EL MICROSCOPIO
Dra. Melby Castellón Gómez
Introducción y necesidad de la
microscopia.
■ La capacidad del ojo humano es limitada a la hora
de estudiar lo pequeño.
■ Gracias a los avances y el progreso en el campo de
la microscopía, el hombre ha sido capaz de ver
organismos y estructuras que a simple vista serían
invisibles.
Historia de la microscopia
■ Las fuentes históricas procedentes de civilizaciones
antiguas como la asiria, la clásica o la árabe, nos
hablan ya del poder amplificador de las lentes
biconvexas y de la utilización de técnicas de
ampliación de la imagen.
■ El término microscopio deriva etimológicamente del
griego mikrós (pequeño) y skoopéo (observar) y fue
acuñado por Jean Faber en 1624.
■ Sin embargo, el impulsor más significativo de la
microscopia fue el holandés Anton Van
Leeuwenhoek (1632-1723).
■ Leeuwenhoek construyó sus propios microscopios
con lentes convexas que él mismo pulía.
■ Entre sus aportaciones más importantes está la de
ser uno de los primeros en estudiar la composición
de la sangre y en observar y dibujar protozoos; en
1676 descubrió las bacterias.
■ Los primeros microscopios simples constaban solamente de una
lente, la cual se sostenía con la mano y se dirigía hacia la fuente
de luz para que ésta atravesara la lente y el objeto.
■ Estos microscopios producían, no obstante, difracciones y
aberraciones, que se corrigieron gracias a la técnica del Doblete,
aportada por Wollastone (1766-1826), aplicando al microscopio
un ocular astronómico.
A principios del siglo XVIII, el microscopio sufre sus modificaciones más
importantes, no sólo en lo referente a óptica, sino también, en la
mecánica.
■ Hooke en 1667, con una bola de vidrio que condensaba los rayos
luminosos;
■ El microscopio de trípode de Von Asch (1687)
■ El de columna de Bonnani (1691)
■ El de Joblot (1716) con cristal de campo.
■ Una de las aportaciones más interesantes fue la de
Cuff-Baker (1744) que confeccionó un aparato de
columna con movimiento rápido y movimiento
micrométrico y con un espejo fijo para concentrar la
luz.
■ Este sería el precedente del actual microscopio
compuesto
■ El descubrimiento del microscopio compuesto es contemporáneo al de las
lupas y se debe principalmente a Zacarias Janssen, su primer constructor
(1590).
■ El gran paso en el perfeccionamiento de éste se debe a Dolland, que con su
objetivo apocromático compuesto de dos lentes superpuestas, una
convergente y otra divergente logró mejorar en gran medida las
observaciones.
■ A partir de entonces, la evolución del microscopio compuesto ha sido
progresiva, destacando Alemania, Inglaterra y Francia como principales
países impulsores.
■ Así, hoy podemos hablar de avances tales como: la aplicación de la
tecnología láser y de la informática a la microscopía.
DESCRIPCIÓN DEL MICROSCOPIO.
Parte
mecánica
Parte óptica
COMPONENTES MECÁNICOS DEL
MICROSCOPIO.
Base o pie:
■ Es la pieza que se encuentra en la parte inferior
del microscopio y sobre la cual se montan el resto
de elementos.
■ Acostumbra a ser la parte más pesante para
proporcionar suficiente equilibrio y estabilidad al
microscopio
■ Sostiene un brazo inclinado del cual salen tanto la
platina como el tubo del microscopio
Platina:
■ Esta es la superficie donde se
coloca la muestra que se quiere
observar. Su posición vertical con
respecto a las lentes del objetivo se
puede regular mediante dos
tornillos para generar una imagen
enfocada
■ La forma de la platina es variada y
puede ser tanto fija como móvil.
Tubo:
■ Es la cámara oscura que
lleva, en la parte inferior, el
revólver con los objetivos, y
en la superior, los oculares
cambiables.
■ Puede estar unida al brazo
mediante una cremallera
para permitir el enfoque.
Revólver:
■ Es el sistema que porta los
objetivos de diferentes
aumentos, y que rota para
poder utilizar uno u otro,
alineándolos con el ocular
Tornillo macrométrico
■ Es una estructura giratoria situada
en un lateral del microscopio que
hace que la muestra se desplace
verticalmente.
■ Este componente es imprescindible
para la visualización, pues cada
muestra requiere estar a una
distancia concreta del objetivo
Tornillo micrométrico:
■ Se utiliza para conseguir un
enfoque más preciso de la
muestra.
■ Mediante este tornillo se
ajusta de forma lenta y con
gran precisión el
desplazamiento vertical de la
platina.
COMPONENTES ÓPTICOS DEL
MICROSCOPIO.
OBJETIVOS
■ Constan de un sistema de lentes.
■ Objetivos secos, que son aquellos en los que
entre el objetivo y la preparación sólo hay aire
■ Objetivos de inmersión, cuando es necesario
colocar entre la lente y la preparación un
elemento líquido, que permite una mayor
luminosidad.
OCULARES
■ Están formados por dos lentes que se
encuentran separadas por un diafragma.
■ Para hacer más cómoda la observación,
existen microscopios que tienen dos
oculares en lugar de uno.
■ Ello permite observar con los dos ojos a la
vez.
■ Actualmente existen cabezales múltiples,
que permiten que varias personas puedan
observar una misma muestra a la vez.
FUENTE DE LUZ
■ Es muy importante ya que una correcta
iluminación de la preparación que
deseamos observar es una condición
necesaria para poder realizar una buena
observación.
■ Se puede obtener la fuente de luz a
través de un espejo situado debajo de la
platina, que recoge tanto la luz natural
como la luz eléctrica, o a través de
lámparas incorporadas al pie del
microscopio
CONDENSADOR
■ Es una lente o sistema de lentes
situadas debajo de la platina y
que permite concentrar la luz en
la muestra que se observa
■ Existen distintos tipos de
condensadores, dependiendo de
las necesidades y
requerimientos
DIAFRAGMA
■ Está situado debajo de la platina
y del condensador, siendo el
encargado de regular la entrada
de luz al condensador.
■ En algunos modelos se acciona
por medio de una palanca y en
otros mediante una rueda con
orificios de distintos diámetros.
MICROSCOPIO DE CAMPO OSCURO
■ Es un tipo de microscopio que cuenta con un condensador especial que dirige los
rayos luminosos desde la parte lateral, de manera que ilumina la muestra
oblicuamente.
■ Las lentes del microscopio reciben solo la luz dispersada por los diferentes
componentes celulares (fenómeno Tyndall), por lo que las estructuras celulares
aparecen brillantes, contra un fondo oscuro.
■ Se usa la microscopía de fondo oscuro para la observación de células vivas y
móviles, como bacterias y espermatozoides. Por ejemplo, una célula de un cultivo
puede mostrar brillantes el nucléolo, la envoltura, las mitocondrias y las gotitas de
lípidos, que se destacan sobre el fondo oscuro del citoplasma.
MICROSCOPIO DE CONTRASTE DE FASES
■ Se basa en la existencia de pequeñas diferencias en el
índice de refracción en distintas partes de cada célula y
tejido; cuando la luz pasa por regiones de mayor índice
de refracción, experimenta un retardo o deflexión y
queda fuera de fase con respecto al haz principal de las
ondas de luz. Estas diferencias de refracción no
resultan evidentes con el microscopio común, pero el
microscopio de contraste de fase las amplifica, con lo
que hace que su intensidad sea visible, de manera que
las preparaciones citológicas e histológicas puedan ser
observadas sin necesidad de tinción.
MICROSCOPIO ELECTRONICO
■ En el microscopio electrónico la muestra no es iluminada con luz sino que se utilizan electrones.
■ Los electrones impactan contra la muestra dentro de una cámara de vacío.
■ Existen diferentes tipos de microscopio electrónico pero su principio de funcionamiento se basa
siempre en capturar los electrones dispersados u omitidos por la muestra y así poder reconstruir
una imagen
■ La ventaja principal de este tipo de microscopio es que puede obtenerse un nivel de aumento muy
superior al del resto de microscopios.
■ Sin embargo, es necesario preparar la muestra y colocarla en una cámara de vacío de modo que
no es posible observar muestras biológicas vivas.
■ Los dos tipos de microscopio electrónicos principales son el microscopio electrónico de barrido y el
microscopio electrónico de transmisión
MICROSCOPIO DE LUZ ULTRAVIOLETA
■ Los microscopios de luz ultravioleta iluminan la muestra, como el nombre indica,
con luz ultravioleta.
■ Este tipo de luz tiene una longitud de onda más corta que la luz visible utilizada en
los microscopios ópticos.
■ La ventaja principal de utilizar esta técnica es que puede alcanzarse una resolución
mejor que con luz visible. Además, el contraste obtenido en la muestra es distinto
que en los microscopios ópticos. De este modo, con el microscopio de luz
ultravioleta pueden observar muestras que aparecen transparentes si son
observadas con luz visible
MICROSCOPIO DE LUZ POLARIZADA
■ También conocido como microscopio petrográfico. Este
microscopio es en realidad un tipo de microscopio óptico al
que se la han añadido dos polarizadores. Esto significa que
la onda de luz utilizada para observar la muestra tiene una
dirección de oscilación concreta. Este tipo de microscopio
es muy útil para observar estructuras cristalinas de rocas y
minerales.
MICROSCOPIO DE FLUORESCENCIA
■ Los microscopios de fluorescencia son aquellos que utilizan las
propiedades de fluorescencia para generar una imagen de la
muestra. Este microscopio permite observar sustancias que emiten
luz propia cuando son iluminadas con una longitud de onda
determinada. Para ello la muestra es habitualmente iluminada con
una lámpara xenón o con una lámpara de vapor de mercurio. Estos
microscopios incorporan además filtros de luz para aislar la luz
correspondiente a la muestra.
MICROSCOPIOS SEGÚN EL NÚMERO DE OCULARES
