LABORATORIO TECNICAS DE SIEMBRA Y MEDIOS SELECTIVOS

KATHERIN RODRIGUEZ MATEUS

SILVIA SOFIA BALLESTEROS MORENO

UNIVERSIDAD COOPERATIVA DE COLOMBIA

FACULTAD DE INGENIERIA
MICROBIOLOGIA AMBIENTAL
2021
PROCEDIMIENTO:
Materiales y equipos

o 1 Cultivo de bacteria en caja

o 1 Cultivo de E. coli
o 1 Cultivo de Pseudomonas spp o Salmonella spp
o 1 Cultivo de levadura en caja
o 1 Cultivo de hongo micelial
o 1 Asa redonda
o 1 Asa micológica
o 1 Cajas de agar nutritivo o SPC
o 1 Cajas de agar YGC, Sabouraud o PDA
o 1 Caja de agar EMB
o 1 Caja de agar Maconkey
o 1 Tubos de caldo BHI
o 1 Tubo de agar inclinado LIA
o 1 Tubo de agar inclinado PDA
o 1 Tubo de agar recto SIM
o Mechero
o Alcohol para desinfección de superficies

Siembra en caldo (Bacterias)

o Tome un asa redonda, previamente calentada al mechero y enfriada

o Trabajando al lado del mechero, destape la caja con el medio sembrado con
bacterias (muestra de una colonia separada).

o Tome un tubo de caldo nutritivo estéril y, trabajando al lado del mechero,

retire la tapa, flamee la boca del tubo, coloque suavemente el asa y
enjuáguela en el caldo. Rotule el tubo.
o Lleve a incubación a 37°C por 24 horas

Siembra por estría y picadura (Bacterias)

o Tome un asa recta, previamente calentada al mechero y enfriada

o Trabajando al lado del mechero, destape la caja con el medio sembrado con
bacterias (muestra de una colonia separada).

o Tome un tubo de agar LIA estéril y, trabajando al lado del mechero, retire la
tapa, flamee la boca del tubo, coloque suavemente la muestra de la bacteria
en un punto del agar (punto de inoculación) y pinche el agar hasta el fondo
del tubo, posteriormente esparza suavemente la muestra en el bisel del agar
en forma serpenteante (Ver imagen). Evite rasgar el agar. Rotule el tubo.
Siembra por agotamiento (Bacterias):

o Tome un asa redonda, previamente calentada al mechero y enfriada

o Trabajando al lado del mechero, destape la caja con el medio sembrado con
bacterias (muestra de una colonia separada).

o Tome una caja de agar nutritivo estéril y, trabajando al lado del mechero,
coloque suavemente la muestra de la bacteria en un punto del agar (punto de
inoculación) y esparza suavemente en el primer cuadrante. Evite rasgar el agar.
o Caliente nuevamente el asa y enfríe. Toque con el asa parte del primer
cuadrante y realice 3 o 4 líneas separadas de izquierda a derecha (segundo
cuadrante)
o Caliente nuevamente el asa y enfríe. Toque con el asa parte del segundo
cuadrante y realice 3 o 4 líneas separadas de izquierda a derecha (tercer
cuadrante)

o Caliente nuevamente el asa y enfríe. Toque con el asa parte del tercer
cuadrante y realice 3 o 4 líneas separadas de izquierda a derecha (cuarto
cuadrante)
o Cierre la caja y marque sobre la tapa (no marcar la caja en la porción del agar)

o Tomar los agares EMB y Maconkey y, con el asa flameada, dividir la caja en 3.

o Sembrar por estría la cepa de E. coli, Pseudomonas spp y Salmonella spp en

agares EMB y Maconkey 1 en cada división.
o Lleve a incubación a 37°C por
24 horas y realice la lectura de acuerdo con la guía de caracterización
macroscópica y microscópica de microorganismos

o Para comprender mejor el procedimiento, siga los presentes enlaces y observe

la figura No.
Siembra por agotamiento (Levaduras):

o Tome un asa redonda, previamente calentada al mechero y enfriada

o Trabajando al lado del mechero, destape la caja con el medio sembrado con
levaduras (muestra de una colonia separada).

o Tome una caja de agar nutritivo estéril y, trabajando al lado del mechero,
coloque suavemente la muestra de la bacteria en un punto del agar (punto de
inoculación) y esparza suavemente en el primer cuadrante. Evite rasgar el agar.
o Caliente nuevamente el asa y enfríe. Toque con el asa parte del primer
cuadrante y realice 3 o 4 líneas separadas de izquierda a derecha (segundo
cuadrante)

o Caliente nuevamente el asa y enfríe. Toque con el asa parte del segundo
cuadrante y realice 3 o 4 líneas separadas de izquierda a derecha (tercer
cuadrante
o Caliente nuevamente el asa y enfríe. Toque con el asa parte del tercer
cuadrante y realice 3 o 4 líneas separadas de izquierda a derecha (cuarto
cuadrante)
o Cierre la caja y marque sobre la tapa (no marcar la caja en la porción del agar)

o Lleve a incubación a 25°C por 72 horas y realice la lectura de acuerdo con la

guía de caracterización macroscópica y microscópica de microorganismos

o Para comprender mejor el procedimiento, siga los presentes enlaces y observe

el esquema
 Siembra por picadura simple (Bacterias)

o Tome un asa recta, previamente calentada al mechero y enfriada

o Trabajando al lado del mechero, destape la caja con el medio sembrado con
bacterias (muestra de una colonia separada).
o Tome un tubo de agar SIM estéril y, trabajando al lado del mechero, retire la
tapa, flamee la boca del tubo, coloque suavemente la muestra de la bacteria en
forma centrada y pinche el agar hasta la mitad del tubo lo más recto posible y
saque el asa evitando que se rasgue el agar. Rotule el tubo.

o Lleve a incubación a 37°C por 24 horas

Siembra por estría y picadura (Hongos)

o Tome un asa micológica, previamente calentada al mechero y enfriada

o Trabajando al lado del mechero, destape la caja con el medio sembrado con
hongo micelial (muestra de una colonia separada).
o Tome un tubo de agar PDA estéril y, trabajando al lado del mechero, retire la
tapa, flamee la boca del tubo, coloque suavemente la muestra y realice una
siembra por picadura y estría. Rotule el tubo.

o Lleve a incubación a 25°C por 8 días.

Siembra por punción central (Hongos)

o Tome un asa micológica, previamente calentada al mechero y enfriada

o Trabajando al lado del mechero, destape la caja con el medio sembrado con
hongo micelial (muestra de una colonia separada).

o Tome una caja de agar PDA estéril y, trabajando al lado del mechero, retire
la tapa, coloque la muestra centrada y perfore levemente el agar. Rotule la
caja en la tapa.
 o Lleve a incubación a 25°C por 8 días.

CONCLUSIONES

o Se pudo conocer los métodos de siembra y cultivos en el laboratorio de

microbiología conociendo exitosamente todos los métodos utilizados en la
práctica
o Da a conocer la importancia de preparar medios de cultivos los cuales nos
permiten identificar diferentes microorganismos
o Se observó que para cada bacteria existen diferentes características con las que
se identifican de otras bacterias.
LABORATORIO IDENTIFICACION POR BACTERIA

KATHERIN RODRIGUEZ MATEUS

SILVIA SOFIA BALLESTEROS MORENO

UNIVERSIDAD COOPERATIVA DE COLOMBIA

FACULTAD DE INGENIERIA
MICROBIOLOGIA AMBIENTAL
2021
 PROCEDIMIENTO:
MATERIALES Y EQUIPOS
o Asa redonda
o Asa recta
o Alcohol para desinfectar
o 2 cultivos axénicos de bacteria Gram negativas
o 2 gradillas cada una con una batería bioquímica con: TSI, LIA, Citrato, urea,
Indol, motilidad, RM-VP
o Placa/galería bioquímica API 20E
o Agua destilada estéril
o Tubo con solución salina estéril
o Micro pipetas de 1 ml
o Aceite mineral en gotero
o Puntas estériles para micro pipetas
o Tiras reactivas para oxidasa

Prueba de oxidasa

o Tome una tira reactiva impregnada con tetrametil para-fenilendiamina

o Tome una colonia y colóquela sobre la tira reactiva

o Positivo: Color morado

Procedimiento de montaje de batería bioquímica clásica

o Desinfecte el área a trabajar

o Tome una gradilla con la batería bioquímica y rotúlela
o Tome el primer cultivo axénico y destape la caja junto al mechero

o Con un asa recta tome una colonia separada e inocule cada tubo con el medio
de cultivo (solo puede tomar una asada)
o Repita el procedimiento con la segunda caja y otra gradilla con batería
bioquímica. Rotule los tubos

o Incube las gradillas a 37°C por 24 horas

Procedimiento de montaje de batería bioquímica API 20E
o Desinfecte el área a trabajar
o Tome el primer cultivo axénico y destape la caja junto al mechero.

o Con un asa redonda tome una UNICA ASADA de una colonia bien separada

o Diluya la colonia en un tubo con solución salina estéril hasta formar una
suspensión bacteriana

o Con una micro pipeta con puntas estériles tome 1 ml de la suspensión

bacteriana

o Llene cada pozo hasta la cúpula excepto: VP, CIT, GEL (estos pozos se
llenan completamente. Evite la formación de burbuja

o Los tubos LDC, ODC, H2S y URE requieren condiciones anóxicas por lo cual
debe colocarse unas gotas de aceite mineral en el orificio de estos pozos.

o Agregue agua destilada estéril sobre la base excavada del API 20E y coloque
la tapa supermechero

o Repita el procedimiento con la segunda cepa bacteriana

o Incube las gradillas a 37°C por 24 horas

Procedimiento de lectura de batería bioquímica clásica
o Observe los tubos y consigne los resultados

o Consulte tablas de lectura bioquímica para determinar la especie bacteriana

analizada
Respuesta:
La especie bacteriana la clesiala, la pseudomona y la ecoli se hizo tinción de gran con
los siguientes pasos: se utilizó cristal violeta, luego de gran, etanol cetona y fascina
llegando así a observar en el microscopio cada una.
• después para identificar loa hongos solo se les aplico una gota de azul
lactofenol de la siguiente manera.
Al realizar las evidencias de los resultados se observaron bacilos gran negativos y
cocos Gram positivos que pertenecen al grupo levanouniforme.
Por último, recordamos calentar la aza cogemos una gota de agua destilada, en la
laminilla flaneamos el aza redonda y luego cogemos el cultivo, tomamos una muestra y
la esparcimos sobre el agua, después la secamos con el mechero y ya flameamos la
lámina eso es todo lo que realizamos para cada análisis de las bacterias.

CONCLUSIONES

• Se pudo conocer la identificación de baterías en el laboratorio de microbiología

conociendo exitosamente todos los paso a paso utilizados en la práctica para
ver cono va el crecimiento de casa bacteria día tras día.
• Da a conocer la importancia de preparar todos los procesos de una
identificación bacteriana, los cuales nos permiten hallar diferentes bacterias
existentes.
• Se observó que para cada bacteria existen diferentes características con las que
se identifican de otras bacterias.