DETECTORES EN ELECTROFORESIS CAPILAR
Para obtener información útil de la técnica de separación, es necesario detectar y medir los
analitos. La detección puede ser cualitativa y / o cuantitativa. La mayor parte de la detección de CE
se realiza en capilares; es decir, una sección del capilar está vinculada al dispositivo de detección y
el capilar en sí es la celda de detección. También podemos decir que la detección es uno de los
retos más grandes retos para la EC ya existe un diámetro interno muy pequeño de los capilares, la
pequeña cantidad de la muestra inyectada y también el hecho que la detección se realice en el
mismo capilar obliga al uso de detectores sensibles y que además tengan una respuesta rápida.
DETECTOR DE UV VIS
Este detector es uno de los más utilizados en EC debido a su universalidad, un bajo costo, rapidez
de la medida y la gran cinformacion espectral que brinda(desventaja no elevada sensibilidad)
En la detección UV-Vis se mide la intensidad de la luz que pasa a través del capilar en una pequeña
zona en la que se ha eliminado el revestimiento opaco.
Este detector usa la longitud de onda de 214 nm o 200 nm de acuerdo al equipo con el que se
trabaje, este sistema a pesar de estabilidad y fácil operación tiene algunos inconvenientes ya que
opera a una única longitud de onda lo que conlleva a una pérdida de sensibilidad, la introducción
del detector de diodos en fila o (DAD) ha resuelto este problema ya que este permite adquirir al
mismo tiempo el espectro de cada uno de los analitos en un mismo análisis y es uno de los
detectores más utilizados en los últimos años
Hay detección indirecta y directa xD en el libro
ABSORBANCIA
Los detectores de absorbancia son los tipos de detector en sistemas de instrumentos CE.
Dependen de la absorbancia de la energía luminosa de los analitos. Esta absorbancia crea una
sombra cuando los analitos pasan entre la fuente de luz y el detector de luz. La intensidad de la
sombra es proporcional a la cantidad de material presente.
El detector de absorbancia más simple, que se muestra en la Fig. 11A, usa solo una parte de la
energía disponible. La luz de amplio espectro de una lámpara fuente pasa a través de un filtro o se
difracta mediante una rejilla de modo que se utiliza un rango estrecho del espectro. En algunos
casos, se utilizan lámparas (como las de cátodo hueco), que producen luz en solo unas pocas
longitudes de onda discretas. Monocromo
Los detectores de absorbancia son relativamente económicos y resistentes. Sin embargo,
debido a que solo se usa una parte del espectro, la información puede perderse de muestras
complejas que tienen componentes con diferentes máximos de absorbancia. Otro tipo de detector
de absorbancia analiza los cambios en una amplia gama de longitudes de onda simultáneamente.
El detector de matriz de fotodiodos (PDA) que se muestra en la Fig.11B entrega todo el espectro
de luz disponible desde la fuente.
lámpara a la ventana capilar. La luz que atraviesa el capilar es difractado en un espectro que se
proyecta en una matriz lineal de fotodiodos. De esta manera, es posible registrar todo el espectro
de absorbancia de los analitos a medida que pasan por la ventana del detector. Los detectores tipo
PDA son más costosos y menos resistentes que los detectores monocromáticos. Debido a que el
espectro se puede dividir en hasta 512 canales, la cantidad de datos adquiridos en una sola
ejecución puede ser muy grande. Sin embargo, el detector de tipo PDA no es adecuado para todas
las aplicaciones porque casi toda la energía de la lámpara fuente se concentra en una región muy
pequeña del capilar. Algunos recubrimientos capilares y tampones se descompondrán bajo esta
avalancha de energía a menos que se filtre parte de la energía. A pesar de estas limitaciones, la
información proporcionada por el detector PDA puede ser valiosa para confirmar la identidad de
los analitos. Al comparar el cambio en la firma espectral a través de un pico, es posible estimar la
pureza del pico (32).
Comparación entre A Y B
FLUORESECIA
Los detectores de fluorescencia no se basan en la medición de sombras. Estos sistemas utilizan
una fuente de energía externa para excitar las moléculas de analito a un estado de mayor energía.
Cuando estas moléculas excitadas vuelven al estado normal, emiten energía de menor longitud de
onda, que puede detectarse y registrarse como evidencia del paso de los analitos. Los detectores
fluorescentes en los sistemas CE suelen utilizar láseres como fuente de energía de excitación
(detección LIF, Fig. 12). Los láseres tienen la ventaja de producir una luz intensa en una sola
longitud de onda. La intensidad de la luz contribuye a una buena eficiencia de excitación. Además,
la naturaleza monocromática del rayo láser lo hace.
Fácil de filtrar cualquier luz láser perdida para evitar que interfiera con la detección de analitos.
Los analitos variarán en sus longitudes de onda de excitación y absorbancia, de modo que un
detector fluorescente no verá todos los componentes que pueden estar en una muestra. Para los
analitos que son fluorescentes o que pueden volverse fluorescentes mediante una reacción
química, la sensibilidad de este tipo de detector puede ser de 10 a 1000 veces mejor que la de un
detector de absorbancia.
INDICE DE REFRACCION
Amperometría y conductividad
Estas dos técnicas de detección pueden ofrecer potencialmente un alto grado de sensibilidad y
aplicarse a una amplia variedad de analitos, incluidos aquellos sin una absorción de UV apreciable.
La amperometría y la conductividad son difíciles de realizar en la práctica y, hasta la fecha, estos
dispositivos no están disponibles comercialmente. Ambos esquemas de detección requieren el uso
de electrodos sensores que se escalan a las dimensiones del capilar de electroforesis. Además,
estos detectores imponen algunas limitaciones al tipo de tampón de separación empleado. En la
detección amperométrica, un analito electroactivo sufre una reacción electroquímica dentro de
una celda detectora (34). La separación de CE se realiza generalmente a corrientes de
microamperios y potenciales de kilovoltios, mientras que la celda de detección debe operar a
corrientes de picoamperios y potenciales de milivoltios. Por lo tanto, los dos circuitos deben
aislarse, generalmente conectando el capilar al alto voltaje en un punto anterior al extremo del
capilar donde se encuentra la celda de detección. Este sistema depende de EOF para llevar el
analito más allá del electrodo de alto voltaje hasta la celda de detección. Detectores
amperométricos
se han utilizado con éxito para la detección de aminas biogénicas a niveles tan bajos como 10–8 m
(35). Con los continuos avances en la microfabricación, este tipo de detector debería estar
disponible de forma rutinaria. Hay dos tipos de detectores de conductividad (36,37). Ambos
requieren que se coloquen dos electrodos dentro del capilar de separación. En el primer tipo, una
corta distancia a lo largo del capilar separa los electrodos. Debido a que existe un gradiente de
voltaje a lo largo del capilar, una parte de ese gradiente de voltaje se puede medir entre los dos
electrodos sensores. La presencia de zonas de analito cambiará la caída potencial en el área de la
zona. Este cambio de potencial se sentirá cuando la zona pase por los electrodos. En la otra
disposición, los electrodos se colocan uno frente al otro a lo largo del diámetro del capilar. En este
caso, no hay caída de voltaje entre los dos electrodos. Se construye un circuito que pasa un voltaje
de detección a través del diámetro del capilar. Si la conductividad del sistema cambia a medida
que los analitos pasan entre los electrodos, habrá un cambio en la corriente en el circuito de
detección. Los detectores de conductividad funcionan mejor cuando hay una diferencia sustancial
entre la conductividad del 48 Whatley
zonas de analito y el búfer de fondo (38). Estas condiciones no están optimizadas para la forma del
pico y conducen a una asimetría de pico inaceptable. Se han descrito varios esquemas para evitar
este problema. Los detectores de conductividad se han utilizado para la medición de iones
inorgánicos y en separaciones isotacoforéticas
