BBL Urea Agar Base Concentrate 10X
BBL Urea Agar Slants, Complete
L007521 • Rev. 11 • septiembre 2015
PROCEDIMIENTOS DE CONTROL DE CALIDAD (Opcionales)
I. INTRODUCCION
El agar urea es un medio diferencial para organismos, en especial los miembros de la especie
Enterobacteriaceae, según su capacidad de producir ureasa.
II. REALIZACION DEL PROCEDIMIENTO DE ANALISIS
A. Instrucciones para la preparación de un medio completo a partir de Urea Agar Base
Concentrate 10X.
1. Para preparar el medio de agar de urea, añadir 1,7 g de agar granulado a 100 mL de
agua purificada. Calentar agitando y hervir durante 1 minuto.
2. Dosificar en alícuotas de 9 mL en tubos y esterilizar en autoclave a 121 °C durante
15 minutos.
3. Enfriar el agar a 45 – 50 °C, y permitir que un tubo de concentrado llegue a
temperatura ambiente. Añadir 1 mL de concentrado por cada 9 mL de solución de
agar enfriado y mezclar bien.
4. Permitir que los tubos se enfríen en una posición inclinada, de manera que se formen
agares inclinados con bases profundas.
B. Prueba del medio completo (agares urea inclinados)
1. Inocular muestras representativas con los cultivos enumerados a continuación.
a. Con un asa calibrada de 0,01 mL, inocular las superficies del agar inclinado con gran
cantidad de inóculos de cultivos de agar inclinado de soja Trypticase de 24 a 48 h. No
inocular la base.
b. Incubar los tubos con las tapas flojas a 35 ± 2 °C en una atmósfera aerobia.
2. Examinar los tubos después de 2, 4, 6 y 24 h en busca de crecimiento y reacciones.
3. Resultados previstos
Organismos de control (cepas ATCC) Reacción de ureasa
*Proteus vulgaris................................................. + (Color de rosa rojo a rojo violeta intenso)
ATCC 8427
Morganella morganii subsp. morganii..................+ (Color de rosa rojo a rojo violeta intenso)
ATCC 8019
*Salmonella enterica subsp. enterica ................. .– (Sin cambio de color)
serotipo Typhimurium ATCC 13311
*Cepa de organismo recomendada para control de calidad del usuario.
NOTA: Según CLSI M22-A3, no es necesario que el usuario realice un control de la calidad de
este medio.
III. CONTROL DE CALIDAD ADICIONAL
1. Examinar los tubos como se describe en la sección “Deterioro del producto”.
2. Examinar visualmente los tubos representativos para asegurarse de que los defectos
físicos existentes no interfieran con el uso.
3. Determinar el pH potenciométricamente a temperatura ambiente para verificar el
cumplimiento de la especificación de 6,8 ± 0,2.
4. Incubar tubos representativos sin inocular a una temperatura de 20 – 25 °C y 30 – 35 °C y
examinar después de 7 días en busca de contaminación microbiana.
INFORMACION DEL PRODUCTO
IV. USO PREVISTO
El agar urea se utiliza para la diferenciación de organismos, en especial el grupo
Enterobacteriaceae, según su producción de ureasa.
V. RESUMEN Y EXPLICACION
El agar urea fue diseñado por Christensen para su uso como medio sólido para la diferenciación
1
de bacilos entéricos . Realiza la diferenciación entre organismos Proteeae rápidos positivos a la
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ureasa (Proteus spp., Morganella morganii subsp. morganii, Providencia rettgeri y algunas
Providencia stuartii) y otros organismos positivos a la ureasa: Citrobacter, Enterobacter, Klebsiella
2
y bacterias diferentes a la Enterobacteriaceae; es decir, algunas especies de Bordetella y Brucella .
La base de ureasa también se suministra en forma de solución concentrada (10X) esterilizada por
filtración para su uso en la preparación de inclinados de agar urea en el laboratorio del usuario.
VI. PRINCIPIOS DEL PROCEDIMIENTO
El medio de urea de Rustigian y Stuart3 es particularmente adecuado para la diferenciación de la
especie Proteus de otros bacilos entéricos gram negativos capaces de utilizar urea1. Los últimos no
tienen la capacidad mencionada en el caldo de prueba ureasa debido a la limitación de nutrientes
1
y la alta capacidad tampón del medio. Para dar mayor utilidad al medio, Christensen diseñó un
agar urea con peptona y dextrosa incluidas y un menor contenido de tampón para favorecer un
crecimiento más rápido de muchas Enterobacteriaceae y permitir una reducción en el tiempo de
incubación.
Cuando los organismos utilizan la urea, se produce amoníaco durante la incubación, lo que hace
la reacción de dichos medios alcalina y genera un color rosa rojo. En consecuencia, la producción
de ureasa puede detectarse mediante el cambio en el indicador rojo fenol.
VII. REACTIVOS
Urea Agar Base Concentrate 10X
Fórmula aproximada* por litro de agua purificada
Digerido pancreático de gelatina ................................ 10,0 g
Dextrosa ........................................................................ 10,0 g
Cloruro sódico ............................................................... 50,0 g
Fosfato potásico ........................................................... 20,0 g
Urea ............................................................................. 200,0 g
Rojo fenol ....................................................................... 0,12 g
*Ajustada y/o suplementada según requisitos para satisfacer los criterios de rendimiento.
Urea Agar Slants, Complete
Fórmula aproximada* por litro de agua purificada
Digerido pancreático de gelatina .................................. 1,0 g
Dextrosa .......................................................................... 1,0 g
Cloruro sódico ................................................................. 5,0 g
Fosfato potásico ............................................................. 2,0 g
Urea ............................................................................... 20,0 g
Rojo fenol ....................................................................... 0,012 g
Agar ............................................................................... 15,0 g
*Ajustada y/o suplementada según requisitos para satisfacer los criterios de rendimiento.
Advertencias y precauciones
Para uso diagnóstico in vitro.
Los tubos con tapas ajustadas deben abrirse con cuidado para evitar lesiones por la rotura del
vidrio.
Emplear una técnica aséptica y seguir las precauciones habituales contra riesgos microbiológicos
durante todo el proceso. Antes de desecharlos, esterilizar en autoclave los tubos preparados, los
recipientes para muestras y cualquier otro material contaminado.
221100 BD BBL Urea Agar Base Concentrate 10X, pqt. de 10 tubos de tamaño K
Atención
H315 Provoca irritación cutánea. H319 Provoca irritación ocular grave.
P103 Leer la etiqueta antes del uso. P264 Lavarse concienzudamente tras la manipulación.
P280 Llevar guantes/prendas/gafas/máscara de protección. P305+P351+P338 EN CASO DE
CONTACTO CON LOS OJOS: Aclarar cuidadosamente con agua durante varios minutos. Quitar las
lentes de contacto, si lleva y resulta fácil. Seguir aclarando.
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Instrucciones para el almacenamiento
Al recibir los tubos, almacenarlos en un lugar oscuro a 2 – 8 °C. No congelar ni sobrecalentar. No
abrir hasta que vayan a utilizarse. Los medios en tubos almacenados como se indica en sus
etiquetas hasta momentos antes de su utilización pueden ser inoculados hasta la fecha de
caducidad e incubados durante los períodos recomendados de incubación. Reducir al mínimo la
exposición a la luz.
Deterioro del producto
No utilizar los tubos si muestran evidencia de contaminación microbiana, decoloración,
deshidratación o cualquier otro signo de deterioro.
VIII.RECOGIDA Y MANIPULACION DE LAS MUESTRAS
Las muestras adecuadas para cultivo pueden manipularse mediante diversas técnicas. Para obtener
4,5
información detallada, consultar los textos correspondientes . Las muestras deben obtenerse
antes de administrar los agentes antimicrobianos. Deben adoptarse las medidas necesarias para
un transporte inmediato al laboratorio.
IX. PROCEDIMIENTO
Material suministrado
Urea Agar Base Concentrate 10X o
Urea Agar Slants, Complete
Materiales necesarios pero no suministrados
Medios de cultivo auxiliar, reactivos, organismos para el control de calidad y el equipo de
laboratorio que se requiera.
Procedimiento de análisis
Emplear técnicas asépticas.
Cuando se utilice Urea Agar Base Concentrate 10X, preparar todo el medio como se describe en la
sección Control de calidad. Si se forman cristales en el concentrado, por lo general se disolverán a
temperatura ambiente, o bien en algunos minutos en baño María a 40 °C.
Tomar un inóculo denso del crecimiento de un cultivo puro de 18 – 24 h (agar TSI u otro medio
adecuado) y extenderlo en ambas direcciones sobre toda la superficie del agar inclinado. No
insertar el inóculo en la base del agar inclinado, puesto que sirve como control de color. Incubar
los tubos con las tapas aflojadas a una temperatura de 35 ± 2 °C en incubadora o baño María.
Examinar las reacciones después de 2, 4, 6 y 24 h y luego diariamente por un total de 6 días. Es
posible que se requieran períodos más prolongados de incubación.
Control de calidad del usuario
Véase “Procedimientos de control de calidad”.
Cada lote de medios se ha probado con los microorganismos de control de calidad adecuados
mediante una prueba que cumple las especificaciones del producto y los criterios aplicables del
CLSI. Como siempre, las pruebas de control de calidad se deben llevar a cabo conforme a la
normativa local, estatal, federal o nacional aplicable, a los requisitos de los organismos de
acreditación y/o a los procedimientos estándar de control de calidad del laboratorio.
X. RESULTADOS
La producción de ureasa se indica por un color rosa rojo (rojo violeta) intenso en todo el agar
inclinado. El color puede penetrar en el agar (base del tubo); la extensión del color indica la
6
velocidad de la hidrólisis de urea .
Una reacción negativa no produce un cambio de color; el medio de agar mantiene un color de
amarillo pálido a beige.
Para obtener una lista de organismos positivos a la producción de ureasa, consultar los textos
5,7,8
correspondientes .
XI. LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO
1. Todos los medios de prueba de urea dependen de la demostración de alcalinidad; por
consiguiente, no son específicos para la ureasa. La utilización de peptonas, especialmente
en agar inclinado (por ejemplo, por Pseudomonas aeruginosa) u otras proteínas en el
medio pueden elevar el pH hasta producir alcalinidad, debido a la hidrólisis de las
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proteínas y la liberación de una cantidad excesiva de residuos aminoácidos, lo que genera
2
reacciones positivas falsas .
2. En agar urea, los organismos Proteeae positivos a la ureasa hacen el medio alcalino
rápidamente después de la inoculación. Para que los resultados sean válidos para la
detección de Proteeae, se debe efectuar la lectura de los resultados durante las primeras
6 horas de incubación. Citrobacter freundii y Klebsiella pneumoniae subsp. pneumoniae
2
pueden presentar reacciones positivas dentro de las 24 – 48 h .
3. Para su identificación, los organismos deben encontrarse en un cultivo puro. Deben
llevarse a cabo pruebas morfológicas, bioquímicas y/o serológicas para lograr una
identificación final. Consultar los textos correspondientes para obtener información
4,5,7
detallada y procedimientos recomendados .
XII. CARACTERISTICAS DE RENDIMIENTO
Kantor et al. desarrollaron un esquema rápido y simplificado, utilizando un mínimo de tres y un
máximo de siete pruebas, que podría utilizarse de manera sistemática en los laboratorios para
identificar bacterias gram negativas no fermentativas. Mediante este esquema se identificó un
total de 229 organismos gram negativos no fermentativos desconocidos y 14 cepas de referencia.
Se utilizó agar urea para diferenciar Alcaligenes sp. y Pseudomonas alcaligenes de Bordetella
9
bronchiseptica .
XIII.DISPONIBILIDAD
Nº de cat. Descripción
221100 BD BBL Urea Agar Base Concentrate 10X, pqt. de 10 tubos de tamaño K
221096 BD BBL Urea Agar Slants, Complete, pqt. de 10 tubos de tamaño K
221097 BD BBL Urea Agar Slants, Complete, caja de 100 tubos de tamaño K
XIV. BIBLIOGRAFÍA
1. Christensen, W.B. 1946. Urea decomposition as a means of differentiating Proteus and paracolon cultures from each other and from Salmonella
and Shigella types. J. Bacteriol. 52:461-466.
2. MacFaddin, J.F. 2000. Biochemical tests for identification of medical bacterial, 3rd ed., Lippincott, Williams & Wilkins, Baltimore.
3. Rustigian, R., and C.A. Stuart. 1941. Decomposition of urea by Proteus. Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 47:108-112.
4. Murray, P.R., E.J. Baron, J.H. Jorgensen, M.A. Pfaller and R.H. Yolken (ed.) 2003. Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for
Microbiology, Washington, D.C.
5. Forbes, B.A., D.F. Sahm, and A.S. Weissfeld. 2002. Bailey & Scott’s diagnostic microbiology, 11th ed. Mosby, Inc., St. Louis.
6. Ewing, W.H. 1985. Edwards and Ewing’s identification of Enterobacteriaceae, 4th ed. Elsevier Science Publishing Co., Inc., New York.
7. Holt, J.G., N.R. Krieg, P.H.A. Sneath, J.T. Staley, and S.T. Williams (ed.). 1994. Bergey’s Manual™ of determinative bacteriology, 9th ed. Williams
& Wilkins, Baltimore.
8. Farmer, J.J., III. 1999. Enterobacteriaceae: introduction and identification, p. 442-458. In P.R. Murray, E.J. Baron, M.A. Pfaller, F.C. Tenover, and
R.H. Yolken (ed.), Manual of clinical microbiology, 7th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C.
9. Kantor, L.T., S.D. Kominos, and R.B. Yee. 1975. Identification of nonfermentative gram-negative bacteria in the clinical laboratory. Am. J. Med.
Technol. 41:3-9.
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