“AÑO DEL BICENTENARIO DEL PERÚ: 200 AÑOS DE

INDEPENDENCIA”
“MADRE DE DIOS CAPITAL DE LA BIODIVERSIDAD
DEL PERÚ”
TEMA
GRUPO 5:
Análisis Instrumental Básico:
1. Cromatografía de gases (GC)
2. Cromatografía líquida (LC)
- Cromatografía líquido - líquido
- Cromatografía sólido – líquido
MATERIA:
Análisis De Productos Agroindustriales
INTEGRANTES:
 Katherin Scalleth Ccalla Valverde CODIGO:15110013
 Antonio Moisés Vargas Gutiérrez CODIGO:17210015
 Jhan Carlos Moreno Laura CODIGO:17210012
 Arturo Apaza Tunqui CODIGO:18110015
 Shuña Tutusima, Brayan Aldair
DOCENTE:
Solís Málaga, Carmen Liz Sandra
AÑO

2021
 INTRODUCCION

LA CROMATOGRAFÍA
La cromatografía es un método físico de separación para la caracterización de mezclas complejas,
la cual tiene aplicación en todas las ramas de la ciencia y la física. Es un conjunto de técnicas
basadas en el principio de retención selectiva, cuyo objetivo es separar los distintos componentes
de una mezcla, permitiendo identificar y determinar las cantidades de dichos componentes.
Las técnicas cromatografías son muy variadas, pero en todas ellas hay una fase móvil que consiste
en un fluido (gas, líquido o fluido supercrítico) que arrastra a la muestra a través de una fase
estacionaria que se trata de un sólido o un líquido fijado en un sólido. Los componentes de la
mezcla interaccionan en distinta forma con la fase estacionaria.
La cromatografía líquida de alta resolución acoplada a la espectrometría de masas (LC-MS) es
una poderosa técnica analítica que combina el poder de separación del HPLC con la gran
selectividad, sensibilidad y precisión en la determinación de la masa molecular de la
espectrometría de masas, proporcionando información cualitativa y cuantitativa.
Los componentes de la muestra separados en el HPLC pasan al espectrómetro de masas a través
de una interfaz donde son ionizados. Los equipos de LC-MS pueden tener dos tipos distintos de
interfases que se incluyen dentro de la denominada ionización a presión atmosférica (API),
denominadas electrospray (ESI) e ionización química a presión atmosférica (APCI), ambas son
compatibles con la mayoría de los solventes volátiles utilizados como fase móvil en HPLC. Los
iones generados en la interfase son acelerados hacia un analizador y separados en función de su
relación masa/carga (m/z) mediante la aplicación de campos eléctricos, magnéticos o
simplemente determinando el tiempo de llegada a un detector. Los iones que llegan al detector
producen una señal eléctrica que es procesada, ampliada y enviada a un ordenador. El registro
obtenido se denomina espectro de masas y representa las abundancias iónicas obtenidas en
función de la relación masa/carga de los iones detectados.
CARACTERISTICAS
Las técnicas cromatografías consisten en el fluido (gas, líquido o fluido supercrítico) que arrastra
a través de una fase estacionaria qué se trata de un sólido o un líquido fijado en un sólido
MARCO TEORICO
La cromatografía de gases (GC) es una técnica analítica de uso muy extendido. Empleado para
determinar la composición de una mezcla de productos químicos (muestra), un cromatógrafo de
gases utiliza diversos gases en su operación en función del analizador y del tipo de detector
concretos. El uso del gas especial y el equipo correctos cuando realice una cromatografía de gases
mejorará considerablemente la precisión de sus resultados analíticos.
Un gas portador se utiliza para transportar la muestra por la columna del cromatógrafo de gases.
Las impurezas críticas en el gas portador, como el agua o el oxígeno, pueden interactuar con la
fase estacionaria y provocar problemas significativos, como un elevado ruido de línea base y
purga de la columna en el cromatograma de gases de salida, lo que reduciría la sensibilidad del
analizador y reduciría la vida útil de la columna.
Análisis en el cromatógrafo
Identificación cualitativa
Determina la presencia de un compuesto de un componente cualquiera basa en el tiempo de
retenes o que se tarda en aparecer al final de de la columna el que es específico para cada elemento.
Identificación cuantitativa
Determinar las cantidades en el que se encuentra la sustancia es más complicado pues requiere el
cálculo del área de la señal o pico dejada por el gas la cual será proporcional a la concentración
del componente.
¿Cómo funciona la cromatografía de gases?
¿Cómo funciona esta técnica? La fase móvil, cuya máxima composición es la del gas acarreador,
arrastra la muestra por el interior de la columna cromatográfica. La muestra líquida necesita
vaporizarse, y para garantizar esto, sus componentes deben tener presiones de vapor altas.
Así, el gas acarreador y la muestra gaseosa, volatilizada de la mezcla líquida original, constituyen
la fase móvil. Pero, ¿cuál es la fase estacionaria?
La respuesta depende del tipo de columna con que trabaje el equipo o demande el análisis; y de
hecho, esta fase estacionaria define el tipo de CG considerado.
TIPOS
En esencia existen dos tipos de cromatografía de gases: la CGS y la CGL.
CGS
La CGS es el acrónimo de Cromatografía de Gas-Sólido. Se caracteriza por tener una fase
estacionaria sólida en lugar de una líquida.
El sólido debe tener poros de un diámetro controlado por donde se retienen las moléculas mientras
migran por la columna. Este sólido por lo general son tamices moleculares, como las zeolitas.
Se emplea para moléculas muy específicas, ya que por lo general la CGS enfrenta varias
complicaciones experimentales; como por ejemplo, el sólido puede retener irreversiblemente una
de las moléculas, alterando por completo la forma de los cromatogramas y su valor analítico.
CGL
La CGL es la Cromatografía de Gas-Líquido. Es este tipo de cromatografía de gases el que abarca
la gran mayoría de todas las aplicaciones, y es por lo tanto la más útil de los dos tipos.
De hecho, la CGL es sinónimo de cromatografía de gases, aun cuando no se especifica de cuál se
está hablando. En adelante solo se hará mención a este tipo de CG.

PARTES DEL CROMATOGRAFO

 Gas portador
Cumple básicamente dos propósitos
- Transporta los componentes de la muestra

- Crear una matriz adecuada para el detector

Debe reunir las siguientes condiciones

. Debe ser inerte para evitar interacciones

. Debe ser capaz de minimizar la difusión gaseosa

. Debe ser fácilmente disponible y puro

. Debe ser económico

. Debe ser adecuado al detector que se está por

utilizar en un cromatografo

 Puerto de inyección
La inyección de la muestra es un apartado crítico ya
que se debe inyectar una cantidad adecuada y debe
introducirse de tal forma como un tapón de vapor
que sea rápida para evitar el ensanchamiento de la sobanda de salida

El método más empleado es una micro jeringa (con capacidad de varios micro litros) para
introducir el analito en una cámara de vaporización instantánea.

 Columnas
Es la parte en la cual el analito es arrastrado por el gas portador para poder así ser separado
Se emplean dos tipos de columnas: las empaquetadas o de relleno y las tubulares abiertas o
capilares

La longitud de estas columnas es variable de 2 hasta 60 m y están constituidas por acero

inoxidable, vidrio, sí Liz y sílice fundida o teflón.

 Detectores
Es la parte del cromatografo qué se encarga de determinar cuándo ha salido el analito por el final
de la columna

CROMATOGRAFÍA LIQUIDA
La cromatografía liquida fue la primera en aparecer cronológicamente, utilizada por primera vez
en 1903-1906 por el botánico ruso Mikhail Tswett para separar los componentes coloreados de
un extracto de plantas.
La cromatografía liquida es un método de análisis que permite separar mezclas en sus
componentes individuales, utilizando como fase móvil un liquido
FUNDAMENTO
Un líquido (fase móvil) circula en un íntimo contacto con un sólido u otro liquido inmiscible (fase
estacionaria), al introducir una mezcla de substancias (analito) en la corriente de fase móvil, cada
analito avanzará a lo largo del sistema con una velocidad diferente que dependerá de su afinidad
por una de las fases.
Después de terminado el recorrido de la muestra por la columna, cada una de las sustancias
introducidas en el sistema eluirá con un tiempo diferente, es decir estarán separadas).
La cromatografía de líquidos es adecuada para el análisis de moléculas no volátiles y
térmicamente sensibles, incluyendo compuestos de alto peso molecular como proteínas.
CARACTERISTICAS CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA DE ALTA RESOLUCIÓN
• Elevada sensibilidad.
• Elevada aplicabilidad.
• Permite realizar análisis cualitativos exactos.
• Es adecuada para la separación de especies termolábiles y no volátiles.
• Aplicaciones principales: Técnica de separación para los materiales menos volátiles e
iónicos; análisis cuantitativo de multicomponentes.
• Fenómeno molecular: Reparto entre una solución líquida y un substrato.
• Ventajas en el análisis cualitativo: Separa materiales para su examen por medio de otras
técnicas.
• Ventajas en el análisis cuantitativo: Aplicación amplia a los materiales menos volátiles,
análisis de multicomponentes.
• Muestra promedio deseable: 10 mg
• Limitaciones del método: Se tarda en desarrollar el método
• Limitaciones para la muestra: Ninguna
Fase móvil
La fase móvil es un fluido

 Liquido
 Gas
 Fluido supercrítico
Fase estacionaria
La fase estacionaria tiene un cociente (Área superficial/Volumen) muy elevado

 Solido
 Liquido
METODOS DE CROMATOGRAFIA LIQUIDA

IMPORTANCIA
La cromatografía líquida es una técnica instrumental utilizada ampliamente en los laboratorios,
por su excelencia cualitativa y cuantitativa, siendo, por tanto, necesaria su comprensión. Sus
distintas modalidades y las técnicas operativas existentes, junto a los aspectos prácticos que
permitirán realizar análisis cualitativos y cuantitativos, optimizarlos y cumplir con ellos los
protocolos de calidad.
CROMATOGRAFÍA DE ADSORCIÓN (LIQUIDO – SOLIDO)
• La fase estacionaria es un adsorbente y la separación se basa en repetidas etapas de adsorción-
desorción
CROMATOGRAFÍA DE REPARTO/ADSORCION (FASES LIGADAS QUÍMICAMENTE)
• La separación se basa en un reparto del soluto entre la fase móvil y la fase estacionaria.
CROMATOGRAFÍA DE INTERCAMBIO IÓNICO
•La fase estacionaria presenta en su superficie grupos ionizados capaces de retener selectivamente
a iones se signó contrario que circulan en la fase móvil.
CROMATOGRAFÍA DE EXCLUSIÓN MOLECULAR
•La fase estacionaria es un material poroso de tamaño de poro controlado, que permite la entrada
de ciertas moléculas de manera selectiva, dejando fuera otras de mayor tamaño.

CROMATOGRAFÍA DE GASES.
a) Gas-líquido (GLC) La cromatografía gas-líquido (GLC, de gas-liquid chromatography)
lleva a cabo la separación por medio del reparto de los componentes de una mezcla
química, entre una fase gaseosa que fluye (móvil) y una fase líquida estacionaria sujeta a
un soporte sólido inerte.
b) Gas-sólido (GSC) La cromatografía gas-sólido (GSC, de gas-solid choromatography)
utiliza un absorbente sólido como fase estacionaria y un gas inerte como helio o nitrógeno
como fase móvil. Esta técnica ha tenido una aplicación limitada.

2. CROMATOGRAFÍA DE LÍQUIDOS.
a) Líquido-sólido (LSC) o de adsorción. En esta la fase estacionaria es un sólido adsorbente
como sílice o alúmina que interactúa con las sustancias que se desea separar y la fase
móvil es un disolvente o mezcla de disolventes.
b) Líquido-líquido (LLC). Involucra predominantemente un reparto simple entre dos fases
líquidas inmiscibles, una estacionaria y la otra móvil.
c) Intercambio iónico (IEC). Consiste en un “intercambio reversible y estequiométrico de
iones entre una fase sólida y una fase líquida”.
d) Exclusión (EC) o de filtración en gel. Consiste en la separación de moléculas en función
de su tamaño molecular.

3. Cromatografía de fluidos supercríticos (SFC).

Es una técnica híbrida entre la cromatografía de gases (GC) y la HPLC, que combina lo mejor de
ambas técnicas. Esta técnica es importante porque permite la separación de mezclas en las que no
es adecuada la aplicación de la GC ni de la HPLC.
 CONCLUSIONES
Se concluye en que la cromatografía de gases es la mejor y más confiable vía para obtener la
composición real de una mezcla estos datos pueden ser de gran utilidad debido a que se pueden
calcular diferentes propiedades de la mezcla partiendo de las propiedades de cada componente.
La HPLC es una técnica rápida para el análisis y separación de mezclas. Los avances tecnológicos
relacionados con esta técnica permiten analizar una amplia gama de analitos de manera eficiente
y precisa. Es por esto que se han propuesto varios métodos para poder establecer las mejores
condiciones y se han desarrollado equipos para la separación de muestras de diferentes
naturalezas. Después de la búsqueda bibliográfica, se puede concluir que la base para desarrollar
un buen método de separación de una o varias muestras por HPLC radica en el conocimiento de
los principios de la técnica y las propiedades de los analitos. Igualmente, es de suma importancia
tener claras las metas o el fin último de la separación.
REFERENCIAS

 Day, R., & Underwood, A. (1986). Química Analítica Cuantitativa. Cromatografía gas-
líquido. (Quinta ed.). PEARSON Prentice Hall.
 Carey F. (2008). Química Orgánica. (Sexta edición). Mc Graw Hill, p577-578.
 Skoog D. A. & West D. M. (1986). Análisis Instrumental. (Segunda edición).
Interamericana.
 Fallon, A., Booth, R., y Bell, L. (1987). Applications of HPLC in biochemistry (1.ª ed.).
EE. UU.: Elsevier Science Ltd.
 Sheffield Hallam University. (s.f.). Gas chromatography. Recuperado de:
[Link]