¨Universidad Mayor de San Andres¨
LABORATORIO DE QUIMICA ORGANICA
CROMATOGRAFIA
DOCENTE : ING. ALVARO SANTIAGO ARIAS CARDENAS
ESTUDIANTE: UNIV. KATHERINE MELISSA RIOJA ORTEGA
CARRERA: INGENIERIA INDUSTRIAL
AÑO ACADEMICO : 1/2021
CROMATOGRAFIA
RESUMEN.-
La cromatografía es un método físico de separación para la caracterización de
mezclas complejas cuyo objetivo es separar los distintos componentes, la cual tiene
aplicación en todas las ramas de la ciencia; en el principio de retención selectiva,
cuyo objetivo es separar los distintos componentes de una mezcla, permitiendo
identificar y determinar las cantidades de dichos componentes. Diferencias sutiles
en el coeficiente de partición de los compuestos dan como resultado una retención
diferencial sobre la fase estacionaria y, por tanto, una separación efectiva en función
de los tiempos de retención de cada componente de la mezcla.
I. OBJETIVOS
La cromatografía es una técnica de separación a nivel solamente de laboratorio
por la cual se pueden diferenciar compuestos muy similares en cuanto a
propiedades y estructuras. En este laboratorio se harán cromatografía de papel y
de capa fina, diferenciando por éstas una mezcla de caroteno y clorofila. La
cromatografía de papel será una referencia para elegir dos disolventes adecuados
y la cromatografía de capa fina se hará para separar los componentes de la
muestra.
II. FUNDAMENTO TEORICO
La cromatografía es un procedimiento físico químico que permite separar e
identificar los componentes o sustancias integrantes de una mezcla. Está basada
en la distribución de la muestra entre dos fases. Una fase es una superficie
estacionaria o inmóvil y la otra es la fase móvil que percola sobre la fase
estacionaria.
La separación se puede llevar a cabo en una columna tubular rellena de un sólido
poroso finamente dividido, el cual a su vez puede actuar como fase estacionaria
propiamente dicha, o como soporte de una fase estacionaria líquida. La
separación también se puede efectuar utilizando como fase estacionaria papel
filtro o un sólido finamente dividido colocado en forma de capa fina sobre una
placa de vidrio. Estos tres tipos de cromatografía se basan en los mismos
principios fundamentales y se conocen respectivamente como:
CROMATOGRAFÍA EN COLUMNA
CROMATOGRAFIA DE PAPEL
CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA
Clasificación de los métodos cromatográficos:
FASE MÓVIL FASE ESTACIONARIA MÉTODO
Líquida Gas – líquido
Gaseosa
Sólida Gas – sólida
Líquida Líquida – sólido
Líquida
Sólida Líquido – sólido
Iónica Intercambio iónico
Mecanismos cromatográficos
La técnica cromatográfica tiene fenómenos diferentes, en los que se distinguen
tres:
Cromatografía por adsorción, de partición o reparto, y por adsorción polar o
intercambio iónico.
En la cromatografía gaseosa, la fase móvil es un gas y usualmente, es en
columna.
La cromatografía líquida puede realizarse en columna o ser plana. La primera
puede tener como fase estacionaria un sólido, un líquido impregnado en sólidos o
resinas de intercambio iónico. Si es plana, puede ser cromatografía de papel o
cromatografía de capa fina.
El proceso cromatográfico de adsorción consiste en hacer pasar una solución de
la sustancia a través de un adsorvente o de adsorventes convenientes
superpuestos. Los adsorventes son sustancias pulverulentas, que pueden ser:
alúmina, carbonato de calcio, cal carbón activado, resinas sintéticas, gel de sílice,
sacarosa, celulosa, etc.
Los constituyentes de las sustancias se retienen selectivamente sobre la superficie
de los adsorventes, al pasar por o sobre ellos. La relación de este proceso es con
los tipos de columna y de capa fina.
El proceso cromatográfico de partición consiste en separar los constituyentes de
una mezcla utilizando las diferencias en sus coeficientes de reparto o distribución
de una sustancia entre dos fases líquidas inmiscibles o parcialmente miscibles.
Una sola fase es móvil, la otra es generalmente agua inmovilizada por saturación
en sólidos. Este proceso está relacionado con el tipo de columna de papel.
El proceso cromatográfico de intercambio iónico, consiste en hacer pasar una
solución por una columna de cambiadores iónicos, donde la solución cambia sus
aniones si la resina (intercambiador) es cambiadora de iones, y la solución cambia
sus cationes por los protones de la resina si esta es catiónica.
Tanto en la cromatografía de adsorción, como en la de reparto es muy importante
la relación entre la velocidad del movimiento del sólido y la velocidad de
movimiento del disolvente, es decir, la siguiente expresión:
velocidad de movimiento del soluto
Rf =
velocidad de movimiento del disolvente
Para la cromatografía en capa fina y de papel el disolvente y el soluto empiezan a
moverse desde el mismo punto, dando lugar a la relación simplificada:
distancia recorrida por el soluto
Rf =
distancia recorrida por el disolvente
En la práctica, la distancia recorrida por el soluto en un tiempo determinado se
mide desde el punto de aplicación del soluto hasta el centro de su zona de
distribución, en tanto que la distancia recorrida por el disolvente se mide desde el
mismo origen hasta el extremo de su máximo recorrido.
Cromatografía en papel
La separación de las sustancias o componentes de una mezcla por migración
diferencial sobre la superficie del papel filtro, donde la selección de los disolventes
es el factor más importante, por lo que hay que considerar la naturaleza química
de las sustancias químicas que se desean separar más la viscosidad y polaridad
del disolvente.
Cromatografía en capa delgada
La separación de las sustancias de una mezcla por migración diferencial sobre
una capa delgada de un adsorbente o gel, con o sin aglutinante, embadurnado en
un soporte rápido y flexible.
Los aspectos técnicos (aplicación de la muestra, desarrollo, localización,
determinaciones cuantitativas, etc) de la cromatografía en papel y en capa fina son
muy parecidos. Los adsorbentes más utilizados son gel de sílice y el óxido de
aluminio o alúmina.
Dependiendo del adsorbente, de su actividad y los de clase de los compuestos
empleados como solutos se pueden utilizar una gran variedad de disolventes.
Etapas fundamentales del análisis cromatográfico
1. Adsorción de las sustancias a separar, normalmente disueltas en disolventes
no polares como el éter de petróleo.
2. Desarrollo, en que los materiales adsorbidos se extienden por la acción de un
flujo continuo de la disolución o de un disolvente puro.
3. Recuperación de los componentes separados , realizada normalmente por
elusión del material adsorbido mediante un disolvente más polar, o varios
disolventes sucesivamente empleados, que van separando a los materiales
deseados.
4. Identificación y medida de las sustancias individuales por distintos medios,
como reacciones coloreadas, fluorescencia ultravioleta, espectrofotometría de
absorción, etc.
La eficacia de la separación depende de factores como la naturaleza química de
los componentes a separar, el disolvente y del adsorbente.
III. METODICA EXPERIMENTAL
1. CROMATOGRAFIA EN PAPEL
Materiales:
-Probeta de 25 ml
-vaso de precipitado
-Vidrio reloj
-mortero y pilón
-embudo de vidrio
-papel filtro
-aro metálico
-marcadores distintos colores
reactivos
-éter di etílico
-cloroformo
-acetona
-ISO propanol
-etanol
-espinaca
Procedimiento.-
Dividimos el papel en 4 rectángulos de 8 cm por 3 procedemos a marcar en
cada rectángulo una línea de referencia preparamos nuestra cámara cromato
gráfica en cada vaso de precipitados con 3 ml de cloroformo 3ml de acetona y
3 gotas de ISO propanol procedemos a sembrar la muestra que consiste en
colocar 3 puntos diferentes de colores el color negro rojo y azul en cada papel
filtro realiza en el mismo procedimiento y en cada rectángulo procedemos a
colocar cada rectángulo en cada cámara cromato gráfica cada cámara tendrá
un tiempo de estudio entre 20 25 30 y 35 minutos pasado el tiempo obtenemos
la primera muestra y así sucesivamente después de pasar los 25 y los 30 y los
35 minutos procedemos a medir las muestras.
La muestra 1 sería del disolvente 5.8 cm color negro 2 mm con los rojos 5.3 cm
y color azul 6 mm la muestra número 2 será 24,8 centímetros de color negro 1
mm de color rojo 4.7 cm de color azul 1.1 cm, continuamos con las mediciones
la media la muestra número 3, 25.3 cm color negro 2 mm color rojos 5.2 cm
color azul 0.7 cm finalmente la muestra 4 disolventes 5.3 cm color negro 1 mm
color rojo 5.2 cm y color azul 1 cm realizamos los cálculos con este disolvente
vemos que el color negro no avanzo lo esperado por lo que simultáneamente
se prepara una solución etanol agua una a una para observar algún cambio
con este disolvente podemos ver resultados más óptimos al fin de esta
actividad extra fue detectar el mejor disolvente para futuro obtener mejores
resultados .
CROMATOGRAFÍA EN PAPEL DOS
Procedimiento .-
En este procedimiento se utilizará otros disolventes y solo un color, este
procedimiento empieza por cortar un papel filtro de 15 por 1 cm se coloca la
correspondiente marca se prepara el disolvente y la placa cromatografía
etanol y agua le siembra de la mezcla será una línea gruesa y de un solo color
ya con la siembra lista procedemos a colocarla dentro de la cámara
cromatografía esperamos 50 minutos aproximadamente para poder observar
los resultados finalmente procedemos a la medición del recorrido de los colores
disolvente 7.9 cm color azul 1.5 cm color amarillo 4 cm color verde 1. 9 cm
PROCEDIMIENTO NÚMERO 3 PIGMENTOS ORGÁNICOS
Trituramos la espinaca con la ayuda del éter dietílico 10 ml y estructurado
filtramos para obtener dos o 3 ml procedemos a preparar la placa
cromatografía luego al sembrado de la muestra colocamos la placa dentro del
disolvente y observamos resultados pasado un considerable tiempo se puede
observar la separación de colores que era el objetivo .
2. CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA
Materiales :
-mortero y pilón
-3 vasos de precipitado
-gredilla
-probeta
-tubo de ensayo
-placa de sílisica gel
-Sulfato de sodio anhidro
-etanol
- hexano
-cloroformo
-acetona
Procedimiento.-
Ya triturado el extracto se le aumenta sulfato de sodio anhidro se preparan varias
cámaras cromato gráficas la primera cámara hexano más cloroformo segunda
cámara acetona más hexano tercera cámara etanol más cloroformo sí llama a
cada placa en las cámaras y esperando el desarrollo cromatográfico procedemos
a colocar cada placa en las cámaras y esperar el desarrollo prometo gráfico
después de un tiempo observamos cómo quedaron las placas procedemos a
describir los resultados realizados y realizar los cálculos y conclusiones .
DATOS Y CALCULOS.-
CROMATOGRAFIA EN PAPEL 1
CAMARA
CROMATOGRAFICA
CLOROFORMO 3ml
ACETONA 3ml
ISO PROPANOL 3gotas
TIEMPO(MIN) NEGRO(MM) ROJO(CM) AZUL( CM) DISOLVENTE
Camara 1 20 2 5,3 0,6 5,8
Camara 2 25 1 4,7 1,1 4,8
Camara 3 30 2 5,2 0,7 5,3
Camara 4 35 1 5,2 1 5,2
FACTOR DE
RETENCION
COLOR CAMARA 1 CAMARA 2 CAMARA 3 CAMARA 4
Negro(cm) 29 48 26,5 52
Rojo(cm) 1,09 1,02 1,02 1
Azul( cm) 9,66 4,4 7,8 5,20
CROMATOGRAFIA EN PAPEL 2
CAMARA
CROMATOGRAFICA
ETANOL 3
AGUA 3
FACTOR DE RETENCION
AZUL(CM) 5,28
AMARILLO(CM) 1,98
VERDE(CM) 4,1
TIEMPO(MIN) AZUL(CM) AMARILLO(CM) VERDE(CM) DISOLVENTE
c UNICA 50 1,5 4 1,9 7,9
CROMATOGRAFIA DE PIGMENTOS ORGANICOS
PIGMENTO
ESPINACA UNAS CUANTAS
HOJITAS
ETER DIETILICO 10(ml)
Tiempo(min) pigmento(cm) disolvente
c UNICA 50 1,5 7,9
C. CROMATOGRAFICA
METANO ABSOLUTO 15ml
CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA
CAMARA RELACION
CROMATOGRAFICA
1 actona y cloroformo 7a1
2 acetona hexano 3a2
3 etanol y cloroformo 1a1
4 cloroformo y etanol 4a1
Cámara 1 : los resultados fueron los esperados
Cámara 2 : los resultados no fueron convincentes
Cámara 3 : los resultados fueron óptimos
Cámara 4 los resultados fueron satisfactorios
CONCLUSIONES
• La cromatografía es un método de separación para cantidades relativamente pequeñas de
muestra; permite separar sustancias bastante parecidas, basándose en su estructura molecular y
solubilidades en diferentes solventes. Puede realizarse por diversos métodos, de los cuales
únicamente se han experimentado cromatografía en papel y cromatografía en capa fina, de los
cuales el último tiene una mayor capacidad de resolución y separación debido a la naturaleza de
la fase estacionaria.
• El mecanismo de la cromatografía, como se ha dicho antes, se basa en la diferencia de
solubilidades y estructura molecular de las sustancias. La estructura molecular permite
diferenciar la naturaleza de las sustancias (específicamente en sus polaridades). Para la
cromatografía en papel, se habla de solubilidades relativas del soluto entre las fases móvil y
estacionaria: cuando el soluto en solución pasa a través de la fase estacionaria (celulosa), se
produce sucesivas micro-extracciones, pues el soluto pasa al agua de los poros del papel debido
a su mayor solubilidad en éste, entonces las sustancias más polares se van quedando a lo largo
del papel y cerca al frente del disolvente se encuentra las sustancias menos polares.
• Para la cromatografía en capa fina, la fase estacionaria está constituida por sustancias que
pueden ser finamente divididas y preparadas en láminas uniformes (tanto sustancias inorgánicas
como sustancias orgánicas). La fase móvil pasa por esta capa, pero lo que sucede es que los
solutos son atraídos por fuerzas electrostáticas de la capa fina. A pesar de esto, la cromatografía
de capa fina permite separar compuestos poco polares, mientras que la cromatografía de papel
permite separar sustancias con una considerable diferencia de polaridad.
• El coeficiente de reparto (Rf) es un indicador usado tanto en la cromatografía de reparto como
en la de adsorción. Está definido por el cociente de las velocidades relativas del soluto y del
solvente de la fase móvil. Principalmente indica cuán semejante es el soluto de la muestra en
comparación con la fase estacionaria e indica cuán soluble es el soluto en el solvente, por
ejemplo, si tenemos un Rf=0 se concluiría que la fase estacionaria es de la misma naturaleza de
la muestra o que el soluto no es soluble en el solvente utilizado. Un R f=1 indicaría que el soluto
es totalmente diferente de la fase estacionaria y que el soluto es bastante soluble en el solvente.
El Rf, entonces, está en función tanto del material de la fase estacionaria, de la naturaleza del
soluto de la muestra y de la temperatura (que afecta directamente la solubilidad).
IV. BIBLIOGRAFIA Y ANEXOS
• Química Orgánica I, Prácticas de Laboratorio
Invernizzi, Eduardo - Álvarez, Alfredo
• Química Orgánica
Morrison & Boyd
• Análisis Químico Cuantitativo
Gilbert H. Ayres
ANEXOS
1. ¿Cuál es el origen de los colores en la tinta de los marcadores? ¿Está
hecha de varios colores o solamente uno? ¿Como se obtiene el color
que observamos en la tinta utilizada a partir de los distintos colorantes
que la componen?
La tinta de los marcadores está compuesta de varios colores que provienen
de los colores primarios azul rojo amarillo y podemos separarlos a través de
la cromatografía.
2. ¿Utiliza el fabricante los mismos colorantes para obtener diferentes
colores de tinta? ¿Si es así, estos colorantes deberán mostrar idéntica
tonalidad y moverse la misma distancia relativa con respecto al agua o
al solvente utilizado?
Sí específicamente utiliza los mismos colorantes pero utiliza diferentes
cantidades para poder obtener diferentes tonalidades
3 ¿Qué ocurre si el agua es alterada adicionalmente algo como sal de
mesa? ¿Causa esto algún cambio en los movimientos de los
colorantes o en la eficiencia en el método de separación?
Yo creo que si causaría algún cambio ya que le estamos añadiendo otro
componente
4 Indicar la respuesta correcta en cromatografía de capa fina
A) El valor de Rf esta comprendido entre 0 y 1
B) El Rf es independiente a la fase móvil (eluyente) empleada
C) El Rf es constante para cada grupo funcional
D) El valor de Rf da información cuantitativa del compuesto
5 La separación por extracción liquido-liquido consiste en:
A) separar solutos que no producen una respuesta similar a la del
compuesto a analizar.
B) separar un soluto mediante su distribución entre dos fases miscibles
entre si.
C) separar los componentes de una mezcla por medio de varios disolventes
de distinta polaridad.
D) separar solutos de una mezcla mediante volúmenes iguales de un
disolvente.
6 Indíquese la respuesta NO correcta:
A) La separación por volatilización se basa en la modificación del estado
físico de la muestra.
B) La destilación fraccionada permite separar mezclas cuyo coeficiente de
partición entre la fase liquida y vapor no difiere considerablemente.
C) La separación por precipitación es una técnica útil para la separación de
polímeros
D) La separación por precipitación se basa en las diferentes solubilidades
entre las sales que pueden formar los analitos y los compuestos
interferentes.
7 Indique la respuesta correcta
A) En la elución en cromatografía, la muestra se añade modo continuo a la
columna hasta la separación completa de sus componentes.
B) La cromatografía de permeabilidad sobre gel se basa en un fenómeno
de filtración molecular en el que influyen el tamaño y forma de las
moléculas.
C) En la cromatografía de intercambio iónico se intercambian cationes de la
muestra con aniones de la resina iónica que constituye la fase estacionaria.
D) La cromatografía de permeabilidad sobre gel es un tipo de cromatografía
sólido-liquido.
8 La solubilidad en alcohol de los pigmentos es de mayor a menor:
carotenos, clorofila a, clorofila b y xantofila. Indicar que pigmento
corresponde a cada banda
La banda con espinaca: el pigmento que le da su color es la clorofila a.
Banda con betabel: El pigmento que le da color es uno llamado betacianina el cual
es un antioxidante y le da su color rojizo.
9 ¿Por que empleamos éter etílico para extraer la clorofila?
El éter etílico es un solvente orgánico por lo cual la clorofila tiene un alto
nivel de solubilidad en solventes orgánicos esto nos lleva a que la clorofila
se disolverá en el éter creando una solución homogénea.
10 Que pigmentos son los mas abundantes?
El pigmento más abundante es la clorofila, la cual da un color verde y verde
intenso.
También existen otros pigmentos como son los carotenos que dan un color
amarillo y xantofilas que da color amarillo anaranjado
11 Por encima de las clorofilas aparece mas de una banda, ¿Qué
significado tiene?
En nuestras bandas el pigmento del betabel (betacianina) lo vimos
expandirse más en la banda que el pigmento de las Espinacas (clorofila)
Esto quiere decir que el pigmento del betabel es Más soluble en el solvente
éter etílico que la clorofila.
