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Espectrofotometría en Bioquímica y Biología

La espectrofotometría es una técnica que utiliza la propiedad de absorción de luz por las moléculas para identificar y cuantificar sustancias. Mide la absorción de luz a diferentes longitudes de onda por una muestra, lo que permite analizar cualitativamente las moléculas presentes. Cada molécula tiene un espectro de absorción característico. La ley de Lambert-Beer relaciona la absorbancia con la concentración de la sustancia y su coeficiente de extinción molar. La espectrofotometría se us

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Angelly Eloisa Acuña Monteza
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Espectrofotometría en Bioquímica y Biología

La espectrofotometría es una técnica que utiliza la propiedad de absorción de luz por las moléculas para identificar y cuantificar sustancias. Mide la absorción de luz a diferentes longitudes de onda por una muestra, lo que permite analizar cualitativamente las moléculas presentes. Cada molécula tiene un espectro de absorción característico. La ley de Lambert-Beer relaciona la absorbancia con la concentración de la sustancia y su coeficiente de extinción molar. La espectrofotometría se us

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Espectrofotometría

Definición corta: La espectrofotometría es una técnica básica en la caracterización y análisis en


la bioquímica y biología molecular.

La espectrofotometría utiliza una propiedad peculiar para identificar y cuantificar moléculas en


un laboratorio, dicha propiedad es la que poseen algunas moléculas al ser incididas por la luz
del sol, donde cada molécula absorbe ciertas longitudes de onda del espectro visible.

Ejemplo: Como las moléculas de las hojas de las plantas, cuando la luz solar incide en ellas,
estas absorben los rayos azul violeta y rojo del espectro dejando pasar solo el color verde.

Con esto podemos decir que nuestros ojos captan las longitudes de onda que una molécula no
ha absorbido, es por eso que vemos a las hojas de color verde.

Espectrofotómetro: Es un instrumento que mide la absorción de luz en una muestra.

Absorción de luz: Es la medida a diferentes longitudes de onda de una muestra, que


corresponde a su espectro de absorción.

Componentes básicos del espectrofotómetro:

1. Fuente de luz: Con intensidad constante en el rango de longitud de onda.


2. Monocromador: Separa la banda de longitud de onda y la dispersa al compartimento.
3. Compartimento para la muestra
4. Fotodetector: Mide la radiación que atraviesa la muestra sin ser absorbida por la
misma.

Espectro de absorción: Ayuda a analizar cualitativamente las moléculas que componen una
muestra.

Dato: Cada molécula que absorbe luz tiene un espectro de absorción característico.

Dato: Mayor es la absorbancia de una muestra cuando mayor sea la distancia que atraviese el
haz de luz, y directamente proporcional a la concentración de moléculas en la muestra.

“Ley de Lambert-Beer”

Nos dice que la absorbancia: es directamente proporcional a su coeficiente de extinción molar


por la longitud a la cual atraviesa la luz (1 cm) por la concentración de dicha sustancia.

La ley de Lambert-Beer no sirve para determinar la concentración de una molécula en


disolución.

La cual también tiene aplicación en el estudio de las reacciones enzimáticas.

Absorbancia = Extinción molar * Concentración de dicha sustancia * Longitud de 1 cm

Coeficiente de extinción molar “E”: Indica el valor de la absorción de una sustancia que se
encuentra a una concentración molar cuando se mide en un centímetro de lado que varía
según la longitud de onda de trabajo.

El sustrato o producto de la reacción debe poder absorber luz en las zonas visibles del espectro.

Por sus características espectrofotométricas el par NAD+, NADH es conveniente para ensayos.

La forma oxidada (NAD+), tiene un máximo de absorción a 260 nm y reducido tiene un máximo
de 340 nm. En la catálisis realizada por una enzima cuyo sustrato sea NAD+, se puede
monitorear el proceso de la reacción midiendo la aparición de NADH o aumento de la
absorbancia.

Así podemos medir la absorción y conocer la composición de una muestra dada, lo que
permite determinar si una enzima realizó su actividad catalítica o no, por la aparición del
NADH+.

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