UNIVERSIDAD DE CORDOBA
FACULTAD CIENCIAS DE LA SALUD
PROGRAMA DE BACTERIOLOGIA
CURSO: LABORATORIO CLÍNICO II
CODIGO: 504137
HORAS SEMANALES: 5
COMPONENTE: Teórico-Práctico
UBICACIÓN: IV Semestre
REQUISITOS: 504115-504129-504130
DOCENTES: Oliva Ennis Otero
Gladys González Pardo
GUÍA N° 5
COPROCULTIVO
INTRODUCCION
El intestino contiene especies de microorganismos que pueden ser bacterias,
virus o parásitos. La mayoría de la flora intestinal es residente y se encuentra
adherida a las células epiteliales de la mucosa donde se multiplican
permanentemente. Hay también mucha flora transeúnte, libre en la luz
intestinal asociada con partículas y restos alimenticios. Transita pasivamente y
en condiciones normales es incapaz de fijarse o establecerse y es eliminada al
exterior. No obstante este tipo de flora puede albergarse en el intestino
generando una situación de enfermedad un estado de portador sano o portador
convaleciente.
Entre las bacterias patógenas a nivel intestinal se destacan la Shiguella,
Salmonella, las E. coli productoras de diarrea, Campylibacter, Yersinia y Vibrio
cholerae. Entre los virus más importantes figuran los rotavirus y entre los
parásitos patógenos sobresalen la Entamoeba hystolitica, Giardia lamblia,
Blastocystis hominis, Strongyloides stercolaris, Trichinella spiralis, etc.
La infección por los enteropatógenos se establece dependiendo de los factores
del huésped y el microorganismo. Los mecanismos por los cuales los
microorganismos producen daño y sintomatología a nivel intestinal pueden
estar dados por una ingestión de toxinas preformadas en los alimentos,
ingestión de microorganismos que producen la toxina in vivo a nivel intestinal,
un sobrecrecimiento o invasión directa de la mucosa del intestino que puede
llegar a ocasionar cambios en la eliminación y consistencia de las heces,
proceso conocido comúnmente como diarrea, por lo cual ante la sospecha de
un cuadro de infección intestinal, debe hacerse una detallada historia clínica y
un correcto estudio microbiológico incluyendo también la práctica del
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coprocultivo el cual se constituye como un método de laboratorio por medio del
cual se aíslan las bacterias patógenas intestinales para su identificación y para
la determinación de su susceptibilidad a antibióticos.
El coprocultivo tiene especial valor porque es el método que permite efectuar
rápidamente el diagnóstico etiológico de las infecciones intestinales e
intoxicaciones alimentarias y, además, determina el estado el estado de
portador de un individuo.
NECESIDAD
Que los estudiantes dominen los aspectos relacionados con el coprocultivo
necesarios para establecer un buen diagnóstico.
OBJETO DE ESTUDIO
Los agentes etiológicos implicados en infecciones gastrointestinales.
OBJETIVOS
Diferenciar el aspecto de una materia fecal patógena y una no
patógena.
Procesar correctamente las muestras de materia fecal.
Identificar los microorganismos causantes de infecciones a nivel
intestinal a través de una correcta interpretación de los cultivos
realizados a partir de muestras patógenas.
Valorar la importancia de una adecuada identificación de
microorganismos responsables de infecciones gastrointestinales para
establecer un diagnóstico preciso y confiable.
COMPETENCIAS A ADQUIRIR POR PARTE DE LOS ESTUDIANTES
Establecer las diferencias entre los microorganismos causantes de
infecciones gastrointestinales.
Identificar los agentes etiológicos implicados en infecciones
gastrointestinales a través del coprocultivo.
Valorar la importancia del aislamiento e identificación de los agentes
etiológicos implicados en infecciones gastrointestinales a través del
coprocultivo en el laboratorio clínico.
METODOLOGÍA
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En el desarrollo de la práctica de laboratorio se socializará la guía, se
discutirán los casos clínicos y se llevaran a cabo los debidos procedimientos.
MÉTODOS
Socialización de la guía.
Desarrollo de los procedimientos.
MATERIALES
Muestra de materia fecal.
Asas bacteriológicas: redondas y en punta.
Caldos de enriquecimiento: selenito o tetrationato.
Medios de cultivo: agar SS, Hecktoen, XLD, Mc Conkey. Bismuto sulfito,
Mueller Hinton
Pruebas bioquímicas.
Sensidiscos para antibiograma
Tubos para escala de Mac farlan
Gradillas
Descartadores
Papel kraft
PROCEDIMIENTO
1. Toma de muestras:
La muestra de elección para cultivo de agentes bacterianos productores de
gastroenteritis es una porción de heces diarreicas, nunca heces formes. Las
muestras de heces dentro de una o dos horas siguientes a su eliminación si
no es posible procesarla inmediatamente es conveniente su conservación
en un medio de transporte, ya que permite el aislamiento del campylobacter,
además de las otras bacterias de importancia clínica. Se almacena a
temperatura ambiente y no debe usarse si el color ha cambiado.
También puede usarse escobillones estériles para obtener la muestra
introduciéndolos a través del esfínter anal, estos escobillones se introducen
en tubos tapa rosca estériles que contienen el medio de transporte, este
procedimiento está especialmente indicado en niños con diarrea aguda y en
casos específicos de investigación de Shiguellas.
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2. Proceso de la muestra:
- Debe procesarse lo más rápido posible y no es aconsejable preservar en
neveras porque gérmenes delicados como las Shiguellas pueden morir.
- Observar la consistencia, el color, el olor, la presencia de moco y sangre,
datos valiosos en la búsqueda de la enfermedad.
- Antes de sembrar es conveniente realizar un examen microscópico con
azúl de metileno para observar reacción leucocitaria.
- Se siembra con asa estéril dos o tres asadas de materia fecal en un tubo
que contiene caldo de enriquecimiento (selenito o tetrationato); se
incuba a 37º C por 24 horas.
- Se siembra en medios seleccionados, por agotamiento. Se incuban los
cultivos a 37º C por 24 horas (EMB, Mc Conkey, Agar SS, Sulfito bismuto
agar).
3. Lectura de cultivos:
- En agar SS inicialmente tienen importancia las colonias no
fermentadoras de lactosa y las de punto negro.
- En Sulfito bismuto agar tiene importancia las colonias negras de brillo
metálico características de Salmonella typhi.
- Las colonias rosas (fermentadoras de lactosa) que aparecen en Mc
Conkey tienen interés cuando el coprocultivo corresponde a niños
menores de cinco años, ancianos débiles y pacientes especiales.
- En agar EMB son importantes las colonias pequeñas con brillo metálico
verdoso y también las transparentes.
- Sembrar las colonias obtenidas de importancia en lo diferentes medios
de las pruebas bioquímicas: TSI, LIA, CITRATO, UREA, SIM, MR-VP.
- Antibiograma.
PRELABORATORIO
1. ¿Cuales son los microorganismos implicados con mayor frecuencia en
las intoxicaciones alimentarias?
2. Qué medio de transporte utilizaría para conservar la muestra de materia
fecal?
3. ¿En qué tipo de pacientes investigaría Clostridium dificcile?
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POSTLABORATORIO
1. ¿Cuáles son los microorganismos que hacen parte de la flora normal
del tracto gastrointestinal?
2. ¿Cuáles son las características de las enterobacterias fermentadoras y
las no fermentadoras en los medios XLD y Hecktoen?
CASO CLÍNICO
Joven de 17 años, consulta a su médico por presentar fiebre desde hace varias
semanas, acompañada de cefalea, diarrea y dolor abdominal. Con la ayuda de
exámenes de laboratorio el médico concluye que el joven tiene fiebre tifoidea.
- ¿Qué muestra le pudieron haber tomado al paciente?
- ¿Cuál es el agente etiológico?
- ¿Qué medios de cultivo utilizaría para aislar el agente etiológico?
BIBLIOGRAFÍA
Manual de Laboratorio Clínico. Editorial Mc Graw Hill.
James D. Diagnóstico y Tratamientos Clínicos por el Laboratorio.
Barcelona Científicas y Técnicas.
Escobar, Myriam. Fundamentos de Microbiología. Cesa. 1998.
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ESQUEMA PARA LA REALIZACIÓN DE UN COPROCULTIVO
Heces – Hisopos rectales
Medio de transporte
Cary Blair
Agar Sangre A. EMB Agua Caldo selenito cistina
35-37º C 24 hrs A. Mc Conkey peptonada Caldo tetrationato
Aerobiosis Hecktoen Ph: 8.6 6-8 hrs 35-37º C
35-37º C 24 hrs Aerobiosis
Aerobiosis
Incuba 8-12 hrs
Prueba oxidasa 37º C
Pruebas Aerobiosis
Gram bioquímicas Agar SS
Características Agar Mc Conkey
Microscópicas Agar BPLS
Pruebas Agar Hecktoen
Diferenciales Incubar 18-24 h
Agar TCBS 35-37º C
Incubar 18-24 hrs Aerobiosis
35-37º C
Aerobiosis
Agar nutritivo
Oxidasa +
Prueba desoxicolato de sodio 0.5%
Pruebas bioquímicas y pruebas serológicas
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BIBLIOGRAFÍA
Escobar, Myriam. Fundamentos de Microbiología. 1998.
Manual de Laboratorio Clínico. Editorial Mc Graw Hill.
VIVES, S.A. Aguilar. Técnicas de laboratorio en hematología salvat. 1.990
JAMES, C. Diagnostico y tratamiento clínico por el laboratorio, Barcelona
científicas y técnicas 1.993
BAICELLS, Alfonso. La clínica y el laboratorio. Científicas y técnicas. 1.993
FISCHBACH. Manual de pruebas diagnosticas. 5ª. Edición, McGraw- Hill
interamer4icana. 1.997.
ESCOBAR, Myriam: Fundamento de microbiología. CESA 1.998
MINISTERIO DE SALUD. Manual de normas técnicas y administrativas para el
laboratorio. Decreto 00711/ 94
MANDELL/ BENNET/ DOUGLAS, de medica panamericana 1.997
LAGUADO, Ivonne: Uroanálisis. Universidad de Antioquía. 2001
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