24/02/2021
Laura Melissa Peña Ortiz
Determinación de un compuesto orgánico mediante espectrofotometría visible
OBJETIVOS
Reconocer los conceptos básicos sobre espectrofotometría de absorción molecular en el
rango visible junto a sus partes y funcionamiento del espectrofotómetro.
Determinar la concentración de un compuesto orgánico colorido mediante
espectrofotometría visible.
Adquirir destreza en el manejo datos, para determinación de compuestos mediante curvas
de calibración
La Espectrofotometría es una de las técnicas experimentales más utilizadas para la detección
específica de moléculas. Se caracteriza por su precisión, sensibilidad y su aplicabilidad a moléculas
de distinta naturaleza (contaminantes, biomoléculas, etc) y estado de agregación (sólido, líquido,
gas). Los fundamentos físico-químicos de la espectrofotometría son relativamente sencillos.
Región visible: es la parte de espectro electromagnético que los ojos humanos son capaces de
detectar. Cubre todos los colores del azul a 400 nm al rojo a 700 nm. Todas las moléculas pueden
absorben en este rango ya que todas contienen electrones en los orbitales moleculares.
pH: Dependiendo de la estructura del indicador en medio ácido y en medio básico, éste exhibirá
un color característico, por ejemplo, en naranja de metilo en medio acido es naranja-rojo (3.1) y
en medio básico es amarillo (4.4).
Ley de Beer
La transmitancia (T): es la fracción de la luz incidente que sale de la muestra.
Absorbancia: es lineal
La absorbancia es directamente proporcional a la concentración
A=a ∙ b∙ c
Donde:
a = (absortividad propiedad característica de las sustancias que indican cuanta luz absorbe a una
longitud de onda dada)
b= camino óptico (longitud de la celda)
c = concentración de la especie absorbente
Para determinar la concentración de una muestra se grafica la longitud de onda y la absorbancia
hasta llegar a la longitud de onda máxima y luego se utiliza la ley de beer para determinar la
concentración.
Medidas de absorbancia
Se debe intentar siempre trabajar en la longitud de onda de máxima absorbancia ya que el punto
de máxima respuesta proporciona mejor sensibilidad y menores límites de detección, además se
reduce el error en la medición.
Efecto batocromico: corrimiento hacia el rojo (menor longitud de onda)
Efecto hipsocromico: corrimiento hacia el azul (mayor longitud de onda)
DIAGRAMA DE FLUJO
1. Preparar 250.0 mL de una solución madre que contenga 12.5 mL de naranja de metilo y
aforar con agua.
2. Tomar 6 alícuotas de 5.0, 10.0, 15.0, 20.0, 25.0 y 30.0 mL de la solución madre usando una
barra de transferencia realista (“Tools”, seleccionar el submenú “transfer Bar” y
seleccionar la opción “realistic transfer”), controlando a que todas las soluciones tengan el
pH=7.0 y aforarlas a 100.0 mL con agua. Repetir el procedimiento a pH=3.0 (Controlar el
pH con HCl 0.1 M o NaOH 0.1M según sea el caso)
Respectivas alicuotas de la solución
madre
Controlar que
todas las
soluciones tengan
pH=7.0/3.00 y
aforar hasta 100
mL
3. Determinar la longitud de onda (o rango de longitudes de onda) de mayor absorbancia del
analito a los diferentes pH (dando click en ´´spectrometer´´ el cual está ubicado en la parte
superior derecha del lab virtual) (realizar un blanco con el agua utilizada y los mL de ácido
o base utilizada para cada solución según sea el caso). Medir la absorbancia de cada
solución a las longitudes de onda determinadas. Registrar la concentración de cada
solución.
Preparación de soluciones
Solución NaOH 0.1 M
0.1 mol NaOH 40 g NaOH 100 g
100 mL sln NaOH ∙ ∙ ∙ =0.4124 g NaOH
1000 mL NaOH 1 mol NaOH 97 g NaOH
Solución HCl 0.1 M
0.1 mol HCl 36.46 g HCl 100 g sln con 1mL sln conc
100 mL sln HCl ∙ ∙ ∙ ∙ =0.82 mL HCl
1000 mL HCl 1mol HCl 37 g HCl 1.19 g sln conc
FICHA DE SEGURIDAD
Naranja de metilo: Evitar el contacto con los ojos y la piel. No respirar el polvo, los gases y/o
vapores. Ventilar la zona del derrame, en caso de inhalación es nocivo y produce irritaciones. En
contacto con los ojos produce Irritación, enrojecimiento. En contacto con la piel produce Irritación,
enrojecimiento, erupción cutánea. En caso de indigestión dolor abdominal, vómito, náuseas y
diarrea.
HCl: No combustible. En caso de incendio en el entorno: están permitidos todos los agentes
extintores. En caso de inhalación produce sensación de quemazón, tos, dificultad respiratoria,
jadeo, dolor de garganta. Proporcionar ventilación, aire limpio, reposo, respiración artificial si
estuviera indicada y proporcionar asistencia médica. El contacto con la piel produce quemaduras
graves, dolor. Quitar las ropas contaminadas, enjuagar la piel con agua abundante o ducharse y
proporcionar asistencia médica. El contacto con los ojos produce dolor, visión borrosa,
quemaduras profundas graves. Enjuagar con agua abundante durante varios minutos (quitar las
lentes de contacto si puede hacerse con facilidad) y proporcionar asistencia médica.
NaOH: El contacto con la humedad o con el agua, puede generar el suficiente calor para producirla
ignición de sustancias combustibles. En caso de incendio en el entorno: están permitidos todos los
agentes extintores. La inhalación produce sensación de quemazón, tos, dificultad respiratoria.
Proporcionar aire limpio, reposo, respiración artificial si estuviera indicada y proporcionar
asistencia médica. En caso de contacto con la piel y los ojos produce enrojecimiento, graves
quemaduras, dolor. Quitar las ropas contaminadas, enjuagar la piel con agua abundante o
ducharse y proporcionar asistencia médica. En caso de ingestión produce dolor abdominal,
sensación de quemazón, diarrea, vómitos, colapso. Enjuagar la boca, NO provocar el vómito, dar a
beber agua abundante y proporcionar asistencia médica.
