TAXONOMIA
Alfa Proteobacteria
CLASE
SUBCLASE α-2 Proteobacteria
FAMILIA Bartonellaceae
GENERO Bartonella
B. alsatica, B. bacilliformis, B. birtlesii, B. clarridgeiae, B. doshiae,
B. elizabethae, B. grahamii, B. henselae, B. koehlerae, B. peromysci,
ESPECIES B. schoenbuchensis, B. schoenbuchii* , B. talpae, B. taylorii,
B. tribocorum, B. vinsonii, B. quintana.
* Bergey, 2 Enero del 2002.
[Link]
Bartonella bacilliformis es una bacteria
aeróbica Gram negativa, pleomórfica,
móvil, que mide 2-3 µm de largo y 0.2 -
0.5 µm de ancho
Penetra y parasita glóbulos rojos,
teniendo forma bacilar, cocoide o
cocobacilar. Dichas formas se colorean
con tinción Wright, Giemsa y Leishman
HISTORIA En la época de la República (1870-1906) se registra una grave
epidemia durante la construcción del ferrocarril Lima – La
Oroya .en ella participaron miles de trabajadores (chilenos,
chinos, bolivianos, etc.) de los cuales fallecieron más de 7,000
siendo la enfermedad conocida como Fiebre de la Oroya
En algunos sobrevivientes aparecieron erupciones dérmicas
rojizas, a las que se dio el nombre de verruga peruana.
En 1885, el estudiante de medicina peruano Daniel Alcides
Carrión investiga y establece la unidad clínica existente entre la
fiebre de la Oroya y la verruga peruana
En 1905, el médico peruano Alberto Barton aisló y describió a
la Bartonella bacilliformis como agente etiológico responsable
de la enfermedad de Carrión o verruga peruana.
En 1913, Townsend identificó a la Lutzomyia verrucarum como
el vector responsable de la enfermedad
Distribución geográfica
• B. bacilliformis es el agente etiológico de la Bartonelosis humana, enfermedad de Carrión o
Verruga Peruana
• Esta es una enfermedad infecciosa, oriunda del Perú, Colombia y Ecuador, que se presenta en los
valles interandinos que se ubican entre los 500 a 3200 m.s.n.m., valles occidentales entre los 800
a 3200 m.s.n.m. y valles orientales del norte, donde existen condiciones ecológicas favorables que
permiten que vectores del género Lutzomyia transmita la enfermedad
• Existen zonas endémicas en los Departamentos de Piura, La Libertad, Ancash, Lima, Cajamarca,
Amazonas, Junín, Huancavelica y se han reportado casos en Ayacucho y el valle del Mantaro
• El departamento de Ancash es la zona endémica de mayor incidencia, reportándose casos en el
Callejón de Huaylas y en el Callejón de Conchucos .Zonas "nuevas" donde se han reportado brotes
se encuentran en San Ignacio (Cajamarca), Churuja (Amazonas) y en el valle de Urubamba, Calca y
Quillabamba en Cuzco ,considerándose en la actualidad como una enfermedad reemergente
BARTONELLOSIS
• Es una enfermedad infecciosa que presenta tres fases clínicas causada por
Bartonella bacilliformis
• Fase Aguda o Hemática
• Fase Intercalar
• Fase Eruptiva o Verrucosa
• Reservorio: El unico demostrado es el humano.
• Vector: Se incrimina algunas especies del género Lutzomyia como el transmisor
causante de la enfermedad en humanos.
La Lutzomyia verrucarum es el principal vector
• FASE CRONICA o verruga:
• FASE AGUDA o Fiebre
de Oroya:
• FASE INTERCALAR:
asintomático. Forma mular Forma multi miliar
Lesión multi miliar
Diagnóstico Clínico
FASE AGUDA o Fiebre de Oroya:
• De inicio brusco o insidioso, dura aproximadamente cuatro semanas.
Los síntomas de la fase aguda son diversos, destacando los de un
proceso infeccioso general, tales como fiebre, malestar general,
palidez, hiporexia; desarrollando anemia severa, hepatomegalia,
ictericia, linfoadenomegalia; en ocasiones pueden presentar derrame
pericárdico, anasarca, convulsiones
FASE ERUPTIVA
• La fase crónica eruptiva
conocida como verruga
peruana es muy frecuente
a nivel pediátrico; muchos
niños preescolares y
escolares de las zonas
endémicas presentan en
cara, extremidades
superiores e inferiores
diversas formas de verr
Las formas descritas son:
Miliar (pequeñas), mular (grandes) y nodular (subdérmicas); estas muchas veces curan solas en 3 a 6
meses; ocasionalmente se ha detectado en algunos pacientes (13%) con verruga peruana, presencia
de Bartonellas en sangre sin cuadro anémico severo.
PATOGENESIS Y FISIOPATOLOGIA
A. Reacomodo Bacteriano-período asintomático (4- 5días)
B.C. Inf. Cél endoteliales vasos capilares - Siembra bacteria.-al torrente sanguíneo-colonización eritrocitos maduros
(desencadenantes [Link]ógico, grado de invasividad)
D. Depresión [Link] (sobreinfecciones) - Hiperplasia del reticulocito endotelial, linfadenomegalia y hepatoesplenomegalia.
Liberación factor angiogénico, hiperproliferación de células endoteliales ---- formación de verrugas
ADHERENCIA E INVASION DE LA CELULA
FACTORES DE HUESPED
VIRULENCIA
Adherencia:
•Receptores de membrana en el eritrocito
•Flagelos – flagelinaimbria agregativa o pili
•Proteínas de superficie bacteriana
•Proteínas de membrana (espectrina A/B, Glicoforina
A/B)
•Adherencia e invasión-correlación con la movilidad
bacteriana.
INVASION DE LA CELULA
HUESPED
Deformina (67kD)
Hemólisis Proteasas Carboxiterminal
(ctpA)
Ingreso de la bacteria en el eritrocito produce invaginación y formación Filamentos polipéptido (Fil
de vacuolas – alteración en la estructura del citoesqueleto, activación de A)
componentes que entrampan ATP, Ca++ y Mg++ cambios en
permeabilidad bacteriana, lisis hipotónica
Fuente: LEE ANN BENSON, SIDDHARTHA KAR, GERALD McLAUGHLIN AND GARRET M. IHLER
Vol. 54, No. 2 INFECTION AND IMMUNITY, Nov. 1986, p. 347-353, American Society for Microbiology
INVASION
Una vez que el flagelo bacteriano con la ayuda de la deformina comienzan la penetración del eritrocito,
entonces se ponen de manifiesto otras sustancias que ayudaran a la invasividad (Ial), este contiene dos genes
IalA, IalB, hay también un gen que codifica una proteasa carboxiterminal (ctpA) y otro gen que codifica el
filamento polipeptidico (FilA)
De los Ial específicamente el IalB, el IalA se encarga de codificar una hidrolasa de poliforfato de dinucleosido
que es importante en la supervivencia de la bacteria, mientras que el IalB codifica una proteina muy parecida a
los determinantes de virulencia
Yanji Xu and Yan Chai Bartonella bacilliformis: Molecular Mechanisms of Invasion. Einstein Quart. J. Biol. Med. (2002) 19:56-58.
Tomar 6 ml de sangre
PRUEBAS DE DIAGNOSTICO
ENFERMEDAD DE
CARRION
Colocar la
muestra en
tubos con o sin
anticoagulante
Tarjeta con
filtro
Codificados
Frotis yGota gruesa
Colocar de 2 a 3
Colocar 3 ml en cada tubo gotas de sangre
Mantener en refrigeración dentro del
área circular. Dejar
secar
Medio de Cultivo
modificado
Colocar 1 ml de
sangre. Incubar
28ºC.
Cerrar la tarjeta y colocar dentro de la
bolsa de trasporte junto con el
desecante. Mantener a temperatura
ambiente.
CARACTERISTICAS MICROBIOLOGICAS
Bartonella bacilliformis
•Bacilo Gram(-) pleomórfico
•0.2-0.5 por 1-2um
•Aeróbico, no fermentativo
•Móvil, unipolar 2-16 flagelos
•Intracelular de células endoteliales y eritrocitos
•Tº óptima de aislamiento 28ºC
•Requiere medios enriquecidos
•Genoma DNA circular 1600kbp
•Coloración: Giemsa o Romanowsky
PREPARACIÓN
COLORACION DE LA SANGUINEO
DEL EXTENDIDO
SOLUCIÓN
GIEMSA (solución madre)
• Fórmula: Fórmula:
Solución madre Giemsa. Colorante Giemsa en polvo,
certificado 0,75 g
0,05 mL Alcohol metílico puro. 65 mL
Glicerina pura 35 mL
Solución amortiguadora o
diluyente. 0,95 mL
solución amortiguadora
Ortofosfato disódico anhidro (Na2HPO4) 4 g
Ortofosfato monopotásico (KH2PO4) 5 g
Preparación:
Mezclar bien, y disolver 1g de la mezcla en un
litro de agua destilada y
ajustar el pH a 7,2.
GIEMSA
La coloración de Giemsa es una modificación de la coloración de
Romanowsky, nos permite detectar los glóbulos rojos infectados
por Bartonella bacilliformis en sus formas bacilares, cocobacilares o
cocoides.
Fijar el frotis sanguíneo sumergiendo la lámina en un frasco con
metanol por tres segundos.
Sacarlo y dejar secar o colocar la lámina sobre una varilla de vidrio y
cubrir la superficie con metanol y dejar que se evapore por
completo
Se cubre la extensión con el colorante de trabajo diluido 1:10 por
15minutos.
LECTURA DEL EXTENDIDO SANGUINEO
•Ubicación entre el cuerpo y cola
•Buscar áreas con una sola capa de hematíes
•Lectura en 100 campos microscópicos, en caso de
porcentajes menores aumentar el número de
campos.
CRITERIOS PARA LA LECTURA DE LAMINAS
COLOREADAS
• Enfocar campos microscópicos de aprox. 100 hematíes y
realizar el recuento de eritrocitos infectados.
• Elevado % - lectura de 50 campos microscópicos.
• Escaso % - lectura de 200 a + campos microscópicos
REPORTE DE
RESULTADOS
• Los resultados positivos deben expresar el
porcentaje de eritrocitos infectados.
• Los resultados deben reportar la forma de la
bacteria (bacilos, cocobacilos o cocos)
• Ejemplo: 85% forma bacilar, <1% formas
cocoides.
• Negativo- no se observan eritrocitos infectados
• Observaciones: presencia de punteado basófilo o
granulaciones tóxicas.
POLIMORFISMO
Bartonella bacilliformis
Morfología Cocoide Morfología Coco bacilar
Morfologia bacilar
EXAMEN DIRECTO
VENTAJAS Y DESVENTAJAS
•No se requieren equipos sofisticados
•Sensibilidad baja ( 36 a 65% aprox.) •Bajo costo
•Requiere personal capacitado. •Ejecución rápida
•Posibilidades de errores en la lectura •Procedimiento sencillo
•Resultados inmediatos
cultivo en placas
• Inocular de 0,5 a 1mL de sangre sobre el
agar Columbia, dejando que la sangre
fluya sobre la superficie del medio, luego
cerrar la placa.
• Colocar la placa con la muestra sembrada
en bolsas de polietileno de baja densidad
autosellables para mantener la humedad
del medio de
cultivo que debido al largo período de
incubación se seca y para evitar
contaminación con hongos saprofitos.
• Incubar el cultivo a 28 ºC hasta por 45
días
MEDIO DE CULTIVO BARTONELOSIS
•Medio bifásico AS Columbia
•Fase sólida: Agar, Sangre carnero desfibrinada 10%, extracto
de Levadura
•Fase líquida: RPMI 1640 con L-glutamina y bicarbonato de Na
•Temperatura incubación 28 – 29ºC
•Desarrollo bacteriano a partir del 6to a 7mo día
•Tiempo de cultivo: máximo 45 días
La identificación del género se realiza por:
• Las condiciones requeridas para el desarrollo bacteriano, como:
[Link] temperatura de crecimiento, entre 28 - 29 ºC.
[Link] período de incubación, desarrolla desde los 4 hasta 45 días.
[Link] sólo en medios enriquecidos.
[Link] aislamiento primario es lento.
• No produce hemólisis
• Son Gram negativos.
• Las colonias son pequeñas, puntiformes y translúcidas, de borde entero se adhieren a
la superficie del agar, esta adherencia es una característica fenotípica de algunas
colonias.
• No crecen en medio de agar Mac Conkey
• No fermentan los azúcares, son bioquímicamente inertes.
• No crece a 37 ºC.
• Son oxidasa negativa, catalasa positiva, ureasa e indol negativo.
