PRÁCTICA Nª 1
RECONOCIMIENTO, PREPARACIÓN Y ESTERILIZACIÓN DEL
MATERIAL PARA MICROBIOLOGIA
Nombre del estudiante: Chilo Coricaza Paulo César
Correo electrónico: pchilo@[Link]
I. OBJETIVOS:
Dar a conocer al estudiante el material de uso frecuente y las técnicas y equipos
de esterilización más empleados, en un laboratorio de microbiología general, así
como adquirir buenas costumbres en el manejo, preparación y esterilización de
dichos materiales,
II. REVISION BIBLIOGRAFICA
El uso de microorganismos exige cuidados especiales en el laboratorio debido a
la facilidad con que ellos pueden dispersarse y difundirse, to cual puede provocar
la contaminación de los medios de trabajo con la consiguiente alteración del
comportamiento de los microorganismos benéficos, e incluso puede provocar la
infección del operador; es por tanto necesario conocer y practicar rigurosamente
métodos adecuados para la preparación y esterilización de los materiales en un
laboratorio de microbiología.
III. MATERIALES Y EQUIPOS:
Equipos.
• Autoclave.
• Horno Pasteur.
• Incubadora para cultivos.
• Refrigerador.
• Baño maría.
• Centrífuga.
• Microscopio, Esteroscopio
• pH metro
• Balanza analítica.
• Lámparas de UV
• Jarras para anaerobios
Materiales.
• Tubos de ensayo,
• Placas de Petry.
• Matraces Erlenmeyer.
• Pipetas, probetas, embudos.
• Vasos de precipitado.
• Láminas portaobjetos y cubreobjetos.
• Luna de reloj.
• Mortero.
• Gradillas, Canastillas.
• Mecheros de Bunsen.
• Termómetro.
• Algodón, Gaza.
• Asas de Kolle.
• Espátula de Drigalsky
IV. PROCESOS DE ESTERILIZACIÓN.
Consiste en preparar los materiales y medios de cultivo, y posteriormente
eliminar totalmente los microorganismos presentes, para dejarlos en condiciones
óptimas de uso.
Existen muchas formas de esterilización, entre ellas tenemos:
Esterilización por calor seco:
• Flameo o Llama Directa: consiste en poner a los materiales a esterilizar (asas,
y agujas de kolle, espátulas, pinzas tijeras, etc.) al contacto de la llamade un
mechero para eliminar rápidamente los microorganismos del entorno.
• Aire Caliente: Para ello se utiliza una estufa bacteriológica u horno Pasteur;
en ella se esteriliza el material a temperaturas de 170°C-180°C por 2 horas.
Esterilización por calor Húmedo:
• Por Ebullición: Se coloca el material a esterilizar en agua hirviente (100°C)
por 15 a 3o minutos.
• Vapor de Agua sin Presión (Tindalización): Se coloca el material a
esterilizar a la acción del vapor de agua y a temperaturas no mayor de 100°C:
para ello se puede hacer uso del autoclave con la espita abierta.
• Vapor de Agua con Presión:
Esterilización por Filtración:
Se usan membranas y filtros diversos y son útiles para líquidos termolábiles.
Esterilización por Radiaciones:
• Radiaciones Ionizantes: Rayos Gamma y Rayos Catódicos.
• Radiaciones No Ionizantes: Luz Ultravioleta.
Esterilización por Agentes Esterilizantes Químicos:
Se pueden usar ácidos o bases en soluciones concentradas, .así como sales,
halógenos y alcohol.
V. METODOLOGÍA.
Cada estudiante preparará el siguiente material de vidrio:
• Tubos de ensayo:
1. Colocar a cada tubo una tapa plástica o de metal o una torunda de algodón
siguiendo las instrucciones dadas por el profesor.
2. Colocar los tubos preparados en una cesta destinada para tal fin.
3. Cubrir la cesta con papel Craft y sujetar el mismo con pabilo.
• Balón, Fiola o Matraces Erlenmeyer.
1. Colocar un tapón o una torunda de algodón siguiendo las instrucciones dadas
por el profesor.
2. Cubrir el algodón con una porción de papel Craft y sujetar el mismo con
pabilo.
NOTA:
Cuando se utiliza algodón para cubrir tubos, fiólas o balones se debe tomar la
precaución de que éste pueda ser manipulado con facilidad, para ello no debe
quedar ni muy apretado ni muy flojo y debe alcanzar aproximadamente 3 cm.
Dentro del material de vidrio.
• Pipetas:
1. Colocar un pequeño trozo de algodón en el extremo superior de la pipeta
2. Envolver completamente con papel Craft, siguiendo las instrucciones dadas
por el profesor.
• Placa de Petri:
a. Envolver con papel Craft siguiendo las indicaciones del profesor.
NOTA:
Las pipetas, así como las placas de Petri, se pueden envolver individualmente
de la manera indicada, o se pueden colocar en grupos, en recipientes metálicos
especialmente diseñados para tal fin, denominados pIpeteros y plaqueros
respectivamente.
Una vez preparado todo el material de vidrio:
Esterilizar siguiendo las instrucciones señaladas:
• Pipetas, Placas Petri, Matraces, Tubos, Fiolas y rascos: Calor seco a 180°C
por 20 minutos.
• Bujías filtrantes: Se someten a ebullición' en hervidores metálicos o bien se
desinfectan por medios químicos.
• Medios de cultivo: Se esterilizan con calor húmedo a 120°C por 20 a 30
minutos y 15 libras de presión.
Una vez que el material ha sido sometido al proceso de esterilización se pueden
realizar ensayos muy sencillos para verificar su esterilidad. Generalmente estos
ensayos consisten en colocar una muestra del material esterilizado en contacto
con un medio de cultivo estéril, el cual, después de ser incubado a 35°C±2°C x
24 - 48 horas, se observa para determinar si hay o no evidencia de crecimiento
microbiano.
VI. RESULTADOS Y DISCUSIONES
Dibujar los equipos y materiales observados en su laboratorio de microbiología
y anotar otras observaciones.
Materiales
VII. CUESTIONARIO:
1) Describa los usos y ventajas de las láminas de
Petrifilm.
Son usados para el recuento de la
población total existente de bacterias aerobias en
productos o superficies, entre los cuales están.
o Recuento de aerobios.
o Recuento de coliformes.
o Recuento de E. coli
o Recuento de enterobacterias
o Recuento de alta sensibilidad
de coliformes
o Recuento rápido de
coliformes
o Recuento de Staphylococcus
aureus
o Recuento de mohos y levaduras.
En cuanto a las ventajas, pues son varias como el que no haya
necesidad de preparar un medio de cultivo o de homogenizar,
tampoco existe la necesidad de esterilizar ni de fundir los medios de
cultivo. En las láminas de Petrifilm solo crecen aquellos
microorganismos que se van a evaluar, también ocupan un menor
espacio.
2) Mencione las sustancias químicas usadas en un laboratorio
demicrobiología, con fines de esterilización.
Óxido de etileno
Plasma de Peróxido
Pastillas de formol
Soluciones químicas
oGlutaraldehído al 2%
oFormaldehído al 38%
oPeróxido de hidrógeno al 6%
oÁcido paracético al 30%
3) Dibuje y explique el funcionamiento de las pipetas automáticas de
usomicrobiológico.
Una pipeta automática es un instrumento de laboratorio que se usa para
medir pequeños volúmenes y transvasarlos de un recipiente a otro.
Las pipetas automáticas se caracterizan por medir los líquidos con una gran
exactitud, que se consigue girando una rueda integrada en la pipeta, y nos
marca el volumen en una pantalla digital. Es importante que se hagan
calibraciones de manera regular para asegurarnos que la pipeta mantiene la
exactitud. Lo habitual es colocar una punta de pipeta distinta cada vez que
se usa.
VIII. CONCLUSIONES
Para concluir un laboratorio de microbiología cuenta con diferentes
instrumentos y materiales que serán usados por los estudiantes, así
también el docente participará enseñando técnicas, como los métodos de
esterilización, y la forma de usar los instrumentos; además se busca que
durante el paso de las clases los alumnos adquieran hábitos de trabajo, así
como que tengan en cuenta las precauciones a tener en cuenta.
IX. RECOMENDACIONES
XI. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
