CÓDIGO: SGC.DI.

505
GUÍA PARA LAS PRÁCTICAS DE LABORATORIO, VERSIÓN: 2.0
FECHA ÚLTIMA
TALLER O CAMPO REVISIÓN: 12/04/17
1 Número de página

CIENCIAS DE LA VIDA Y
DEPARTAMENTO: CARRERA: AGROPECUARIA
LA AGRIGULTURA
PERíODO
ASIGNATURA: Biología Celular 201950 NIVEL: 1
LECTIVO:
DOCENTE: Carlos Noceda NRC: 5025, 5045 PRÁCTICA N°: 14
LABORATORIO DONDE SE DESARROLLARÁ LA Microbiología-IASA
PRÁCTICA
TEMA DE LA IDENTIFICACIÓN DE LAS FASES DE LA MITOSIS EN RAÍCES DE CEBOLLAS (HORTALIZA) MEDIANTE
PRÁCTICA: OBSERVACIÓN MICROSCÓPICA.
INTRODUCCIÓN:
Una de las características relevantes de la vida, es la capacidad de los organismos vivos de reproducirse, al igual que los
procariotas, los eucariotas están condicionados a crecer y reproducirse generando como resultado células hijas idénticas, sin
embargo, la diversidad genética demanda procesos complejos de reproducción que incluyen la recombinación o mezcla de alelos
en los cromosomas (unidades genéticas conformadas por largas moléculas de ADN condensadas en proteínas) y la combinación
de juegos de cromosomas para incrementar la diversidad entre los individuos en cada especie (Reece, Taylor, Simon, Dickey,
2012; Miller, Levine, 2010; Willey, Sherwood, Woolverton, 2008; Alberts, 2008).
La división celular mitótica se caracteriza entonces por generar células hijas idénticas a la célula progenitora, mientras la meiosis
consiste en la generación de gametos, células con la mitad de número de cromosomas de la especie, distinguibles por género
masculino o femenino en los organismos pluricelulares y que posteriormente se fusionarán dando lugar a una nueva célula
completa (Mader, 2013; Reece et al., 2012; Miller, Levine, 2010, Willey, Sherwood, Woolverton, 2008).
Las fases de la mitosis son profase, prometafase, metafase, anafase y telofase (Mader, 2013; Reece et al., 2012).
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Tomado de Reece et al., 2012.

La presente práctica tiene como objetivo principal: Identificar las fases de la mitosis en raíces de cebollas (hortaliza) mediante
observación microscópica.
OBJETIVOS:
1. Reconocer adecuadamente las fases de la mitosis y meiosis, según información investigada.
2. Emplear reactivos y materiales de laboratorio para el montaje y observación de las muestras, respetando normas de
bioseguridad y el medio ambiente.
3. Adquirir destrezas al realizar correctamente el montaje de la muestra seleccionada.
4. Identificar y diferenciar mediante observación microscópica las fases de la mitosis comparándolas con una galería de imágenes
desde bibliografía confiable.
5. Identificar los cambios morfológicos en cada una de las fases de la mitosis en base a bibliografía científica.
6. Distinguir correctamente los cromosomas y su disposición dentro de cada fase de la mitosis, según información investigada.
7. Analizar e interpretar con criterio los resultados obtenidos en las observaciones.
8. Compartir los resultados entre los compañeros de la clase y los demás paralelos.
9. Mantener correctamente el cuaderno de laboratorio con investigación científica actualizada de la práctica y sus resultados.
10. Realizar apropiadamente registros fotográficos y/o videos de resultados en la red social para la asignatura, cuaderno de
laboratorio y aula virtual.
MATERIALES:
REACTIVOS: Ácido clorhídrico al 10%, ácido acético al 45%,
Orceína acética clorhídrica (A), Orceína acética B, Solución INSUMOS: Placas portaobjetos, cubre objetos, bisturís o
fijadora de Carnoy, Acetocarmín, aceite de inmersión, alcohol tijeras, pinzas de metal, pinzas de madera, picetas, vidrios
potable para mecheros de alcohol, agua destilada, alcohol reloj, mecheros de alcohol, pipetas desechables o goteros,
antiséptico. pinzas de madera, papel especial para limpieza de
MATERIALES DE PROTECCIÓN PERSONAL: Mandil, guantes, microscopios, torundas de algodón, papel toalla..
mascarillas.
EQUIPOS: Microscopios ópticos de campo claro (lentes objetivos 4, 10 y 40x).
MUESTRA: Muestras de raíces.
ORGANISMOS: Raíces de vegetales.
INSTRUCCIONES:
 Revisar los libros e información subidos al aula virtual.
 Obtener y resumir información en el cuaderno de investigación sobre los temas planificados: Mitosis y meiosis. Al mismo tiempo
contestar en redacción el siguiente cuestionario: ¿En qué consiste el proceso de la mitosis y meiosis?, ¿Cuáles son las fases de la
mitosis y meiosis?, ¿Cuál o cuáles son las diferencias entre mitosis y meiosis?, ¿Cuál es la función e importancia de la mitosis y
meiosis?, ¿En qué células ocurre la mitosis y/o meiosis?, ¿Cuántas células y divisiones se obtienen como resultado de la mitosis y
meiosis?, ¿Qué son los cromosomas y qué función tienen?, ¿Qué son las células somáticas?, ¿Para qué sirven cada uno de los
reactivos utilizados en la preparación de muestras?, ¿Por qué se eligen los ápices de las raíces para observar las fases de la
mitosis?, ¿En qué consiste la meiosis?.
 Graficar y/o pegar las fases de la mitosis y meiosis.
 Pegar o transcribir los objetivos y procedimiento de esta guía de laboratorio.
 Realizar la primera actividad para obtener la muestra de raíces de cebolla.
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 Depositar mochilas u otro en los lugares destinados a la entrada de los laboratorios de docencia.
 Portar mandil manga larga con puño y cerrado, guantes, zapatos cerrados, pantalón, cabello recogido, cuaderno y esferos.
 Ingresar al laboratorio con tiempo antes de la hora asignada, ya que, la clase empieza puntualmente.
 Un estudiante según planificación realiza una exposición de 10 minutos, para dar inicio a la introducción, discusión y análisis del
tema.
 Verificar que la bitácora correspondiente a cada microscopio esté junto con el equipo o en su defecto tomarla de las repisas
destinadas para estas.
ACTIVIDADES POR DESARROLLAR:
Preparación de cebolla de una semana antes
1. Colocar una cebolla roja (paiteña) o perla en un recipiente con agua de tal forma que solo las raíces tengan contacto con el
agua.
2. Mantener la cebolla en el recipiente de una a dos semana (s) hasta el día de la práctica de laboratorio.
3. Llevar al laboratorio la cebolla de experimentación.
Preparación de muestras de raíces
Cortar con bisturí o tijera, aproximadamente 0.5 a 1 cm de los ápices (puntas) de las raíces de la cebolla.
Tinción de muestras
Procedimiento 1 (Ácido clorhídrico, Orceína B):
1. Colocar 2 gotas de una solución de ácido clorhídrico al 10% en un vidrio reloj y calentar hasta 40ºC aproximadamente, tomando
el vidrio reloj con una pinza de madera. Pueden obtener la temperatura deseada, al pasar el vidrio reloj de 1 a 2 veces en la llama
del mechero y este ser tolerable al tener contacto con el dorso de la mano.
2. Depositar los ápices de raíces en el vidrio reloj conteniendo las dos gotas de ácido clorhídrico al 10% (caliente), durante 8
minutos. Cuando sea necesario pasar nuevamente el vidrio reloj por la llama del mechero con cuidado de no sobrepasar la
temperatura, ya que el vidrio se puede romper.
3. Con una pinza retirar los ápices del vidrio reloj que los contiene y trasladarlos a otro vidrio reloj conteniendo una gota del
colorante aceto-orceína (Orceína B), durante 4 minutos.
4. Depositar los ápices en una placa portaobjetos, agregar 1 gota de ácido acético al 45% y cubrir con una placa cubreobjetos.
5. Con el dedo pulgar, hacer una ligera pero firme presión sobre la placa cubre objetos, para obtener una extensión de la muestra,
quedando prácticamente transparente. Este es un paso importante, donde se debe asegurar que la muestra quedó totalmente
aplanada y transparente de esto dependerá gran parte del éxito en la observación.
6. Observar en el microscopio con los lentes objetivos 4, 10 y 40X e identificar las fases de la mitosis.
Procedimiento 2 (Orceína A y B):
1. Depositar los ápices de las raíces en un vidrio reloj conteniendo 2 a 3 gotas de Orceína acética clorhídrica (Orceína A), durante
8 minutos.
2. Calentar suavemente el vidrio reloj a la llama del mechero de alcohol, con la ayuda de una pinza de madera, evitando la
ebullición, hasta que emita vapores tenues. Dejar enfriar y repetir el proceso. Puede lograr esto, pasando el vidrio reloj de 2 a 3
veces en la llama del mechero, teniendo cuidado de no exceder la temperatura porque el vidrio se puede romper.
3. Depositar con la ayuda de una pinza los ápices en una placa portaobjetos, verter 1 gota de Orceína acética (Orceína B) y cubrir
con cubreobjetos.
4. Proceder de la misma forma que en los pasos 5 y 6 del procedimiento 1.
Procedimiento 3 (Carnoy y Acetocarmín):
4. Depositar los ápices de raíces en un vidrio reloj conteniendo una a dos gota(s) de solución fijadora de Carnoy (3 metanol: 1
ácido acético), durante 18 minutos.
5. Trasladar con la ayuda de una pinza, los ápices a otro vidrio reloj que contenga ácido clorhídrico al 10%, durante 8 minutos.
6. Colocar los ápices en un vidrio reloj que contenga agua para lavar, por 5 minutos.
7. Depositar los ápices en un vidrio reloj conteniendo Acetocarmín, durante 18 minutos.
8. Con una pinza, depositar los ápices en una placa portaobjetos y cubrir con una placa cubreobjetos.
9. Proceder de la misma forma que en los pasos 5 y 6 del procedimiento 1.
RESULTADOS OBTENIDOS:
 Observación e identificación microscópica de las fases de la mitosis y cromosomas.
 Gráficos o fotos con identificación microscópica, especificando el lente objetivo del microscopio.
CONCLUSIONES:
Al final de la práctica el estudiante:
 Evalúa la información investigada acerca de mitosis y meiosis en base a bibliografía actual y confiable.
 Reconoce las fases de la mitosis y meiosis.
 Adquiere destrezas en la preparación de montajes de muestras y uso del microscopio, respetando normas de bioseguridad.
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 Emplea correctamente, reactivos, colorantes y materiales de laboratorio para realizar montaje y observación de muestras,
respetando normas de bioseguridad y el medio ambiente.
 Identifica y diferencia las fases de la mitosis en raíces de cebolla, comparándolas con bibliografía confiable.
 Identifica cambios morfológicos en cada una de las fases de la mitosis, con fundamento científico.
 Identifica adecuadamente la disposición de los cromosomas en cada fase de la mitosis, según bibliografía confiable.
 Comparte los resultados obtenidos entre todos los miembros de la clase, incentivando el compañerismo, colaboración y
solidaridad.
 Realiza registros de los resultados, tomando fotos que serán compartidos en red social entre todos los estudiantes de la
asignatura.
 Respeta plazos de tareas programadas al cumplir con un control de lectura, investigación en el cuaderno e informe de
laboratorio.
 Asiste puntualmente a clases.
 Realiza una exposición de los temas a tratar, respetando la propiedad intelectual, usando tecnología, comunicación oral
adecuada, bibliografía actual y confiable.
 Maneja adecuadamente el cuaderno de laboratorio con la investigación programada y los resultados obtenidos en la práctica.
 Desarrolla sus actividades dentro de la clase con honestidad, respeto, disciplina y responsabilidad.
 Planifica la siguiente clase e investigación: Hogos: Levaduras: gemación, fermentación. Mohos: esporulación, usos en la
industria, setas.
RECOMENDACIONES:
 Anotar cada uno de los detalles del proceso de la práctica y resultados obtenidos.
 Graficar los resultados en su cuaderno, señalando: identificación, muestra, estructuras, lente objetivo, detalles u otros.
 Tomar fotografías desde el ocular del microscopio para subirlas por equipo de trabajo en el grupo Facebook.
 Portar siempre el mandil cerrado.
 Usar guantes para teñir las muestras.
 Sacarse los guantes si desea abrir la puerta y/o manipular el celular.
 Usar correctamente los recipientes de desecho común e infeccioso: cortopunzantes (portaobjetos rotos, hisopos y/o palillos).
 Lavar el material utilizado detergente.
 Limpiar los mesones con savlon diluido.
 Lavarse las manos con jabón.
 Asegurarse de que todos los materiales y equipos estén limpios y en completo orden para poder salir.
 Si son paralelos de la tarde colocar las bitácoras en la repisa respectiva, depositar todos materiales en la canasta destinada,
cerrar las ventanas.
BIBLIOGRAFÍA:
 Alberts, B., Johnson, A., Lewis, J., Raff, M., Roberts, K., Walter, P. 2008. Molecular Biology of The cell. Garland Science. Fifth
edition. U. S. A.
 Cortés, J. 2005. Ensayos microbiológicos: Preparación de colorantes. España.
 De Robertis, E., Hib, J. 2004. Fundamentos de Biología celular y molecular de De Robertis. Editorial El Ateneo. Cuarta edición.
Argentina.
 González, M., Caballero, M., Olivares, E., Santisteban, A., Serrano, Ma. P. 2003. Prácticas de laboratorio y de aula: biología,
ecología, genética, geología. Narcea ediciones. España. Pp: 135.
 Lodish, H., Berk, A., Matsudaira, P., Kaiser, C., Krieger, M., Scott, M., Zipursky, S. L., Darnell, J. 2005. Biología celular y
molecular. Editorial médica Panamericana. Quinta edición. U. S. A. Pp. 838 – 841.
 Mader, S., 2013. Laboratory Manual to accompany Biology. Mc Graw Hill. Eleventh edition. USA.
 Madigan, M., Martinko, J., Parker. 2004. Brock Biología de los microorganismos. Pearson Prentice Hall. Décima edición, España.
 Miller, K., Levine, J. 2010. Biología. Pearson. Edición en español. USA.
 Reece, J., Taylor, M., Simon, E., Dickey, J. 2012. Campbell Biology. Concepts & Connections. Pearson. Seventh edition. USA.
 Salomon, E. P., Berg, L., Martin, D., 2008. Biología de Villée. Editorial interamericana Mc. Graw Hill. Octava edición. España.
 Universidad de Cartagena. Laboratorio No. 9. División celular: Mitosis. Colombia. Pp: 51 a 53.
 Universidad Nacional Autónoma de México. 2003. Juego de prácticas de laboratorio de biología. México. Pp: 13 y 14.
 Willey, J., Sherwood, L., Woolverton, C. 2008. Microbiología de Prescott, Harley y Klein. Mc. Graw Hill, Séptima edición. España.
Esta guía de laboratorio se basa fundamentalmente en los materiales amablemente cedidos por la Prof. Karina Ponce, docente de
la UFA-ESPE, a la que agradecemos enormemente su inestimable ayuda y colaboración. AUTORÍA DE GUÍAS ORIGINALES
(Diciembre 2017): Lourdes Karina Ponce Loaiza y María Fernanda Loayza Villa (Docentes de la Universidad de las Fuerzas
Armadas – ESPE.
FIRMAS
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Nombre: Carlos Noceda Nombre: Jakeline Torres Nombre: Carlos Chiriboga

COORDINADOR DE ÁREA DE COORDINADOR/JEFE DE LABORATORIO
DOCENTE CONOCIMIENTO

ANEXO
Preparación de colorantes:

Carmín acético
Composición:
• Carmín -----------------------4-5 g
• Ácido acético---------------45 mL
• Agua destilada--------------55 mL

Se disuelve el carmín en ácido acético al 45% y la disolución se calienta hasta ebullición durante una
hora, teniendo la precaución de refrigerar continuamente los vapores para no variar la concentración; esto
se consigue calentando la mezcla en un Erlenmeyer cerrado mediante un tapón de goma perforado a
través del cual se pasa un serpentín de refrigeración.

Orceína A:
• Orceína................................................................................................2 g
• Ácido acético.....................................................................................45,8 mL
• Ácido clorhídrico 1 mol/L....................................................................8,3 mL
• Agua..................................................................................................45,8 mL

Orceína B:
• Orceína................................................................................................2 g
• Ácido acético.....................................................................................55 mL
• Agua..................................................................................................55 mL
Se disuelve la orceína en caliente a 60ºC en ácido acético, tomando las mismas precauciones que en el
proceso de preparación del carmín, para evitar la evaporación del acético. Una vez enfriada la disolución,
añadir el agua.

Rotular cada una de las fases de la mitosis:

Tomado de Reece et al., 2012.