Práctica 2
UROCULTIVO
MICROBIOLOGÍA CLÍNICA
INTRODUCCIÓN ciertos grupos de población y
Fundamento de un urocultivo. actualmente no se puede considerar un
criterio absoluto, la presencia "real" de
Las infecciones urinarias son una de cualquier número de bacterias en orina
las causas más frecuentes de una puede representar una ITU cuando
consulta médica por lo que el existen síntomas específicos y si ha
diagnóstico definitivo de la infección del ello le aumentamos la resistencia a los
tracto urinario (ITU) se realiza por antimicrobianos es de suma necesidad
cultivo cuantitativo de orina. realizar urocultivos para poder detectar
Tradicionalmente se ha considerado al agente etiológico y efectuar consigo
que la presencia en orina de 100.000 o el antibiograma.
más bacterias/ml representa una
bacteria significativa, indicativa de ITU Microorganismos que crecen en un
donde este criterio sólo es aplicable a urocultivo
Coagulase-negative staphylococci Bacteroides spp.
Streptococcus spp. Fusobacterium spp.
Mycobacterium spp. Peptostreptococcus spp.
● Conocer los m.o.s. que se
Como se realiza el conteo de pueden encontrar en una
UFC/mL para saber si es una muestra de orina.
infección o se debe repetir la prueba ● Conocer la metodología de
siembra para una muestra de
Un recuento bacteriano mayor de orina.
100.000 UFC (unidades formadoras de
colonias)/ml, acompañado de METODOLOGÍA
respuesta inflamatoria, es indicativo de
Siembra de muestra
infección urinaria. En general, la
contaminación por microbiota uretral
debido a una mala recogida de la
muestra, se correlaciona con un
recuento menor de 100.000 UFC/mL.
Toma muestra de orina
OBJETIVOS
● Conocer los agares de Método siembra en estría
preferencia para el urocultivo.
Métodos para la obtención de la
muestra de orina
Orina de segundo chorro: es la
muestra más frecuentemente
procesada para urocultivo, en especial
por su fácil obtención; sin embargo, se
puede contaminar frecuentemente con
flora de la piel, uretra, y vagina en
mujeres. Requiere de un aseo genital
prolijo con tórulas, agua y jabón.
RESULTADOS Orina obtenida mediante recolector:
no en una buena muestra, ya que
Recomendaciones al tomar la
generalmente se contamina con flora
muestra
perineal. Es útil sólo si el cultivo resulta
ser negativo o si se aísla, en recuento
1. Preferentemente se debe obtener la
significativo, una especie uropatógena
primera orina de la mañana (ya que
única. Para este procedimiento se
se trata de una muestra más
recomienda el cambio de recolector
concentrada). De no ser posible, el
cada 30 minutos hasta obtener la
paciente debe abstenerse de orinar
muestra de orina.
durante las 3 horas previas al
examen.
2. No forzar la ingestión de líquidos, ya Orina obtenida a través de catéter
que con ello se diluye la orina, vesical permanente: no es una buena
alterando el recuento. muestra excepto que el catéter haya
3. Volumen recomendado a recolectar: sido recientemente instalado.
25 a 50 mL. Generalmente los catéteres vesicales
4. Volumen mínimo: 3 mL. están colonizados ya a las 48 horas de
5. No haber tomado antibióticos instalados y los microorganismos
durante las últimas 72 horas ya que aislados no necesariamente son el
se puede correr el riesgo de que el agente causal de la infección urinaria.
resultado de un falso negativo ya La superficie externa del catéter debe
que este inhibe el crecimiento limpiarse con una tórula con alcohol
microbiano. 70% y esperar que seque. La punción
6. Entregar la muestra en las 2 horas se efectúa en un ángulo de 30°en el
de haber sido recolectada debido a sitio indicado para ello. No debe pinzar
que la orina es una muestra de fácil el catéter antes de obtener la muestra.
descomposición o contaminación.
7. Al transportar la muestra debe de Punción vesical: es el método de
evitarse la exposición directa al sol y referencia para la obtención de orina a
al calor, se debe de mantener lo más cultivar ya que evita la contaminación
fresco posible. con flora uretral; sin embargo, se
reserva para casos especiales por ser
un procedimiento invasor.
Cateterización vesical transitoria: se
considera una alternativa a la punción
vesical pero es también un
procedimiento invasivo y puede
generar arrastre retrógrado de
microorganismos.
El resultado del examen de
urocultivo puede ser: Agar sangre
● Negativo o normal: cuando no
se observa crecimiento de ● Reacciones que se llevan a
colonias bacterianas en la orina cabo en el agar sangre
en valores preocupantes. ○ Hemólisis alfa: Lisis
● Positivo: cuando es posible parcial de los glóbulos
identificar más de 100.000 rojos, se observa un halo
colonias de bacterias, siendo verdoso debido a la
también indicado la bacteria oxidación de la
identificada en el examen. hemoglobina a
metahemoglobina por el
Agar McConkey peróxido de hidrógeno.
Un ejemplo de
Crecen bacterias Gram negativas tanto
microorganismo que
aerobias como anaerobias facultativas.
genera esta hemólisis es
Las bacterias fermentadoras de lactosa
el Streptococcus mitis.
como Escherichia coli y Klebsiella
○ Hemólisis beta: Lisis total
degradan la lactosa acidificandolo y las
de los glóbulos rojos, se
colonias se tornan rosadas o rojizas.
observa un halo brillante
Las lactosa negativas como
claro. Un ejemplo de esta
Salmonella, Proteus y Yersinia
hemólisis es el
permanecen amarillas.
Streptococcus pyogenes.
○ Hemólisis gamma:
Ausencia de lisis de los
glóbulos rojos.
Cultivo de E. coli en agar sangre
PRUEBAS BIOQUÍMICAS
Oxidasa:
La reacción de las oxidasas se debe a
la presencia de un sistema citocromo
oxidasa que activa la oxidación del
citocromo que es reducido por el
oxígeno molecular que produce el agua
o peróxido de hidrógeno según la
especie.
Catalasa:
La catalasa es una enzima que poseen
la mayoría de las bacterias aerobias.
Descompone el peróxido de hidrógeno
en agua y oxígeno. El desprendimiento
de burbujas procedentes del oxígeno
indica que la prueba es positiva.
Prueba Simmons
Ciertos microorganismos tienen la
Prueba indol habilidad de utilizar citrato, un
El indol es un compuesto que se metabolito intermedio del ciclo de
genera mediante la desaminación Krebs, como única fuente de carbono
reductiva del triptófano, esta reacción externa. Es un medio para evidenciar la
es llevada a cabo por algunas bacterias utilización del citrato en presencia de
que poseen enzimas denominadas sales de amonio inorgánicas. Las
triptófanos; para detectar la producción bacterias capaces de utilizar citrato
de indol se utiliza el medio Caldo como única fuente de carbono, utilizan
triptófano y la lectura de la prueba se también las sales de amonio como
realiza con el reactivo de Kovacs en única fuente de nitrógeno, que se
donde el indol producido reacciona desdoblan para dar amoníaco. El
generando una coloración rosa intensa. resultado es un medio ambiente
alcalino que hace virar el indicador azul
de bromotimol a un color azul intenso
cuando se logra obtener un pH por
encima de 7.6. Esta característica se
puede usar para diferenciar a los
miembros de la familia
Prueba CAMP Enterobacteriaceae.
Se basa en que los estreptococos del
grupo B (como el Streptococcus
agalactiae) producen un factor
llamado CAMP (factor de monofosfato
de adenina cíclica) que aumenta la
zona de hemólisis producida por un
estafilococo productor de ß-lisina.
Bilis esculina:
El medio contiene extracto de carne y
peptona de carne, los Streptococcus
hidrolizan la esculina, que en presencia
viran el agar hasta un tono verde olivo
hasta negro.
Ureasa:
Esta prueba consiste en detectar la
presencia de la enzima ureasa en un Prueba nitratos
determinado microorganismo Se basa en la aceptación de electrones
problema, esta enzima cataliza la del nitrato reduciéndose a NO2 o N2.
hidrólisis de la urea, que da lugar a
dióxido de carbono y amoniaco.
Sí es negativa es posible que haya
NO3, para confirmar se agrega Zinc y si
se vira a rojo es positivo. El fundamento
es NO3 → NO2 → NO →N2O →N2
Prueba Manitol
Coagulasa:
Sirve para detectar si los gérmenes son
La coagulasa es una enzima producida
capaces de fermentar el manitol
por un determinado microorganismo
liberando productos ácidos que serán
capaz de coagular el plasma
detectados gracias al indicador rojo de
sanguíneo. Su aplicación clínica más
fenol que cambiará a color amarillo.
importante es la ayuda a la
Bacterias manitol (-) son, dentro de las
diferenciación del Staphylococcus
enterobacterias, Proteus mirabilis,
Aureus de otros Staphylococcus.
Proteus vulgaris y Shigella dysenteriae.
Nucleasa
Algunas bacterias excretan nucleasas
que hidrolizan el DNA. Se hace una
estría gruesa en una placa de medio
Rojo de Metilo que contenga DNA. Se revela después
La prueba se usa para determinar la de incubar con HCL 0,1 N que precipita
presencia de iones hidrógeno cuando el DNA no hidrolizado. El agar DNA se
un microorganismo fermenta la dispone en cápsulas de Petri. Se
glucosa. Todos los miembros de la efectúa una estría con la bacteria a
familia Enterobacteriaceae convierten ensayar sobre la superficie del medio.
glucosa en ácido pirúvico por el camino Se deja incubar una noche a 25°C.
de Embden-Meyerhof. Las bacterias Luego se vuelca sobre la superficie
que metabolizan ácido pirúvico desarrollando una solución de HCl 1N.
producen ácido y bajan el pH a menos Prueba positiva: se observa un halo
de 4,4. Las que utilizan, en cambio, el transparente alrededor de la estría
camino del butilenglicol producen (degradación del ADN)
acetoína y butanodiol (diacetilo). El Prueba negativa: se observa todo el
indicador del medio, rojo de metilo, es medio turbio, inclusive alrededor de la
rojo a pH < 5,0 y amarillo a pH > 5,8. La estría.
prueba es útil para la diferenciación de
Escherichia coli (rojo metilo positivo) de TSI
Klebsiella (rojo metilo negativo). La
El medio fue diseñado para determinar
mayoría de las Enterobacteriaceae
la habilidad de las bacterias de
tienen uno u otro camino metabólico,
fermentar hidratos de carbono y
pero raramente ambos.
producir sulfuro de hidrógeno (H2S). El
medio contiene una parte (0.1 %) de
glucosa y diez partes (1.0 %) de lactosa
y sacarosa. El indicador de pH es el
rojo fenol y el sulfato ferroso pone en
evidencia la formación de H2S. Si el
microorganismo fermenta glucosa,
tanto el 390 fondo como la superficie
aparecerán de color amarillo. Si la
bacteria fermenta la lactosa y/o
sacarosa, la superficie permanecerá La glucosa puede ser metabolizada por
ácida (amarilla). Si no fermenta la los microorganismos, a través de
lactosa, la superficie se vuelve alcalina distintas vías metabólicas. Según la vía
(roja). Los microorganismos que no utilizada, se originarán productos
fermentan glucosa no producen finales ácidos, o productos finales
cambios en el pH del medio o neutros (acetil metil carbinol). Esta
producirán productos alcalinos y el diferencia en el metabolismo
medio TSI permanecerá rojo. La bacteriano, podría ser reconocida por
producción de H2S se manifiesta por un la adición de un indicador como rojo de
ennegrecimiento del medio por metilo, para revelar la presencia de
formación de SFe. productos ácidos, y por la adición de
alfa naftol e hidróxido de potasio para
evidenciar la presencia de productos
finales neutros.
VP
En el medio de cultivo, la pluripeptona
aporta los nutrientes necesarios para el
desarrollo bacteriano y la glucosa es el
hidrato de carbono fermentable.
MO Causantes de las Prueba bioquímica. Interpretación
infecciones urinarias
[Link] Simmons, indol, lactosa, Simmons: - sin cambio
ureasa, TSI, VP, SH2 de color
Indol: + halo rosado
Ureasa: - rosado
TSI: -/+ formación de
burbujas
VP: -
SH2: -
Proteus mirabilis Prueba de manitol, *Manitol: - sin cambio de
Rojo metilo, lactosa, indol, color.
ureasa Lactosa: -
Indol: -
Ureasa: +
Rojo Metilo :+ rojo
Enterococcus faecalis Catalasa, hemólisis, bilis Catalasa: -
esculina Hemólisis: ɤ
Bilis esculina: +
Staphylococcus Coagulasa, nucleasa Coagulasa: -
saprophyticus Nucleasa: -
Streptococcus agalactiae Catalasa , CAMP, Catalasa: -
hemólisis CAMP: +
Hemólisis β
Klebsiella pneumoniae Lactosa, VP, SH2, ureasa, Manitol: +, cambio de
indol color a rojo-rosa
VP: +
SH2: -
Ureasa: +
Indol: -
Lactosa: +
Bacteria Tinción Gram Características Características
macroscópicas macroscópicas
en el medio agar en el medio agar
sangre McConkey
E. coli Bacilo Gram Colonias medianas Colonias de color
negativo blanquecinas, rosa.
redondeadas,
algunas cepas
llegan a producir
hemólisis.
Proteus mirabilis Bacilo Gram Colonias Colonias de
negativo medianas, incoloras a color
blanquecinas o beige,
translúcidas, forma agrupamiento
circular, Se forma dinámico inhibido.
una especie de ola
alrededor de las
colonias
bacterianas.
Enterococcus Cocos Gram Forma cocobacilar Inhibición de
faecalis positivo u ovoide, que se parcial a completa
presentan
aisladas, en
parejas o cadenas
cortas, color
translúcido.
Staphylococcus Cocos Gram Se puede observar Inhibición de
saprophyticus positivos una zona de β- parcial a completa
hemólisis
alrededor de las
colonias, color
blanco.
Streptococcus Cocos Gram Las colonias son Crece como
agalactiae positivos de unos 2 mm de colonias beta-
diámetro, lisas y hemolíticas
rodeadas por un
halo de ß-
hemólisis, aunque
existen algunas
cepas no
hemolíticas.
Antibiograma de los principales
microorganismos causantes de
infecciones urinarias.
Primeramente se requiere de agar
Mueller-Hinton, debido a que permite
resultados reproducibles, contiene
inhibidores sulfonamidas, trimetoprima
Existe otro llamado E-test que permite
y tetraciclinas mínimamente y si se
conocer la concentración mínima
suplementa con sangre de ternero al
inhibitoria, en µg/ml, ya que se emplean
5% permite prueba de diferenciación a
tiras plásticas impregnadas en
Streptococcus.
concentraciones crecientes de
El antibiograma más popular es el
antibiótico. Se conoce la CMI leyendo
Kirby-Baeur, que permite demostrar la
el punto más bajo de la elipse de
resistencia o sensibilidad de un
crecimiento.
microorganismo frente a un antibiótico
que se encuentra en pequeños discos
que se colocan en el agar de cultivo,
antes de incubar.
En este caso se mencionan los
resultados reportados en efectividad de
algunos antibiogramas con distintos
antibióticos para los microorganismos
seleccionados como patógenos en un
urocultivo.
Se recomienda el uso de antibióticos directamente a los resultados
para la eliminación de la infección obtenidos. Así mismo se deben de
provocada principalmente por los tomar en cuenta los errores que se
microorganismos mencionados en la pueden cometer al cultivar la muestra,
tabla anterior, siendo la Gentamicina, el ya que puede alterar el conteo en placa
Amoxicilina-clavulánico y la y por ende generar un mal diagnóstico
Nitrofurantoína los principales hacia el paciente. Cumpliendo de este
medicamentos para el tratamiento de modo con los objetivos planteados en
este tipo de afecciones. la práctica.
CONCLUSIÓN
A lo largo de esta práctica se analizó la
metodología para llevar a cabo un
urocultivo y se pudo observar que se REFERENCIAS
deben de tomar ciertas
● Britania. “MacConkey Agar”.
consideraciones al momento de tomar
Fecha de consulta: 04/02/2020.
la muestra de orina, ya que el método
[Link]
que sea utilizado puede afectar
k/public/upload/productos/upl_5 Recomendaciones para el
[Link] diagnóstico microbiológico de la
● Clínica Universidad de Navarra. infección urinaria. Revista
(s. f.). Diagnóstico chilena de infectología, 18(1),
microbiológico de infecciones 57-63.
del tracto urinario. Recuperado 4 [Link]
de febrero de 2021, de 6-10182001000100008
[Link] ● Cueto, M. (2005). "Diagnóstico
es-tratamientos/pruebas- microbiológico de la infección
diagnosticas/diagnostico- del tracto urinario".
infecciones-tracto- Departamento de microbiología.
urinario#:%7E:text=Un%20recu Vol. 23. Núm. S4. Pág. 9-
ento%20bacteriano%20mayor% 14.[Link]
20de,menor%20de%20100.000 revista-enfermedades-
%20UFC%2Fml infecciosas-microbiologia-
● Lemos, M. (2020, 11 clinica-28-articulo-diagnostico-
noviembre). Urocultivo: qué es, microbiologico-infeccion-del-
cómo se realiza y resultados. tracto-13091443
Recuperado 4 de febrero de ● Análisis clínicos.(2018, 10
2021, de Tua Saúde. Sitio web: septiembre) “7
[Link] recomendaciones para la
ocultivo/ recolecta y transporte de una
● COMITÉ DE MICROBIOLOGÍA muestra de orina”.
CLÍNICA. SOCIEDAD CHILENA [Link]
DE INFECTOLOGÍA (2001). /blog/entrada/29
