Rev. peru. biol.

15(2): 117- 124 (Febrero 2009)

© Facultad de Ciencias Biológicas UNMSM VersiónenOnline
Flavobacterium psychrophilum y su patología ISSN 1727-9933
Onchorhynchus mykiss

Flavobacterium psychrophilum y su patología en alevines de

Onchorhynchus mykiss del centro piscícola El Ingenio, Huancayo
Flavobacterium psychrophilum and its pathology in alevins of Onchorhynchus
mykiss from the El Ingenio fish farm, Huancayo

Jorge León1, Rita Ávalos1 y Milagros Ponce2

1 Laboratorio de Ecología Micro-
biana, Instituto de Ciencias Bioló- Resumen
gicas Antonio Raimondi (ICBAR),
Facultad de Ciencias Biológicas, En el presente trabajo se reporta la presencia de Flavobacterium psychrophilum, como agente causante de
Universidad Nacional Mayor de San la patología “enfermedad bacteriana del agua fría” en alevines de Onchorhynchus mykiss “trucha arco iris”
Marcos. Apartado postal 11-0058,
Lima-11, Perú. Email Jorge León:
del Centro Piscícola El Ingenio, Junín (3250 m de altitud). La lesión macroscópica externa más frecuente fue
[email protected] la ulceración profunda de la región dorsal del pez acompañado de un ennegrecimiento localizado de la piel.
2 Laboratorio de Microbiología, Internamente se observó una marcada esplenomegalia, palidez del hígado, riñón y branquias, inflamación
Centro Piscícola El Ingenio, Huan- del intestino y acumulación de líquido ascítico en el peritoneo. No se detectó hemorragia interna. En Agar
cayo, Perú. Cytophaga Modificado (ACM) según Anaker & Ordal (1959) fueron aisladas inicialmente 29 Gram negativas,
de las cuales según la caracterización fenotípica y pruebas bioquímicas 9 fueron consideradas como F. psy-
chrophilum. Pruebas de susceptibilidad antibiótica mostraron alta sensibilidad de las cepas a Gentamicina,
Ceftazidina, oxitetraciclina, Norfloxacina, furazolidona, Ciprofloxacina y Cefoxitina.
Palabras clave: Flavobacterium, Flexibacter, Enfermedad Bacteriana del Agua Fría, trucha arcoiris.
Abstract

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The present paper reports the presence of Flavobacterium psychrophilum such as pathological agent of
"bacterial disease of cold water" on juvenile Onchorhynchus mykiss "rainbow trout" from El Ingenio fish farm,
Junín (3250 m). The ulceration of the dorsal area was the most frequent macroscopic external injury as well
the localized blackening of the skin. Internally there was a marked splenomegaly, pallor of the liver, kidney and
gills, inflammation of the intestine and ascitic fluid in the peritoneum. Internal hemorrhage was not detected. 29
strain Gram negative were isolated in Modified Cytophaga Agar (MCA) (Anaker & Ordal, 1959), which accord-
ing to the phenotypic characterization and the biochemical tests 9 were considered as F. psychrophilum. Tests
Presentado: 19/05/2008 of antibiotic susceptibility showed high sensitivity of this strains to Gentamicin, Ceftazidine, oxytetracycline,
Aceptado: 17/07/2008 Norfloxacine, furazolidone, Ciprofloxacine and Cefoxitine.
Publicado online: 26/02/2009
Keywords: Flavobacterium, Flexibacter, Cold Water Bacterial Disease, rainbow trout.

Introducción causal de la “enfermedad o Síndrome del alevin de la trucha arco

El rápido desarrollo de la acuicultura y del intercambio iris” (Crump et al. 2001). Inicialmente, se consideró que esta
internacional de animales acuáticos cultivables ha traído como enfermedad se restringía al norte del continente americano, pero
consecuencia el progresivo crecimiento de los problemas pato- desde finales de la década de los años 80 se sabe que tiene una
lógicos, que a su vez ocasionan bajas de rendimiento y conside- distribución mundial que abarca Alemania (Weis 1987), Fran-
rables pérdidas económicas en muchos países dedicados a esta cia (Bernardet et al., 1988), Dinamarca (Dalsgaard & Horlyck
actividad (Cuéllar 1984). 1990), Reino Unido (Santos et al. 1992), España (Toranzo &
Barja 1993), Finlandia (Wiklund et al. 1994), Australia (Smit-
Las patologías de origen bacteriano representan un riesgo chke & Carson 1995), Japón (Wakabayashi et al. 1991) y Chile
importante en el desarrollo de la acuicultura continental (Padrós (Bustos et al. 1995). En la actualidad es probable que la bacteria
y Furones 2002). Las bacterias Gram negativas son las principales esté ampliamente diseminada a través del mundo (Ekman, 2003;
causantes de enfermedades en los salmónidos; siendo el grupo de Cipriano & Holt 2005).
las flavobacterias responsables de cuadros patológicos habituales
que afectan la piel, aletas y branquias y son conocidas como la En nuestro medio no existe literatura científica que describa
“enfermedad bacteriana de la branquia” o “enfermedad de la casos de la “enfermedad bacteriana del agua fría” o “Síndrome
columnaris”; pero en algunos casos como las infecciones por del alevín de trucha arco iris”. El presente estudio describe la
Flavobacterium psychrophilum (antes Flexibacter psychrophilus o patología de ésta enfermedad y las características de Flavobacte-
Cytophaga psychrophila) (Bernardet et al. 1996) pueden llegar a rium psychrophilum procedentes de un brote atípico que apareció
producir además serios procesos septicémicos (Padrós y Furones, entre los meses de junio, julio y agosto del año 2003, afectando
2002). Flavobacterium psychrophilum es un bacilo Gram negativo alevines de trucha arco iris (Oncorhynchus mykiss) en el Centro
que origina diversas patologías en peces salmónidos, desde ne- Piscícola El Ingenio - Huancayo.
crosis ulcerativa de la piel hasta una infección sistémica (Holt et Material y métodos
al. 1993). Ésta patología ha recibido diferentes denominaciones:
Muestreo
“enfermedad del pedúnculo”, “enfermedad del agua fría” (CWD)
(Borg, 1960), “enfermedad bacteriana del agua fría” (BCWD) Fueron seleccionados 14 alevinos enfermos de trucha arcoiris
(Holt et al. 1993) y el “síndrome del alevín de la trucha” (RTFS) de 5 a 7 cm de longitud provenientes de los estanques de cultivo
(Rangdale et al., 1996). La “enfermedad bacteriana del agua fría” de la piscigranja El Ingenio, Huancayo (Región Junín) (3250 m
ha sido detectada en la mayoría de las especies de salmónidos en de altitud). Paralelamente, muestras de agua fueron tomadas de
cultivo (Amos 1985; Dalsgaard 1993; Austin & Austin 1993). los estanques que contenían los especimenes afectados. Asimis-
Flavobacterium psychrophilum ha sido descrito como el agente mo, se determinaron la temperatura y pH del agua. A manera
de control se tomaron peces de apariencia sana.

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Procesamiento y aislamiento de flavobacterias siendo común la observación de lesiones macroscópicas evidentes

y frecuentes como el ennegrecimiento local de la piel, distensión
Las muestras fueron procesadas en el laboratorio de la pisci-
abdominal y ocasionalmente exoftalmia (Fig. 1b).
granja. Con el fin de aislar al patógeno se realizaron disecciones
asépticas de los peces para obtener muestras de líquido ascítico Otras características adicionales fueron la letargia, la inape-
del peritoneo, forúnculos, raspado de las ulceraciones cutáneas, tencia, natación errática y/o permanencia casi siempre aislado
maceración de órganos internos (bazo, hígado, riñón) y agallas; cerca de la salida del agua. La Figura 2 muestra los signos clínicos
las cuales fueron sembradas en el Agar Cytophaga Modificado más relevantes que afectan a los órganos internos como: esple-
según Anaker & Ordal (AOA) (1959) (triptona 0,5%; acetato nomegalia, palidez del hígado, riñón y branquias; inflamación
de sodio 0,02%; extracto de levadura 0,05%, extracto de carne del intestino y acumulación del líquido ascítico en el peritoneo.
0,05% y agar 1,5%) y Agar Tripticasa Soya (TSA). Paralelamente No se detectó hemorragias externas ni internas.
se prepararon láminas para la observación directa en “gota pen-
En preparaciones frescas y coloreadas procedentes de úlceras
diente” y frotis para la coloración Gram. Las muestras controles
se observaron bacilos finos en disposición de “empalizada” (Fig.
(peces sanos) y las muestras de agua, también fueron procesadas
3a) o filamentosas (Fig. 3b) con motilidad presuntamente desli-
bajo las mismas condiciones. Los cultivos fueron incubados a
zante. En otros casos, no se detectó motilidad aparente.
20 °C por 48 a 96 horas.
Los signos clínicos de la flavobacteriosis en salmónidos así
Pruebas de identificación
como la mortalidad dependen del tamaño de los peces afectados.
Las pruebas fueron realizadas en el Laboratorio de Micro- Sin embargo, Flavobacterium psychrophilum se caracteriza por
biología Ambiental y Biotecnología de la Facultad de Ciencias causar infecciones agudas principalmente en alevinos, caracteri-
Biológicas de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos, zados por una marcada erosión dorsal y/o peduncular acompaña-
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Lima. Las lecturas presuntivas se realizaron a partir de cultivos da de una pigmentación oscura, además por causar mortandad
de 48 h de incubación y consistieron en la observación directa de hasta 50% de la población afectada (Holt et al. 1993).
cultivos en “gota pendiente” acompañadas de coloración Gram,
Según el cuadro patológico y las características fenotípicas de
y pruebas bioquímicas preliminares según las recomendaciones
las 9 cepas evaluadas en este estudio, observamos gran similitud
de Skarmeta (1996). Para la identificación preliminar se selec-
con el “síndrome del alevín de trucha arcoiris” causado por Fla-
cionaron colonias del medio AOA y TSA con características
vobacterium psychrophilum causante de la enfermedad bacteriana
similares tanto de morfología como de coloración Gram. La
del agua fría (“Bacterial Cold Water Disease” o BCWD). Este
identificación final de las Gram negativas se realizó siguiendo
cuadro patológico fue descrito por primera vez en alevines de
la metodología convencional según Austin & Austin (1993); y
trucha arco iris (O. mykiss) en Estados Unidos (Davis 1946) con
para el caso particular de las flavobacterias se tomó en cuenta
el nombre de enfermedad del pedúnculo. La enfermedad fue
además la metodología señalada por Cipriano et al. (1996) y
posteriormente descrita en alevines de salmón coho (O. kisuth)
Shotts & Starliper (1999).
por Borg (1960), quien la denominó como enfermedad de baja
Susceptibilidad in vitro a diversos antimicrobianos temperatura o enfermedad bacteriana del agua fría y propuso a
Cytophaga psychrophila como el agente causal. En los últimos 20
Las cepas aisladas de alevines con patología de ulceración
años han sido descritas en diferentes partes del mundo patologías
de la piel y órganos internos afectados, previa coloración Gram
similares en alevinos, juveniles y adultos de “trucha arcoiris”,
fueron sometidos a pruebas de sensibilidad in vitro frente a
todas bajo el nombre genérico de síndrome del alevin de trucha
diversos antimicrobianos mediante la técnica de Kirby-Bauer,
arcoiris (“Raibow Trout Fry Sindrome” o RTFS) (Bernardet et
según recomendaciones del National Committee for Clinical
al. 1988; Sarti et al. 1992; Toranzo & Barja 1993; Bustos et al.
Laboratory Standards (NCCLS, 1991). A partir de colonias de
1995; Ostland et al. 1999; Madetoja et al. 2001; Lorenzen et al.
48—72 horas, se preparó una suspensión con una concentración
1991; Wakabayashi et al. 1991; Wiklund et al. 1994; Rangdale
equivalente al tubo 0,5 McFarland (1,5x108 ufc/ml) y se sembró
1999; Nematollahi et al. 2003).
mediante una tórula en TSA y AOA. Se utilizaron sensidiscos
con los antimicrobianos: bacitracina (10 µg), norfloxacino (10 Flavobacterium psychrophilum ha sido aislada también en
µg), ciprofloxacino (5 µg ), ampicilina (10 µg), cefoxitina (30 peces no salmónidos (Amita et al. 2000; Madetoja et al. 2002),
µg), clindamicina (2 µg), ácido nalidixico (30 µg), penicilina sin embargo en todos los casos, el agente etiológico presentaba
(10 U), gentamicina (10 µg), ceftazidina (30 µg), furazolidona características similares a las descritas por Borg (1960) siendo
(100 µg), oxitetraciclina (30 µg) y sulfatrimetoprim (25 µg). Se denominado primero como Cytophaga psychrophila, luego como
incubaron por 5 días a 20 °C. Flexibacter psychrophilus y actualmente Flavobacterium psychro-
philum (Cipriano & Holt 2005).
Resultados y discusión
Signos anátomo-patológicos En un cuadro de infección externa o sistémica el patógeno
principal generalmente es asociado con otras bacterias principal-
Los especimenes enfermos (14) de alevines de “trucha arcoiris” mente Gram negativas como Yersinia, Edwarsiella, Pseudomonas,
(5—7 cm de longitud y 25 g de peso promedio) analizados en Aeromonas y otros (Padrós y Furones 2002).
este estudio presentaban macroscópicamente cuadros patoló-
gicos muy evidentes de erosiones o ulceraciones severas y muy Características de cultivo bacteriano y pruebas bioquími-
profundas que afectaban la piel, músculo, aleta dorsal y región cas de identificación
del pedúnculo caudal del huésped a manera de “silla de montar” A partir de las muestras patológicas se lograron aislar tanto del
(Fig. 1a). En general, los alevines afectados se mostraron con un medio AOA como del TSA un total de 29 cepas Gram negativas,
cuadro de lesiones propias de una infección aguda o sub-aguda, las cuales mostraron características de colonia algo similares

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(a)

Figura 2. Signos clínicos: : esplenomegalia, palidez del hígado, riñón

y branquias; inflamación del intestino y acumulación del líquido as-
cítico en el peritoneo. observados a nivel de órganos internos en un
espécimen juvenil de “trucha arco iris” causados por Flavobacterium
psychrophilum.

venientes del medio AOA, debido a que TSA por ser un medio
muy enriquecido permitió crecimiento de colonias morfológica-
mente variables. Microscópicamente, resultaron ser todos Gram
negativos, bacilos finos o bastoncillos delgados rígidos, algunos
filamentosos (Fig. 3c). La motilidad de las bacterias, determinada
a partir de colonias y caldos de crecimiento mediante la técnica
(b)

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de “gota pendiente”, mostró resultados heterogéneos. En 9 casos
se confirmó la motilidad deslizante y en otras ocasiones dicho
carácter se mostró muy discreto o de tipo flagelar al igual que
otros Gram negativos. Entre otras características preliminares las
reacciones de oxidasa y catalasa resultaron positivas en todos los
casos, con excepción de las cepas 11 y 16 que resultaron catalasa
negativas (Tabla 1). A partir de las muestras de agua procesadas
no se lograron aislar colonias presuntivas de flavobacterias.

Figura 1. Cuadro característico de la “Enfermedad Bacteriana de Agua Los signos externos de la enfermedad no tienen gran valor
Fría” o “Síndrome del Alevín de Trucha Arco Iris” en Onchorhynchus para diagnosticar al patógeno Flavobacterium psychrophilum,
mykiis (a); ocasionalmente se observa casos de pigmentación de la porqué son similares a los observados en peces afectados por
piel y exoftalmia (b). otras enfermedades como la “columnaria” (bacteriana) y la
(Tabla 1). Dichas colonias presentaron un tamaño comprendido Necrosis Pancreática Infecciosa (viral). Sin embargo el examen
entre 1 a 4 mm de diámetro, circulares, lisas, borde entero u microscópico de muestras de úlceras y órganos internos afectados
ondulado, aplanadas o poco elevadas, translúcidas, la mayoría como el riñón y el hígado permiten una buena identificación
no pigmentadas o de escasa pigmentación y algunas adheridas preliminar al observar células bacterianas filamentosas (Austin
al medio. Se tomaron en cuenta mayormente las colonias pro- & Austin, 1993; Fig. 3b).

(a) (b) (c)

Figura 3. Observación microscópica de flavobacterias: coloración Gram de un frotis directo de una úlcera cutánea (a); frotis de un órgano
interno afectado (b); Gram a partir de una colonia en el medio AOA (c).

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Tabla 1. Origen y características primarias de 29 cepas de bacterias aisladas de alevines enfermos de Oncorhynchus mykiss “trucha arco
iris”, Centro Piscícola El Ingenio, Huancayo, 2003. En negrita: cepas identificadas como Flavobacterium psychrophilum.

Cepa Fuente de aislam.(*) Estanque Gram Motilidad (**) Oxidasa Catalasa Características de colonia (***)

1 H 1 - F + + Mucoide, circular, SP
2 H 1 - F + + Mucoide, circular, SP
3 H 1 - F + + Mucoide, circular, SP
4 UE 7 - F + + Lisa, aplanada, SP
5 UE 7 - F + + Lisa, aplanada, SP
6 UE 8 - F + + Mucoide, grisáceo
7 UE 8 - F + + Mucoide, grisáceo
8 UE 20 - D + + Mucoide, convexo, AT
9 R 20 - I + + Mucoide, circular, SP
10 R 28 - PD + + Lisa, aplanada, NT
11 R 28 - PD + - Lisa, aplanada, NT
12 UE 28 - I + + Mucoide, lisa, incolora
13 UE 28 - D + + Mucoide, lisa, PN
14 H 7 - F + + Mucoide, aplanada, SP
15 H 7 - F + + Mucoide, lisa, SP
16 UE 1 - I + - Lisa, aplanada, SP
17 UE 1 - I + + Mucoide, lisa, incolora
18 UE 1 - I + + Mucoide, lisa, AT
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19 O 7 - F + + Mucoide, lisa, incolora

R28 R 28 - I + + Lisa, aplanada, NT
R8 R 8 - F + + Lisa, aplanada, SP
ULC8 UE 8 - D + + Lisa, aplanada, NT
ULC19 UE 19 - D + + Mucoide, lisa, AT
ULC28 UE 28 - F + + Mucoide, lisa, SP
AGA19 A 19 - F + + Mucoide, grisáceo
ULC7 UE 7 - I + + Lisa, aplanada, SP
ULC20 UE 20 - PD + + Lisa, aplanada, NT
HIG7 H 7 - I + + Lisa, aplanada, SP
FOR19 For 19 - PD + + Lisa, aplanada, AT
(*) H: hígado; R: riñón; UE: úlcera externa; O: globo ocular; A: agallas; For: forúnculo.
(**) I: inmóvil; PD: pobremente deslizante; D: deslizante; F: movimiento flagelar.
(***) SP: sin pigmento aparente; AT: amarillo tenue; NT: naranja tenue; PN: pigmento naranja.

En el medio Agar Anacker & Ordal (AOA), F. psychrophilus mayoría de las cepas resultaron con escasa o nula actividad so-
produce colonias convexas, brillantes, con borde entero o difusos bre el almidón, quitina, alginato y carboximetilcelulosa. Estos
que no se adhieren al agar y que producen un pigmento amarillo resultados sobre flavobacterias concuerdan con los de Cipriano
no difusible del tipo flexirrubina. Nuestras cepas no presenta- & Holt (2005).
ron una pigmentación evidente, salvo algunas que mostraron
En relación al examen microbiológico, podemos afirmar que
pigmentos amarillo y naranja tenues (Tabla 1).
las células bacterianas del agente patógeno a pesar de presentar
Respecto al metabolismo oxido-fermantivo de las 29 cepas, variantes morfológicas, en líneas generales guarda estrecha
la mayoría (13 de 29) degradó glucosa en presencia de oxígeno; relación con las bacterias filamentosas del grupo Cytophaga-
sin embargo algunas cepas mostraron un comportamiento típico Flexibacter descritas por Lorenzen et al. (1991), Wakabayashi
de fermentador (6 de 29); sin embargo, en ningún caso produ- et al. (1991) y Lorenzen et al. (1997). Respecto a la motilidad
jeron gas. Solo en dos casos se observó presencia de H2S. Las Bernardet & Kerouault (1989) determinaron a Flavobacterium
cepas presuntivas de flavobacterias se mostraron no oxidantes o psychrophilum como un género “pobremente deslizante” lo cual
excepcionalmente oxidantes de glucosa (Tabla 2). El crecimiento concuerda con la mayoría de las cepas aisladas en este trabajo,
frente a diferentes valores de temperatura indica que crecen favo- en especial con 9 cepas provenientes de ulceraciones y órganos
rablemente a 20 °C, aunque algunas crecieron muy bien entre 5 internos (Tabla 3).
y 30 °C. Todas las cepas crecieron sin y con NaCl (hasta 1,0%).
Asimismo, otros patógenos oportunitas aislados en el pre-
Holt (1994), Ekman (2003), y Cipriano & Holt (2005) señalan
sente trabajo fueron Aeromonas (6/29) y Pseudomonas (6/29)
que Flavobacterium psychrophilum crece muy bien en cultivos
(Tabla 3).
de 3 a 6 días a 15—20 ºC de incubación, así como también en
su hábitat natural, en ríos y lagos con temperaturas que oscilan Las características de cultivo y pruebas bioquímicas nos per-
entre 10 y 18 ºC. Otras características fenotípicas consideradas miten identificar al agente patógeno como miembros del grupo
en el estudio de las 29 cepas mostraron resultados variables frente Cytophaga-Flexibacter-Flavobacterium. Flavobacterium psychro-
a diferentes polímeros; sin embargo, la capacidad degradativa philum también ha sido encontrado en el mucus, riñón, bazo,
de las flavobacterias sobre la gelatina, caseína, Tween 80, DNA fluido ovárico y fluido seminal de peces sexualmente maduros y
y lecitina fue bastante homogénea (Tabla 3). Por otro lado, la en la superficie de los huevos (Holt et al. 1993; Lorenzen 1994;

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 Flavobacterium psychrophilum y su patología en Onchorhynchus mykiss

Tabla 2. Características bioquímicas y fisiológicas de 29 cepas de bacterias aisladas de alevines enfermos de Oncorhynchus mykiss “trucha
arco iris”, Centro Piscícola El Ingenio, Huancayo, 2003. En negrita: cepas identificadas como Flavobacterium psychrophilum.

Tº crecimiento (ºC) Tolerancia a NaCl (%)

Cepa Reducción de NO3 a NO2 Prueba de O/F H2S Gas Indol 5 20 30 0 0,5 1,0
1 + F - - + + + - + + +
2 + F - - + - + + + + +
3 + F - - + + + + + + +
4 + O - - + - + + + + +
5 + O - - - - + - + + +
6 + O - - - - + - + + +
7 + O - - + - + + + + +
8 + - - - + + + - + + +
9 - - + - - - + - + + +
10 - - + - - - + - + + +
11 - - - - + - + - + + +
12 + O - - - - + + + + +
13 - - - - - - + - + + +
14 - O - - - - + - + + +
15 + F - - + - + - + + +
16 - - - - - - + + + + +
17 + O - - + - + - + + +

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18 - O - - - - + - + + +
19 + F - - + - + + + + +
R28 - O - - - - + + + + +
R8 + F - - + - + + + + +
ULC8 - - - - - - + + + + +
ULC19 - - - - + - + - + + +
ULC28 + O - - + - + + + + +
AGA19 - F - - - + + + + + +
ULC7 + O - - + - + - + + +
ULC20 - O - - + - + - + + +
HIG7 + O - - + - + - + + +
FOR19 + - - - - + + - + + +
F: fermentador de glucosa; O: oxidador de glucosa; - : sin reacción o alcalinidad del medio

Obach et al. 1995). Esto sugiere que la bacteria podría ser trans- 1991; Bertolini et al. 1994; Bustos et al. 1995). Respecto a las
mitida verticalmente e indica el riesgo de su introducción en otras condiciones ambientales del lugar de muestreo (El Ingenio) es
áreas geográficas debido al transporte incontrolado de huevos y necesario precisar que dicha epizootia ocurrió justamente en
alevines infectados (Holt et al., 1993; Obach et al., 1995). Si bien los meses de mayor irradiación solar (junio, julio y agosto) y
todos estos datos sugieren que tanto los peces como el medio en estanques desprotegidos, disminuyendo considerablemente
ambiente pueden constituir un reservorio del microorganismo, la mortandad cuando se recurrió a la protección solar. Hasta el
no se han realizado estudios para esclarecer este aspecto. momento se han realizado pocos estudios con el fin de esclarecer
los mecanismos de virulencia de F. psychrophilum. Las proteasas
La manifestación de la enfermedad del agua fría así como el
extracelulares podrían contribuir a la patogenicidad, ya que se
curso de la epizootia están profundamente influenciados por la
ha demostrado que producen diferentes enzimas proteolíticas
temperatura del agua. Generalmente la enfermedad se manifiesta
capaces de degradar gelatina, caseína, tirosina, elastina, fibri-
cuando del agua oscila entre 4 y 10 °C y sigue su curso hasta
nógeno, colágeno y extracto de músculo que podrían causar
que la temperatura del agua alcanza los 13 °C. En este sentido,
lesiones en los tejidos o incrementar la capacidad invasiva de
la temperatura del agua del lugar de estudio fue en promedio 10
las cepas (Dalsgaard 1993). Al respecto, las cepas aisladas en el
ºC, el cual es ideal para el desarrollo del patógeno. Aunque tem-
presente estudio mostraron una actividad extracelular de gran
peraturas superiores normalmente conducen a la desaparición
consideración principalmente gelatinasa y lecitinasa (Tabla 3).
de la enfermedad (Holt et al., 1989) se han descrito epizootias a
No se han investigado otros potenciales factores de virulencia
temperaturas del orden de 16 °C (Obach et al. 1995). A tempe-
relacionados con la superficie celular como son la adherencia e
raturas superiores a 15 °C la mortalidad declina progresivamente
invasividad o la capacidad para sobrevivir en el interior de las
hasta llegar cerca del 0% a 23 °C.
células fagocíticas.
Además de la temperatura del agua existen otros factores
Por otra parte, los brotes mas graves de la enfermedad del
ambientales desencadenantes de las epizootias como la irra-
agua fría se producen en alevines que aún no han reabsorbido
diación solar directa a los alevines muy jóvenes, el estrés, la
el saco vitelino y por lo tanto no se alimentan mediante pienso
superpoblación y otros factores inherentes al pez (talla, estado
(Nematollahi et al. 2003), lo que imposibilita su medicación a
inmunológico) que pueden condicionar la aparición y/o de-
través de la dieta. La vacunación en esta etapa es inefectiva o
sarrollo de la enfermedad (Obach et al. 1995). A todo ello, se
confiere una protección limitada (Obach & Baudin-Laurencin
debe agregar la virulencia de la cepa bacteriana (Lorenzen et al.

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Tabla 3. Producción de Enzimas Extracelulares (EEC) de 29 cepas de bacterias aisladas de alevines enfermos de Oncorhynchus mykiss
“trucha arco iris”, Centro Piscícola El Ingenio, Huancayo, 2003. En negrita: cepas identificadas como Flavobacterium psychrophilum.

Producción cualitativa de enzimas extracelulares (EEC)

Cepa GEL CAS QUIT AM LEC TWsa ALG CMC DNA Identificación
1 ++++ ++ - (+) ++ ++ - - - Aeromonas sp.
2 ++++ ++ - - ++ +++ - - - Aeromonas sp.
3 +++ ++ - (+) ++ +++ - - - Aeromonas sp.
4 +++ + - - ++ +++ - - ++ Pseudomonas sp.
5 ++++ - - - +++ +++ - - +++ Pseudomonas sp.
6 +++ ++ - + ++ ++ - - ++ Pseudomonas sp.
7 ++++ + - - ++ +++ - - +++ Pseudomonas sp.
8 ++++ ++ - - (+) +++ - - ++ F. psychrophilum
9 +++ - - - ++ ++ - - - NI
10 +++ +++ - (+) (+) +++ - - - F. psychrophilum
11 ++++ ++ - - - +++ - - - F. psychrophilum
12 +++ +++ - - + ++ - - +++ Pseudomonas sp.
13 +++ + - - + - - - +++ F. psychrophilum
14 ++ - - + - - - - +++ NI
15 +++ ++ - + ++ +++ - - +++ Aeromonas sp
16 ++ - - ++ +++ ++ - - - Flavobacteriun sp.
http://sisbib.unmsm.edu.pe/BVRevistas/biologia/biologiaNEW.htm

17 ++ ++ - + +++ +++ - - +++ Flexibacter sp.

18 + ++ - - (+) ++++ - - +++ F. psychrophilum
19 ++ ++ - - +++ +++ - - +++ Aeromonas sp.
R28 + ++ - - - ++ - - - F. psychrophilum
R8 + ++ - - ++ ++ - - - Aeromonas sp.
ULC8 +++ +++ - (+) - +++ - - +++ F. psychrophilum
ULC19 +++ + - - (+) ++ - - +++ F. psychrophilum
ULC28 +++ + - (+) ++ +++ - - +++ Pseudomonas sp.
AGA19 ++++ ++ - + ++ - - - - NI
ULC7 +++ + - (+) ++ ++ - - +++ Flavobacterium sp.
ULC20 +++ ++ - - (+) ++ - - +++ F. psychrophilum
HIG7 +++ ++ - - ++ ++ - - ++ Flavobacterium sp.
FOR19 - - - - - - - - - Flexibacter sp
EEC: GEL (gelatinasa); CAS (caseínasa); QUIT (quitinasa); AM (amilasa); LEC (lecitinasa); TWsa (tween esterasa); ALG (alginasa); CMC (caboximetilcelulasa); DNA (DNAsa).
Halos de actividad enzimática (mm de diámetro): (+): reacción débil; +: <5 mm; ++: 5-15 mm; +++: 16-30 mm; ++++: >30 mm; -: sin actividad.
En negrita: cepas identificadas como Flavobacterium psychrophilum; NI: cepa no identificada.

1991; Lorenzen 1994). Por otra parte, la posible diversidad El cloranfenicol fue el antibiótico más usado para el trata-
serológica de las cepas de F. psychrophilum debe ser tomada en miento de la enfermedad del agua fría, sin embargo, desde su
cuenta en el desarrollo de una vacuna. prohibición la oxitetraciclina bajo diferentes prescripciones te-
rapéuticas es la terapia mas eficaz en la actualidad (Bruun et al.,
Actualmente, los análisis serológicos tipo aglutinación son de 2003). Generalmente, la enfermedad del agua fría es controlada
gran utilidad para el diagnóstico confirmativo de la enfermedad
del agua fría, así como ensayos de anticuerpos fluorescentes Tabla 4. Sensibilidad in vitro de 29 cepas de bacterias aisladas de alevines
enfermos de Oncorhynchus mykiss “trucha arco iris”, frente a diferentes
(Holt 1994), pero se ha determinado la existencia de reacciones
antimicrobianos. Centro Piscícola El Ingenio, Huancayo, 2003.
cruzadas con otras bacterias filamentosas como F. columnaris u
otros grupos bacterianos (Faruk et al. 2002; Mata et al. 2002). Sensibilidad
Actualmente para muestras de campo existen varios métodos Antimicrobiano (μg) Sensible Intermemedia Resistente
de identificación todos basados en técnicas moleculares como
Nº % Nº % Nº %
PCR y RFLP (Baliarda et al. 2002; Nilsson & Strom 2002; del
Ac. Nalidíxico (30) 14 48,2 9 31,0 6 20,6
Cerro et al. 2002a y b).
Bacitracina (10) 1 3,4 3 10,3 25 86,2
Sensibilidad frente a diversos antimicrobianos Ciprofloxacina (5) 22 75,8 7 24,1 - -
Norfloxacina (10) 27 93,1 - - 2 6,8
La sensibilidad de las 29 cepas de bacterias aisladas de alevines Ampicilina (10) 3 10,3 3 10,3 23 79,3
enfermos fue variable frente a diferentes antibióticos, sin embar- Cefoxitina (30) 22 75,8 1 3,4 6 20,6
go, todas mostraron sensibilidad antibiótica propia de bacterias Clindamicina (2) 2 6,8 1 3,4 26 89,6
Gram negativas. Resultaron altamente sensibles frente a Genta- Penicilina (10U) - - 1 3,4 28 96,5
micina (100%), Ceftazidina (100%), oxitetraciclina (93,1%), Furazolidona (100) 26 89,6 3 10,3 - -
Norfloxacina (93,1%), furazolidona (89,6%), Ciprofloxacina Gentamicina (10) 29 100 - - - -
(75,8%) y Cefoxitina (75,8%) (Tabla 4). Asimismo, resultaron Ceftazidina (30) 29 100 - - - -
altamente resistentes frente a sulfatrimetoprim (100%), penici- Oxitetraciclina (30) 27 93,1 2 6,8 - -
lina (96,5%), clindamicina (89,6%) y bacitracina (86,2%). Sulfatrimetoprim (25) - - - - 29 100

122 Rev. peru. biol. 15(2): 117- 124 (Febrero 2009)

 Flavobacterium psychrophilum y su patología en Onchorhynchus mykiss

por medios terapéuticos, aunque el constante uso de éstos ha Cerro del, A., I. Marquez & A. Guijarro. 2002b. simultaneous
provocado la aparición de cepas resistentes (Holt et al., 1993; detection of Aeromonas salmonicida, Flavobacterium
Lorenzen, 1994; Obach et al., 1995). psychrophilum and Yersinia ruckeri, three major fish
pathogens by multiplex PCR. Appl. Environ. Microbiol.
Agradecimientos 68: 5177-5180.
Los autores agradecen a los directivos y trabajadores del Cen- Cipriano, R.C.; W.B. Schill; J.D. Teska & L.A. Ford. 1996. Epi-
zootiological Study of Bacterial Cold-Water Disease in
tro Piscícola El Ingenio - Huancayo, en especial al Blgo. Jorge
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