de la region UV-

visible es el campo de estudio de la espectroscopia UV-visible o
espectrofotometria
Esta basada en la relacion que presenta un haz de luz incidente en la muestra
y el
haz de luz que pasa por la solucion. Su estudio se basa en que la cantidad de
luz absorbida por la materia presente en la solucion es caracteristica del
compuesto. La respuesta de dicho componente es funcion de las caracteristicas
del haz de luz
incidente en la muestra lo que permite determinar la respuesta en funcion de la
calidad del has proporcionado. Dicho conjunto de respuesta en el rango de
longitud
de onda gama UV-visible se denomina espectro de absorcion dicha respuesta
caracteristica de cada compuesto.

5.- Señale algunas razones el porque determina la longitud de onda analítica o

de trabajo.

La longitud de onda es la distancia entre dos crestas consecutives. Es

importante ya que cuando se determina la longitud de onda maxima se puede
determinar la
concentracion que presenta el analito. La longitud de onda de absorcion maxima
es util para identificar una sustancia desconocida. Midiendo una serie de
estandares
(patrones o referencias) podemos identificar la cantidad, concentracion o
actividad
de una sustancla en una mezcla

6.- Indicar que formas conoce para representar una curva de absorción.

Se pueden representar las curvas de absorcion utilizando la Absorvancia vs. la

longitud de onda o mediante el porcentaje de transmitancia vs. la longitud de
onda

7.- Que es un espectro de absorción atómica y que es un espectro de absorción

molecular.
La espectroscopia de absorcion atomica (a menudo llamada AA) es un método
instrumental de la Quimica analitica que determina una gran variedad
de elementos al estado fundamental como analitos. Es un metodo quimico
analitica
que esta basado en la atomizacion del analito en matriz liquida y que utiliza

7
Laboratorio de Análisis Químico II INGENIERÍA BIOTECNOLÓGICA

comunmente un nebulizador pre-quemador (o camara de nebulizacion) para

crear
una niebla de la muestra y un quemador con forma de ranura que da una llama
con una longitud de trayecto mas larga, en caso de que la transmision de energia
inicial
al analito sea por el metodo "de llama". La niebla atomica es desolvatada y
expuesta a una energia a una determinada longitud de onda emitida ya sea por
la
dicha llama, o una lampara de catodo hueco construida con el mismo analito a
determinar o una Lampara de Descarga de Electrones (EDL). Normalmente las
curvas de calibracion no cumplen la Ley de Beer-Lambert en su estricto rigor.

El espectro de absorcion de un material muestra la fraccion de la radiacion

electromagnetica incidente que un material absorbe dentro de un rango
de frecuencias. Es, en cierto sentido, el opuesto de un espectro de emision.
Cada elemento quimico posee lineas de absorcion en algunas longitudes de
onda,
hecho que esta asociado a las diferenclas de energia de sus distintos orbitales
atomicos. De hecho, se emplea el espectro de absorcion para identificar los
elementos componentes de algunas muestras, como liquidos y gases; mas alla,
se
puede emplear para determinar la estructura de compuestos organicos.' Un
ejemplo de las implicaciones de un espectro de absorcion es que aquel objeto
que
lo haga con los colores azul, verde y amarillo aparecera de color rojo cuando
incida
sobre el luz blanca. Cuando incide una luz a un metal al superar su energia
umbra
saca un electron, si la energia es superior la energia que sobra se convierte en
energia cinetica

8
Laboratorio de Análisis Químico II INGENIERÍA BIOTECNOLÓGICA

INFORME DE LABORATORIO # 1
SELECCIÓN DE LA LONGITUD DE ONDA DE TRABAJO

Fecha: _______ No GRUPO: ______

ANALISIS:
◼ Operar adecuadamente el espectrofotómetro computarizado Shimadzu 160 -
A.
◼ Preparar soluciones stock, madre y patrones de Manganeso
◼ Obtener espectros o Curva de absorción
◼ Seleccionar la longitud de onda de trabajo, máxima o analítica

METODO
Espectrofotométrico del visible
MUESTRA:
◼ Solución stock de KMnO4 0.1 N
◼ Solución madre de KMnO4 de 100 ppm
◼ Soluciones patrones de KMnO4

1.- PREPARACIÓN DE LA SOLUCIÓN STOCK 0.1 N DE

PERMANGANATO DE POTASIO PARA UN VOLUMEN DE
UN LITRO, A PARTIR DEL REACTIVO SÓLIDO.
La reacción del KMnO4 es:

MnO4- + 8H+ + 5e -----------→ Mn+2 + 4 H2O

Peso equivalente del KMNO4 = 158.03 = 31.6060 g/eq

5
1 meq= 0.031606 g KMnO4

CALCULO DEL PESO DE KMnO4

0.1000 meq KMnO4 x (0.031606 g KMnO4) x (1000 ml)

ml ( 1 meq ) x ( 1 litro )

= 3.1606 g KMnO4 (peso teórico))

PREPARACIÓN DE LA SOLUCIÓN
Pesar en la práctica 3.2500 g de KMnO4, disolver la solución con agua destilada,
disolver, y trasvasar a una Fiola por 1000 ml. Diluir la solución hasta la línea de
enrase, homogenizar la solución y depositar en un frasco color caramelo con
tapa esmerilada. Valorar la solución.

9
Laboratorio de Análisis Químico II INGENIERÍA BIOTECNOLÓGICA

A) PESAR 3.2500 G KMnO4

c) Disolver con agua destilada

d) Trasvasar a una Fiola de un litro

e) Enrase y homogenización de la solución de KMnO4

10
Laboratorio de Análisis Químico II INGENIERÍA BIOTECNOLÓGICA

2.- VALORACIÓN DE LA SOLUCIÓN DE KMNO4 CON

OXALATO DE SODIO
a) Se pesa 0.1000 g del reactivo patrón oxalato de sodio

b) El reactivo patrón se disuelve con agua destilada y se diluye a ± 80 ml

11
Laboratorio de Análisis Químico II INGENIERÍA BIOTECNOLÓGICA

c) Se añada a la solución 2-3 ml de acido sulfúrico concentrado

d) La solución se calienta a ± 90º C (cerca del punto de ebullición

e) Se titula la solución de oxalato de sodio en caliente con la

solución de KMnO4, hasta obtener un color rosa pálido, que
indica el punto final. Anotar el gasto de permanganato

12
Laboratorio de Análisis Químico II INGENIERÍA BIOTECNOLÓGICA

TECNICA DE VALORACIÓN

REACCIÓN DE VALORACIÓN
5C2O4 -2 + 2MnO4 - + 16H+ --→ 10CO2 + 8H2O + Mn+2

Reacción de oxidación
C2O4 -2 ----→ 2CO2 + 2e

Peso equivalente= 134 = 67 g/eq = 0.067 g/meq

2

CALCULOS
DATOS
• Peso de oxalato = 0.1004 g
• Gasto del KMnO4 = 14.5 ml
• Meq Na2C2O4 = 0.067 g/ mol

a) CALCULO DE LA NORMALIDAD EXACTA

0.1004 g Na2C2O4 x ( 1meq KMnO4) = 0.1033 N
14.5 ml KMnO4 x (0.067 g Na2C2O4)

b) EXPRESIÓN DE LA CONCENTRACIÓN EN ppm

REFERIDA A MANGANESO.

0.1033 meq KMnO4x (0.03160 gKMnO4) x (54.94 g Mn) x (1000 mg) x (1000 ml)
ml x (1 meq KMnO4 ) x (158.03 gKMnO4)x (1 g )x (1L )

13
Laboratorio de Análisis Químico II INGENIERÍA BIOTECNOLÓGICA

= 1134.8 mg Mn
ml

2.- PREPARACIÓN DE SOLUCIONES

a) PREPARACIÓN DE LA SOLUCIÓN MADRE DE 100 ppm
de Manganeso PARA UN VOLUMEN DE 250 ml, CALCULO
DEL VOLUMEN DE LA SOLUCIÓN STOCK.
A partir de la solución de 1134.8 ppm de manganeso se calcula que volumen de
esta solución se requiere para preparar 250 ml de una solución de 100 ppm en
manganeso.
Aplicando la ecuación de dilución.
V1 x N1 = V2 x N2

V1 x 1134.8 ml = 250 ml x 100ppm

V1 = 22.03 ml.

TECNICA

MEDIR MEDIANTE
BURETA 22.03 ml DE LA
SOLUCIÓN STOCK

DEPOSITAR EN UNA
FIOLA POR 250 ml, DILUIR
A LA LÍNEA DE AFORO,
HOMOGENEIZAR.

b) PREPARACIÓN DE LAS SOLUCIÓNES PATRONES

Se preparan las souciones patrones a partir de la solución de 100
ppm de manganeso.

N° CONCENTRACIÓN VOLUMEN VOLUMEN

Patron ppm Mn A MEDIR A MEDIR
DE LA ml
SOLUCIÓN
DE 100
ppm Mn ml
1 2.0 2.0 100.0
2 4.0 4.0 100.0
3 6.0 6.0 100.0
4 8.0 8.0 100.0
5 10.0 10.0 100.0
6 12.0 12.0 100.0

Se preparan las soluciones patrones para un volumen de 100 ml.

MEDIANTE BURETA 22.03 ml DE LA SOLUCIÓN STOCK

14
Laboratorio de Análisis Químico II INGENIERÍA BIOTECNOLÓGICA

c) Medición de las soluciones patrones en el

espectrofotometro

D ) TABLA DE MEDICIÓN DE LAS ABSORBANCIAS A

DIFERENTES LONGITUDES DE ONDA λ

TABLA # 1
TABULACION DE DATOS EXPERIMENTALES EN
FUNCIÓN DE LA ABSORBANCIA Y LONGITUD DE ONDA

15
Laboratorio de Análisis Químico II INGENIERÍA BIOTECNOLÓGICA

Longitud de Absorbancia
onda nm ABS
450 0.072
460 0.112
470 0.180
480 0.264
490 0.325
500 0.518
510 0.705
520 0.732
530 0.640
540 0.620
550 0.596
560 0.470
570 0.452
580 0.230
590 0.106
600 0.084

ESPECTRO DE ABSORCIÓN
Mediante excell procesar esta información y obtener la curva de absorción.
Pasos para obtención de la gráfica
1. Copiar en Word datos de los parámetros a procesar longitud de onda y
absorbancia
2. Hacer click en EXCEL
3. Seleccionar celdas y hacer click en insertar
4. Seleccionar gráfica y formatear la gráfica
5. Plotear datos de absorbancia máxima en el pico más alto y longitud de onda de trabajo
que le corresponde.

GRAFICA # 1
ESPECTRO DE ABSORCION DEL PERMANGANATO
DE POTASIO EN FUNCIÓN DE LA ABSORBANCIA Y
LONGITUD DE ONDA.
Absorbancia (ABS)
0.8
0.7
0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
400 450 500 550 600
Longitud de onda (nm)

16
Laboratorio de Análisis Químico II INGENIERÍA BIOTECNOLÓGICA

El pico mas alto se encuentra en el punto 0.733 y el λ es

de 526 nm

TABLA # 2
TABULACION DE DATOS EXPERIMENTALES EN
FUNCIÓN DEL PORCENTAJE DE TRANSMITANCIA Y
LONGITUD DE ONDA
Longitud de %T
onda nm
450 84.72
460 77.27
470 66.07
480 54.45
490 47.32
500 30.34
510 19.72
520 18.54
530 22.91
540 23.99
550 25.35
560 33.88
570 35.32
580 58.88
590 78.34
600 82.41

Fuente:

GRAFICA # 2
ESPECTRO DE ABSORCION DEL PERMANGANATO DE
POTASIO EN FUNCIÓN DEL PORCENTAJE DE
TRANSMITANCIA Y LONGITUD DE ONDA

%T
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0
400 450 500 550 600
Longitud de onda (nm)

17
Laboratorio de Análisis Químico II INGENIERÍA BIOTECNOLÓGICA

Fuente: Elaboración propia

Mediante excell procesar esta información y obtener la curva de absorción con los
parámetros correspondientes:
Pasos para obtención de la gráfica
1. Copiar en Word datos de los parámetros a procesar longitud de onda y
absorbancia
2. Hacer click en EXCEL
3. Seleccionar celdas y hacer click en insertar
4. Seleccionar gráfica y formatear la gráfica
5. Plotear datos del porcentaje de transmitancia (valor más bajo de %T) en el valle más
profundo y de la longitud de onda de trabajo que le corresponde (longitud de onda de
trabajo).
El % T: 18.5
λ: 525.2 nm

DISCUSIÓN DE RESULTADOS
Se puede observar que al ponderar adecuadamanete la curva, la
hondacon pico mas bajo, choca con el punto 18,2 y la honda con pico
mas alto en el punto 0.733.

18
Laboratorio de Análisis Químico II INGENIERÍA BIOTECNOLÓGICA

ESPECTROFOTOMETRIA DEL VISIBLE

DEMOSTRACION DE LAS LEYES
FOTOMETRICAS Y ERROR RELATIVO
DE LA CONCENTRACION
I OBJETIVOS
• Preparar soluciones de permanganato de potasio
• Medición de los patrones a la longitud de onda de trabajo
• Construir la curva de calibración
• Verificar la conformidad de la ley Beer
• Determinar las concentraciones límites de los patrones

II GENERALIDADES
Después de determinar la longitud de onda a la cuál deben de realizarse las medidas, se calibra el
método midiendo una serie de patrones del constituyente en estudio. Generalmente se prepara una
solución diluida de la sustancia que se desea determinar, se pipetean cuidadosamente porciones
de esta solución, de distinto volumen, se añade el reactivo que forma color, y se ajustan las
condiciones para que se desarrolle el color en forma óptima, se diluye cada solución a un volumen
predeterminado en una fiola, y luego se mide la absorbancia de cada solución a la longitud de onda
analítica o de trabajo.

Las medidas de la absorbancia se realizan comúnmente utilizando un blanco, que debe ser idéntico
a la muestra en todo, excepto en que no debe contener el constituyente que se ha de determinar.
El blanco deberá contener los reactivos, aditivos, disolvente, etc., en la misma naturaleza y
concentración que las utilizadas en cada muestra desconocida en la que se desarrolle color. De esta
manera, las lecturas de las muestras están corregidas automáticamente para cualquier absorción
pequeña por acción de los reactivos y del disolvente. Con los datos absorbancia para las diferentes
concentraciones de las series patrón se construye una curva de calibrado. La cantidad de luz
absorbida por cada patrón se encuentra bien definida y se debe ajustar a ciertas leyes físicas
denominadas leyes fotométricas:

a) Ley Lambert - Bouguer

Presenta dos partes:

1.- “La relación entre la energía radiante transmitida, P, y la incidente, Po, es una constante
expresada como T, y se denomina TRANSMITANCIA”.
T = P / Po
2.- “La energía de radiación transmitida decrece en progresión geométrica cuando la longitud del
camino óptico aumenta en progresión aritmética”. Se expresa matemáticamente de la siguiente
manera:
◼ log T = ab = A = - log T = - ( P/ Po ) = log ( Po/ P )

b) Ley Beer
Expresa la relación entre transmitancia y concentración de material absorbente, es decir, que la
transmitancia disminuye en progresión geométrica cuando la concentración aumenta en progresión
aritmética. Por tanto:
-log T = ac = A = - log (P / Po) = log (1/ T) = -log T

c) Ley Combinada Lambert - Beer

Resulta de la combinación de la ley de Lambert con la de Beer y suele llamarse simplemente ley de
Beer. Esta ley establece que: “la cantidad de luz o energía ultravioleta o infrarroja absorbida o

19
Laboratorio de Análisis Químico II INGENIERÍA BIOTECNOLÓGICA

transmitida por una solución es una función exponencial de la concentración de sustancia absorbente
presente y de la longitud de la trayectoria hacia la muestra”. Se obtiene las siguientes relaciones:
A = abc = = - log T = -log (P/ Po) = log (Po / P ) = log ( 1 / T ).

Donde:
T = transmitancia
a = absortividad del medio
b = Trayecto óptico
P = poder de radiación transmitida
Po= poder de radiación incidente.

Esta forma matemática de la ley combinada muestra que la absorbancia A en función de la

concentración “c” es una línea recta de pendiente “a”, y la representación de log T frente a la
concentración es una línea recta de pendiente negativa. La representación gráfica de esta ley se
denomina representaciones de la ley Beer.

III FUNDAMENTO
La obtención de la curva de calibrado y la demostración de la ley de Beer se determinan
experimentalmente, preparando una serie de soluciones patrones y midiendo la absorbancia de
cada solución a la longitud de onda analítica, máxima o de trabajo. Con los datos de absorbancia
frente a las concentraciones de los patrones se gráfica en un sistema cartesiano y la representación
debe ser una línea recta de pendiente positiva si cumple con la ley Beer.

IV ARREGLO EXPERIMENTAL

20
Laboratorio de Análisis Químico II INGENIERÍA BIOTECNOLÓGICA

V APARATOS
• Espectrofotométro : Shimadzu 160 -A
• Cubeta : 1 cm. De trayecto óptico
• Región de trabajo : Espectro visible
• Longitud de Onda de trabajo : 525 nm

VI MATERIALES
• Fiolas de 100 y 250 ml.
• Buretas por 25 ml.

VII REACTIVOS
• Solución Stock O,100N de permanganato de potasio
• Solución madre de permanganato de potasio de 100 ppm .de manganeso
• Soluciones patrones de manganeso

VIII TECNICA
1.- PREPARACIÓN DE SOLUCIONES PATRONES
Preparar a partir de la solución Stock de KMnO4 0, 1000 N una solución estándar diluida de 100
ppm en manganeso para un volumen de 250 ml y luego por dilución preparar las soluciones
patrones siguientes:

CUADRO DE SOLUCIONES

No Concentración ppm Volumen a Volumen a preparar

Patrón Medir del estándar ml
1 0,5 0.5 100.0
2 1,0 1.0 100.0
3 2,0 2.0 100.0
4 4,0 4.0 100.0
5 6,0 6.0 100.0
6 8,0 8.0 100.0
7 10,0 10.0 100.0
8 12,0 12.0 100.0
9 16,0 16.0 100.0
10 20,0 20.0 100.0
11 30,0 30.0 100.0
12 40.0 40.0 100.0

2.- Selección de Modo

Cuando se enciende el instrumento el interruptor es llevado hacia arriba en la posición “ON “y es
iniciado su funcionamiento. Cuando aparece el menú de modo básico seleccionar el modo “5” que
corresponde al modo cuantitativo.

3.- Ajuste de Parámetros

En el mostrario de la función CUANTITATIVO o de determinación de la concentración, ajuste los
parámetros de medición.

21
Laboratorio de Análisis Químico II INGENIERÍA BIOTECNOLÓGICA

MOSTRARIO DE CAMBIO DE PARAMETRO EN EL MODO CUANTITATIVO

CUANT. CAMBIO DE PARAMETRO S / N?

1.- METODO : 1
1λ = 525 NM
2.- STANDAR No = 12
3.- MUESTRA No = 1
4.- REPETIR = 1
5.- IMPRESION DE DATOS NO
6.- CURVA DE TRABAJO NO LINEAL NO
7.- FILA

Para ajustar el primer parámetro “METODO” se sigue los siguientes pasos:

• Para una medida a una longitud de onda única.presionar “SI” ENTER, 1 ENTER. Luego
introducir la longitud de onda de medición.
• Para una medida con 2, 3 longitudes de onda, o para un análisis con valores
derivados...presionar “SI” ENTER, y presionar la opción 2, 3 o 4 y ENTER.

El segundo parámetro “STANDARD” significa introducir el número de soluciones patrones cuyos

valores de absorbancia se van a medir.

El tercer parámetro “MUESTRA No”, significa la solución muestra, este será creado
automáticamente.

El sexto parámetro “CURVA DE TRABAJO NO LINEAL”, cuando este parámetro es colocado en

“SI”, la curva trabajada es no lineal. Cuando este es colocado para “NO” , el trabajo de la curva es
lineal .

Cuando los parámetros han sido ajustados a las condiciones adecuados presionar en “CAMBIO
DE PARAMETROS “NO. De acuerdo con la indicación de la pantalla, ingresar tantos valores de
concentración como muestras standard o patrones exista. El sistema pregunta “CAMBIO DE
CONCENTRACION S/ N”. Si se cometió un error en la introducción de datos, presionar “SI “
presionar el No del patrón para la corrección, ENTER, entrar el dato correcto, y ENTER.
Cuando no hay error en las entradas de concentración, presionar la tecla “NO “luego el sistema
pregunta “ INGRESO MANUAL DE DATOS DE ABSORBANCIA S/ N? “:
• Al presionar la tecla “SI “puede ingresar los valores de absorbancias desde el patrón número 1
hasta el último.
• Para medir las muestras standares o patrones...presionar “NO “y luego medir los patrones desde
el número 1.

Cuando la entrada manual de las absorbancias de los patrones se ha terminado, el sistema

pregunta “CAMBIO DE DATOS S/N “igual que antes. Luego corregir las entradas equivocadas
como se señaló anteriormente, y presionar por último la tecla “NO “.

El sistema pregunta al operador “MOSTRARIO DE CURVA DE TRABAJO S/ N “, cuando se

presiona “NO “se puede iniciar una medición inmediatamente. Si se presiona “SI “, la curva de trabajo
se indica en la pantalla. Cuando el sistema pregunta “CAMBIO DE CONCENTRACION EN CURVA
DE TRABAJO S/ N ‘“, para cambiar la escala del eje de concentración de la curva de trabajo,
presionar “SI “(valor de concentración) ENTER. En este caso si se presiona “NO “, se indican la
curva de trabajo y su ecuación.

4.- Medición de la Muestra

Insertar una muestra y entonces presionar la tecla “STAR/STOP “, para iniciar su medición.

22
Laboratorio de Análisis Químico II INGENIERÍA BIOTECNOLÓGICA

IX INTERPRETACIÓN DE DATOS
Para copiar la curva de trabajo obtenida en pantalla en función de los valores de absorbancia en el
eje de la ordenada frente a las concentraciones en partes por millón de manganeso en el eje de la
abcisa, presionar la tecla “COPY “.

Para seleccionar las soluciones patrones para la construcción de la curva de calibración es

necesario calcular el error relativo de la concentración o de la absorbancia que surge de un error
fotométrico de 1 %, y se efectua a partir de la ecuación siguiente:

dA = dC = 0.434 dT
A C t log t
Donde:
dA = dC = error relativo de la concentración o de la absorbancia
A C

dT = error fotométrico de 1 %
t = transmitancia.

23
 Laboratorio de Análisis Químico II INGENIERÍA BIOTECNOLÓGICA

CUESTIONARIO
1.- ¿Que son y cuales son las leyes fotómetricas?
La fotometría es la ciencia que se encarga de la medida de la luz, como el brillo percibido por el ojo
humano. Es decir, estudia la capacidad que tiene la radiación electromagnética de estimular el
sistema visual. No debe confundirse con la Radiometría, encargada de la medida de la luz en
términos de potencia absoluta.

Magnitud Símbolo Unidad Símbolo Notas

Energía lumínica Qv lumen segundo lm·s A veces se usa la denominación talbot,

ajena al Sistema Internacional.

Flujo luminoso Φv, F lumen (= cd·sr) lm Medida de la potencia luminosa percibida.

Intensidad luminosa Iv candela (= lm/sr) cd Es una medida de la intensidad luminosa.

Luminancia Lv candela por metro cd/m2 A veces se usa la denominación nit, ajena
cuadrado al Sistema Internacional.

Iluminancia Ev lux (= lm/m2) lx Usado para medir la incidencia de la luz

sobre una superficie.

Emitancia luminosa Mv lux (= lm/m2) lx Usado para medir la luz emitida por una
superficie.

Exposición luminosa Hv lux segundo lx·s Iluminancia integrada en el tiempo.

Eficacia luminosa de K lumen por vatio lm/W Razón entre flujo luminoso y flujo radiante.
la radiación

Eficacia luminosa de η lumen por vatio lm/W Razón entre flujo luminoso y potencia
una fuente eléctrica consumida.

2.- Como obtiene y para que se utiliza una curva de calibración o de trabajo
Una curva de calibración es la representación gráfica de una señal que se mide en función de la
concentración de un analito. La calibración incluye la selección de un modelo para estimar los
parámetros que permitan determinar la linealidad de esa curva.

3.- Como comprueba experimentalmente la ley Beer

La Absorbancia de una especie en solución homogénea es directamente proporcional a su actividad
óptica, longitud del paso óptico y su concentración. Es una relación empírica que relaciona la
absorción de luz con las propiedades del material atravesado. Establece que la absorbancia es
proporcional al número de moléculas absorbentes.

24
Laboratorio de Análisis Químico II INGENIERÍA BIOTECNOLÓGICA

A= 3CI
• A= Absorbancia
• C= Concentración
• I= Longitud de la Celda.
• 3= Coeficiente de extinción o absortividad molar.

4.- Señalar las razones por las cuáles se dan las limitaciones de la Ley de Beer
Se han encontrado pocas excepciones a la generalización de que la absorbancia está
relacionada en forma lineal con la longitud de la trayectoria. Por otra parte, se han encontrado
desviaciones frecuentes de la proporcionalidad directa entre la absorbancia medida y la
concentración cuando b es constante. Algunas de estas desviaciones, llamadas desviaciones
reales, son fundamentales y representan limitaciones propias de la ley. Otras resultan de la
forma en que se realizan las mediciones de absorbancia (desviaciones instrumentales) o son
consecuencia de cambios químicos que ocurren cuando se modifica la concentración
(desviaciones químicas).

5.- A que se denominan y cuales son los errores personales

Los errores personales son una clase de errores en los resultados analíticos, dontro de los
Errores determinados, atribuibles al experimentador, tales como equivocación al anotar el dato
de una pesada, error en la lectura de un volumen, errores de manipulación al transvasar
materiales, al añadir una cantidad dada de reactivo y al permitir contaminación de muestras,
entre otros.

6.- Que criterios se maneja para seleccionar las soluciones patrones para ser utilizadas en un
método espectrofotómetrico
Se mide la absorbancia de la solución a utilizar

7.- Representar en forma gráfica el error relativo de la concentración considerando el 0.5 % de error
fotométrico si las lecturas son de 1, 5, 10, 20, 30 ,40, 50, 60, 70, 80, 90, y 95 % de transmitancia.
El grafico del error relativo esta en las siguientes paginas.

8.- Dar razones porque en espectroscopia se utilizan soluciones diluídas

La unidad de medida que se usa para la longitud de onda (λ) depende de la región en determinadas
condiciones: luz monocromática y soluciones diluidas.
La ley de Lambert-Beer se cumple para soluciones diluidas
El fundamento de la espectroscopía se debe a la capacidad de las moléculas únicamente para
disoluciones diluidas (c≤ a 0.1 M)

9.- Cuando una curva de calibración no parte del origen señalar las razones que determinan este
tipo de curva
Relaciona una señal instrumentalen función de la concentración de un analito y define un intervalo
de trabajo en el cual, los resultados a informar tienen una precisión y exactitud conocida que ha sido
documentada en la validación de cada método.
La etapa de calibración analítica se realiza mediante un modelo, que consiste en encontrar la
recta de calibrado (expresión matemática) que mejor ajuste a una serie de “n” puntos
experimentales, donde cada punto se encuentra definido por una variable “x” (variable
independiente, generalmente concentración del analito de interés) y una variable “y” (variable
dependiente, generalmente respuesta instrumental).

10.- Señalar los rangos de transmitancias y absorbancias de los patrones y de la muestra coloreada
donde el error relativo es mínimo
En espectofotometría de absorbancia se utilizan las regiones del ultravioleta (UV cercano, de 195-
400 nm) y el visible (400-780 nm).

25
Laboratorio de Análisis Químico II INGENIERÍA BIOTECNOLÓGICA

26
 Laboratorio de Análisis Químico II INGENIERÍA BIOTECNOLÓGICA

Informe de laboratorio No 2
DEMOSTRACIÓN DE LAS LEYES FOTOMÉTRICAS Y
ERROR RELATIVO DE LA CONCENTRACIÓN

Fecha: 21/08/2021 No GRUPO: ___________

Análisis
• Preparación de la solución madre de 100 ppm Mn
• Preparación de soluciones patrones
• Obtención de la curva de calibración
• Verificación de la ley de Beer

Método: Espectrofotométrico del visible

Muestra: Soluciones de permanganato de potasio

A) CÁLCULO DEL VOLUMEN DE LA SOLUCIÓN STOCK

REQUERIDO PARA PREPARAR UNA SOLUCIÓN MADRE DE
100 ppm EN MANGANESO PARA UN VOLUMEN DE 250 ML.
Se aplica la ecuación de dilución para calcular el volumen de la solución
stock de MnO4 1130.50 ppm Mn (0.1 000 N)

V1 x 1130.55 ppm Mn = 250 ml x 100 ppm

V1 = 22.11 ml

Medir por bureta 22.1 ml de la

solución stock y depositar en fiola
x 250 ml

Diluir con agua destilada y

enrasar. Homogenizar la solución

b) CÁLCULOS PARA PREPARAR 100 ML DE LAS

SOLUCIONES PATRONES O ESTÁNDARES ppm Mn. A
PARTIR DE LA SOLUCIÓN MADRE

Se prepara a partir de la solución diluída de 100 ppm Mn. Cálculo del volumen a medir
V1 x 100 ppm = 100 ml x 0.5 ppm V1 = 0.5 ml
V2 x 100 ppm = 100 ml x 1.0 ppm V2 = 1.0 ml
V3 = 2.0 ml
V4 = 4.0 ml

27
Laboratorio de Análisis Químico II INGENIERÍA BIOTECNOLÓGICA

TABLA DE PREPARACIÓN DE SOLUCIONES PATRONES

No Concentración ppm Volumen a medir Volumen final

Patrón Mn de la solución de ml
100 ppm ml
1 0,5 0.5 100.0
2 1,0 1.0 100.0
3 2,0 2.0 100.0
4 4,0 4.0 100.0
5 6,0 6.0 100.0
6 8,0 8.0 100.0
7 10,0 10.0 100.0
8 12,0 12.0 100.0
9 16,0 16.0 100.0
10 20,0 20.0 100.0
11 30,0 30.0 100.0
12 40.0 40.0 100.0

B) PREPARACIÓN DE LAS SOLUCIONES PATRONES

Se preparan las soluciones patrones diluidas para un volumen de 100
ml a partir de la solución de 100 ppm Mn

Medir el volumen calculado

y depositar la solución en
fiola por 100.0 ml

Diluir, enrasar con agua

destilada. Homogenizar las
soluciones

28
Laboratorio de Análisis Químico II INGENIERÍA BIOTECNOLÓGICA

E) SELECCIÓN DEL MODO DE TRABAJO (MODO CUANTITATIVO)

MOSTRARIO DE CAMBIO DE PARAMETROS EN EL MODO CUANTITATIVO

CUANT. CAMBIO DE PARAMETRO S / N ?

1.- METODO : 1
1λ = 525 NM
2 .- STANDAR No = 12
3.- MUESTRA No = 1
4.- REPETIR = 1
5.- IMPRESION DE DATOS NO
6.- CURVA DE TRABAJO NO LINEAL NO
7.- FILA

F) MEDICIÓN DE LAS SOLUCIONES PATRONES

TABLA DE RESULTADOS

No patrón Concentración ABS %T

ppm Mn
1 0.5 0.023 94.84
2 1.0 0.042 90.68
3 2.9 0.087 81.84
4 4.0 0.160 69.18
5 6.0 0.245 56.89
6 8.0 0.339 45.81
7 10.0 0.419 38.11
8 12.0 0.500 31.62
9 14.0 0.578 26.42
10 16.0 0.669 21.43
11 18.0 0.745 17.99
12 20.0 0.843 14.35
13 30.0 1.256 5.55

29
Laboratorio de Análisis Químico II INGENIERÍA BIOTECNOLÓGICA

SOLUCIONES SELECCIONADAS

No Patrón Concentración ppm Mn ABS

1 6.0 0.245
2 8.0 0.339
3 10.0 0.419
4 12.0 0.500
5 14.0 0.578
6 16.0 0.669

CÁLCULO DEL ERROR DE LA ABSORBANCIA O LA

CONCENTRACIÓN

c = 0.434  T
c t logt

Donde:

c/c = Error relativo de la concentración

 T = grado de inertidumbre 1% (0.01)
t = transmitancia

1) Cálculo del error relativo para 1 % t

30
Laboratorio de Análisis Químico II INGENIERÍA BIOTECNOLÓGICA

= 0.434 (0.01) x 100% =

0.01 log 0.01
2) Cálculo del error relativo para 5 % t
= 0.434 (0.01) x 100% =
0.05 log 0.05
3.- Cálculo del error relativo para 10 % t
= 0.434 (0.01) x 100% =
0.1 log 0.1
4.- Cálculo del error relativo para 15 % t
= 0.434 (0.01) x 100% =
0.15 log 0.15
5.- Cálculo del error relativo para 20 % t
= 0.434 (0.01) x 100% =
0.20 log 0.20
6.- Cálculo del error relativo para 30 % t
= 0.434 (0.01) x 100% =
0.30 log 0.30
7.- Cálculo del error relativo para 40 % t
= 0.434 (0.01) x 100% =
0.40 log 0.40
8.- Cálculo del error relativo para 50 % t
= 0.434 (0.01) x 100% =
0.50 log 0.50
9.- Cálculo del error relativo para 60 % t
= 0.434 (0.01) x 100% =
0.60 log 0.60
10.- Cálculo del error relativo para 70 % t
= 0.434 (0.01) x 100% =
0.70 log 0.70
11.- Cálculo del error relativo para 80 % t
= 0.434 (0.01) x 100% =
0.80 log 0.80
12.- Cálculo del error relativo para 90 % t
= 0.434 (0.01) x 100% =
0.90 log 0.90
13.- Cálculo del error relativo para 95 % t
= 0.434 (0.01) x 100% =
0.95 log 0.95

31
Laboratorio de Análisis Químico II INGENIERÍA BIOTECNOLÓGICA

TABULACIÓN DE DATOS

%t ABS Dc/c
95 0.0222 20.50
90 0.0458 10.53
80 0.097 5.60
70 0.155 4.00
60 0.222 3.26
50 0.300 2.88
40 0.397 2.72
30 0.523 2.77
20 0. 699 3.10
15 0.824 3.51
10 1.000 4.34
5 1.301 6.67
1 2.000 21.70

%t DC/C

95 20.50
90 10.53 SOLUCIONES MUY DILUIDAS
80 5.60
70 4.00
60 3.26
50 2.88 SOLUCIONES DILUIDAS
40 2.72
30 2.77
20 3.10
15 3.51
10 4.34 SOLUCIONES CONCENTRADAS

5 6.67
1 21.70

32
Laboratorio de Análisis Químico II INGENIERÍA BIOTECNOLÓGICA

CURVA DEL ERROR RELATIVO DE LA CONCENTRACIÓN

ERROR RELATIVO DE LA CONCENTRACION

Series2 Lineal (Series2)

21
21.7
20.5
16

11
10.53
6
6.67
5.6
4 3.26 2.88 2.72 2.77 3.1 3.51 4.34
1
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13

FUENTE: Propia

33
Laboratorio de Análisis Químico II INGENIERÍA BIOTECNOLÓGICA

SELECCIÓN DE LAS SOLUCIONES PATRONES

No patrón Concentración ABS %T

ppm Mn
1 0.5 0.023 94.84
2 1.0 0.042 90.68
3 2.9 0.087 81.84
4 4.0 0.160 69.18
5 6.0 0.245 56.89
6 8.0 0.339 45.81
7 10.0 0.419 38.11
8 12.0 0.500 31.62
9 14.0 0.578 26.42
10 16.0 0.669 21.43
11 18.0 0.745 17.99
12 20.0 0.843 14.35
13 30.0 1.256 5.55

SOLUCIONES PATRONES SELECCIONADOS

No Patrón Concentración ppmABS
Mn
1 6.0 0.245
2 8.0 0.339
3 10.0 0.419
4 12.0 0.500
5 14.0 0.578
6 16.0 0.669

CURVA DE CALIBRACIÓN

Curva de tutilacion
0.8
0.669
0.7
0.578
0.6
0.5
ABSORBANCIA

0.5 0.419
0.4 0.339
0.3 0.245 y = 0.0417x - 0.0002
R² = 0.9992
0.2
0.1
0
3 5 7 9 11 13 15 17
CONCENTRACION DE PPM

34
Laboratorio de Análisis Químico II INGENIERÍA BIOTECNOLÓGICA

DISCUSIÓN DE RESULTADOS

Podemos ver en los gráficos anteriores el error relativo en la

concentración del analito que se aproximadamente 3.80 dc. Además de
la curva de calibración la cual nos indica un r2 de 0.9992 que también
es un resultado bueno.

35
Laboratorio de Análisis Químico II INGENIERÍA BIOTECNOLÓGICA

ESPECTROFOTOMETRIA DEL VISIBLE

ANALISIS DE MANGANESO

I OBJETIVOS
• Construir la curva de calibración o de trabajo
• Tratamiento adecuado de la muestra de alimento y formación de la especie coloreada
• Determinar el contenido de manganeso en muestras de alimentos.

II GENERALIDADES
Pueden determinarse por espectrofotometría y colorimetría en forma de permanganato
pequeñas cantidades de manganeso en minerales, aguas, alimentos, aceros y fármacos.
Entre los diversos reactivos capaces de oxidar los estados inferiores de oxidación del
manganeso a permanganato, tenemos el peryodato de potasio cuya reacción se desarrolla
de la siguiente manera:
Reacciones del análisis<<<<<<<<<<<<.
A) Disolución de la muestra por calcinación
C, H, O, minerales --→ CO2 (g) + H20 (g) + Fe +2 + Mn+2 + P + Zn.
550 oC analito

B) Formación del ion permanganato

2 Mn+2 + 5 IO4- + 3 H2O ----→ 2 MnO4- + 5 IO3- + 6 H+

analito peryodato ión permanganato

Existen productos farmacéuticos que son agentes activos para el restablecimiento de la

capacidad corporal e intelectual y para la lucha contra las manifestaciones de desgaste. Las
cápsulas de Pharmaton son productos que contienen extracto de ginseng, vitaminas A, B1,
B2, B6, B12, C, D, E, hierro, calcio, fósforo, flúor, cobre, potasio, magnesio, zinc, y
manganeso en cantidad de 1.0 mg por cápsula y otros componentes.
Muchas enzimas contienen manganeso o son activados por este elemento. El manganeso
está presente en los alimentos de origen vegetal, como té, harina integral, germenes de
cereales y nueces. La deficiencia de manganeso ocasiona trastornos del crecimiento,
modificaciones de esqueleto y alteración del metabolismo de hidratos de carbono y grasas.
A grandes dosis, el manganeso es tóxico y produce trastornos en el tracto grastrointestinal
y neumonía. No se conocen intoxicaciones debidas a una ingesta normal procedente de
alimentos.
El salvado de trigo es el resultado de una parte de la molienda de los granos de cereales
procedentes de las capas externas del grano. Es un producto en forma de hojuelas de color
café rojizo.Es un cereal que contiene nutrientes y contiene proteínas, carbohidratos,
vitaminas, minerales, y dentro de ellos hierro, magnesio, potasio, calcio, y manganeso. El
manganeso es importante para la salud de la piel que es requerido por una enzima llamada
prolidasa que genera colageno como un componente estructural de la piel. Su contenido en
manganeso es de 11.50 mg por 100 g de salvado.

1.- Interferencias
Son pocas las interferencias para el método. La presencia de iones coloreados se puede
compensar empleando como blanco un parte alícuota de la muestra problema , no oxidada
por el peryodato.El cerio (III) y el cromo (III) son excepciones ; estos dan productos de
oxidación por el peryodato que absorben en el mismo grado a la longitud de onda que se
usa para la medición del permanganato.
Los componentes que acompañan al manganeso comunican cierta coloración a la solución,
el ión férrico de color amarillo se elimina con ácido fosfórico por formación del complejo

36
Laboratorio de Análisis Químico II INGENIERÍA BIOTECNOLÓGICA

hierro-fosfórico incoloro, el color debido a pequeñas cantidades de cromo, vanadio, níquel,

y cobalto se compensan con el blanco tal como se ha señalado.
Los cloruros reducen el permanganato formado y por lo tanto, si hubo necesidad de utilizar
HCl, deben ser eliminados previamente en forma de vapores de HCl llevando a fumación
con H2SO4
III FUNDAMENTO
La muestra es sometida a calcinación seca entre 500 - 550 oC , hasta obtener un resíduo
de cenizas, la que es disuelta por ácido y tratada con peryodato de potasio en caliente ; el
manganeso es oxidado por este reactivo hasta permanganato de color violeta. En esta
condición de color desarrollado por reacción y diluido a un volumen conocido se realiza la
medición espectrofotométrica a una longitud de onda de 525 nm.

IV ARREGLO EXPERIMENTAL

V APARATOS
• Espectrofotómetro : Shimadzu 160 - A
• Cubeta de cuarzo : 1 cm. De trayecto óptico
• Región de trabajo : Espectro visible
• Longitud de onda : 525 nm
• Blanco : agua

VI MATERIAL ES
• Fiolas de 100 ml.
• Pipeta graduada de 10 ml.
• Equipo de filtración
• Vaso de precipitación
• Pisetas

VII REACTIVOS
• Solución de ácido nítrico 1 : 3
• Peryodato de potasio en reactivo RA
• Acido fosfórico al 85%
• Solución de Permanganato de potasio de 100 ppm en manganeso
• Soluciones patrones o Standares.

37
Laboratorio de Análisis Químico II INGENIERÍA BIOTECNOLÓGICA

VIII TECNICA
1.- Preparación de las soluciones patrones
Preparar las soluciones patrones o estandares de: 4, 6, 8, 12 y 16 ppm en manganeso para un
volumen de 100 ml.
CUADRO DE SOLUCIONES

No standard Volumen del Stock Volumen aforado Concentración ppm

1 4.0 100.0 4
2 8.0 100.0 8
3 12.0 100.0 12
4 16.0 100.0 16

2.- TRATAMIENTO DE LA MUESTRA

A. Medida y disolución de la muestra
Pesar 5.0000 g de muestra, colocarla en un crisol de porcelana y someterla a calcinación a más
o menos 550 oC, mantener esa temperatura por espacio de 3 - 4 horas hasta obtener un residuo
de cenizas.
Trasladar las cenizas a un vaso de precipitado de 250 ml y agregar 20 ml de HNO3 1:3, cubrir el
vaso con un vidrio de reloj y hervir lentamente hasta semisequedad. (En el curso de la disolución
se produce NO2 y NO), estos pueden interferir posteriormente reduciendo el ácido periódico por
ello deben ser removidos). Diluir con más o menos 30 ml de agua destilada, calentar suavemente
y si queda un residuo sólido filtrar.
Lavar el precipitado con agua destilada. El residuo sólido de descarta

B. Oxidación del Manganeso

Colocar la solución filtrada en un vaso de 250 ml, añadir de 3 a 5 ml. de ácido fosfórico al 85% y
unos 0.3 gramos de peryodato de potasio sólido. Hervir la solución suavemente durante unos 3
minutos. Retire del fuego y permita que se enfrie; después añada otros 0.2 gramos del peryodato
de potasio (el exceso de peryodato estabiliza el permanganato). Haga hervir uno o dos minutos
más para desarrollar el color purpúreo, enfriar y llevar a un volumen de 25 ó 50.0 ml en un matraz
aforado (según intensidad del color obtenido)
Medir en el instrumento la solución problema coloreada, a la longitud de onda seleccionada (525
nm), utilizando como blanco agua.

3.- Medición Cuantitativa

A. Selección de Modo
Encender el instrumento y seleccionar en el menú de modo básico, presionando la tecla “5 “que
corresponde al modo cuantitativo y ajustar los parámetros de medición a lo siguiente:

CUANTIT. CAMBIO DE PARAMETRO S/ N

1.- Método: 1
λ = 525 NM
2.- Standard No = 6
3.- Muestra No = 1
4.- Repetir No = 1
5.- Impresión de datos = NO
6.- Curva de trabajo no lineal = NO
7.- Fila

38
Laboratorio de Análisis Químico II INGENIERÍA BIOTECNOLÓGICA

El sistema pregunta “CAMBIO DE PARAMETRO S /N “al presionar “NO “aparece en pantalla

“CALIBRATION “e ingresar los valores de concentración como soluciones Standares, aparece
luego en pantalla el mensaje de “CAMBIO DE CONCENTRACION S / N” .

Si presiona “NO “el sistema pregunta “INGRESO MANUAL DE DATOS DE ABS. S / N “. Para
ingresar las absorbancia de las soluciones Standares....presionar YES. Y luego ingresar los
valores de absorbancia desde el standard No 1 hasta el 4.

Cuando aparece “MOSTRARIO DE CURVA DE TRABAJO S/N “, presionar YES y la curva se

indica en pantalla. Presionar “RETURN “, aparece el modo cuantitativo y presionar la tecla “NO
“.

B.- Medición
Cuando aparece en pantalla “COLOCAR MUESTRA Y PRESIONAR LA TECLA START. Luego
aparecen los valores de absorbancia y concentración para cada muestra.

IX CALCULOS
1.- Método Gráfico
Presionar la tecla COPY para obtener la curva de calibrado y en ella se plotea el valor de
absorbancia de la muestra en la curva para determinar su concentración. Luego calcular la
concentración final de la muestra teniendo en cuenta las alícuotas correspondientes.

2.- Método Analítico

Los pasos a seguir en el cálculo son:

A.- Cálculo de las absortividades de los estandares en base a:

A p = a. b. Cp

B.- Cálculo de la concentración de la muestra en base a:

Am = a. b. C m
Donde:
Ap = absorbancia del patrón
Am = absorbancia de la muestra
Cp = concentración del patrón
Cm = concentración de la muestra

C.- Cálculo de la concentración de la muestra teniendo en consideración las diluciones

efectuadas.
Considerar en estos cálculos las diluciones que se han realizado con la solución problema. Se
tiene un peso inicial, un volumen inicial de la solución, una medición de una porción alícuota, y
finalmente un volumen final de la muestra.

d.- Expresión del resultado

El resultado del análisis expresarlo bajo las dos formas siguientes: El fármaco declara en su
envase que contiene un peso determinado en miligramos por cápsula. En el caso de alimentos
se expresa el resultado como miligramos por ciento.

X CUESTIONARIO
1.- Que métodos de trabajo conoce para determinar concentraciones de analitos en
espectrofotometría
El espectro de absorción puede medirse usando un espectrómetro. Conociendo la forma del
espectro, la longitud de ruta óptica y la cantidad de radiación absorbida, se puede determinar la
estructura y la concentración del compuesto.

2.- Porque en espectroscopia visible la solución debe presentar color natural o formado con
colorante cromóforo y cuáles son los factores a tomar en consideración

39
Laboratorio de Análisis Químico II INGENIERÍA BIOTECNOLÓGICA

La espectrofotometría UV-visible es una técnica analítica que permite determinar la concentración

de un compuesto en solución. Se basa en que las moléculas absorben las radiaciones
electromagnéticas y a su vez que la cantidad de luz absorbida depende de forma lineal de la
concentración. Para hacer este tipo de medidas se emplea un espectrofotómetro, en el que se puede
seleccionar la longitud de onda de la luz que pasa por una solución y medir la cantidad de luz
absorbida por la misma.

3.- Que papel desempeña el reactivo per yodato de potasio y el ácido fosfórico. Formule las
reacciones químicas

H3PO4 + KIO4 -> H2O + KPO4+ HIO4

4.- Señale razones porque la especie coloreada debe presentar una lectura del 36.8 % de
transmitancia de acuerdo con el error relativo de la absorbancia
La muestra numero 5 tiene el nivel de absorbancia de 0.35 lo que nos indica que no absorbe tanta
luz según teoría.

5.- Como emplea la curva de calibración para determinar la concentración de un analito

El uso de la curva de calibración para la determinación de la concentración de un analito implica
que los estándares contengan, además del analito, los mismos constituyentes que contiene la
muestra (misma matriz). En ocasiones la matriz de la muestra es compleja y/o desconocida.

6.- Un peso de 15 mg de muestra de un compuesto con peso molecular de 384.63 se disuelve en

un matraz volumétrico de 5 ml. Un alícuota de 1 ml se coloca en un matraz de 10 ml y se diluye
hasta la marca de enrase.
a) Halle la concentración de la muestra en el matraz de 5 ml
b) Determine la concentración en el matraz de 10 ml
c) La muestra de 10 ml se coloca en una celda de 0.5 cm y se obtiene una absorbancia de 0.634
a 495 nm. Determinar la absortividad molar a dicha longitud de onda

7.- Una muestra de 0.525 g que contiene manganeso se disolvió y se oxidó a ión permanganato y
la solución se diluyó a 100 ml en un matraz volumétrico. La absorbancia a 525 nm en una celda de
1 cm fue de 0.496 y su absortividad molar de 2.24 x 10 3, calcule el porcentaje de manganeso en la
muestra.

8.- Calcular la concentración de manganeso encontrado en la práctica utilizando el método de

regresión lineal

SI se realizo la pregunta 6, 7, 8 durante el desarrollo de la practica.

40
Laboratorio de Análisis Químico II INGENIERÍA BIOTECNOLÓGICA

Informe de laboratorio No 3
Determinación de Manganeso
Fecha : 01/09/2021 No Grupo: ___________
Análisis:
• Aplicar la espectroscopia del visible en un análisis cuantitativo
• Preparar soluciones patrones de KMnO4
• Obtener la curva de calibración
• Determinar Manganeso en una muestra de alimento, salvado de trigo
• Obtener una gráfica de resultados
• Evaluar los resultados obtenidos

Método: Espectrofotométrico del peryodato

Muestra: Salvado de Trigo Peso de muestra: 5.0000 g
Contenido teórico: 11.50 mg Mn/100g de salvado

DATOS:
• Longitud de onda de trabajo = 525 nm
• Peso de muestra = 5.0000 g
• Volumen final = 50.0 ML
• Blanco = AGUA DESTILADA
• Longitud de onda de trabajo: 525 nm

PREPARACIÓN DE LAS SOLUCIONES PATRONES

TABLA DE RESULTADOS DE LOS PATRONES

No Patrón Concentración ppm Mn ABS
1 6.0 0.245
2 8.0 0.339
3 10.0 0.419
4 12.0 0.500
5 14.0 0.578
6 16.0 0.669

41
Laboratorio de Análisis Químico II INGENIERÍA BIOTECNOLÓGICA

CURVA DE CALIBRACIÓN

Curva de Titulacion
0.8
0.7
0.6
Absorbncia

0.5
0.4
0.3
0.2 y = 0.0417x - 0.0002
0.1 R² = 0.9992
0
0 5 10 15 20
Concentración ppm Mn

TECNICA DE ANALISIS

1.- Pesar la muestra de salvado de trigo (5.0000 g)

PESADA DE LA MUESTRA

42
Laboratorio de Análisis Químico II INGENIERÍA BIOTECNOLÓGICA

2.- Calcinar la muestra en el horno mufla a 550 oC, por 3-4 horas
hasta obtención de cenizas.

3.- Disolver las cenizas con HNO3 1:3. Calentar a semisequedad

4.- Añadir más o menos 20 ml de agua destilada, calentar para

diolver sales anhidras. Filtrar la solución (si hay residuos
carbonosos)

43
Laboratorio de Análisis Químico II INGENIERÍA BIOTECNOLÓGICA

5.- A la solución filtrada diluirla a más o menos 30 ml de agua

destilada y agregar 3 ml de H3PO4

6.- Pesar y agregar 0.2 g de peryodato de potasio. Calentar y hervir

por tres minutos hasta desarrollar color violeta. Enfriar

7.- Llevar a fiola por 50.0 ml, diluir, enrasar y homogenizar la

solución.
CUADRO DE PREPARACIÓN DE MUESTRAS

No muestra Peso eHNO3 1:3 Agua Acido Peso e

muestra g ml destilada fósforico mlperyodato e
ml potasio g
1 5.0000 15 30 3 0.2
2 5.0000 15 30 3 0.2
3 5.0000 15 30 3 0.2
4 5.0000 15 30 3 0.2
5 5.0000 15 30 3 0.2
6 5.0000 15 30 3 0.2

8.- Medir las muestras en el espectrofotometro a 525 nm. de longitud de onda

de trabajo.

44
Laboratorio de Análisis Químico II INGENIERÍA BIOTECNOLÓGICA

TABLA DE MEDICIÓN DE MUESTRA

No grupo ABS
1 0.470
2 0.468
3 0.482
4 0.475
5 0.480
6 0.466
Longitud de onda de trabajo= 525 nm

CÁLCULOS:

1.- MÉTODO GRÁFICO (Curva de trabajo)

Curva de Calibracion
0.484
0.482
0.48
0.478
Absorbancia

0.476
0.474
0.472
0.47
0.468 y = 0.0003x + 0.4726
0.466 R² = 0.0054
0.464
0 1 2 3 4 5 6 7
N°

2.- MÉTODO ANALÍTICO

• Cálculo de la absortividad media Ap = a. b. Cp

a1 = 0.245 = 0.0408
(1 cm) (6mg/L)

45
Laboratorio de Análisis Químico II INGENIERÍA BIOTECNOLÓGICA

a2 =0.339 = 0.0423
(1 cm) (8mg/L)

a3 =0.419 = 0.0419
(1 cm) (10mg/L)

a4 =0.5000 = 0.0417
(1 cm) (12mg/L)

a5 = 0.578 = 0.0412
(1 cm) (14mg/L)

a 6 = 0.661 = 0.0418
(1 cm) (16mg/L)

am = 0.0416 L/cmx mg

• Cálculo de la concentración de la muestra (Cm): Am = a. b. Cm

Cmuestra = 0.47 = 11.298 mg/L

0.0416 L/cmx mg x 1 cm

• Cálculo de la concentración para las diluciones

11.298 mg/L x 0.050 L = 0.5649 mg

• Cálculo del peso de manganeso en miligramos

•
mg/% Mn = 0.5649 mg Mn x 100 % = 11.30
5.0000 g muestra

TABLA DE RESULTADOS DEL ANÁLISIS

No de Muestra mg Mn/ %
1 11.3
2 11.06
3 11.77
4 11.3
5 11.54
6 11.11

GRAFICA DE RESULTADOS

46
Laboratorio de Análisis Químico II INGENIERÍA BIOTECNOLÓGICA

Grafica de Resultados
mg Mn/ %

12
11.8
11.6
11.4
11.2
11
10.8
10.6
10.4
1 2 3 4 5 6

DISCUSIÓN DE RESULTADOS:
TRATAMIENTO ESTADÍSTICO DE DATOS

1.- EXACTITUD

a) ERROR ABSOLUTO (Ea)

E=/X/- /A/
Donde:
/x/ = valor medido
/A/ = valor verdadero = 11.50

TABLA DE ERROR ABSOLUTO

No /x/ / A/ E ERROR
grup - =
1 11.30 11.50 = -0.20 defecto
2 11.06 11.50 -0.44 defecto
3 11.77 11.50 0.27 exceso
4 11.30 11.50 -0.20 defecto
5 11.54 11.50 0.04 exceso
6 11.11 11.50 = -0.39 defecto

b) ERROR RELATIVO (Er)

% Er = /x/ - /A/ x 100%

/A/

TABLA DE ERROR RELATIVO

47
Laboratorio de Análisis Químico II INGENIERÍA BIOTECNOLÓGICA

No grupo % ERROR relativo

1 1.74
2 3.83
3 2.35
4 1.74
5 0.35
6 3.39

2.- MEDIDA DE TENDENCIA CENTRAL

A) MEDIA ARITMÉTICA O PROMEDIO (M)

MEDIA ARITMÉTICA
No grupo /X/
1 11.30
2 11.06
3 11.77
4 11.30
5 11.54
6 11.11

M = x1 + x2+x3+x4+x5 = ∑ X = 68.08
N N 6

M = 11.35

A) MEDIANA (Me)
colocar datos en orden creciente, por ser el número de casos
par se toma como mediana el valor medio de los valores
centrales (3) y (4). Si el número de casos es impar se toma el
valor medio.

MEDIANA
No grupo /X/
1 11.06
2 11.11
3 11.30
4 11.30
5 11.54
6 11.77

48
Laboratorio de Análisis Químico II INGENIERÍA BIOTECNOLÓGICA

La mediana es igual
Me= 11.30 + 11.30 = 11.30
2
3.- MEDIDAS DE DISPERSION
A) RANGO O INTERVALO
R = VALOR mayor – VALOR menor
= 11.77 - 11.06 = 0.61

B) DESVIACIÓN ABSOLUTA (DA)

TABLA DE DESVIACIÓN ABSOLUTA

No grupo / x / - /M/ = DA
1 11.06 11.35 0.29
2 11.11 11.35 0.24
3 11.30 11.35 0.05
4 11.30 11.35 0.05
5 11.54 11.35 0.19
6 11.77 11.35 0.42

El resultado del grupo 6 presenta una desviación absoluta de 0.42. Es el valor

que presemnta mayor dispersión, por lo que, es un valor sospechoso o dudoso,
que puede ser rechazado.

C) DESVIACIÓN ABSOLUTA (DA)

DESVIACION ABSOLUTA SIN CONSIDERAR EL VALOR

DUDOSO
No grupo / x / /M/ = DA
1 11.77 11.26 0.51 valor
dudoso
2 11.11 11.26 0.15
3 11.30 11.26 0.04
4 11.30 11.26 0.04
5 11.54 11.26 0.28
6 11.06 11.26 0.20

Z = 56.31/5 DM =0.71
M = 11.26
D) Test 4d (rechazo de datos)
Si el valor de la desviación absoluta del valor considerado sospechoso es mayor
en 4 veces la desviación el valor se rechaza
0.51 4 (0.71)
0.51 < 2.84
El valor sospechoso se acepta. No se rechaza ningún dato.

49
Laboratorio de Análisis Químico II INGENIERÍA BIOTECNOLÓGICA

Apellidos y nombres: Diana Carolina Castro Diaz

50