UNIVERSIDAD AUTONOMA JUAN MISAEL SARACHO
FACULTAD DE CIENCIAS AGRICOLAS Y FORESTALES
LABORATORIO DE FITOPATOLOGIA Y CULTIVO IN
VITRO # 3
PRACTICA
ELABORACION DE MONTAJES MICROSCOPICOS DE HONGOS FITOPATGENOS
INTRODUCCION
Por su tamaño microscópico, los hongos generalmente no pueden observarse a simple vista, a
excepción de hongos macroscópico que por su propio tamaño pueden ser observados
superficialmente sin aparatos, siempre y cuando no se requiera estudiar detalles de las esporas, etc.
Para su observación al microscopio compuesto, los hongos requieren ser preparados y montados en
portaobjetos. En estudios preliminares o de rutina se hacen preparaciones temporales desechables,
pero si se desea preservar especímenes por largo tiempo es necesario elaborar montajes
permanentes, los que de hacerse correctamente duran uno o varios años en buenas condiciones.
Para hacer un montaje de calidad, se requiere paciencia y experiencia, además de la destreza
individual, sin embargo, todo fitopatólogo debe intentar hacer buenas preparaciones, ya que
actividades prácticas tales como el diagnostico de enfermedades dependen de alto grado de buenas
preparaciones.
OBJETIVOS
Aprender a preparar montajes microscópicos de especímenes fungosos. MATERIALES
Materiales
Porta objetos
Cubre objetos
Cinta adhesiva
Agujas de disección
Azul de metileno
Frutas o tejidos vegetales con signos o manifestación del hongo
Equipos
Microscopio
Lupa estereoscópica
Cámara fotografica
METODOLOGIA
A) MONTAJE CON AGUJA DE DISECCION
Es útil para montar estructuras que desarrollan abundantemente en la superficie del hospedante, o a
partir de cepas que crecen en medio de cultivo. Es la técnica obligada para hacer preparaciones a
partir de raíces infectadas. El procedimiento consiste en:
1. Colocar una pequeña gota de agua u otro medio de montaje en el centro de un portaobjetos.
2. con la punta de la aguja humedecida tome o roce ligeramente las esporas y/o micelio que desee
montar, evite tomar material excesivo ya que dificulta la observación posterior. De ser
necesario, puede auxiliarse del microscopio estereoscopico para hacer mejor el trabajo.
3. Transferir el material a la gota del medio de montaje, coloque cuidadosamente un cubreobjetos
y observe con los objetivos 10x y 40x.
4. Para montajes temporales use agua o lactofenol, para preparaciones permanentes use lactofenol
y selle con esmalte para uñas.
B) MONTAJE MEDIANTE CINTA ADHESIVA
Es la técnica más rápida y fácil, sobre todo para personas inexpertas. Las preparaciones son
exclusivamente temporales. No usar para hacer montajes a partir de raíces, especialmente si estas
presentan suelo adherido. El método consiste en:
1. Colocar una gota de agua u otro medio de montaje en el centro de un portaobjetos.
2. cortar un trozo de cinta, 1 o 2 cm más grande que la longitud del portaobjetos, no use trozos de
cinta más pequeños o más grandes.
3. Tomar la cinta por los extremos con dos de los dedos, deposite suavemente la parte engomada
sobre la superficie del hospedante o crecimiento del hongo en medio de cultivo, evite presionar
demasiado, pues tomara material en exceso y/o también se pegaran setas u otras estructuras de
la planta que dificultaran la observación.
4. Tome la cinta con las dos manos y péguela sobre el portaobjetos, vigile que la cinta pegue
rápidamente en ambos extremos del cristal, pues de lo contrario despegara fácilmente, observe
al microscopio con los objetivos 10x y 40x.
Las mejores preparaciones no son aquellas que presentan mucho material, sino las que contienen las
estructuras típicas del hongo, más aun si se encuentran bien separadas y arregladas en forma
estética.
RESULTADOS
Se considera como tales los montajes en sí.
DISCUSION
Se discuten las dificultades obtenidas con cada una de las técnicas; ventajas y desventajas de cada
una.
BIBLIOGRAFIA
Echando, E. 1971. Manual de Laboratorio para Fitopatología General, Herrera
Hermanos. 13-14 p.
López, A.G. 1979. Manejo de Hongos Fitopatógenos. UACH. 25-29 p.
