INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL
UNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE
BIOTECNOLOGIA
ACADEMIA DE CIENCIA Y TECNOLOGÍA FARMACEUTICA
MANUAL DE PRACTICAS DE LABORATORIO
BIOFISICA I
ELABORADO POR:
María Esther Bautista Ramírez
Yolanda Gómez y Gómez
Marcela Segura Granados
PRÁCTICA No. 1
MECANISMOS DE TRANSPORTE A TRAVES DE MEMBRANAS
TEMA
DIFUSIÓN SIMPLE
DIFUSION FACILITADA
TRASPORTE ACTIVO
OSMOSIS
INTRODUCCIÓN
A través de la membrana la célula realiza un continuo intercambio de moléculas y energía
entre el medio intracelular y el extracelular, éste recambio se realiza por varios
mecanismos:
difusión pasiva, facilitada, transporte activo y osmosis.
La membrana celular es selectivamente permeable, permite que algunas sustancias pasen
a través de ella, pero otras no. Los materiales se mueven a través de las membranas por
dos procesos; trasporte pasivo llamado comúnmente difusión y transporte activo.
Difusión simple.- Es el movimiento cinético de moléculas o iones a través de las
aberturas de la membrana celular, sin necesidad de fijación de proteínas portadoras. La
magnitud de la difusión depende de la cantidad de sustancia disponible, la velocidad del
movimiento y el número de canales de la membrana celular por los cuales pueden pasar
las moléculas o iones.
Las características de la difusión simple son:
a) Siempre ocurre a favor de un gradiente de concentración electroquímico.
b) independiente de la energía metabólica de la célula.
c) Es bidireccional, dependiendo de la concentración externa e interna de la célula.
Difusión facilitada es un transporte dependiente de la concentración e involucra el
transporte de moléculas hidrofílicas de mayor tamaño como la glucosa y los aminoácidos.
El proceso es estrictamente pasivo pero requiere de moléculas transportadoras las cuales
son especificas.
Las características de la difusión facilitada son:
a) Ocurre a favor de un gradiente de concentración.
b) Depende parcialmente de energía.
c) Depende de un transportador de naturaleza proteica.
Transporte activo.- es el paso de iones a través de la membrana en combinación con una
proteína portadora, pero contra un gradiente de concentración.
El ejemplo clásico de transporte activo es el del sodio que de manera continua se realiza
por medio de la "bomba de sodio". Esté proceso depende de energía, como el ATP o
algunos otros nucleótidos trifosforilados.
Trasporte activo
a) Requiere de la energía de la célula (el trasporte cesa sin ATP del metabolismo y tiende
a un equilibrio).
b) Ocurre contra un gradiente de concentración.
c) Es unidireccional. El flujo del soluto siempre es en la misma dirección.
OBJETIVO GENERAL
Describir los procesos involucrados en el transporte de iones a través de las membranas
celulares, analizando las fuerzas fisicoquímicas responsables.
OBJETIVOS ESPECIFICOS
Analizar y describir el fenómeno de difusión simple, facilitada, transporte activo y osmosis.
METODOLOGÍA
EXPERIMENTO # 1 Difusión y temperatura
Materiales
Parrillas
Vaso 250 ml
Pinzas
Termómetro
Azul de metileno
Permanganato de potasio
Agua destilada
Hielo
En un vaso de precipitados calentar 200 ml de agua a 50 ºC, en otro vaso poner la
misma cantidad de agua con hielo y registrar la temperatura.
Observar que el agua tienen movimiento en ambos vasos, añadir 1 g. de permanganato
de potasio a cada vaso. Registrar el tiempo de difusiòn.
Hacer lo mismo con azul de metileno.
CUESTIONARIO # 1
Conteste con las bases teóricas adquiridas las siguientes preguntas:
1. ¿ Es uniforme el descenso del colorante en el agua?
2. ¿ Qué sucede cuando se calienta el agua?
3. Defina qué es disolución y difusión.
4. Mencione los factores que afectan la difusión, en los líquidos, en los sólidos y en los
gases.
Difusión, tamaño de la molécula y permeabilidad de la membrana.
Las moléculas pueden difundir a través de la membrana celular si son suficientemente
pequeñas, mientras que las moléculas grandes tienen dificultad para su paso.
La selectividad de las moléculas por la membrana celular puede estudiarse
experimentalmente usando una membrana de celulosa. La membrana de celulosa tiene
poros microscópicos sobre su superficie y las moléculas pequeñas pueden atravesar la
membrana.
Usando la prueba de yodo y de Benedict para determinar azúcares reducidos podemos
realizar el experimento.
EXPERIMENTO # 2 Difusión y Peso Molecular
Pinzas
Cajas de petri con agar
Granos de azul de metileno
Granos de permanganato de potasio
Usando dos sustancias con diferente peso molecular, por ejemplo azul de metileno P.M.
320 y permanganato de potasio P.M. 158, estudiaremos su difusión. Ambas sustancias
son solubles en agua y difunden rápidamente en un agar con 98 % de agua.
En una caja petri con agar colocar grànulos de un mismo tamaño a una distancia de 4 cm
cada uno de permanganato de potasio en la caja #1 y azul de metileno en la caja #2.
Presionar ligeramente los grànulo dentro del agar. Registrar el diàmetro de difusiòn a los
15, 30 y 60 min.
RESULTADOS
Tiempo
Sustancia
15 min 30 min 60 min
Permanganato de potasio
Azul de metileno
EXPERIMENTO # 3 Permeabilidad de la membrana.
Humedezca una membrana de celulosa de aproximadamente 15 cm de largo por 2.5 cm de
diámetro en agua destilada, cierre un extremo atándolo con hilo. Añada 5 ml de glucosa al
5% y 5 ml de almidón al 1%. Cierre el extremo superior y suspéndalo en un vaso con agua
destilada.
-Determine la concentración de azúcares con la prueba de Benedict en el líquido del vaso
de precipitados a tiempo cero, 15, 30, 60 y 120 min.
-Después de este tiempo, repita las dos pruebas con el líquido que se encuentra dentro de
la membrana .
Reactivo de Benedict: disolver 100 g de carbonato de sodio y 173 g de citrato de sodio
(Na2C6H5O7 .H2O) en 700 ml de agua. Disolver 17.3 g de Sulfato de cobre (CuSO 4.5H2O) en
100 ml de agua destilada y se vierte en la solución de carbonato citrato con agitación
constante aforar a 1 lt de solución.
Reactivo de Yodo (Lugol) : Disolver cristales de yodo 1 g ,Yoduro de Potasio 2g y agua
destilada 100 ml.
Prueba de Benedict
Tomar 1 ml de la muestra y añadir 1 gota del reactivo de Benedict y hervir en baño María
durante 5 min. La prueba es positiva cuando se desarrolla una coloración roja o amarilla.
Prueba de lugol
Tomar un 1 de la muestra y añadir 1 gota del reactivo de lugol y observar, una prueba
positiva da una coloración azul intensa.
Osmosis y presión osmótica
El agua es esencial para la vida. Los organismos necesitan un medio acuoso para llevar a
cabo sus reacciones. El agua es la sustancia más abundante en las células, ésta es una
molécula que difunde libremente dentro y fuera de la célula.
Osmosis es simplemente la difusión del agua a través de una membrana semipermeable o
selectivamente permeable. Cuando se colocan dos sustancias de diferente concentración
separadas por una membrana semipermeable, se lleva a cabo la difusión del solvente de
la solución de menor concentración a la de mayor concentración. De no existir una fuerza
que se oponga al paso del solvente, se alcanzará el equilibrio de la concentración por
dilución de la sustancia más concentrada a la más diluida. La ósmosis desarrolla una
presión, la presión osmótica, que es una de las propiedades de mayor importancia
fisiológica.
Se define presión osmótica como la fuerza ejercida para impedir el paso del solvente
hacia la solución concentrada.
EXPERIMENTO #4 Osmosis
Preparar una solución de sacarosa, cloruro de potasio y cloruro de sodio al 2% y realizar las
siguientes diluciones:
No.Tubo ml NaCl 2%, KCl o ml de agua Conc de la solución (%)
sacarosa Destilada
1 0.25 4.75 0.1
2 1.25 3.75 0.5
3 2.25 2.75 0.9
4 5.0 0 2.0
-Obtener la sangre de un paciente limpiando la yema del dedo con alcohol etilico al 70 % y
pinchando la piel con una lanceta estéril.
-En un portaobjetos mezclar 1 gotas de sangre con 1 gota de solución salina de cada una
de las diluciones preparadas anteriormente ,colocar un cubreobjetos y observar.
-Observar al microscopio y anotar las observaciones.
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
De Robertis, Robertis. Biología Celular y Molecular.
Ed. El Ateneo, 1992
Alberts, Bray, Lewis, Raff, Roberts, Watson. Molecular biology of the cells. 3er ed.
Garland Publishing Inc. 1995.
