CONSERVACIÓN IN VITRO

Conceptos básicos

Taller de Operaciones y Aprendizaje Avanzado en

Bancos de Germoplasma.
14 al 18 Mayo 2018.

Ericson Aranzales Rondon

Coordinador Laboratorio Conservación in vitro
Programa de Recursos Genéticos

earanzales@[Link]
Conservación in vitro – Conceptos básicos
Agenda
1. Definiciones, fundamentos y aplicaciones prácticas del cultivo in vitro.

2. Factores que afectan el cultivo de tejidos: medios de cultivo, factores

ambientales, fuente de material y características genéticas.

3. Aplicaciones prácticas:

Conservación de germoplasma
Obtención de plantas libres de patógenos
Micropropagación y producción masiva (ETAPAS)

4. Requisitos: equipos, infraestructura y personal

Objetivos:

Presentar los fundamentos teóricos de la conservación in vitro, definir y

discutir los requisitos básicos para su desarrollo.

Lista de requisitos para la conservación in vitro, materiales y métodos

para la conservación in vitro.
 BIOTECNOLOGÍA VEGETAL -Cultivo de tejidos

Conjunto de técnicas que se refieren al trabajo con células y tejidos vegetales, son
técnicas diversas- heterogéneas mediante las cuales un EXPLANTE es cultivado sobre
un MEDIO NUTRITIVO ARTIFICIAL y bajo condiciones ambientales controladas y
CONDICIONES ASÉPTICAS con el objetivo fundamental de renegar plantas enteras.

 Rápida multiplicación de clones

 Especies difíciles
 Uniformidad genética
 Condiciones asépticas
 Ambiente controlado
 FUNDAMENTOS

1. NUTRICIÓN VEGETAL. Conjunto de procesos que permiten a los vegetales

absorber en el medio ambiente y asimilar los elementos nutritivos necesarios
para sus distintas funciones fisiológicas: crecimiento, desarrollo, reproducción
entre otras.

2. TOTIPOTENCIA CELULAR. Toda célula vegetal viva con núcleo (material genético)
cualquiera que fuere su “especialización” es capaz de originar una planta idéntica
en condiciones optimas. Haberlandt (1902) es considerado el fundador de la
ciencia del cultivo in vitro vegetal.

3. HORMONAS VEGETALES. “ Una sustancia secretada por células de una parte del
cuerpo que pasa a otra parte, donde actúa en una pequeña concentración
regulando el crecimiento o la actividad de las células”.
APLICACIONES PRÁCTICAS

1. CONSERVACIÓN DE GERMOPLASMA

2. OBTENCIÓN DE PLANTAS LIBRES DE PATÓGENOS (CALIDAD FITOSANITARIA)

3. MICROPROPAGACIÓN Y PRODUCCIÓN MASIVA

4. MEJORAMIENTO VEGETAL

5. PRODUCCIÓN Y OBTENCIÓN DE METABOLITOS SECUNDARIOS

 FACTORES QUE AFECTAN EL CULTIVO IN VITRO

MEDIO DE CULTIVO FUENTE DE MATERIAL

Composición mineral Semilla
Reguladores de crecimiento Tipo de explante
Estado

FACTORES AMBIENTALES GENÉTICA – COMPORTAMIENTO

Luz Respuesta según genotipo
Temperatura Comportamiento frente al cultivo
Fotoperiodo de tejidos: recalcitrancia
Humedad relativa
MEDIOS DE CULTIVO
A. COMPONENTES INORGÁNICOS

Macronutrientes:
El N, S y P, junto con C, H y O, son los constituyentes mayoritarios de las moléculas
estructurales de las plantas, mientras que K, Ca y Mg, desempeñan funciones que tiene que ver
con el agua y la conformación de proteínas.

NO3- , PO43- , K+, Ca2+, Mg2+, SO42-

Micronutrientes:
Son siete los micronutrientes u oligoelementos necesarios para toda planta: Hierro (Fe),
Manganeso (Mn), Zinc (Zn), Cobre (Cu), Molibdeno (Mo), Boro (B) y Cloro (Cl).

Fe2+, Cu2+, Zn+, Mn2+, Mo2+, Co2+, I-

B. COMPONENTES ORGÁNICOS

1. Vitaminas necesarias en el metabolismo normal similar a enzimas u hormonas

para el crecimiento y desarrollo.

2. Carbohidratos son fuentes de energía, reguladores osmóticos p.e. Sacarosa,

manitol, sorbitol.

3. Aminoácidos no son necesarios pero ayudan a la asimilación del N y de los

agentes quelantes.

4. Reguladores de crecimiento

5. Complejos naturales antioxidantes p.e. agua de coco.

6. Agentes gelificantes.

SOLVENTE COMÚN AGUA DESIONIZADA Y BIDESTILADA

Reguladores de crecimiento
Grupos básicos de reguladores del crecimiento:

Auxinas
Citoquininas
Giberelinas
Ácido abscísico
Etileno

Generalidades:

-Actúan a bajas concentraciones

-Interactúan unos con otros (los resultados están determinados por las concentraciones relativas
entre las diferentes fitohormonas)

-Los reguladores endógenos del crecimiento están presentes en la planta durante todo su ciclo de
vida pero su concentración fluctúa

-Están involucrados en numerosos procesos fisiológicos.

 HORMONA LOCALIZACIÓN EN LA PLANTA EFECTOS MÁS IMPORTANTES
Estimulan la elongación celular, intervienen en la dominancia
AUXINAS Embrión, hojas jóvenes, meristemos de apical y en la diferenciación vascular, inhiben la abscisión,
las yemas apicales estimulan el desarrollo del fruto y la formación de raíces
adventicias; estimulan la síntesis de etileno; intervienen en el
fototropismo y en el gravitropismo.
GIBERELINAS
Meristemos de yemas apicales y raíces, Estimulan la floración y la elongación de los brotes, movilizan
hojas jóvenes, embrión reservas en las semillas.

CITOQUININAS Estimulan la división celular, revierten la dominancia apical,

Se sintetizan en las raíces y se transportan estimulan la formación de brotes y la germinación, movilizan
al resto de la planta nutrientes hacia las hojas y retrasan el envejecimiento foliar.

ÁCIDO Estimula el cierre de estomas, promueve la formación de la

ABSCÍSICO semilla y mantiene su dormición, favorece el envejecimiento,
Hojas, tallos, frutos verdes
facilita la adaptación de la planta al estrés.

ETILENO Favorece la maduración de frutos, la epinastia y el envejecimiento

Frutos en maduración, nudos de los tallos,
foliar, provoca el final de la dormición y la germinación de las
hojas y flores senescentes
semillas, es el responsable de la abscisión.

[Link]
 ESTADO FÍSICO DE LOS MEDIOS DE CULTIVO
SÓLIDOS, SEMISÓLIDOS Y LÍQUIDOS. Dependiendo del uso o no y de la concentración del agente
gelificante

VENTAJAS
- Mejor soporte - Dificultad soporte, hipoxia
y vitrificación.
-La absorción y difusión de
sustancias toxicas se - Mejor absorción y difusión
dificulta. de sustancias toxicas.
SOLIDO LÍQUIDO
-Mayor costo y dificultad de -Menos costos y facilidad
preparación ? en la preparación.

- El gelificante puede -Mayor productividad del

interferir con el explante operario

-Dificultad subcultivo y -Facilidad subcultivo y

automatización. automatización.
PROPIEDADES FÍSICAS DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

• Intercambio gaseoso:

Los recipientes de cultivo se tapan con una película de polietileno para posibilitar el intercambio de
gases. La organogénesis puede verse modificada si el intercambio de gases se ve dificultado.

- La inducción de yemas a partir de callos

se reduce si no hay suficiente oxígeno.

- La acumulación de etileno puede inhibir

la regeneración de brotes.
• pH:

- Constituye un factor crítico.

- Se ajusta en el rango 5,5 – 5,8.
- Se modifica durante el crecimiento de los cultivos.
 ASEGURAMIENTO DE CALIDAD DE LOS MEDIOS DE CULTIVO
Posibles problemas
ANORMALIDAD POSIBLE CAUSA
- Sobrecalentamiento del medio durante la
Falla en la solidificación del medio sólido preparación
- Peso incorrecto del agar
- Agar mal disuelto
- Pobre calidad del agua
- Pobre calidad del medio deshidrato
pH incorrecto - pH medio incorrectamente
- Contaminación externa con químicos
- Sobrecalentamiento del medio durante la
preparación
- Sobrecalentamiento del medio durante la
preparación
Color anormal - pH incorrecto
- Contaminación externa
- Pobre calidad del agua o del medio deshidratado
Aseguramiento de calidad de los medios de cultivo -Posibles problemas

ANORMALIDAD POSIBLE CAUSA

- Sobrecalentamiento del medio durante la preparación
- pH medido incorrectamente
Formación de precipitado - Pobre calidad del agua
- Pobre calidad del medio deshidratado

- Pobre calidad del agua

- Formulación inadecuada Ej. Ingredientes y suplementos
Medio inhibitorio / Productividad baja mal pesados
- Pobre calidad del medio deshidrato
- Sobrecalentamiento del medio durante la preparación

- Sobrecalentamiento del medio durante la preparación

- pH incorrecto
- Formulación inadecuada
Selectividad pobre -Pobre calidad del agua o del medio deshidratado
- Suplementos agregados incorrectamente Ej. Con el
medio demasiado caliente o en alta proporción
FACTORES AMBIENTALES GENÉTICA – FUENTE DE MATERIAL
Luz COMPORTAMIENTO Semilla
Temperatura Respuesta según genotipo Frutos
Fotoperiodo Comportamiento frente al Plantas
Humedad relativa cultivo de tejidos: Tipo de explante
recalcitrancia

Condiciones definidas según el Tipo de propagación (sexual o Disponibilidad del material

origen de la especie. asexual). (ubicación, época del año, clima y
Comportamiento de la semilla condiciones de transporte).
Condiciones definidas según el frente al almacenamiento.
propósito de la multiplicación. CIENCIA DE LA CONSERVACIÓN
1. CONSERVACIÓN DE GERMOPLASMA

✓ Estrategia de conservación ex situ usada como método complementario dentro de una

estrategia de conservación de recursos fitogenéticos.

✓ Implica el mantenimiento de los explantes en un medio estéril y libre de agentes patógenos.

✓ Las técnicas in vitro ofrecen metodologías para la conservación y multiplicación de especies

que producen semillas recalcitrantes o que no producen semillas.

✓ USOS: Introducción ó establecimiento, colecta, eliminación de patógenos, multiplicación,

conservación y distribución e intercambio de germoplasma.
RESCATE DE EMBRIONES

EXTRACCIÓN DE SEMILLA
RESCATE DE EMBRIONES

OBTENCIÓN DE PLANTULAS

FRUTOS

Fuente: Aranzales, 2005

CULTIVO DE YEMAS Y MERISTEMOS

Selección en función del objetivo:

Yemas Apicales (> estables) Yemas Laterales (< estables)

Saneamiento de material vegetal.
COLECTA DE GERMOPLASMA

Consiste en tomar y transportar in vitro hasta el laboratorio tejidos vegetales viables denominados
explantes (yemas, meristemos, embriones).

El explante se extrae, se esteriliza y se siembra en un medio de cultivo. La colecta in vitro se practica con
especies cuyas muestras son difíciles de manejar, como las de reproducción vegetativa o de semilla no
ortodoxa (recalcitrante).

Se ha usado para colectar coco ( Cocos nucifera), algodón (Gossypium spp.), cacao (Theobroma cacao),
pastos y forrajes entre otros (Withers, 1995).
MULTIPLICACIÓN DE MATERIAL VEGETAL
CONSERVACIÓN in vitro – Mínimo crecimiento

BANCO GENÉTICO in vitro ACTIVO (IVAG)

MÍNIMO CRECIMIENTO
CONDICIONES FÍSICAS CONDICIONES QUÍMICAS
Factores ambientales Composición del medio

Temperatura Reguladores osmóticos

Fotoperiodo Reguladores de crecimiento (Relaciones h.)
Intensidad lumínica Inhibidores del etileno
Recipientes de cultivo Agente gelificante
[O2]
CONSERVACIÓN in vitro – Crioconservación

BANCO GENÉTICO in vitro BÁSICO (IVBG)

✓ Las técnicas en las que ocurre supresión de crecimiento por almacenamiento del material a
temperaturas ultra bajas (-196oC), usualmente en nitrógeno liquido se denominan técnicas de
crioconservación.

✓ A estas temperaturas la división celular y los procesos metabólicos se detienen, permitiendo el

almacenamiento a largo plazo sin que sufra alteraciones o modificaciones (Engelmann, 1997).

✓ Útil para conservar especies de semilla no ortodoxa o de reproducción vegetativa, difíciles de

conservar en cámaras o en campo (Ashmore, 1997; Engelmann, 2000).

✓ Técnicas clásicas y modernas (vitrificación).

METODOLOGÍA DE CRIOCONSERVACIÓN EN SEMILLAS DE PALMAS

C.H. 43-45%
EXTRACCIÓN SECADO
SEMILLA 20 oC / 40% H.R.
FRUTOS
40 -20 - 10%
CONTENIDOS DE
HUMEDAD
12- 8 - 4%

EMPAQUE AL VACÍO
VERIFICACIÓN DE
VIABILIDAD

CRIOCONSERVACIÓN
TTC (-196 oC)

GERMINACIÓN EN
ARENA DESCONGELAMIENTO
(23 oC)
RESCATE DE
EMBRIONES
Fuente: Aranzales, 2005
DISTRIBUCIÓN E INTERCAMBIO DE GERMOPLASMA

RIESGO:

Disminuye el riesgo de transferencia o introducción de plagas y

patógenos asociados al material vegetal

REQUISITOS:

Certificado fitosanitario expedido por la autoridad competente en el cual se explican los tratamientos
y pruebas de detección de enfermedades aplicadas al material vegetativo.

El solicitante permiso de importación expedido por la autoridad competente del lugar de destino del
material o la respectiva comunicación escrita en la que se informa la ausencia de requerimiento de
este para el ingreso del material vegetal al país de destino.
2. OBTENCIÓN DE PLANTAS LIBRES DE PATÓGENOS

CULTIVO DE MERISTEMOS

El meristemo es un pequeño tejido (0.2-0.3 mm)

localizado en la parte apical de la yema.

La técnica consiste en aislar asépticamente la región meristemática de la yema vegetativa apical o

axilar, juntamente con 1-2 de los primordios foliares más jóvenes, e implantarla en un medio de
cultivo estéril.

Las características morfológicas (ausencia de tejido vascular y conexiones plasmodesmáticas

pequeñas), unida a la activa multiplicación celular que allí ocurre, puede explicar la baja
concentración o la ausencia de virus en ese tejido (Wu et al., 1960).
ELIMINACIÓN DE PATÓGENOS
TERMOTERAPIA

40oC/35oC

ESTACAS

TERMOTERAPIA
INDEXACIÓN
37oC/35oC

MATERIAL IN VITRO 12 días

Fotoperiodo 12 horas
Temperatura 26-28
EMBRI
Embryo
ÓN
Medios 4E – 17N
RESCATE DE Intensidad lumínica 1000 lux

EMBRIONES

SEMILLAS
CASO: Papa

Representación esquemática del proceso de erradicación de virus que se realiza con

fines de producción de semilla el Centro Internacional de la Papa –CIP.
Fuente: Panta & Golmirzaier- CIP
3. MICROPROPAGACIÓN Y PRODUCCIÓN MASIVA

FASES O ETAPAS

Fase 0. FASE INICIAL

Fase 1. FASE ESTABLECIMIENTO in vitro

Fase 2. FASE DE MUTIPLICACIÓN

Fase 3. FASE DE ENRAIZAMIENTO

Fase 4. FASE DE ACLIMATIZACIÓN

FASE 0. FASE INICIAL O PREPARATIVA

Qué?
Fuente de material
Pre-tratamiento a plantas madre
Aspectos cuarentenarios
J.F. Martínez

Manuales y guías de procedimientos

Normas
Artículos científicos
Cómo?

Instalaciones, equipos, insumos ….. Donde?

FASE 1. FASE ESTABLECIMIENTO IN VITRO
CULTIVO AXÉNICO Y VIABLE
Cultivo de meristemos en yuca:

• Equipamiento: elementos generales para cultivo in vitro, estereoscópio e instrumental de

disección.

• Etapas del cultivo:

- Elección del explante: esencialmente meristemos apicales

- Domo meristemático desnudo o acompañado por 2 ó 3 pares de primordios foliares.

- Tamaño aproximado 0,5 mm.

- Esterilización de la yema o porción apical conteniendo al meristemo propiamente dicho.

- Disección del meristemo bajo estereoscopio, eliminación de las primeras hojas.

- Transferencia del explante al medio de cultivo semi-sólido.

A partir de estacas:

• Tomar estacas de 15-20 cm conteniendo yemas vigorosas.

• Desinfestar las estacas superficialmente sumergiéndolas por cinco minutos en una solución de
insecticida (p. e. Dimetoato al 0.3%), posteriormente dejar secar por 1-2 horas bajo la sombra.
• Sembrar las estacas tratadas en potes que contengan sustrato esterilizado (suelo: arena 1:2), regarlas
con agua.

Tratamiento de termoterapia

Colocar los potes con las estacas a crecer en la cámara de termoterapia a una temperatura de 40 0C
día/35 0C noche, 3000-4000 lux, humedad relativa alta.

Mantener los potes con las estacas en éste ambiente por 3 semanas, al cabo de este tiempo las yemas han
brotado y puede iniciarse el cultivo de meristemos; se pueden cortar 2-3 yemas por estacas.

Las yemas que se cortan deben ser las más vigorosas y las que han tenido una mayor elongación. Es
importante desinfectar la cuchilla, con un detergente, cada vez que se cortan yemas de una planta a otra.
Preparación del tejido estéril

• Remover las yemas terminales de las estacas y colocarlas en un vaso precipitado con una malla que
facilita el manejo de éstas en el laboratorio.
• En el laboratorio bajo una cámara de flujo laminar se desinfectan las yemas recolectadas siguiendo
el siguiente protocolo:

a) Sumergir rápidamente las yemas en 70% alcohol y enjuagar con agua estéril.
b) Pasar a hipoclorito de sodio al 0.5% por 5 minutos (blanqueador comercial, con 5.25% de
ingrediente activo de hipoclorito de sodio).
c) Hacer 3 enjuagues con agua bidestilada estéril.

Aislamiento y siembra de los meristemos

Esta etapa del proceso consiste en el aislamiento aséptico del meristemo (estructura de 0.3-0.5 mm,
estructura que comprende la región meristemática de la yema vegetativa, acompañada de 1 o 2 de sus
primordios más jóvenes) y su siembra en un medio de cultivo nutritivo y estéril (4E).
FASE 2. FASE MULTIPLICACIÓN
LOGRAR LA PROLIFERACIÓN

La micropropagación
constituye la principal
.a. b. c.
aplicación comercial
del cultivo de tejidos
vegetales

.d. e. .f.
ALCANCES DE LA MICROPROPAGACIÓN VEGETAL

• Propagación vegetativa rápida y a gran escala

• Uniformidad seleccionada del material clonado

• Multiplicación de plantas recalcitrantes a las técnicas convencionales

• Reducción en el tiempo de multiplicación y en el espacio requerido para tal fin

• Mayor control sobre la sanidad del material propagado

• Introducción rápida de nuevos cultivares

• Conservación de germoplasma

• Facilidades para el intercambio internacional de material vegetal

La micropropagación
vegetal requiere • Laboratorio
disponer de una
- Área de preparación de medios
infraestructura mínima
- Área de lavado y esterilización
especializada
- Cuarto estéril
y de condiciones
- Cámara de cultivo
controladas
- Área de aclimatización
de cultivo
• Material vegetal
- Plantas madres seleccionadas (pre-acondicionamiento)
- Explantes (elección, disección, desinfección, etc.).

• Condiciones de cultivo

- Asepsia
- Recipientes
- Temperatura
- Luz y fotoperíodo
FASE 2. FASE MULTIPLICACIÓN EN YUCA
Acelerar in vitro del crecimiento natural de yemas existentes.

• Explantes (ápices y/o yemas axilares, tamaño variable) provenientes de plantas in vitro son
sembrados en medio de propagación 4E.

Las condiciones de incubación o crecimiento de material in vitro de yuca son (Roca et al., 1991):
Estabilidad
Temperatura: 27-28 0C
genética/
Iluminación: 18.5 µmol.m-2.s-1
Variación
Fotoperiodo: 12 horas
Calidad de luz: Lámparas fluorescentes, tipo luz día
somaclonal
Humedad relativa: 50-70%

• Transcurridas de 4 a 6 semanas las plántulas pueden nuevamente multiplicadas.

MEDIO DE PROPAGACIÓN (4E): MS, 2% sacarosa, 0.04 mg/L BAP, 0.05 mg/L GA3, 0.02 mg./L
ANA, 1 mg/L Thiamina-HCl, 100 mg/L m-Inositol, pH 5.7-5.8, Agar 0.7%
Roca, W.M., Nolt, B., Mafla, G., Roa, J.C., & Reyes, R. 1991. Eliminación de virus y propagación de clones en la yuca (Manihot esculenta Crantz) In: 'Roca, W.M., Mroginski, L.A., Fundamentos y Aplicaciones', pp. 403-421.
 Tasa de multiplicación in vitro de yuca
Duración del subcultivo (meses)
Características 2 4 6 8 10 12
Tasa de multiplicación 3 3 3 3 3 3
Número estimado de
15 45 135 405 1215 3645
plantas (a partir de 5 tubos)

La tasa de multiplicación (t.m.) se calcula con base en el número de brotes o vástagos obtenidos
a partir de un explante inicial, entre una resiembra y otra sucesiva.
Cuáles son las principales limitantes en esta etapa?

RECALCITRANCIA
INCONSISTENCIA EN LAS TASAS DE CRECIMIENTO
HIPERHIDRICIDAD (VITRIFICACIÓN)
VARIACIÓN SOMACLONAL
BACTERIAS LATENTES

BACTERIA HONGOS
FENOLIZACIÓN ACLIMATIZACIÓN
CONTAMINACIÓN
 Cómo puede
Principales causas de
contaminación CONTAMINACIÓN EXOGENA solucionarse?
fúngica • Esterilización superficial inadecuada Adecuada desinfección
• Manipulación (mal manejo) Buenas prácticas de
• Introducción de esporas por ácaros manejo

• Problemas de infraestructura
• Detección por inspección visual

Principales causas de Antibióticos

contaminación
CONTAMINACIÓN ENDOGENA
bacteriana • Principal agente contaminante Desinfección

• Síntomas sobre el explante o en el medio de Reintroducción de

germoplasma
cultivo
• Pueden aparecer luego de varios subcultivos
• Síntomas no visibles, plantas que no sobreviven
la aclimatación.
Oxidación Amarronamiento del explante y/o medio
Inhibición del crecimiento y muerte del explante

Causas:
• Acción de enzimas oxidasas que son liberadas en
respuesta a heridas
• Fenoles se oxidan a quinonas
Cómo puede solucionarse?

• Agua estéril 2-3 horas previo a la introducción

• Empleo de antioxidantes en el último enjuague o en el medio de
cultivo (ácido cítrico, ascórbico)
• Transferencias frecuentes (cada dos o tres días) a medio fresco
• Carbón activado
• Sistema de sellado de contenedores
FASE 3. FASE ENRAIZAMIENTO
ELONGACIÓN E INDUCCIÓN DE RAÍCES Y SU DESARROLLO
• Los ápices (3 a 4 cm) provenientes de plantas in vitro son sembrados en medio de enraizamiento
17N, las yemas axilares son sembradas en medio de propagación 4E (continuación Fase 2).

Las condiciones de incubación o crecimiento de material in vitro de yuca son (Roca et al., 1991):

Temperatura: 27-28 0C
Iluminación: 18.5 µmol.m-2.s-1
Fotoperiodo: 12 horas
Calidad de luz: Lámparas fluorescentes, tipo luz día
Humedad relativa: 50-70%

• Transcurridas de 4 a 6 semanas las plántulas pueden ser llevadas para su establecimiento en

invernadero (Fase 4).

MEDIO DE ENRAIZAMIENTO (17N): 1/3 MS, 2% sacarosa, 0.01 mg/L ANA, 0.01 mg/L GA3, 25
mg/l fertilizante 10-52-10, Thiamina-HCl, 100 mg/L m-Inositol, pH 5.7-5.8, Agar 0.6%
FASE 4. FASE ACLIMATIZACIÓN
ESTABLECIMIENTO BAJO CONDICIONES EX VITRO

Procedimientos…
 Porcentaje de
pérdida durante el
establecimiento
<5%
REQUERIMIENTO DE EQUIPOS
ÁREA EQUIPOS PROPÓSITO

Máquina para el lavado de vidriería Lavado y termodesinfección de material de

vidrio
LAVADO Autoclave pequeña Esterilizar herramientas
Vitrinas para el almacenamiento Almacenar vidriería
Horno de secado y esterilización Esterilización de material seco

Neveras Almacenar medios de cultivo

Autoclave Esterilizar medios de cultivo
NEVERAS Y AUTOCLAVE
Destilador Proporcionar agua bidestilada
Incubadoras Condiciones especiales

Dispensador Llenado de tubos con el medio

Planchas eléctricas con agitadores Calentar y agitar medios (agar)
magnéticos
PREPARACIÓN DE MEDIOS DE
pH metro Ajustar pH del medio de cultivo
CULTIVO
Balanza analítica Pesar diferentes componentes del medio
Computador Labores de gestión –base de datos
Sistema purificación aire Mejorar calidad del aíre
 ÁREA EQUIPOS PROPÓSITO
Cámaras de flujo laminar Proceso de subcultivo
Bactoincineradores Esterilización de herramientas
SUBCULTIVO Deshumificador Controlar humedad relativa
Unidad de aire acondicionado Refrigerar
Sistema purificación del aire Mejorar calidad de aire

Estantería Ubicar material vegetal

Deshumificador Controlar humedad relativa
Higrotermógrafo Registrar temperatura y humedad
CUARTO DE
Extintor, censor de humo y temperatura Elementos de seguridad
CRECIMIENTO/CONSERVACIÓN
Controlador fotoperiodo
Unidad de aire acondicionado Regular encendido y apagado de luces
Sistema purificación del aire Refrigerar
Mejorar calidad del aíre

CRIOCONSERVACIÓN Suministro de NL, tanques de almacenamiento y sistemas de seguridad

INFRAESTRUCTURA EQUIPOS
REQUERIMIENTO DE PERSONAL
METAS ESTABLECIDAS PARA
EL ÁREA O LABORATORIO

RECUR$O$
DISPONIBLES

[Link]
REQUERIMIENTO DE PERSONAL
SUPERVISAR EL PROCESO DE PROPAGACION DEL MATERIAL VEGETAL IN VITRO Y EX VITRO POR LO CUAL VERIFICARA LA
CALIDAD DEL MAERIAL PROPAGADO Y ADMINISTRARA DE FORMA EFICIENTE LOS RECURSOS.
TAMBIEN PODRA REPRODUCIR Y OBTENER MATERIAL VEGETAL APLICANDO TECNICAS DE CULTIVO DE TEJIDOS
VEGETALES IN VITRO Y PROCESOS DE PROPAGACION ASEXUAL Y SEXUAL DE ACUERDO A LOS PROCEDIMIENTOS
ESTABLECIDOS PARA LA ESPECIE.
EL EGRESADO EJECUTARA TODAS SUS FUNCIONES CON RESPONSABILIDAD DANDO CUMPLIMIENTO A LA
NORMATIVIDAD Y APLICANDO PROTOCOLOS TECNICOS DE SEGURIDAD Y SALUD EN EL TRABAJO.

Perfil del personal:

Contenido
Naturaleza
Alcance

Competencias
REQUISITOS:

El laboratorio debe asegurarse que:

La infraestructura y el personal requerido para la realización de las actividades. Este es un punto crítico!
La calidad de los medios de cultivo y reactivos sea apropiada para los ensayos realizados.
Contengan todos los elementos requeridos por las plantas para su normal crecimiento y desarrollo.

¿Cómo se asegura su calidad?

La descripción de los procedimientos y establecimiento de instructivos de trabajo
Capacitación y entrenamiento del personal a cargo
Mantenimiento preventivo y validación de los equipos requeridos para la preparación
¡Gracias!