COLECCIÓN MEMORIAS DE LOS CONGRESOS DE LA SOCIEDAD QUÍMICA DE MÉXICO
52° CONGRESO MEXICANO DE QUÍMICA Y 36° CONGRESO NACIONAL DE EDUCACIÓN QUÍMICA
Química de Productos Naturales(QPNT) ISSN 2448-914X
Preparación de las emulsiones. Se pesaron 50 mg de cada una de las muestras (A1-A5) por duplicado y se disolvieron en la
mínima cantidad de diclorometano, posteriormente se incorporó 1 ml de la solución al 2% del surfactante Tween 20 (Sigma-
Aldrich) de tal forma que se tenga una concentración al 5% de extracto. Las muestras incorporadas al surfactante se dejaron
en agitación en una campana de extracción, hasta lograr la completa eliminación del disolvente, y la incorporación del extracto
al surfactante.
Recolección de garrapatas. Las garrapatas hembras de R. sanguineus fueron proporcionadas por la MVZ Mayte Pech Haro,
propietaria del Hospital Médico Veterinario ubicado en la colonia Limones del municipio de Mérida, Yucatán. Estas se
almacenaron en viales de vidrio con un tapón de algodón a 25.7 ±2 °C| y 80% de humedad. La colecta de huevos se realizó a
los 14 días, transfiriéndolos en otro vial limpio bajo las mismas condiciones; la eclosión de larvas ocurrió dos semanas
posteriores a la oviposición.
Bioensayo de inmersión larval. Se utilizaron larvas de 10-14 días de eclosión, empleándose la técnica de inmersión larval
descrita por Soberanes et al., 2002. Posteriormente se transfirieron de 100-200 larvas a cada vial con la muestra a evaluar
empleando pinceles No. 4, éstas se sumergieron en la muestra a evaluar por 10 minutos, posteriormente se transfirieron a
sobres de papel filtro Whatman No. 1 (4 sobres por vial), los cuales se sellaron con cinta tipo maskin tape. Se incubaron en un
recipiente a una temperatura de 25.7±2 °C y humedad de 80% durante 48 horas. Transcurrido el tiempo los sobres se abrieron
para contar el número de larvas vivas y muertas. Como control positivo se empleó una solución de Amitraz (2%) marca
BAYER y Tween 20 (2%).
Con los resultados obtenidos, se aplicaron las fórmulas de Abbot (Abbot, 1925) recomendada por la FAO (2004):
Larvas muertas
% Mortalidad: _______________ X 100
Total de larvas
% Mortalidad tratada - % Mortalidad del control
% Mortalidad corregida: ________________________________________ X 100
100 - % Mortalidad del control
Análisis por Cromatografía de Gases-Espectrometría de Masas. Se empleó un cromatógrafo de gases marca Agilent
Tecnologies modelo 6890N Network GC System acoplado a un espectrofotómetro de masas modelo 5975B inert MSDEl, con
una columna modelo HP-5MS y velocidad de flujo del aire de 1 ml/min. Se inyectó 1 ml de cada una de las muestras A1-A5,
a partir de una solución al 1 % , empleando una temperatura inicial de 50 °C por dos minutos con una doble rampa de
temperatura de 8 y 3 °C/min, para llegar a 250 y 300 °C, respectivamente.
Resultados y discusiones
El empleo de surfactantes permitió una mejoría en la solubilización de las fracciones A1-A5. El Tween 20 o polisorbato-20 es
un tensoactivo no iónico que tiene un balance hidrofílico-lipofílico de 16.7 por lo que es adecuado para la formación de
emulsiones de aceite-en –agua como es el caso de las fracciones poco polares de L. punctatus.
Los resultados de porcentaje de mortalidad y la mortalidad corregida, se observan en el Cuadro 1. Como se muestra en el
Cuadro 1, se observaron porcentajes de mortalidad corregida en un rango de 10 a 65%. Las fracciones con mayor actividad
larvicida fueron las indicadas como A2, A3 y A4, siendo inactivas las fracciones A1 y A5. La fracción que mostró el mayor
porcentaje de mortalidad fue A3.
En los análisis por cromatografía de gases-espectrometría de masas (Cuadro 2) las muestras que mostraron más similitud fueron
A2 Y A3, ambas coincidiendo en componentes principales con tiempos de retención de 17.466-17.462 min para el óxido de
cariofileno, 18.482-18.482 min para Eudesma-4(14),11-dieno y 24.501-25.494 para 3,5-dimetoxiestilbeno respectivamente.
Estudios iniciales de actividad acaricida de ésta especie realizados por R. Borges y Colaboradores, contra larvas de R.
microplus, garrapata del ganado bovino, atribuyeron la actividad acaricida a la presencia de dimetoxiestilbeno. En el presente
Barranca del Muerto No. 26, Col. Crédito Constructor, Del. Benito Juárez, C.P. 03940, México, D.F.
Tels/Fax: 5662 6823 y 5662 6837, [Link], congresos@[Link] 11
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trabajo, con larvas de R. sanguíneus, se observó que éste metabolito no es el principal responsable del efecto acaricida de L.
punctatus, ya que las fracción A3 que contenían una mezcla de 3,3’,4,4’-tetrametoxiestilbeno, junto con dimetoxiestilbeno fue
la que presentó el mayor efecto acaricida, siendo la que contenía sólo el dimetoxiestilbeno, con menor actividad. Este es el
primer reporte del efecto sinergista de la mezcla de estilbenos presente en L. punctatus contra larvas de garrapatas caninas R.
sanguíneos. Estudios de evaluación individual de los estilbenos presentes en dicho extracto están en desarrollo, siendo la
mezcla de estilbenos activos en proceso de patentamiento.
Cuadro 1. Resultados de la evaluación acaricida de las fracciones de L. punctatus (5%) empleando Tween 20 como vehículo.
Muestras % Mortalidad % Mortalidad
(fracciones) corregida
A1 24.07 16.26
A2 28.40 21.04
A3 68.49 65.25
A4 38.53 32.21
A5 18.39 10
Tween 20 al 2% 9.32
Tabla 2. Análisis de los perfiles cromatográficos (CG/EM) de las fracciones A2-A3
Muestra Tiempo de % Área total Estructura Química (metabolito)
retención
(min)
17.466 4.516 Óxido de cariofileno
18.482 1.891 Eudesma-4(14),11-dieno
A2 25.501 18.839 3,5-Dimetoxiestilbeno
17.462 1.501 Óxido de cariofileno
18.482 7.426 Eudesma-4(14),11-dieno
25.494 6.137 3,5-Dimetoxiestilbeno
A3 30.379 12.024 cis 3,3’,4,4’-tetrametoxiestilbeno
31.448 6.030 trans 3,3’,4,4’-tetrametoxiestilbeno
Conclusión
El empleo de tween 20 como vehículo para la disolución de fracciones de baja polaridad de L. punctatus mostró ser una buena
opción para mejorar las propiedades de solubilidad y evaluación acaricida de esta especie, permitiendo observar un efecto
sinergista de los componentes de tipo estilbeno presentes en dicho extracto.
Bibliografía
De la Fuente J., Estrada. P.A., Venzal, M.J., Kocan, M.K., Sonenhine, E.D.(2008). Overview: Ticks as vectors of pathogens
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