852 CAPÍTULO 20 • Microtúbu los

c. También se obtuvieron resultados similares a los mostra­ Holleran, E. A., S. Karki, and E. L. F. Holzbaur. 1998. The ro­
dos en la parte (e) cuando se usó GMPCPP, un análogo del le of the dynactin complex in intracellular motility. lnt'l. Rev Cyrol.
GTP no hidrolizable, para ensamblar microtúbulos estabili­ 182:69-109.

21
z ados. ¿Qué sugiere este resultado acerca de la acción de Karcher, R. L., S. W. Deacon, and V. l. Gelfand. 2002. Motor­
Kin I? cargo interactions: the key to transport specificity. Trends Cell Biol.
12:21-27.

di. Hay más pruebas de que Kin I puede producir resultados Kull, F. J., and S. A. Endow. 2002. Kinesin: switch I and II and
the motor mechanism. J. Cell Sci. 115:15-23.
similares incluso en proporciones menores con respecto a la
tubulina. En vista de esto y lo que usted sabe sobre el ensam­ Mandelkow, E., and K. A. Johnson. 1998. The srructural ami ,

REGULACION
mechanochemical cycle of kinesin. Trends Biochem. Sci. 23:429-433.
blaje de los microtúbulos, ¿dónde podría usted esperar en­
contrar el motor sobre los microtúbulos? Moore, J. D., and S. A. Endow. 1996. Kinesin protcins: a phy­
lum of motors for microtubule-based motility. Bioessays 18:207-

DEL CICLO CELULAR

218.
Sablin, E. P., and R. J. Fletterick. 2001. Nucleoride switches in
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Kinesin home pagc
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Dinámica de los mic rotúbulos y proteínas motoras
anchoring mechanisms. Curr. Opin. Ccll Biol. 14:25-34.
en la mitosis Esta célula cultivada de riñón de rata en metafase muestra
Desai, A., and T. J. Mitchison. 1997. Microtubule polymeriza­
cromosomas condensados (azul), microtúbulos del aparato
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Cyr, R. J. 2001. Plant cells: mitosis, cytokincsis, and cell piare proteínas de la envotura nuclear interna se retiran hacia el
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assembly/disassembly of microtubules. Cell Struc. Funct. 21:375-
1 ci cl o celular está constituido por una serie ordenada de estos acontecimientos son un número pequeño de proteinci­

E
Vaughn, K. C., and J. D. l. Harpcr. 1998. Microtubule-organi­ 379.
zing centers and nucleating sites in land plants. lnt'l. Rev. Cytol. acontecimientos macromoleculares que llevan a la divi­ nasas heterodimér_icas que contienen una subunidad regul a­
Kapoor, T. M., and D. A. Compton. 2002. Searching for the
181:75-149. sión celular y a la producción de dos células hijas, cada dora (ciclina) y una catalizadora (cinasa dependiente de cicli­
middle ground: mechanisms of chromosome alignment during mito­
Zimmerman, W., C. A. Sparks, and S. J. Doxsey. 1999. Amorp­ una de las cuales contiene cromosomas idénticos a los de la na). Estas cinasas regulan la actividad de numerosas proteínas
sis. J. Cell Biol. 157:551-556.
hous no longer: the centrosome comes into focus. Curr. Opin. Cell madre. La duplicación de los cromosomas paternos tiene lu­ involucradas en la repl icación del DNA y la mitosis por fos­
Karsenti, E., and l. Vernos. 2001. The mitotic spindle: a self-ma­
Biol. 11:122-128. gar durante la fase S del ciclo, y durante la mitosis los cromo­ forilación de sitios reguladores específicos, activando algunos
de machine. Science 294:543-547.
somas hijos resultantes se distribuyen en cada una de las cé­ e inhibiendo otros para coordinar sus actividades. Este capí­
Kitagawa, K., and P. Hieter. 2001. Evolutionary conservation
lulas hijas (véase fig. 9-3). E l control temporal preciso de los tulo se centra en la manera en que se regula el ciclo celular
Movimientos impulsados por cinesina y dineína between budding yeast and human kinetochores. Nature Rev. Mol.
Cell. Biol. 2:678-687.
acontecimientos del ciclo celular asegura que la replicación de y los sistemas experimentales que llevaron a nuestro conoci­
cromosomas y su segregación a las células hijas se produzca miento actual sopre estos mecanismos reguladores cruciales.
Allan, V. J., H. M. Thompson, and M. A. McNiven. 2002. Mo­ Mitchison, T. J., and E. D. Salmon. 2001. Mitosis: a history of
toring around the Golgi. Narure Cell Biol. 4:E236-E242. division. Nature Cell Biol. 3:E17-E21. en el orden apropiado y con una fidelidad extraordinariamen­
Dell, R. R. 2003. Dynactin polices two-way organelle traffic. J.
te alta. La regulación del ciclo celular es fundamental para el
Nicklas, R. B. 1997. How cells get che right chromosomes. Sden­
C ell Biol. 160:291-293. ce 275:632-637.
desarrollo normal de los organismos multicelulares y la pér­
dida de control termina por conducir al cáncer, una enferme­
Dietz, S., W. R. Schief, and J. Howard. 2002. Molecular motors: Nigg, E. A.2001. Mitosis. Nature Encyclopcdia of Life Sciences. CONTENIDO
singlc-molecule recordings made easy. Curr. Biol. 12:R203-R205. dad demasiado familiar que mata a una de cada seis personas
Palazzo, R. E., and T. N. Davis. 2001. Centrosomes and
en el mundo desarrollado (cap. 23).
21. 1 Panorama general del ciclo celular y su
Dujardin, D. L., and R. B. Vallee. 2002. Dynein at the cortex. spindle pote bodies. Methods in Cell Biology, vol. 67. Academic control
Curr. Opin. Ccll Biol. 14:44-49. Press.
· A fines de la década de 1980, se hizo evidente que los pro­
cesos moleculares que regulan los dos acontecimientos impor­ 21.2 Estudios bioquímicos con ovocitos, huevos
Dutcher, S. K. 1995. Flagellar assembly in two hundred and fifty Rieder, C. L., and E. D. Salmon. 1998. The vertebrare cell kine­
tantes del ciclo celular, la replicación y la segregación de los y embriones tempranos
easy-to-follow steps. Trcnds Genet. 11 :398-404. rochore and its roles during mitosis. Trends Cell Biol. 8:310-318.
Goldstein, L. S. 2001. Kinesin molecular motors: transpon path­
cromosomas, son esencialmente similares en todas las células 21.3 Estudios genéticos con S. pombe
Schimoda, S. L., and F. Solomon. 2002. lntegrating funcrions at
ways, receptors, and human disease. Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA the kinetochore. Cell 109:9-12.
eucariontes. Debido a esta similitud la investigación de diver­ 21.4 Mecanismos moleculares de regulación
98:6999-7003. sos organismos, cada uno de ellos con sus propias ventajas de los eventos mitóticos
W ittmann, T., A. Hyman, and A. Desai. 2001. The spindle: a
Higuchi, H., and S. A. Endow. 2002. Directionality and proces­ experimentales particulares, contribuyó a tener un mayor co­
dynamic assembly of microtubules and motors. Nature Cell Biol, 21.5 Estudios genéticos con S. cerevisiae
sivit)' of molecular motors. Curr. Opin. Cell Biol. 14:50-57. 3:E28-E34. nocimiento de cómo se coordinan y controlan estos aconte­
cimientos. Para estudiar los diversos aspectos del ciclo celu­
21 6 Control del ciclo celular en las células
.

Hirokawa, N. 1998. Kinesin and dynein superfamily proteins Zhou, J., J. Yao, and H. C. Joshi. 2002. Attachmem and tension de mamífero
and the mechanism of organellc transport. Science 279:519-526. in thc spindle assembly checkpoint. J. Ccll Sci. 115:3547-3555. lar en los eucariontes se emplearon técnicas bioquímicas y
genéticas, así como la tecnología del DNA recombinante. Es­ 21.7 Puntos de control en la regulación del
tos estudios revelaron que el control primario de la división ciclo celular
celular es la regulación del momento de la replicación del 21 .8 Meiosis: un tipo especial de división
DNA nuclear y la mitosis. Los controladores principales de celular

853
854 CAPÍTULO 21 • Regulación d el ciclo c elular eucarionte 21.1 • Panorama general del c1clo celular y su control 855

ral salen del ciclo celular en G1 e ingresan en una fase llamada acontecimientos del ciclo celular, aumentan y di,m inu yl'll :1 llll'
[Link] Panorama general del ciclo G0 (véase fig. 21-1 ). Algunas células en G0 pueden volver al ci­ dida que las células avanzan por éste. Las suhunid.1deo; l':ltali
celular y su control clo celular y reanudar su replicación; este reingreso es regula­ zadoras de estas cinasas, llamadas cinasas dcpcmlicnll.'\ de d·
do, lo que proporciona un control de la proliferación celular. clin a (COK), no poseen activida d de cinasa a menos que se
Empezaremos esta descripción con el repaso de los esta­ asocien con una ciclina. Cada CDK puede [Link];lrsc con di
dios del ciclo celular eucarionte, mediante u n resumen del mo­ ferentes ciclinas y la ciclina asociada determm;l qul� pmrcín:1s
ddo actual de cómo se regula el ciclo y una descripción bre­ La fosforilación y la degradación regulada serán fosforiladas por un complejo ciclina-CDK dl'tl'rminado.
ve de los sistemas experimentales clave que proporcionaron de las proteínas controla el pasaje a través En la figura 2 J -2 se presenta un esquema del p;lpt·l dl� l;¡o;
información reveladora acerca de esa regulación. tres clases principales de compleJOS ciclina-CDK qul' l'Ontro
del ciclo celular
lan el pasaje por el ciclo celular: los complejos cichna G1·CDK,

8
Las concentraciones de las ciclinas, las subunidadcs regu­ de fase S y mitót1co�. Cuando la-. células se estimulan p.H<l re
El ciclo celular es una serie ordenada G,
ladoras de las proteincinasas heterodiméricas que controlan los plicarse, los complejos cidina- G1-CDK se expresan en prinH'r
de acontecimientos que conducen
a la replicación celular

��
APC-Cdh1/proteasomas
Como se ilustra en la figura 21 1, el ciclo celular se divide Condensación citocinesis degradan las ciclinas m1tóticas
de los cromosomas, �
en cuatro fases prinopab. En la� cclulas somáticas en ciclo (en
fragmentación de la 1!1
replicación), las células sintetizan RNA y proteínas durante la envoltura nuclear,

A
fase G., para prepararse para la síntesis de DNA y la replica­ G2 separación de los
ción de los cromosomas durante la fase S (de síntesis). Después cromos omas
de avanzar a través de la fase G2, las células empiezan el pro­
ceso complicado de la mitosis, también llamada fase M (mitó­ Cromátid as APC-Cdc20/
hermanas
tica), que se divide en varios estadios (véase fig. 20-29).
s-< Telofase y citocinesis
Al describir la mitosis, el término cromosomn suele usarse
para designar las e�tructuras replicadas que se condensan y se -....
__ ..___ S
hacen visibles con el microscopio óptico durante el período de Sfntesis de ONA
D m
Se fo r an los complejos
de prerreplicación del ONA
profasc de la mitosis. Por lo tanto, cada cromosoma eo;rá com­
en los orígenes
puesto por las dos moléculas hija� de DNA que provtenen de
A Fig. 21-1. Resumen de los eventos principales del ciclo
la replicación del DNA, más histonas y otras protcmns cromo­ fJ El complejo ciclina COK de G1
celular de los eucariontes y destino de un solo cromosoma
1nactiva Cd h 1

-f 0
sómicas asociadas con ellas (véa�e fig. 1 0-27). Las moléculas pa terno. En las células en proliferación, G, es el perfodo entre el G,
hijas de DNA idénticas y l as proteínas cromosómicas asocia­ media-tardía
"nacimiento" de una célula después de la mitos1s y la iniciac1ón de EJ El compl ejo ciclina G1-COK

� V
das que forman un cromosoma se denominan cromátidas her­ la síntes•s de DNA. que marca el principio de la fase S. Al f1nal de Punto de activa la e p r esión de los
x
manas. Éstas se unen entre sí por un1ones cruzada� de proteí­ la fase S. un cromosoma replicado presenta dos moléculas h1¡as componentes de ciclina-COK
nas en roda su long1tud. En los \'ertebrados estas uniones se de DNA y las proteínas cromosóm1cas asociadas Cada una de las de fase S o
moléculas h1¡as de DNA y sus proteínas cromosóm•cas asoc1adas
11 <D
conden�an en una sola región de asociación llamada ccntrómc­ e
(no mostradas) se denomina cromatlda hermana. El fin de G2 está Metafase El comple¡o 0 La ciclina G1-CDK fosforit a
e
ro, a medida que avanza la condensación de los cromosomas.
marcado por el 1n1C1o de la mitosis, durante la cual se forma el ciclina COK el i nhi bidor de fase S ...
Durante la interfase, l a parte del ciclo celular que transcu­
huso mitót1co (líneas rojas) y tracc1ona las cromátidas hermanas mit ótico activa
rre entre el fin de una fase M y el principio de la �iguiente, la
separándolas, seguido por la div1sión del Citoplasma (citocines1s) los sucesos
membrana nuclear externa es conrmua con el renculo endo­ para produc1r dos células hijas. Las fases G., S y G1 se denom111an mitóticos
plasmárico (véase f1g. 5-19). Cuando comienza la mitosis en en conjunto interfase, el período entre una mitOSIS y la siguiente. tempranos
la profase, la envoltura nuclear se retrae hacia el retículo en­ La mayor parte de las células que no proliferan en los vertebrados
doplasmárico en la mayoría de las células de los cucariontes abandonan el CIClo celular en G1 y entran en el estado G0•
superiores y las membranas de Golgi se fragmentan en vesí­ 1!1 SCF/protea s oma
degrada al inhi bidor
culas. Como se describió en el capítulo 20, los microtúbulos La ciclina-COK de fase S D fosforilado de cicli na-CDK
celulares <;e ensamblan y desarman para formar el aparato mi­ activa los co mpl ejos
de fase S
tótico, que es un ha1 de microrúbulos con forma de pelota de otra vuelta del ciclo. En la� levaduras y otrO'> hongos, la en­ de prerreplicación

8
rugby (el huso) con un grupo de microrúbulos en forma de es­ voltura nuclear no se fragmenta durante la mitosis. En estos
trella que se irradian de cada extremo, o polo, del huso. Du­ microorganismos, el huso mitótico se forma dentro de la en ­
rante el período de metafase de la mitosis en cada centróme­ voltura nuclear, que luego se fragmenta para formar dos n ú­
ro se forma un complejo multiprotcico, el cinerocoro. Los cleos en el momento de la cirocinesis.
cinerocoros de las cromátidas hermanas se asocian a continua­ En los vertebrados y las levaduras diploidcs, las células en Replicación del DNA
ción con microrúbulos que vienen de los polos opuestos del (,1 tienen un número diploide de cromosomas (2n), uno he­
huso (véase f i g. 20-31 ). Durante el período de anafase de la redado de cada padre. En las levaduras haploides, las células A Fig. 21-2. Panorama general del modelo actual de conduce a la replicac1ón de los cromosomas. La proteólis1s de
mitosis, las crornátidns hermanas se separan. Al inicio las reac­ en G1 tien en un representante de cada cromosoma (ln), es regula ción del ciclo celular en los eucariontes. El pasa¡e a la segunna tiene como resultado la degradación de los
cionan proteínas motoras a lo largo de los microrúbul os del decir, un número haploide. Las células humanas en replica través del ciclo es controlado por complejos cinasa-ciclina comple¡os proteicos que conectan las cromátidas hermanas
huso hacia l os polos opuestos y luego se separan aún más a ción rápida cumplen el ciclo celular completo en alrededor de dependiente de G,, fase S y mitóticos (verde). Éstos están durante la metafase. lo que ong1na así la anafase, el período
meJ1da que el huso mirótico se elonga (véase fig. 20-40). 24 horas: la mitosis insume unos 30 minutos; G, 9 horas; la compuestos por una subumdad de ciclina reguladora y una de m1tótico en el que las cromátidas hermanas se separan y se
cinasa dependiente de c1chna catalizadora ICDKl. Dos desplazan hacia los polos opuestos del huso. La reducción de
Una ve;. que la separación de lo� cromosomas es comple­ fase S, 1 O horas y G1, 4,5 horas. Por el contrario, en las cé­
comple¡os de ligasa de ubiCUitlna (naran¡a), SCF y APC, la act1vidad de los complejos cichna-CDK mitóticos causada por
ta, el huso mitótico se desarma y los cromosomas se descon­ lul as de l evadura en crecimiento rápido el ciclo completo in­
generan pohubicuitinación de sustratos específicos, como los la proteólisis de las ciclinas mitóticas permite que tengan lugar
dcnsan durante la telofase. La envoltura nuclear se forma de sume sólo cerca de 90 minutos.
inhibidores de fase S (paso ll!J. la segurina (paso (l)) y las los acontecimientos mitóticos tardíos y la citocinesis. Estas
nuevo alrededor de los cromosomas separados a medida que En los organismos mulricelulares la mayoría de las células ciclinas m1tót1cas (paso &;)J. marcando estos sustratos para su degradaciones proteolíticas impulsan el ciclo en una sola
se descondensan. La división física del ciroplasma, llamada diferenciadas "salen" del ciclo celular y sobreviven durante degradac1ón por los proteasomas. La proteóhsis del inhibidor dirección, debido a la Irreversibilidad de la degradación de las
citocinesis, produce dos células hiJaS cuando el complejo de días, semanas o, en algunos casos (p. ej., neuronas y células del de la fase S activa los complejos ciclina-CDK de fase S, lo que proteínas. Para mayor explicación véase el texto.
Go l gi se forma otra vez en cada célula h ija . Después de la mi­ cristalino del ojo) incluso durante toda la vida del organismo
tosis, las células en ciclo entran en la fase G¡, comenzando sin dividirse de nuevo. Estas células posmitúticas por lo gene-
856 CAPÍTULO 21 • Regula ción del ciclo celular eucarionte 21.1 • Panorama ge nera l de l ciclo celular y su control 857

lugar. Éstos preparan la célula para la fase S, activando facto­ de las células hijas y el aparato de Golgi vuelve a ensamblar­ misiva. Sin embargo, la complementación de la mutación
res de transcripción que promueven la transcripción de genes se durante la telofase; por último, el citoplasma se divide du­ rccesiva con el alelo de tipo silvestre contenido en uno de
que codifican las enzimas requeridas para la síntesis de DNA rante la citocinesis, y se forman las dos células hijas. los dones de plásmidos de la genoteca permite que una cé­
y de genes que codifican ciclinas y CDK de fase S. Al princi­ Durante la prim era parte de G1 del ciclo celular siguien­ lula mutante transformada desarrolle una colonia; los plás­
pio, la actividad de los complejos ciclina-CDK de fase S es te, las fosfatasas desfosforilan las proteínas que forman com­ midos portadores del alelo de tipo silvestre pueden recupe­
controlada por inhibidorcs. Al final de G1, los complejos ci­ plejos de prerreplicación. Estas proteínas habían sido fosfo­ rarse a p artir de esas células. Debido a que muchas de las
clina G1-CDK inducen la degradación de los inhibidores de fa­ riladas por los complejos ciclina-CDK de fase S durante la proteínas que regulan el ciclo celular están muy conserva­
se S por medio de fosforilación y la consecuente estimulación fase S anterior y su fosforilación se mantuvo durante la mi­ das, el cONA humano clonado en vectores de exprcswn de
de su poliubicuitinación por el complejo multiprote::icu se¡.: tosis por los complejos ciclina-CDK mitóticos. Como resul­ levaduras a menudo puede complementar los mutante\ de
ubicuitina ligasa (paso li]). La degradación posterior por los tado de su desfosforilación en G1, los complejos nuevos de ciclo celular de levaduras, lo que permite el aislamiento r.l­
protcasomas del inhibidor de la fase S poliubicuitinado libera prerreplicación son capaces de reensamblarse en los oríge­ pido de genes humanos que codifican proteínas de control
los complejos ciclina-CDK de fase S activos. nes de replicación, y se preparan para la próxima fase S (véa­ del ciclo celular.
Una vez activados, los complejos ciclina-CDK de fase S se fig. 21-2, paso []).La fosforilación de Cdhl por los com­ Los estudios bioquímicos requieren la preparación del'\:­
fosforilan los sitios reguladores en las proteínas que forman plejos ciclina G1-CDK al final de G, lo inactiva, y permite tractos celulares. Para realizar estudios bioquímicos del c1
los complejos de prerreplicación del DNA, que se ensam­ la acumulación de ciclinas de fase S y mitóticas durante el clo celular son potencialmente conveniente los huevos y cm
b lan en los orígenes de replicación durante G1 (cap. 4). La ciclo. briones tempranos de anfibios e invertebrados marinos. Fn
fosforilación de estas proteínas no sólo activa el comienzo El pasaje por tres transiciones críticas del ciclo celular, estos organismos se producen múltip les ciclos celulares sin
Cro moso mas
de la replicación del DNA, sino que también impide el reen­ G1 -4 fase S, mctafase -4 anafase y anafase -4 telofase y mitóticos Cromosomas en G, cronizados después de la fecundación del huevo. Mediante
samblaje de complejos nuevos de prerreplicación. Debido a citocinesis, es irreversible porque estas transiciones se de­
esta inhibición, cada cromosoma se replica sólo una vez du­ sencadenan por la degradación regulada de proteínas, lo
.& FIGURA EXPERIMENTAL 21-3 Un factor difusible presente
rante el pasaje a través del ciclo celular; así se asegura que cual es un proceso irreversible. Como consecuencia, las cé­ Transformación co n
en las células mitóticas puede inducir la mitosis en una célula
en las células hijas se mantiene el número de cromosomas lulas están obligadas a realizar el ciclo celular sólo en una la genoteca de plásmidos
en interfase. En células en interfase no fusionadas, la envoltura
adecuado. dirección. de DNA de S. cerevisiae
nuclear está intacta y los cromosomas no se condensan. de Células
Los complejos mitóticos ciclina-CDK se sintetizan duran­ En los organismos superiores, el control del ciclo celular de tipo si lvestre 1
forma que no pueden dis tinguirse los cromosomas individuales cdc281 0 Células cdc28 0

}
te las fase::s S y G2, pero sus actividades se mantienen inhibi­ se logra en primer término por la regulación de la síntesis y (véanse figs. 1-2b y 5-25). En las células mitóticas. la envoltura cultivadas transformadas
Gen X

o
das por la fosforilación de los sitios inhibitorios hasta que se la actividad de los complejos ciclina G,-CDK. Factores de cre­ nuclear está ausente y los cro mosomas individuales replic ados a 25 oc cultivadas a 35 oc

o
completa la síntesis de DNA. Una vez activados por la des­ cimiento extracelulares funcionan como mitógcnos e inducen están muy condensados. Esta microfotografía muestra una célula

o
fosforilación de los sitios inhibitorios, los complejos mitóti­ la síntesis de complejos ciclina G,-CDK. La actividad de és­ híbrida. resultado de la fusión de una célula mit ótica (lado •
cos ciclina-CDK fosforilan numerosas proteínas que promue­ tos y otros complejos ciclina-CDK se regula por la fosforila­ izquierdo) con una en interfase en G, (lado derecho). Un fact or
proveniente del citoplasma de la célula mitótica hizo que la Gen Y

o
No hay formación
ven la condensación de los cromosomas, la desintegración de ción de sitios específicos, inhibitorios y activadores, de la sub­
envoltura nuclear de la célula en G, se retraiga hacia el retículo de colonias

o
la envoltura nuclear, el ensamblaje del huso del aparato mi­ unidad catalizadora. Una vez que los mitógenos actuaron
endeplasmát1co. por lo que no es vis1ble. El factor también
tótico y la alineación de los cromosomas condensados en la durante un período suficiente, el ciclo celular continúa hacia
o
o
provoca la condensación parcial de los cromosomas de la célula •
placa de la metafase. Durante la mitosis, el complejo promo­ la mitosis, incluso si estos mitógenos se eliminan. El punto de en G,. Los cromosomas mitóticos pueden distinguirse porque las CDC28
tor de la anafase (anaphase promoting cornplex, APC), una G1 tardío en el que el pasaje a través del ciclo celular se ha­ dos cromátidas hermanas están unidas por e l centrómero. (De R.T.

� o
ubicuitina ligasa compuesta por varias subunidades, genera ce independiente de los mitógenos se denomina punto de res­ .()
Johnson y P. N Rao. 1970, Biol. Rev. 46:97) ·.· a.0 Plásmido CDC2B

o
p oliubicuitinación de proteínas reguladoras clave, marcándo­ tricción (véase fig. 21-2).
a 1s l ado
las para la degradación por los proteasomas. Un sustrato im­
portante del APC es la securina, una proteína que inhibe la
c;r;{ L
degradación de las proteínas de ligadura cruzada entre las
cromátidas hermanas. La poliubicuitinación de la sccurina
Se usaron diversos sistemas experimentales
para identificar y aislar las proteínas de control
un núcleo en G2• En la actualidad se sabe que estos factores
son complejos ciclina-CDK de fase S que pueden activar los
ca
Células de la colonia
por el APC se inh ibe hasta que los cinctocoros unidos a los del ciclo celular complejos de prerreplicación ensamblados en los orígenes de en disti ntos estadios
centrómeros de todos los cromosomas se unen a los micro­ replicación del DNA en los núcleos en fase G1 temprana. Aun­ del ciclo celular
túbulos del huso, y hacen que los cromosomas se alineen en La primera evidencia de que factores difusibles regulan el que en estos experimentos de fusión celular se demostró que
la placa de la metafase. Una vez que todos los cromosomas ciclo celular provino de experimentos de fusión celular con los factores difusibles controlan la entrada en las fases S y M
están alineados, el APC provoca la poliubicuitinación de la se­ células de mamífero cultivadas. Cuando células en interfase del ciclo celular, se necesitaron ensayos genéticos y bioquími­ .& FIGURA EXPERIMENTAL 21-4 Los genes del ciclo de
curina, lo que conduce a su degradación por los proteasomas en las fases G,, S o G2 del ciclo celular se fusionaban con cé­ cos para identificarlos. división celular (COC) de tipo silvestre pueden aislarse a partir
y a la degradación posterior de las proteínas de ligadura cru­ lulas en mitosis, sus envolturas nucleares se desintegraban y La levadura de gemación Saccharomyces cerevisiae y la le­ de una genoteca de S. cerevisiae por la complementación
zada de las cromátidas hermanas (véase fig. 21-2, paso lli]). sus cromosomas se condensaban (fig. 21-3). Este hallazgo in­ janamente relacionada levadura de fisión Schizosaccharomyces funcional de mutantes cdc. Células mutantes con una mutación
Esta secuencia de acontecimientos inicia la anafase, liberan­ dica que algún componente o varios componentes difusibles pombe fueron en especial útiles para el aislamie nto de mu­ sensible a la temperatura en un gen COC se transforman con una
genoteca preparada a partir de células de tipo silvestre y se
do las cromátidas hermanas para su separación hacia los po­ presentes en el citoplasma de las células mitóticas obligaban tantes bloqueadas en pasos específicos del ciclo celular o que
cultivan e n placas sobre agar nutritivo a temperatura no permisiva
Jos opuestos del huso. a los núcleos en interfase a iniciar muchos de los procesos muestran alteraciones en la regulación del ciclo. En estas dos
(35 °C). Cada célula transformada capta un solo plásmido que
Al final de la anafase, el APC también dirige la poliubi­ asociados con la mitosis temprana. En el presente se sabe que levaduras, las mutantes sensibles a la temperatura, con de­ contiene un fragmento genómico de DNA. La mayor parte de
cuitinación y la degradación posterior por los proteasomas de estos factores son los complejos ciclina-CDK mitóticos. fectos en proteínas específicas necesarias para avanzar a través estos fragmentos implica genes (p. ej. . X e Y) que no codifica n
las ciclinas mitóticas. La poliubicuitinación de las ciclinas mi­ De forma similar, cuando se fusionaban células en G1 con del ciclo celular, se reconocen con facilidad en el microscopio la proteína defectuosa Cdc; las células transformadas que captan
tóticas por el APC se inhibe hasta que los cromosomas en se­ células en fase S y las células fusionadas se exponían a timi­ y por consiguiente se pueden aislar sin dificultad (véase fig. esos fragmentos no forman colonias a la temperatura no
paración alcanzan la ubicación apropiada en la célula en di­ dina con marca radiactiva, la marca se incorporaba en el DNA 9-6). Estas células se denominan mutantes cdc (ciclo de divi­ permisiva. Las muy escasas células que captan un plásmido que
visión (véase fig. 21-2, paso [2]). La degradación de las ciclinas del núcleo en G1, así como en el núcleo en fase S, lo que indi­ sión celular). Los alelas de tipo silvestre de los alelas mutan­ contiene la versión de tipo silvestre del gen mutante (en este
mitóticas conduce al cese de la actividad proteincinasa de las ca que la síntesis de DNA empezaba en el núcleo en G, poco tes recesivos cdc sensibles a la temperatura pueden aislarse caso CDC28J se complementan, lo que permite que la célula se
COK mitóticas. La disminución resultante de la actividad de después de la fusión. Sin embargo, cuando se fusionaron con facilidad, por transformación de las células haploides mu­ reproduzca y forme una colonia a la temperatura no permisiva. El
plá s mido de DNA ais lado de esta colonia es portador del gen
las COK mitóticas permite que proteinfosfatasas consitutiva­ células en G2 con otras en fase S, no hubo incorporación de tantes con una genoteca de plásmidos preparada a partir de
CDC de tipo silvestre que corresponde al gen defectuoso en las
mente activas diminen los fosfatos agregados a las proteínas timidina marcada en los núcleos en G2• Por lo tanto, los fac­ células de tipo silvestre y luego sembrando placas con las cé­
células mut antes. El mismo procedimiento se usa para aislar los
específicas por los complejos ciclina-CDK mitóticos. Como tores difusibles de una célula en fase S pueden entrar en el lulas transformadas a la temperatura no permisiva (fig. 21-4). genes CDC de tipo silvestre en S. pombe Véanse las figuras
resultado, los cromosomas ya separados se descondensan, la núcleo de una célula en G1 y estimular la síntesis de DNA, Cuando se siembran en placas, las células haploides mu­ 9-19 y 9-20 para una ilustración más detallada de la construCCión
envoltura nuclear se forma de nuevo alrededor de los núcleos pero estos factores no pueden inducir la síntesis de DNA en tantes no pueden formar colonias a la temperatura no per- y la detección de genes en una genoteca de levaduras.
858 CAPÍTULO 21 • Regulación del ciclo celular eucarionte 21.2 • Estudios bioq u ímic os con ovocitos. huevos y embriones tempranos 859

Primer cuerpo polar Segundo cuerpo polar

CUADRO 21-1 Ciclinas y cinasas dependientes
de ciclina (COK) seleccionadas*
CONCEPTOS CLAVE DE LA SECCIÓN 21.1 Progesterona

Organismo/Proteína Nombre Panorama general del ciclo celular y su control

• El ciclo celular eucarionte se divide en cuatro fases: M

!
---+ ---+

(mitosis), G1 (el período entre la mitosis y el comienzo de la D fl

S. I'OMBI:
replicación del DNA nuclear), S (el período de replicación
CDK (solo una) Cdc2 del DNA nuclear) y G2 (el período entre la finalización de la
Ovocito Meiosis 1 Huevo detenido Pronúcleo Pronúcleo Primera
replicación del DNA nuclear y la mitosis) (véase fig. 21-1). en meiosis 11 masculino f eme ni no división
Ciclina mitótica (solo una) Cdc13 detenido en G2

• Los complejos ciclina -CDK, compuestos por una subu­

S. CERI:VISIAE
nidad de ciclina reguladora y una de cinasa dependiente de metafase para producir un huevo . Se muestran en forma
Á FIGURA EXPERIMENTAL 21-5 La progesterona estimula
CDK (solo una) Cdc28 ciclina catalizadora, regulan el progreso de una cé lula por la maduración meiótica de ovocitos de Xenopus in vitro. esquemática dos cromosomas conectados a los microtúbulos
medio del ciclo celular (véase fig. 21-2}. Grandes ligasas de Paso 0: El tra tamie nto con progesterona de ovocitos de Xenopus del huso para representar las células del huevo detenidas en
Ciclina de G1 media Cln3
ubicu itina compuestas por varias subunidades también po­ dete nidos en G2 y extirpados mediante cirugía del ovario de una la metafase de la meiosis 11. Paso D: Fecundac ió n por el
Ciclinas de G1 tardía Cln1, Cln2 liubicuitinan en los reguladores clave del ciclo celular, y los hembra adulta hace que los ovocitos ingresen en la meiosis l. Se espermatozoide libera a los huevos de su detención en metafas e .
marcan para su degradación por los proteasomas. muestran de manera esquemática dos pares de cromosomas y les permite avanzar a través de la anafase de la meiosis 11 y
Ciclinas de fase S temprana Clb5, Clb6 homólogos unidos (azul) conectados a los microtúbulos del huso sufrir una segunda división celular muy asimétrica que separa una
• Los complejos difusibles ciclina-CDK mitóticos produ­ mitótico (rojo) para representar las c élulas en la metafase de la cromátida de cada cromosoma y lo envía a un segundo cuerpo
Ciclinas de fase S tardía y mitóticas Clb3, Clb4
cen la condensación de los cromosomas y la fragmentación meiosis l. Paso f): La separación de los cromosomas homólogos polar. Paso 9: El pronúcleo fe meni no haploide resultante se
tempranas de la envoltura nuclear en células en G1 y G2 cuando se f u­ y una div•sión celular muy asimétrica envía la mitad de los fusiona con el pronúcleo haplo ide del espermatozoide para produci r
sionan con células mitóticas. De forma similar, los comple­ cromosomas a una célula pequeña llamada primer cuerpo polar. un cigoto diploide que sufre la replicación del DNA y la primera de
Ciclinas mitóticas tardías Clb1, Clb2 El ovocito comienza de inmed1ato la meios1s 11 y se detiene en 12 divisiones mitóticas embrionarias tempranas sincronizadas.
jos ciclina-CDK de fase S estimulan la replicación del DNA
VERTEBRADOS en los núcleos de las células en G1 cuando se fusionan con
células en fase S.
CDK de G1 media CDK4, CDK6
• El aislamiento de mutantes del ciclo de división celular rápidos, sincronizados, que generan una esfera hueca, la blástu­ gesterona (fig. 21-6). Este sistema no sólo condujo a la identi­
CDK de G1 tardía y de fase S CDK2
(cdc) de levaduras condujo a la identificación de genes que la. La división celular luego se hace más lenta y las divisiones ficación inicial de un factor presente en el citoplasma del hue­
CDK mitótica CDKI regulan el ciclo celular (véase fig. 21-4). siguientes no son sincronizadas, por lo que las células de dife­ vo que estimula la maduración de los ovocitos in vitro, sino
rentes lugares de la blástula se dividen en distintos momentos. que también proporcionó una forma de ensayo para el mismo,
Ciclinas de G1 media Ciclinas tipo D • Los huevos de anfibios e invertebrados y los embriones
llamado factor fJromotor de la maduración (MPF). Como se
tempranos provenientes de huevos fecundados de forma sin­ ,- verá en breve, el MPF resultó el factor clave que regula la ini­
Ciclina de G1 tardía y de fase S Ciclina E
cronizada proporcionan fuentes de extractos para estudios
bioquímicos de los eventos del ciclo celu lar.
El factor promotor de la maduración (MPF) ciación de la mitosis en todas las células eucariontes.
Ciclina de fase S y mitótica Ciclina A Usando el sistema de microinyección para ensayar la activi­
estimula la maduración meiótica de los ovocitos
dad del MPF en diferentes momentos durante la maduración de
Ciclina mitótica Ciclina B y la mitosis de las células somáticas
ovocitos in vitro, los investigadores encontraron que los ovoci­

* Las ciclinas y COK descritas en este capítulo se enumeran y clasifi­ 1'.11'�1

Estudios bioquímicos Cuando los ovocitos de Xenopus detenidos en G2 se ex­
traen del ovario de una rana hembra adulta y se tratan con
tos no tratados detenidos en G2 tienen niveles [Link] activi­
dad MPF; el tratamiento con progesterona induce la actividad
can de acuerdo con el período del ciclo celular en el que acnían. Un con ovocitos, huevos y embriones progesterona, sufren una maduración meiótica, el proceso de MPF en el momento en que las células entran en meiosis 1 (fig.
heterodímero compuesto por un a ciclina mitútica y una CDK, por lo
tempranos maduración del ovocito desde un ovocito detenido en G2 has­ 21-7). La actividad MPF decae a medida que las células entran
general se designa como un factor promotor de la mitosis (MPF).
ta el huevo detenido en metafase de la meiosis II (véase fig. 21- en la interfase entre la meiosis I y Il, pero luego aumenta de
Los estudios de maduración de ovocitos de la rana Xeno­ 5). La microinyección de citoplasma proveniente de huevos de­ nuevo cuando las células entran en meiosis 11 y permanece ele­
pus laevis permitieron un gran adelanto en la identificación de tenidos en metafase de la meiosis II a ovocitos detenidos en G2 vada en las células huevo detenidas en la metafase TI. Después
factores que inducen la mitosis. Para comprender estos expe­ estimula a los ovocitos a madurar a huevos en ausencia de pro- !
de la fecundación, a actividad MPF disminuye de nuevo hasta
el aislam iento de grandes cantidades de huevos de las hem­ rimentos, primero deben describirse los acontecimientos de
bras y la fecundación de manera simultánea por el agregado maduración del ovocito que puede reproducirse in vitro. Cuan­
de espermatozoides (o a través de formas de tratamiento que do los ovocitos se desarrollan en el ovario de la rana, replican Transferencia
imitan la fecundación), los investigadores pueden obtener su DNA y se detienen en G1 durante 8 meses, tiempo duran­ de citoplasma
extractos de células que se encuentran en puntos específicos te el cual aumentan de tamaño hasta alcanzar un diámetro de
del ciclo celular para el análisis de proteínas y actividades 1 mm, y acumulan todos los materiales que se requieren para
enzimáticas. las numerosas divisiones celulares necesarias para geoerar ---+ ---+
En las secciones siguientes se describen los experimen­ un renacuajo capaz de nadar y alimentarse. Cuando son esti­ fl 11
tos crí ticos que condujeron al modelo actual de regulación muladas por un macho, las células ováricas de una hembra
del ciclo celular eucarionte, resumidos en la figura 21-2, y adulta secretan la hormona esteroide progesterona, que indu­
Inyección Ovocito Meiosis 1 Huevo detenido
se presentan detalles adicionales de los diversos aconteci­ ce a los ovocitos detenidos en G1 a entrar en meiosis I y pro­ Huevo detenido
de MPF detenido en G2 en meiosis 11
gresar hasta la segunda metafase rneiórica (fig. 21-5). En este en metafase 11
mientos reguladores. Como se verá, los resultados obteni­
dos con los diferentes sistemas y enfoques experimentales estadio, las células se denominan huevos. Cuando los esper­
Á FIGURA EXPERIMENTAL 21-6 Un factor difusible repetirse var ias veces sin el agregado de progesterona. lo que
p roporcionaron un panorama de cada uno de los puntos de matozoides lo fecundan, el núcleo del huevo se libera de su
presente en los huevos de Xenopus detenidos promueve demuestra que el citoplasma del huevo contiene un factor
transición importantes del ciclo celular. Por razones históri­ detención en metafase Il y completa la meiosis. El pronúcleo promotor de maduración (MPF) de ovocitos. La microinyección
la maduración meiótica. Cuando alrededor de un 5% del
cas, los nombres de diversas ciclinas y cinasas dependientes haploide resultante se fusiona luego con el del espermatozoi­ citoplasma de un huevo no fecundado de Xenopus dete nido en la de ovocitos detenidos en G2 fue el primer ensayo para determmar
de ciclina de las levaduras v los vertebrados son diferentes. de, lo que produce el núcleo diploide del cigoto. A continua­ metafase de la meiosis 11 se mi croinyecta en un ovocito detenido la actividad del MPF (paso IEJJ en diferentes estadios del c1clo
E n el cuadro 21-1 se enut�eran los nombres de las que se ción tiene lugar la replicación del DNA y comienza la primera en G2 (paso ID). el ovocito entra en meiosis 1 (paso f)) y si gue celular y en diversos organismos. [Véase Y. Masui y C. L. Markert,
describen en este capítulo y se indica en qué momento del división mitótica de la embriogénesis temprana. Las células hasta la metafase de la meiosis 11 (paso 0). generando un huevo 1971, J. Exp. Zool 177:129.1
ciclo celular son activas. embrionarias resultantes atraviesan luego 11 ciclos celulares más maduro en ausencia de progesterona . Este proceso puede
860 CAPÍTULO 21 • R e gulac ión del ciclo celular eucari ont e 21 . 2 • Est ud ios bioquímicos c on ovocitos. huevos y embriones tempranos 861

<0111 FIGURA EXPERIMENTAL 21-7 son sincronizados, con todas las células embrionarias que en ­ Cuando núcleos preparados a partir de espermatozoides
La actividad del MPF e n ovocitos, tran en mitosis en forma simultánea. Los estudios bioquímicos de Xenopus se agregan a este extracto de huevos de Xenopus,
Prog e ster ona huevos y embriones tempranos de con huevos y embriones de erizo de mar llevaron a la identifi­ la cromatina fuertemente condensada de los espermatozoides
Fe c undaci ó n

il
Xenopus alcanza su nivel máximo cación del componente ciclina del MPF. Estos ensayos con se descondensa y el DNA del espermatozoide se replica una

l � cuando las células entran en meiosis y huevos de erizo de mar fertilizados de manera sincronizada re­ vez. Los cromosomas replicados del espermatozoide se con­
mitosis. En la figura 21-5 se observan los velaron que la concentración de una proteína alcanzaba su nivel densan a continuación y la envoltura nuclear se fragmenta, co­
diagramas de las estructuras celulares que mo sucede en las células intactas que entran en mitosis. Alre­
máximo al principio de la mitosis, disminuía en forma abrupta
corresponden a cada estadio. La actividad
inmediatamente antes de la división celular y luego aumentaba dedor de 10 minutos después de la fragmentación de la
del MPF fue determinada por el ensayo
durante la interfase siguiente para alcanzar un punto máximo envoltura nuclear, toda la ciclina B presente en el extracto se
de microinyección de la figura 21·6 y se
al comienzo de la próxima mitosis y caer en forma abrupta in­ degrada en forma súbita, como sucede en las células intactas
cuantificó mediante diluc iones de
extractos celulares. Para la explicación mediatamente antes de la segunda división (fig. 21-8). El análi­ después de la anafase. Después de la degradación de la cicli­
Detención Meiosis 1 Detención en met afase Primer a Segunda véase el texto. IVéase J. Gerhart y col., 1984, sis cuidadoso mostró que esta proteína, denominada cic/ina B, na B, los cromosomas del espermatozoide se descondensan y
en G2 de la meiosis 11 mitosis mitosis J Cell Biol 98:1247; adaptado de A. Murray y M. se sintetiza de manera continua durante los ciclos celulares em­ la envoltura nuclear se forma otra vez alrededor de ellos, co­
embrionari{l em b rio nari a W. Kirschner. 1989. Nature 339:275.1 brionarios, pero se destruye en forma abrupta después de la ana­ mo en una célula intacta al final de la mitosis. Después de
Tie mpo ------:;. fase. Dado que su concentración alcanza el nivel máximo en la unos 20 minutos, el ciclo empieza de nuevo. El DNA que se
mitosis, la ciclina B funciona como una ciclina rnitótica. encuentra dentro de los núcleos formados después del primer
En experimentos posteriores, se usó una copia de cDNA período mitótico (ahora 2n) se replica, formando núcleos 4n.
(a) Min (posfecundación)
que el cigoto (huevo fecundado) entra en la primera mitosis del que codifica la ciclina B del erizo de mar como sonda para La ciclina B, sintetizada a partir del mRNA de ciclina B pre­
desarrollo embrionario. A lo largo de los siguientes 11 ciclos de <D <D <D <D <D <D <D <D
<D
O
<D
.-
<0
N
(0
M aislar un cDNA de ciclina B homólogo en Xenopus laevis. sente en el extracto, aumenta. Cuando la ciclina B se aproxi­
N M ..,_ [Link] <D r-. CO Ol
mitosis sincronizados en el embrión temprano, la actividad MPF La ciclina B pura de Xenopus, obtenida por la expresión del ma a sus niveles máximos, los cromosomas se condensan una
es baja en los períodos de interfase entre las mitosis y aumenta
a medida que las células entran en mitosis. Cicli na -
1 · • ;r·r�rr�.-·1 cDNA en E. coli, se usó para producir anticuerpos específi­
cos contra ciclina B. Mediante este anticuerpo, se detectó un
vez más, las envolturas nucleares se fragmentan y cerca de 10
minutos más tarde la ciclina B se destruye una vez más de for­
Aunque primero se descubrió en las ranas, la actividad MPF polipéptido en Western blot que coincidía con la actividad ma súbita. Estos notables extractos de huevos de Xenopus pue­
se halló en las células mitóticas de todas las especies ensaya­ MPF de huevos de Xenopus, lo que demostró que la ciclina den mediar varios de estos ciclos que imitan los ciclos sincro­
das. Por ejemplo, células de mamífero cultivadas pueden dete­ B-+ B es de hecho una subunidad del MPF. nizados rápidos de un embrión temprano de rana.
nerse en mitosis por tratamiento con compuestos (p. ej., col­ Los estudios con este sistema experimental de extractos de
chicina) que inhiben el ensamblaje de los microtúbulos. Cuando C-+ huevos se facilitaron por el desarrollo de un ensayo nuevo pa­
el citoplasma de esas células de mamífero detenidas en mitosis Los niveles de ciclina B y la actividad cinasa ra detectar la actividad del MPF. Usando MPF purificado me­
se inyectó en ovocitos de Xenopus detenidos en G2, los ovoci­ del factor promotor de la mitosis (MPF) cambian diante el ensayo de inyección de ovocitos (véase fig. 21-6), los
tos maduraron a huevos; esto es, las células somáticas de ma­ juntos en extractos de huevos de Xenopus investigadores encontraron que el MPF fosforila la histona Hl.
(b) Esta actividad de cinasa de H1 proporcionó un ensayo mucho
mífero en mitosis contenían un factor citosólico con actividad ro a> en ciclo
de MPF de rana. Este hallazgo sugirió que el MPF controla la e
-
•.
e:
más simple y más fácil de cuantificar para la actividad MPF que
entrada de las células somáticas de mamífero en la mitosis, así ·� � � 50 Algunos aspectos fuera de lo común de los ciclos celulares
sincronizados de los embriones tempranos de Xenopus propor­
el ensayo de inyección de ovocitos. Al disponer de un ensayo
conveniente, los investigadores rastrearon la actividad MPF y la
como el ingreso de ovocitos de rana en la meiosis. Cuando el Q) 'O
-o e e
citoplasma de células somáticas de mamífero detenidas en mi­ � :�·E cionaron una forma de estudiar el papel de la ciclina mitótica concentración de ciclina B en extractos de huevos de Xenopus
tosis se inyectó a células en interfase, estas últimas entraron en e
ct) ·.?!-or­
en el control de la actividad del MPF. Primero, después de la en ciclo. Estos estudios mostraron que la actividad MPF aumen­
mitosis; o sea, sus membranas nucleares se fragmentaron y sus .0 "O Q) fecundación de huevos de Xenopus los períodos G1 y G2 se re­ ta y disminuye de forina simultánea con la concentración de ci­
� e "O 25 ducen a un nivel mínimo durante los 12 ciclos celulares sincro­ clina B (fig. 21-9a). Los eventos tempranos de la mitosis, la con­
cromosomas se condensaron. Por lo tanto, el MPF es el factor Q) Q) (/)
(/) o
difusiblc, encontrado por primera vez en los experimentos de �
� ro­
- ro
nizados iniciales. Esto es, una vez terminada la mitosis, las cé­ densación de los cromosomas y la fragmentación de la envoltura
-o
fusión celular (véase fig. 21-3 }, que promueve la entrada de las co � � lulas embrionarias tempranas pasan de inmediato a la próxima nuclear ten ían lugar cuando la actividad MPF alcanzaba sus ni­
"O ·Q) Q)
fase S, y una vez que termina la replicación del DNA, las célu­ veles más altos, en forma paralela al aumento de la concentra­
células en mitosis. Es muy conveniente que la sigla MPF tam­ � ��
bién signifique mitosis [Link] factor, un nombre que de­ � "O las pasan casi inmediatamente a la próxima mitosis. Segundo, ción de ciclina B. El agregado de cicloheximida, un inhibidor
e , ..,
...
no(a una actividad más general de este factor. la oscilación de la actividad MPF que se produce cuando los de la síntesis de proteínas, impidió la síntesis de ciclina B y tam­
60 120
Debido a que el ensayo de inyección de ovocitos usado embriones tempranos de rana entran y salen de la mitosis se ob­ bién impidió la elevación de la actividad MPF, la condensación
Min (posfecundación)
en principio para medir la actividad MPF es muy engorroso, serva en el citoplasma de un huevo de rana fecundado incluso de los cromosomas y la fragmentación de la envoltura nuclear.
pasaron varios años antes de que el MPF fuera purificado por cuando el núcleo se extirpa y no puede haber transcripción al­ Para probar las funciones de la ciclina B en estos eventos
¿FIGURA EXPERIMENTAL 21-8 Dete cc ión experimental de guna. Este hallazgo indica que todos los componentes celulares del ciclo celular, todos los mRNA presentes en los extractos
cromatografía en columna y caracterizado. El MPF es, en efec­ la síntesis y la destrucción cíclicas de ciclinas mitóticas en
to, uno de los complejos heterodiméricos compuestos por una requeridos para que se produzcan los ciclos celulares truncados de huevos se degradaron por digestión con una concentración
embriones de erizo de mar. U na suspensión de huevos de
ciclina y CDK que en el presente se sabe regulan el ciclo en los embriones tempranos de Xenopus están almacenados en baja de RNasa que luego se inactivó por el agregado de un
erizo de mar se fecundó de manera sincronizada por el agregado
celular. Al inicio cada subunidad de MPF se reconoció por el huevo no fertilizado. En las células somáticas formadas inhibidor específico. Este tratamiento destruye los mRNA sin
de espermatozoides de erizo de mar y se ad ic ionó 35S-metionina.
medio de diferentes enfoques experimentales. En primer lugar A interval os de 10 minutos. empezando 16 minutos después de en etapas más tardías del desarrollo y en las levaduras descritas afectar los tRNA y rRNA necesarios para la síntesis de pro­
en secciones posteriores, deben producirse mRNA específicos en teínas, ya que su degradación requiere concentraciones mu­
se explicará cómo se identificó la subunidad ciclina regulado­ la fecundación, se tomaron muestras para el análisis de proteínas
ra y luego se describirá la manera en que los experimentos en gel de SDS-poliacrilamida y para la detección de la d ivisión determinados momentos del ciclo celular para que tenga lugar cho más altas de RNasa. Cuando se agregaron núcleos de es­
genéticos con levaduras condujeron al descubrimiento de la sub­ celular por microscopia. (a) Autorradiogramas de los geles SOS el progreso a través del ciclo. Pero en los embriones tempranos permatozoides a los extractos tratados con RNasa, los núcleos
de cada muestra. La mayor parte de las proteínas. como X e Y, de Xenopus, todos los mRNA necesarios para las divisiones ce­ 1n replicaron su DNA, pero no hubo aumento de la activi­
unidad CDK catalizadora.
aume ntaro n de intensidad en forma continua. Por el contrario, la lulares tempranas están presentes en el huevo no fecundado. dad MPF ni tuvieron lugar los eventos mitóticos tempranos
i nte ns idad de la ciclina disminuyó de manera súbita a los 76 Por lo tanto, los extractos preparados a partir de huevos de (condensación de cromosomas y fragmentación de la envol­
minutos después de la fecundación y luego comenzó a aumentar tura nuclear) que promueven los extractos no tratados (fig.
La ciclina mitótica se identificó primero Xenopus no fecundados contienen todos los materiales reque­
de nuevo a los 86 minutos. La banda de ciclina alcanzó su nivel
en embriones tempranos de erizo de mar ridos durante varios ciclos celulares, incluidas enzimas y precur­ 21-9b). El agregado de mRNA de ciclina B, producido in vi­
máximo cada vez a los 1 06 min y volvió a d isminuir a los 126
sores necesarios para la replicación del DNA, histonas y otras tro a partir de cDNA clonado de ciclina B, al extracto de hue­
min. (bl Gráfico de la intensidad de la banda de ciclina (línea roja)
Los experimentos con inhibidores mostraron que para el au­ y de la fracción de células que sufr ieron división durante el proteínas de la cromatina necesarias para el ensamblaje del DNA vos tratado con R Nas a más los núcleos de espermatozoides
mento de MPF durante la fase mitótica de cada ciclo celular en intervalo de 10 minu tos previo (línea azul). Nótese que la cantidad replicado para formar cromosomas, así como proteínas y fos­ restauró las oscilaciones paralelas de la concen tración de la
embriones tempranos de rana se necesita la síntesis de proteínas de ciclina disminuyó con rapidez inmediatamente antes de la folípidos necesarios para la formación de la envoltura nuclear. ciclina B y la actividad M P F y los eventos mitóticos caracte
nuevas. Como sucede en los embriones tempranos de rana, los división celular. !De T. Evans y col., 1983. Cell 33:389; cortesía de Estos extractos de huevos también sintetizan proteínas codifi­ rísticos tempranos y tardíos, como se observan con el extrac­
cidos celulares iniciales en el embrión temprano de erizo de mar [Link] Hunt, Imperial Cancer Research Fund.J cadas por mRNA presentes en el extracto, incluida la ciclina B. to de huevos no tratado (fig. 21-9c). Dado que la cic lina B es

i
862 CAPÍTULO 21 • Regulac16n del ciclo celular eucaríonte 21.2 • E studios bioquímicos con ovocitos, huevos y e mbriones tempranos 863

(al Extracto no tratado - =Actividad del MPF (b) Extracto tratado con RNasa Metafase ... Fig. 21-10. Regulación de los niveles
- - Concentración de cicli n a B Ciclina mitótica elevada de ciclina mitótica en las células
Eventos mi tóticos Actividad del MPF elevada embrionarias tempranas de Xenopus en
� ciclo. En la anafase tardía, el complejo
Agregado Agregado
de n ú cleos de de núcleos de promotor de la anafase (APC) poliubicuitina
espermatozo ides i 1 erermatozoides a las c1chnas mitóticas. Cuando las ciclinas

il
se degradan por acc1ón de los
t proteasomas, la act1v1dad c�nasa del MPF
d1sm1nuye con rapidez, activando el 1n1cio
de la telofase. La act1v1dad del APC se
APC

()
dirige hacia las ciclinas mitóticas por
activo acción de un factor de especificidad,
llamado Cdhl, que es fosforilado y por
Tiempo� Tiempo� Ciclina ende �nactivado por los complejos ciclina
Cdc14 G.-CDK. Una fosfatasa específica, llamada
G1-CDK
Proteasoma f� Cdc14, elimina el fosfato regulador del
Síntesis de p) factor de especificidad en la anafase
(el Extracto tratado con RNasa + mANA de ciclina 8 de tipo
silvestre
(d) Extracto tratado con RNasa + mANA de ciclina 8 no degradable
cic li na mitótica +QAPc l1P tardia. Una vez que el factor de
inactivo especificidad se inh1be en G,, la
Event o s mi tótico s Cdhl
� concentración de cichna mitótica aumenta
Agregado Agregado y termina por alcanzar un nivel lo
de núcleos de de núcleos de suficientemente alto como para estimular
j 1es¡ermatozoides espermatozoides la entrada en la mitOSIS Siguiente.

il •

Detención ..j Ciclina mitótica baja

T ie mpo � 1< de la mitOSIS "1 Actividad MPF baja
Tiempo�
Telofase

.t. FIGURA EXPERIMENTAL 21-9 Los ciclos de actividad del eventos mitóticos tempranos (sombreado azul), como la
MPF y los eventos mitóticos en extractos de huevos de condensación de los cromosomas y la fragmentaCión de la
envoltura nuclear. y de eventos tardíos (sombreado anaranjado).
período de la mitosis en el que las cromátidas hermanas se se­ En la figura 21-1O se observa el modelo actual que mejo r
Xenopus dependen de la síntesis y la degradación de cichna
B. En todos los casos la act ividad del MPF y la concentración de como la descondensación de los cromosomas y el reensamblaje
paran y se traccio nan hacia los polos opuestos del huso. explica los cambios en los niveles de ciclina mitótica vistos en
ciclina B se determinó en diferentes momentos después del de la envoltura nuclear. Para la explicación véase el texto. (Véase Los estudios bioquímicos con extractos de huevos de Xe­ las células de embriones tempranos de Xenopus en ciclo. La ci­
agregado de núcleos de espermatOZOides a un extracto de A W Murray y col., 1989, Natura 339275; adaptado de A. Murray y T. twjms mostraron que, en el momento de su degradación, las clina B, la ciclina mitótica primaria de los animales m ulticelu­
huevos de Xenopus tratado como se 1nd1ca en cada panel. Las Hunt. 1993, The Cell Cycle: An lntroduct1on. W. H. Freeman and ciclinas de tipo B s ilv estre se modifican por el agregado co­ lares (metazoos), se sintetiza a lo largo del ciclo celular a partir
observacio nes microscópicas determinaron la presenc ia de Company) valenre de numerosas moleculas de ubi cuitin a. Este proceso de un mRNA establ e. El descenso observado en su concentra­
de poliub�euitinación marca a las proteínas de las células eu­ CIÓn en l a anafa se tar día es resultado de su degradación estimu­
carionres para su de gra da c ió n rápi da por los proteasomas, lada por el APC en esta fase del ciclo celular. Como se explica­
que son estructuras cil ín dr icas multiproteica!> que contienen r;) e n la sección 21.5, los estudios genéticos con levaduras
la única proteína sintetizada en estas condiciones, estos resul­ Los result ados de los dos e x per imen tos con extractos trata­ numerosas proteasas. El agregado de una cadena de ubicui­ condujeron a la identificación de un (aclor de especificidad APC,
tados muestran que es fa proteína crucial cuya síntesis es ne­ dos con RNasa muestran que la entrada en mitosis precisa la tina a una ciclina del tipo B o a otra proteína diana requiere den om inado Cdh 1, que se une al APC y lo dirige hacia las ci­
cesaria para re gular la ac t ivid ad MPF y los ciclos de conden­ acumulación de ciclina B, la ciclina mitótica de Xenopus, has­ tres tipos de enzimas (véase fig. 3-13). La ubicuitina se acti­ clinas mitóticas en las que se produjo poliubicuitinación. Este
sación de los cromosomas y de fragme nt ac ión de la envoltura ta [Link] niveles altos, y que la salida de la mitosis requiere va primero en su extremo carboxilo por la formación de una factor de especificidad e� activo solo en la anafase tardía, cuan­
nuclear med1ados por los extracto� de huevos de Xenopus. la d egradación de esta ctclina mitótica. Dado que la acti vidad ligadura tioéster con un residuo de c is teína de la enzima ac­ do los cromosoma<; en '>eparación se distanciaron lo suficiente
En esto'> [Link] la de'>condensación de los cromo­ cinasa del MPF varió en forma paralela con la concentración tiL,adora de la ubicuitina, [l. A continuación la ubicuitina se en la célula en divistón como para asegurar que ambas células
somas y el ensamblaje de la envoltura nuclear (los eventos mi­ de la ctclina rnitótica, los resultados implica n que la actividad transfiere de la El a una cisreína de una clase de entimas re­ htjas contendr án un juego comp leta de cromosomas. La fosfo­
t óticos tardío�) coincidieron con las disminuciones del nivel de alta de MPF cinasa produce la entrada en mitosis y que se ne­ lacionadas, llamadas enzmras con¡ugadoras de ubicuitina, E2. rilación de Cdh1 por otros complejos cicl ina-CDK durante G1
ciclina B y de la actividad del MPF. Para determinar si la de­ cesita una caída en la ac tividad MPF cin as a para salir de ella. La F..2 específica determina, junto con una tercera proteína, inhibe su asociación con el APC y por ende la degradación de
gradación de la ciclina B es necesaria para salir de la mitosis, la ubicuitina ligasa (E3), la proteína sustrato a la que se uni­ la ciclina mitótica (véase fig. 21-2, paso 121). Esta inhibición per­
los invest iga dores agregaron un mRNA mutanre que codifica rá de forma covalenre una cadena de ubicuitina. Muchas li­ mite la elevación gradual de los niveles de ciclina mitótica ob­
una ciclina B no degradable a una mezcla de extracto de hue­ El complejo promotor de la anotase (APC) gasa� de ubicuitina son proteínas con varias subunidades. servada a lo largo de la interfase del ciclo celular siguiente.
vos de Xenopus tratados con RNasa y núcleos de espermato­ controla la degradación de las ciclinas mitóticas La determinación de la secuencia de los cONA que codifi­
wides. Como se muestra en la fi gu ra 21-9d, la acti vi dad MPF y la soHda de la m¡tn,.is can algunas ciclinas del upo B de varios eucariontes mostró

,
aumentó en forma paralela con el nivel de ciclina B mutante, que todas contienen una secuencia h omó loga de nueve residuos
CONCEPTOS CLAVE DE LA SECCIÓN 21.2
lo que desencadena la condensación de la cromatina de los es­ En estudios
adicionales se reveló que las células de verte­ cerca del extremo N, deno minada caja de destrucción. La de­
[Link] y la fragmentación de la envoltura nuclear brados contienen tres proteí nas que pueden funcionar como leción de esta caja de des t r ucción, como se ve en el mRNA mu­ Estudios bioquímicos con ovocitos, huevos y embriones
(eventos mitóticos tempranos). Sin embargo la ciclina B mu­ una ciclina B pa ra estimular la maduración de ovocitos de Xe­ tante usado en el experimento representado en la figura 21-8,
tempranos
tante producida en esta reacción nunca se degradó. En conse­ tzo¡ms: dos ciclinas B estrechamente relacio na das y una cicli im pide la poliu bicu iti naci ón de las ciclinas del tipo B y por con­
cuencia, la actividad :\.1PF permanecía elevada y los eventos na A. De no m inadas en co nju nt o ciclinas de tipo B, estas pro­ siguiente las transforma en no degradables. La lig as a de la ubi­ El MPF es una proteincinasa que requiere una ciclina mi
mitóticos tardíos de descondensación de lo s cromosomas y f or­ teínas muestran r egio nes de alta homología de secuencias. (Las cuitina que reconoce la caja de destrucción de la ciclina miró­ tótica para su actividad. La actividad proreincinasa del MPI
mación de la envoltura nuclear estaban bloqueados. Este ex­ cidinas de tipo B se diferencian de las G1 descr itas en la sec­ rica es una proteína con múltiples subunidades denominada estimula el comienzo de la mitosis al fosforilar varios <;[Link];l·
perimento muestra que el descenso de la actividad MPf y la ción 21.5.) En las células intactas, la deg radación de todas )a, comp/e¡o promotor de la anafase (APC), que se mencionó an­ tos proteicos específicos, la mayoría de los cuales todavl•l no
salida de la mitosis dependen de la degradación de la cidina B. cicl inas de tipo B empieza desp u és del inicio de la anafase, el tes en este capítulo (véase fig. 21-2, pasos [ID y [2]). se identificaron.
864 CAPÍTULO 21 • Regulación del ciclo celular eucarionte 21.3 • Estudios genéticos con S. pombe 86�

• En las células en división sincronizada de embriones tem­ ta la síntesis continua de una ciclina mitótica, seguida por su nos como exponente ([Link]., cdc2-). Las proteínas codificadas El aislamiento y la determinación de �c�m·[Link] �k mro
pranos de Xenopus y erizo de mar, la concentración de cicli­ degradación periódica en la anafase tardía, para que tengan por un gen particular se designan por el símbolo del gen en gen cdc de S. pombe (cdc13•), que también l'' nn:c....u-io pM.l
nas mitóticas (p. ej., la ciclina B) y la actividad del MPF au­ lugar los ciclos rápidos de mitosis observados en embriones tipo romano con una inicial mayúscula (p. ej., Cdc2). la entrada en la mitosis, reveló que codifica un.1 protl'Ín:• con
mentan a medida que las células ingresan en mitosis y luego tempranos de Xenopus. La identificación de la subunidad ca­ homología con la ciclina B del erizo de mar y dt• 'ú�IIO/IIIS. Ln
disminuyen cuando salen de ella (véanse figs. 21-7 y 21-8). talizadora de proteincinasa del MPF y el conocimiento adi­ estudios adicionales se demostró que un hctnodínwro d
cional de su regulación provienen del análisis genético del ci­ Un complejo muy conservado similar al MPF Cdc13 y Cdc2 forma el MPF de S. pombe; como d ¡\II'F d
• La elevación y la caída de la actividad del MPF durante
clo celular en la levadura de fisión S. pombe. Ésta crece como controla la entrada en la mitosis de S. pombe Xenopus, este heterodímero tiene actividad de pmtt•ut(lll;l'iJ
el ciclo celular es resultado de la síntesis y la degradación
una célula en forma de bastón que aumenta de longitud a me­ que fosforila la histona Hl. Es más, la actividad protdn\�111,1
concomitante de ciclina mitótica (véase fig. 21-9). Las mutaciones sensibles a la temperatura de cdc2, uno de
dida que crece y luego se diviue por la mitad durante la mi­ sa de Hl aumenta cuando las células de S. pombe t·ntrilll en
• El complejo promotor de la anafase (APC) compuesto tosis, para producir dos células hijas del mismo tamaño (fig. varios genes cdc diferentes en S. pombe, producen fenotipos mitosis y disminuye cuando salen de ella, en forma p.�[Link] i!l
¡por numerosas subunidades es una ligasa de ubicuitina que 21-11). opuestos en función de si la mutación es recesiva o dominan­ incremento y la disminución del nivel de Cdc13. Estos h,¡Jl,¡
reconoce la secuencia conservada de una caja de destrucción En la S. pombe tipo silvestre, la entrada en la mitosis es­ te (fig. 21-12). Las mutaciones recesivas (cdc2-) por lo general gos, que son análogos por completo a los resultados ohtnu
de las ciclinas mitóticas y promueve su poliubicuitinación, tá regulada con cuidado para coordinar en forma adecuada dan lugar a células anormalmente largas, en tanto que las do­ dos con extractos de huevos de Xenopus (véase fig. 21 lJ,, .

para marcar así a las proteínas para su degradación rápida la división celular con el crecimiento celular. Las mutantes minantes (cdc2°) generan células demasiado pequeñas, el feno­ identificaron a Cdcl3 como la ciclina mitótica de S. pom/J(
en los proteasomas. La disminución resultante de actividad sensibles a la temperatura de S. pombe con defectos condi­ tipo wee. Como se describió en el capítulo 9, las mutaciones En estudios adicionales se observó que la proteína Cdc2 ¡m
MPF lleva a la finalización de la mitosis. cionales en la capacidad de progresar a través del ciclo celu­ recesivas por lo general causan una pérdida de la función de la lada y sus homólogos en otros eucariontes tienen poca activr
lar se reconocen con facilidad porque esos defectos producen proteína del tipo silvestre; en las células diploides ambos ale­ dad cinasa hasta que se unen a una ciclina. Por lo tanto, est.l
• La actividad ligasa de ubicuitina del APC es controlada,
cambios característicos en la longitud de las células a la tem­ los deben estar mutados para que se observe el fenotipo mu­ familia de proteincinasas se conoció como cinasas dependien­
de forma que en las ciclinas mitóticas sólo se produzca po­
peratura no permisiva. La mayoría de tales mutantes que fue­ tante. Por el contrario, las mutaciones dominantes suelen pro­ tes de ciclina o CDK.
liubicuitinación durante la anafase tardía (véase fig. 21-1 0).
ron aislados pertenecen a dos grupos. En el primer grupo se ducir un aumento de la función de la proteína, ya sea por la Los investigadores pronto encontraron que los anticuer­
La desactivación del APC en G1 permite la acumulación de
encuentran las mutantes cdc, que no progresan a través de las superproducción o por la falta de regulación; en este caso, la pos dirigidos contra una región muy conservada de la Cdc2
ciclinas mitóticas durante el ciclo celular siguiente. Esto pro­
fases del ciclo celular a la temperatura no permisiva; forman presencia de sólo un alelo mutante confiere el fenotipo mutan­ reconocen un polipéptido que se purifica junto con el MPf
duce los aumentos y las disminuciones cíclicos en la activi­
células muy largas porque continúan creciendo en longitud, te a las células diploides. El hallazgo de que una pérdida de ac­ purificado a partir de huevos de Xenopus. Por lo tanto, el
dad de MPF que causan la entrada y la salida de la mitosis.
pero no se dividen. Por el contrario, las murantes wee for­ tividad de Cdc2 (mutantes cdc2 ) impide la entrada en la mi­ MPF de Xenopus también está compuesto por una ciclina
man células más pequeñas de lo normal, debido a que son tOsis y que un aumento de su actividad (mutantes cdc2°) la mitótica (ciclina B) y una CDK (llamada CDK1). Esta con­
defectuosas en las proteínas que normalmente impiden que inicia más temprano de lo normal identificó a Cdc2 como un vergencia de resultados de los estudios bioquímicos en un
I'.JH Estudios genéticos con S. pombe las células se dividan cuando son demasiado pequeñas. regulador importante de la entrada en la mitosis en S. pombe.
El gen de tipo silvestre cdc2• contenido en una genoteca
invertebrado (el erizo de mar) y un vertebrado (Xenopus),
Para S. pombe los genes tipo silvestre se escriben en cur­ así como de los análisis genéticos en una levadura indican
Mediante los estudios con extractos de huevos de Xeno­ siva, con un signo más como exponente (p. ej., cdc2•); los ge­ de plásmidos de S. pombe se identificó y aisló por su capaci­ que la entrada en la mitosis es controlada por complejos ci­
pus descritos en la sección previa se demostró que se necesi- nes con una mutación recesiva, en cursiva con un signo me- dad de complementar las mutantes cdc2- (véase fig. 21-4). La clina-CDK mitóticos análogos en todos los eucariontes (véa ­
determinación de secuencias mostró que el cdc2• codifica una se fig. 21-2, paso [Z] ). Es más, se encontró que la mayoría
pro(éína de 34 kDa con homología con las proteincinasas de de proteínas que participan están muy conservadas durante
(a) (b) Ci toci nesis

0
los eucariontes. En estudios posteriores, los investigadores la evolución.
identificaron clones de cONA de otros organismos que po­

""'''"�-
dían complementar los mutantes cdc2- de S. pombe. Lo más
notable fue que aislaron un cONA humano que codifica una
Dlvl•lóo _, la fosforilación de la subunidad COK regula
proteína idéntica a la Cdc2 de S. pombe en el 63% de sus re­ ·

la actividad cinasa del MPF

siduos.
Separación de los
El análisis de otras mutantes cdc de S. pombe reveló que
cromosomas
proteínas codificadas por otros genes regulan la actividad de
proteincinasa del complejo ciclina-CDK mitótico (MPF) en las

Q) � Crecimiento
cdc2+
(tipo silvestre)
�
levaduras que se reproducen por fisión. Por ejemplo, los mu­
tantes cdc25- sensibles a la temperatura demoran su entrada en

�
Q.
Formación
del huso
la mitosis a la temp�ratura no permisiva, y produce células lar­
gas. Por otro lado, la sobreexpresión de Cdc25 por acción de
cdc2-
un plásmido presente en varias copias por célula disminuye la
(recesivo) duración de G2, y genera la entrada prematura en mitosis y cé­
lulas pequeñas (wee) (fig. 21-13a). Por el contrario, las muta­
Punto
ciones con pérdida de función en el gen wee1• causan la entra­
--de inicio
(START) da prematura en mitosis, lo que produce células pequeñas, en

@
Condensación cdc0
tanto que la superproducción de proteína Weel aumenta la du­

�
de los (dominante)
ración de G2, lo que genera células largas. Una interpretación
cromosomas
lógica de estos resultados es que la proteína Cdc25 estimula la
A. FIGURA EXPERIMENTAL 21-12 Las mutantes recesivas actividad cinasa del MPF de S. pombe, en tanto que la proteí­
y dominantes cdc2 de S. pombe tienen fenotipos opuestos. na Weel inhibe la actividad MPF (fig. 21-13b).
Replicación La célula del tipo silvestre (cdc2•) se re presenta en forma En estudios posteriores se aislaron los genes cdc2S• y
Duplicación del esquemática con dos células hijas de tamaño normal

�
del DNA weel+ del tipo silvestre, se determinó su secuencia y se usa­
cuerpo del polo
inmediatamente antes de la citocinesis. La mutante recesiva ron para producir las proteínas que codifican mediante vec
del huso
cdc2- no puede entrar en mitosis a la temperatura no pe rmisiva
tores de expresión convenientes. Las secuencras deducid,,.,
y aparece como una célula larga con un solo núcleo que
de Cdc25 y Wee1, así como los estudios bioquímicos de !,1..,
A. Fig. 21-11. Levadura de fisión S. pombe. (a) Microfotografía (b) Eventos principales en el ciclo celular de S. pombe. Nótese contiene los cromosomas replicados. La mutante cdc2°
electrónica de barrido de células de S. pombe en diferentes que la envoltura nuclear no se fragmenta durante la mitosis en dominante entra en mitosis de manera prematura, antes de
proteínas demostraron que ellas regulan la actividad cin,,.,,,
estadios del ciclo celular. Las células largas están a punto de S. pombe ni en otras levaduras. IParte (a) cortesía de N. alcanzar el tamaño normal en G2; asi, las dos células hijas que del MPF de S. pombe por fosforilación y desfosforilación dt�
entrar en mitosis; las cortas recién sufrieron citocinesis. Hajibagheri.J resultan de la citocinesis son de menor tamaño que lo normal, sitios reguladores específicos en Cdc2, la subunidad ( DK
o sea. tienen el fenotipo wee. del MPF.
866 CAPÍTULO 21 • Regulación del ciclo celular eucari onte 21.3 • Estudios genéticos con S. pombe 867

(a) hos residuos están fosforilados, el MPF es inactivo. Por último, (a) CDK2 libre
la fosfatasa Cdc25 elimina el fosfato de Y15, lo que genera un

e ) MPF muy activo. La mutagénesis específica de sitio, que cam­

Déficit de Cdc25
o o
bia el Y15 en la CDK de S. pombe a una fenilalanina que no
exceso de Wee1
puede fosforilarse, produce mutantes con el fenotipo wee, simi­
Células largas
(G2 prol ongado) lar al de las murantes wee1·. Ambas mutaciones impiden la fos­
forilación inhibitoria de Y15, lo que produce una incapacidad
para regular en forma adecuada la actividad del MPF y, en con­

@
Déficit de Wee 1
secuencia, la entrada prematura en mitosis.
o
exceso de Cdc25
Células pequeñas
Los cambios de conformación inducidos
(G2 acortada)
por la unión y la fosforilación de la ciclina
aumentan la actividad del MPF
(b)
MPFde A diferencia de lo que sucede con las levaduras que se re­
S. pombe producen por fisión y brotación, cada una de las cuales pro­
duce solo una CDK, los vertebrados generan varias CDK (véa­
.á. Fig. 21-15. Modelos estructurales de la CDK2 humana, extensa con la ciclina A. se desplaza varios angstroms dentro del

Wee1
\ Cdc25
se cuadro 21-1). Se determ inó la estructura tridimensional de
una cinasa dependiente de ciclina humana (CDK2) y propor­
que es homóloga a la cinasa dependiente de ciclina (COK) de
S. pombe. (a) CDK2 libre, inactiva, no unida a la ciclina A. En la
surco catalizador. cambiando de posición cadenas laterales
catalizadoras clave necesarias para la especificidad de sustrato de
cionó un panorama de la manera en que la unión de la ciclina CDK2 libre, el bucle T bloquea el acceso de los sustratos la reacción de fosforotransferencia. Las esferas rojas marcan la
y la fosforilación de las CDK regulan su actividad de protein­ proteicos al fosfato y del ATP que está unido, representado como posición equivalente a la treonina 161 en la Cdc2 de S. pombe.
.á. FIGURA EXPERIMENTAL 21-13 Cdc25 y Wee1 tienen cinasa. Aunque no se determinaron las estructuras tridimensio­ un modelo de esferas y barras. Las estructuras de las regiones (e) Complejo fosforilado. de alta actividad, ciclina A-CDK2. Los
efectos opuestos sobre la actividad de MPF en S. pombe. nales de la CDK de S. pombe y de la mayor parte de las otras resaltadas en amarillo se alteran cuando la CDK se une a la cambios de conformación inducidos por la fosforilación de la
(a) Las células que carecen de actividad Cdc25 o Wee1. como cinasas dependientes de ciclina, su extensa homología de se­ ciclina A. (b) Complejo ciclina A-CDK2 no fosforilado de baja treonina activadora (esfera roja) modifican la forma de la
resultado de mutaciones recesivas sensibles a la temperatura en actividad. Los cambios de conformación inducidos por la unión superficie de unión al sustrato. aumentando en gran medida la
cuencias con la CDK2 humana sugiere que todas estas CDK
los genes correspondientes. tienen fenotipos opuestos. De la de un dominio de ciclina A (verde) hace que el bucle T se separe afinidad por el sustrato proteico. [Cortesía de P. D. Jeffrey. Véase A.
tienen una estructura y un mecanismo de regulación similares.
misma forma. las células con copias numerosas de plásmidos que del sitio activo de CDK2. de manera que las proteínas sustrato A. Russo y col.. 1996, Nature Struct. Biol. 3:696.1
contienen cdc25• o wee7• de tipo silvestre y que por lo tanto La CDK2 no fosforilada, inactiva, contiene una región fle­ puedan unirse. La hélice a1 en CDK2. que interactúa en forma
producen un exceso de las proteínas codificadas por ellos. tienen xible, llamada bucle T, que bloquea el acceso de los sustra­
fenotipos opuestos. (b) Estos fenotipos implican que el complejo tos proteicos al sitio activo donde se une el ATP (fig. 2 1-15a).
ciclina-CDK mitótico es activado hl por Cdc25 e inhibid o ( -1) Este bloqueo estérico por el bucle T explica en gran medida
por Wee1. Para una explicación adicional véase el texto. por qué la CDK2 libre, no unida a la ciclina, no tiene activi­ teicos (fig. 2l-15c). Como resultado, la actividad cinasa del interfase. Como resultado, el MPF de Xenopus formado por
dad de proteincinasa. La CDK2 no fosforilada unida a una complejo fosforilado es cien veces mayor que la del no fos­ la COK 1 y la ciclina mitótica recién sintetizada es inactivo.
de sus ciclinas asociadas, la ciclina A, tiene una actividad de forilado. A medida que el extracto inicia los sucesos de la mitosis, la
proteincinasa mínima, pero detectable in vitro, aunque pue­ El residuo inhibidor de tirosina (Y 15) en la CDK de S. actividad de Wee 1 disminuye y la de Cdc25 aumenta, de for­
En la figura 21-14 se ilustran las funciones de cuatro pro­ de ser esencialmente inactiva in vivo. Las interacciones exten­ pombe está en la región de la proteína que liga los fosfatos ma que MPF se convierte en su forma activa. Aunque la ci­
teínas que regulan la actividad proteincinasa de la CDK de sas entre la ciclina A y el bucle T causan un cambio especta­ del ATP. Las proteínas CDK2 de los vertebrados contienen un clina B es la única ptoteína cuya síntesis es necesaria para el
S. pombe. La primera es Cdc13, la ciclina mitótica de S. pombe cular en la posición del bucle T, y exponen así el sitio activo segundo residuo inhibidor, treonina-14 (T14 ), localizado en la ciclo de los embriones tempranos de Xenopus, las activida­
de CDK2 (fig. 21-15b). La unión de la ciclina A también des­ misma región de la proteína. La fosforilación de Y15 y T14 des de otras proteínas, como Wee1 y Cdc25 de Xenopus, de­
(equivalente a la ciclina B de los metazoos) que se asocia con la
CDK para formar un MPF con actividad muy baja. La segun­ plaza la posición de la hélice al de la CDK2, y modifica su en estas proteínas impide la unión del ATP, debido a la repul­ ben regularse en forma adecuada para que el ciclo se produz­
da es la Weel protcína-tirosincinasa, que fosforila un residuo superficie de unión al sustrato. La fosforilación de la treoni­ sión electrostática entre los fosfatos unidos a la proteína y los ca. En su forma activa, Cdc25 está fosforilada. Su actividad
de tirosina inhibidor (Y15) en la subunidad CDK. La tercera es na activadora, localizada en el bucle T, causa cambios de con­ del ATP. Por lo tanto, estas fosforilaciones inhiben la activi­ también la controlan proteincinasas y fosfatasas adicionales.
otra cinasa, denominada cinasa activadora de CDK (CAK), que formación adicionales en el complejo ciclina A-CDK2, que dad de proteincinasa incluso cuando la proteína CDK está uni­ La actividad del MPF también puede regularse por con ­
fosforita un residuo de treonina activador (T161). Cuando am- aumentan en gran medida su afinidad por los sustratos pro- da a una ciclina y el residuo activador está fosforilado. trol de la transcripción de los genes que codifican las proteí­
nas que regulan la 'actividad del MPF. P or ejemplo, después
de las divisiones celulares sincronizadas rápidas iniciales del
Otros mecanismos también controlan la entrada embrión temprano de Drosophila, todos los mRNA se degra­
en la mitosis regulando la actividad del MPF dan y las células se detienen en G2• Esta detención se produ­
MPF MPF MPF MPF ce porque el homólogo de Cdc25 en Drosophila, llamado
inactivo inactivo inactivo activo Hasta el presente se describieron dos mecanismos de con­ String, es inestable. La disminución resultante de la actividad
trol de la entrada en la mitosis: a) la regulación de la con­ fosfatasa de String mantiene el MPF en su estado inhibido y
Wee1 CAK Cdc25 centración de ciclinas mitóticas como se muestra en la figura evita la entrada en mitosis. El ingreso ulterior en la mitosis,
----+ ----+ ----+ 21-1O, y b) la regulación de la actividad cinasa del MPF, como regulado por grupos específicos de células se desencadena por
se observa en la figura 21- 14. Estudios adicionales de mutan­
la transcripción regulada del gen string.
tes de S. pombe con ciclos celulares alterados revelaron otros
Y15 T161 Y15 T161 T161
genes, cuyas proteínas codificadas influyen en forma directa

G9
Y15 T161
® ® ® ® o indirecta en la actividad del MPF. En la actualidad está cla­
ro que la actividad del MPF en S. pombe se regula de una
manera compleja con el objeto de controlar con precisión el CONCEPTOS CLAVE DE LA SECCIÓN 21.3
.á. Fig. 21-14. Regulación de la actividad cinasa del factor eliminación del fosfato de Y15 por la fosfatasa Cdc25 produce momento de la mitosis y por consiguiente el tamaño de las
promotor de la mitosis (MPFl de S. pombe. La interacción de MPF activo. en el que la subunidad de CDK está monofosforilada células hijas. Estudios genéticos con S. pombe
la ciclina mitótica (Cdc13) con la cinasa dependiente de ciclina en T1 61 . La subunidad de ciclina mitótica contribuye con la Se encontraron enzimas con actividades equivalentes a las
(Cdc2) forma el MPF La subunidad de CDK puede fosforilarse en especificidad de unión al sustrato del MPF. probablemente Wee1 y Cdc25 del S. pombe en extractos de huevos en ciclo • En la levadura de fisión S. pombe, el gen cdc2• codificl
dos sitios reguladores; por el Wee1 en la tirosina 15 (Yl 5) y po r formando parte de la superficie de unión al sustrato (zona de Xenopus. La actividad de tirosincinasa de la Weel de Xe­ una proteincinasa dependiente de ciclina (CDK} que se a�o­
la cinasa activadora de CDK (CAK) en la treonina 161 (T161) . La rayada), que también implica el residuo inhibidor Y15. nopus es alta y la de fosfatasa de Cdc25 es baja durante la cia con una ciclina mitótica codificada por el gen cdc 1 3•. El
868 CAPITULO 21 • Regu lación del ciclo celular eucarionte
21.4 • Mecanismos moleculare s de regula ción de lo s eventos mitóti cos 869
heterodírnero ciclin a-CDK mitótico resultante es equivalente (al �·�
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·/J���,� i."... > r�.r�--.���� � -;J � chos complejos de poros nucleares (véase fig. 5-19). La bica­ gión central de aspecto tubular formada por dos hélices a para­
a 1 MPF de Xenopus. Las mutantes que carecen de ciclina mi­ �1S· ': -.. ·�.:'.! ��..�;.�...:;�.��;
. 1-. ��r��
.. _ ,;.�4!.-.�c-:-
pa lipídica de la membrana nuclear interna está soportada por
lelas y enrolladas entre sí, y dominios de cabeza globular y de

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la laminilla nuclear, una malla de filamentos de lamina loca­
tótica o CDK no entran en mitosis y forman células largas.
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· cola; la polimerización de estos dímeros por medio de asociacio­

,¡� y � �� ..- --.. •.· -�-· � '�:�

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• La actividad de proteincin asa del complejo mitótico cicli­ i!1- "·:.t.'. ��#i!'t.� A>r.
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na-CDK (MPF) depende del estado de fosforilación de dos '"" �"0..&.:� ·,.-�
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A 21-16a). Las tres laminas nucleares (A, B y C) presentes en las
medios que componen la laminilla nuclear (véase fig. 19-33).

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células de vertebrados pertenecen a los filamento s intermedios,

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residuos presentes en la subunidad catalizadora CDK (véase Al comienzo de la mitosis, el MPF fosforila residuos de
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serina específicos en las tres laminas nucleares y produce la

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fig. 21-14). La actividad es máxima cuando la treonina-161

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está fosforilada y se inhibe por la fosforilación de la tirosi­
na-15 catalizada por Wee1, que interfiere en la unión co­
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Las laminas A y e, codificadas por la misma unidad de trans­
despolimerización de los filamentos intermedios de lamina
(fig. 21-16b ). Los dímeros fosforilados de lamina A y C se li­
rrecta del ATP. Este fosfato inhibidor es eliminado por la �--�
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cripción y producidas por el empalme alternativo de un único
pre-mRNA, son idénticas, salvo en una región de 133 residuos
beran en solución, en tanto que los dímeros fosforilados de
lamina B permanecen asociados a la membrana nuclear a tra­
f osfatasa de proteínas edc25. • :.

11J.m en el extremo e de la lamina A que está ausente en la C. La la­ vés de su anclaje isoprenilo . La despolim erización de las la­
• Una disminución en la actividad de Weel y un aumento mina B, codificada por una unidad de transcripción diferente, se
minas nucleares conduce a la desintegración de la malla de la
en la actividad de Cdc25, que producen la activación del modifica después de la traducción por el agregado de un grupo
laminil la nuclear y contribuye a la fragmentación de la en­
complejo ciclina-eDK mitótico, tienen como resultado el isoprenilo hidrófobo cerca de su extremo carboxilo. Este ácido
voltura nuclear. El experimento resumido en la figura 21-17
inicio de la mitosis. graso queda incluido por completo en la membrana nuclear in­
muestra que la fragmentac ión de la envoltura nuclear, que por
• El complejo ciclina A-eDK2 humano es similar al MPF terna, y fija así la laminil la nuclear a la membrana (véase fig.
lo general se produce temprano en la mitosis, depende de la
de Xenopus y S. pombe. Los estudios estructurales con pro­ 5-15). Las tres laminas nucleares forman dímeros con una re-
fosforilación de la lam ina A.
teínas humanas revelan que la unión de la ciclina a CDK2 y
l a fosforilación de la treonina activadora (equivalente a la �
r::=:::
�=-rr-J (al Interfase
treonina-161 de la CDK de S. pombe) producen cambios de
conformación que exponen el sitio activo y modifican la su­ �
··
• •
perficie de unión al sustrato para que tenga alta actividad y
afinidad por el sustrato proteico (véase fig. 21-15). .
II'.Jifll Mecanismos moleculares
de regulación de los eventos mitóticos
�
C) •
En las secciones anteriores, se observó que un aumento
1 ••• .
regulado de la actividad del MPF induce la entrada en la mi­
tosis. Es probable que ese ingreso sea consecuencia de la fos­

• •
forilación de proteínas específicas por la actividad de protein­
cinasa del MPF. Aunque muchos de los sustratos críticos del
Tetrámero de lamina
MPf todavía no se identificaron, se conocen ejemplos que
muest ran cómo la regulación por la fosforilación del MPF
media muchos de los eventos tempranos de la mitosis que lle­
van a la metafase: la condensación de los cromosomas, la for­
mación del huso mitótico y la fragmentación de la envoltura
nuclear (véase fig. 20-29).
p�l MPF

(e) Metafase

Recordemos que una disminución de las ciclinas mitóti­ C p

p

• •
cas y la inactivación asociada del MPF coinciden con los es­
tadios más tardíos de la mitosis (véase fig. 21-9a). Inmedia­ f'
tamente antes de esto, en la anafase temprana, las cromátidas
hermanas se separan y desplazan hacia los polos opuestos del Dímeros de lamina
huso. Durante la telofase, la dinámica de los microtúbulos re­ fosfor ilados
torna a las condiciones de la interfase, los cromosomas se des­
condensan, la envoltura nuclear se forma de nuevo, el com­ A. Fig. 21-16. La laminilla nucl ea r y su despolimerización. Tinción de lamina A Tinción de DNA Tinción de lamina A Tinción de DNA
plejo de Golgi se remodela y tiene lugar la citocinesis. Algunos (a) Microfotografía electrónica de la laminilla nuclear de un ovocito
Células con lamina A h umana de tipo silvestre
de estOs procesos se activan por desfosforilación; otros, por de Xenopus. Nótese la red tipo malla regular de filamentos Células con lamina A humana mutante

degradación de proteínas. intermedios de lamina. Esta estructura se encuentra adyacente a

la membrana nuclear interna (véase fig. 19-31). (b) Diagramas A. FIGURA EXPERIMENTAL 21-17 Los experimentos de con un anticuerpo monoclonal especffico para la lamina A
En esta sección se explican los mecanismos moleculares y transfección muestran que la fosforilación de la lamina
esquemáticos de la estructura de la laminilla nuclear. Dos juegos humana marcado con fluoresceína y con un colorante
las proteínas específicas asociadas con algunos de los eventos humana A es necesaria para la despolimerización de la
ortogonales de filamentos de 1 O nm de diámetro compuestos por fluorescente que se une al DNA. La banda brillante de
que caracterizan a la mitosis temprana y tardía. Estos meca­ lamina. Se usó mutagénesis dirigida a sitios para preparar un fluorescencia alrededor del perímetro del núcleo en las células en
laminas A, By C forman la laminilla nuclear (arriba). Cada uno de
nismos ilustran cómo los complejos ciclina-eDK, junto con los filamentos de lamina está formado por la polimerización gen mutante de lamina A h umana que codifica una proteína en la interfase teñidas para detectar lamina A huma na representa
las ligasa� de ubicuitina, controlan el pasaje a través de la fa­ terminoterminal de tetrámeros de lamina. que presentan dos que alaninas reemplazan a las serinas que en condiciones lamina A polimerizada (no fosforilada) (a). En las células que
se mitótica del ciclo celular. dímeros de lamina (medio). Los círculos rojos representan los normales se fosforilan en la lamina A de tipo silvestre (véase fig. expresan el tipo silvestre de lamina A humana, la tinción difusa
dominios globulares del extremo N. La fosforilación de los 21-16b). Como resultado, la lamina A mutante no puede de la lamina en todo el citoplasma en la profase y la metafase (b
residuos de serina específicos cerca de la sección central de fosforilarse. Vectores de expresión portadores del gen humano y el y la ausencia de la banda periférica brillante en la metafase
La fosforilación de laminas nucleares y otras aspecto tubular helicoidal enrollada de los dímeros de lamina hace de tipo silvestre o mutante se transfectaron por separado en las (e) indican la despolimerización de la lamina A. Por el contrario,
que los tetrámeros se despolimericen (abajo). Como resultado, la células de hámster cultivadas. Debido a que los genes de lamina no hubo despolimerización alguna de la lamina en células que
proteínas promueve Jos eventos mitóticos tempranos
laminilla nuclear se desintegra. (Parte (a) de u. Aebi y col., 1986, Natur. transfectados se expresan a niveles mucho más altos que el gen expresan lamina A mutante La tinción para DNA mostró que los
La envolrura nucll•:tr l�� un;l extensión de la dohle mem­ 323:560; cortesía de U. Aebi Parte (b) adaptado de A. Murray y T. Hunt, de lamina endógeno de hámster, la mayor parte de la lamina A cromosomas estaban condensados por completo en la metafase
brana del rL'tÍl:ulo tndopla�m.ític.:o rugoso que contiene mu- 1993. The Cell Cycle: An lntroduction. W. H. Freeman and Company.l producida en las células transfectadas es humana. Células en las células que expresan lamina A de tipo silvestre o mutante
transfectadas en diferentes estadios del ciclo celular se tiñeron lOe R. Heald y F. McKeon. 1990, Cell 61 :579 1
 (a) Extracto tratado con RNasa+ mRNA que codifica ciclina 8 tipo silvestre
870 CAPÍTULO 21 • Regulación d el ciclo celular eucarionte

Además, la fosforilación catalizada por MPF de nucleo­ de condensina individuales se activan por la fosforilación ca­
porinas específicas (véase cap. 12) hace que los complejos de talizada por MPF u otra proteincinasa regulada por el MPF.
poro nucleares se disocien en subcomplcjos durante la profa­ Una vez activados, los complej os de condensina se unen al
se. De forma similar, se cree que la fosforilación de proteínas DNA a intervalos a lo largo del armazón del cromosoma. Se DNA
integrales de la membrana nuclear interna disminuye su afi­ postuló que la condensación de los cromosomas es causada
nidad por la cromatina y contribuye con la fragmentación de por la auwasociación de los complejos unidos a través de sus
la envoltura nuclear. El debilitamiento de las asociaciones en­ dominios de espiral enrollada y por el superenrollamiento de
tre la membrana nuclear interna y la laminilla nuclear y la los segmentos de DNA entre sí.
cromatina puede permitir que hojas de membrana nuclear in­ Es probable que la fosforilación de las proteínas asocia­
terna se retraigan hacia el retículo endoplasmático, que es das con los microtúbulos por el MPF sea necesaria para que
continuo con la membrana nuclear externa. se produzcan los cambios espectaculares en la dinámica de
Varias líneas de evidencia indican que la fosforilación ca­ los microtúbulos cuyo resultado es la formación del huso mi­
tal izada por MPF también tiene importancia en la condensa­ tótico y los ásteres (cap. 20). Además, se cree que la fosfori-
ción de los cromosomas y la formación del aparato del huso . lación de las proteínas asociadas con el retículo endoplasmá­ Tubulina

mitótico. Por ejemplo, en experimentos genéticos realizados tico (RE) y el complejo de Golgi, por el MPF u otras
con la levadura de gemación S. c erevisiae se identificó una fa­ proteincinasas activadas por la fosforilación catalizada por
milia de proteínas SMC (structural maintenance of chromo­ MPF, altera el tránsito de vesículas entre el RE y el Golgi pa­
somes, mantenimiento estructural de los cromosomas) que ra favorecer el tránsito en dirección hacia el RE durante la
son necesarias para la separación normal de los cromosomas. profase. Como resultado, durante la mitosis no tiene lugar el Tiempo (min)
Estas proteínas grandes (de alrededor de 1.200 aminoácidos) tránsito de vesículas del RE a través del Golgi hacia la super­
contienen dominios ATPasa característicos en su extremo C ficie celular (cap. 17), visto en las células en interfase.
y regiones largas que se supone participan en estructuras en­
rolladas entre sí.
Los estudios de inmunoprecipitación con anticuerpos es­ la separación de las cromátidas hermanas
pecíficos para proteínas SMC de Xenopus revelaron que en inicia la anotase
ONA
extractos de huevos en ciclo algunas proteínas SMC forman
parte de un complejo multiproteico llamado condensina, que Como se explicó, en la anafase tardía la poliubicuitina­
se fosforita cuando las células entran en mitosis. Cuando los ción de la ciclina mitótica por el complejo promotor de la
anticuerpos anti-SMC se usaron para eliminar la condensina anafase (APC) conduce a la destrucción por parte de los pro­
de un extracto de huevos, éste perdió su capacidad de con­ teasomas de esta ciclina (véase fig. 21-10). Experimentos adi­
densar la cromatina de espermatozoides agregados. Otros ex­ cionales con extractos de huevos de Xenopus proporciona­
perimentos in vitro mostraron que la condensina fosforilada ron pruebas de que la degradación de la ciclina B, la ciclina
purificada se une al DNA y lo pliega en superhélices (véase mitótica del Xenopus, y la disminución resultante de activi­
fig. 4-7), en tanto que la no fosforilada no lo hace. Estos re­ dad MPF son necesarias para la descondensación de los cro­
sultados condujeron al modelo que indica que los complejos mosomas, pero no para su separación (fig. 21-18a,b).
Tu bu l ina

o 10 15 80 Tiempo (min)

(e) Extracto no tratado+ péptido de ciclina 8 con la caja de destrucción

.... FIGURA EXPERIMENTAL 21-18 El comienzo de la anafase ciclina B se degradaba. En presencia de ciclina B no d eg radab l e
depende de la poliubicuitinación de proteínas diferentes de (b), los cromosomas se separaron hacia los polos del huso a los
la ciclina B en los extractos de huevos de Xenopus en ciclo. 15 minutos. como en (a). pero los microtúbulos del huso no se
Las mezclas de reacción contenían extractos de huevos de desp olime rizaron y los cromosomas no se descondensaron ni
Xenopus no tratados o tratados con RNasa y núcleos aislados de siquiera después de 80 m inutos. Estas observaciones indican que DNA

espermatozoides de Xenopus, más otros componentes indicados la degradación de la ciclina B no es necesaria para la separación
a c ontinuación. Los cromosomas se visualizaron mediante un de los cromosomas durante la anafase. aunque se requiere para
colorante fluorescente que se une al DNA. La tubulina marcada la des polimerizac ión de los microtúbulos del huso y la
con roda mina fluorescente en las reacciones se incorporó en los descondensación de los cromosomas durante la te l ofas e. (e) Se
microtúbulos, lo q ue permitió la observación del huso del aparato agregaron diferentes concentraciones de un péptido de ciclina B
mitótico. (a, b) Después de que el extracto de huevos se trató que contenía la caja de destrucción a extractos que no se habían
con RNasa para destruir los mRNA endógenos, se agregó un tratado con RNasa; las muestras se tiñeron para detectar DNA a
inhibidor de la RNasa. L ue go se agregó un mRNA que codificaba los 15 o 35 minutos d es pués de la formación del huso del
una ciclina B de tipo silvestre o una ciclina B mutante no aparato. Las dos concentraciones de péptido más bajas
degradable. El momento en el que los cromosomas condensados demoraron la separación de los cromosomas y las
y el aparato del huso ensamblado se hicieron visibles después co ncentraciones más altas inhibieron por completo la sepa ra ción
del agregado de núcleos de espermatozoides s e desig na tiem po de los cromosomas. En este experimento se cree que el péptido
de la ciclina B agregado inhibe competitivamente la ONA
O. En prese ncia de ciclina B de tipo silvestre. los cromosomas
condensados se unieron a los microtúbu los y se separaron hacia poliubicuitinación mediada por APC de la ciclina B. as i como la de
los polos del hu so. Hacia los 40 minutos, el huso se había otra proteína diana cuya degradación es necesaria para la
Concentración
despolimerizado (por eso no es visible) y los cromosomas se separ ac ió n de los cromosomas. IDe S. L. H olloway y col., 1993, Ce/1
de péptido
habían descondensado (tinción difusa del DNA) a medida que la 73:1393; cortesía de A. W. Murray.l
agregada
o 20 40 60 80 (mg/ml)
872 CAPÍTULO 21 • Regulac ión del ciclo celular eucarionte 21.4 • Mecanismos molec u lares de regulación de los eventos mitóticos 873

Para determinar si se necesita la degradación dependien­ a lo largo de los brazos del cromosoma por complejos mul­ la separasa degrada el Sccl, rompiendo la unión cruzada de samblaje de las envolturas nucleares que contienen complejo�
te de ubicuitina de otra proteína para la separación de los tiproteicos llamados cohesinas. Entre las proteínas que com­ proteínas entre cromátidas hermanas. Una vez rota esta unión, de poro nuclear alrededor de cada cromosoma forma [Link]ú­
cromosomas, los investigadores prepararon un péptido que ponen los complejos de cohesina se encuentran los miembros la fuerza de tracción hacia los polos ejercida sobre los cine­ clcos individuales, llamados cariómeros (véase fig. 21-20). La
contiene la secuencia de la caja de destrucción de la ciclina y de la familia de proteínas SMC descritos en la sección an­ tocoros puede desplazar las cromátidas herman as hacia los fusión posterior de los cariómeros asociados con cada polo del
el s itio de poliubicuitinación. Cuando este péptido se agregó terior. Cuando se eliminó la cohesina de extractos de huevos polos opuestos del huso. huso genera los dos núcleos de las células hijas, cada uno de los
a una mezcla de reacción que contenía un extracto de hue­ de Xenopus por tratamiento con anticuerpos específicos para Debido a que el Cdc20, el factor de especificidad que diri­ cuales contiene un juego completo de cromosomas. Las lami­
vos no tratado y núcleos de espermatozoides, la desconden­ las proteínas SMC de la cohesina, los extractos deplecionados ge el APC hacia la segurina, se activa antes que el Cdh 1, el fac­ nas A y C desfosforiladas parecen importarse a través de los
sación de los cromosomas y, lo más interesante, el movimien­ pudieron replicar el D N A de los núcleos de los espermatozoi­ tor de especificidad que dirige el APC a las ciclinas mitóticas, complejos de poro nuclear vueltos a formar durante e�te perío­
to de los cromosomas hacia los polos del huso, fueron des agregados, pero las cromátidas hermanas resultantes no la actividad MPF no disminuye hasta después � los cromo­ do y se vuelven a organizar en una laminilla nuclear nueva. Es
retrasados en gran medida por concentraciones del péptido se asociaron en forma adecuada entre sí. Estos resultados somas se separaron (véase fig. 21-2, pasos IR] y l2J ) . Como re­ probable que el reensamblaje de la laminilla nuclear en los nú­
de 20 a 40 )lg/mL y fueron bloqueados por completo por con­ muestran que la cohesina es necesaria para las uniones cru­ sultado de este orden temporal en la activación de los dos fac­ cleos hijos se comience sobre las moléculas de lamina B que per­
centraciones más altas (fig. 21-18c). Se piensa que el péptido zadas entre cromátidas hermanas. tores de especificidad del APC (Cdc20 y Cdhl), los cromosomas manecen asociadas a la membrana del RE por medio de su .tn·
con caja de destrucción agregado en exceso actúa como sus­ En estudios genéticos recientes realizados con la levadura permanecen condensados y el reensamblaje de la envoltura nu­ da de isoprenilo a lo largo de la mitosis y quedan ubicacbs en
trato para el sistema de poliubicuitinación dirigido por APC, . de gemación S. cerevisiae se llegó al modelo representado en clear no tiene lugar hasta que los cromosomas alcanzan su po­ la membrana interna de las envolturas nucleares nuevas qul' sl'
y compite con las proteínas blanco endógenas normales para la figura 21-19 que describe cómo el APC regula la separa­ sición apropiada. En una sección más adelante se considerará vuelven a formar a partir de los cariómeros.
demorar o evitar así su degradación por los proteasomas. La ción de las cromátides hermanas para comenzar la anafase. cómo se regula el momento de activación de Cdhl. Durante la citocinesis, el paso final de la división celular,
competición por la ciclina B explica la inh ibición observada Las proteínas SMC de la cohesina se unen a cada una de las los filamentos de actina y miosina que componen el anillo
de la descondensación de los cromosomas . La obser vación de cromátidas hermanas; otras subunidades de cohesina, como contráctil se deslizan unos sobre otros para formar un surco
que la separación de los cromosomas también se inhibió en la Sed, se unen luego a las proteínas SMC, y asocian con fir­ El reensamblaje de la envoltura nuclear
este experimen to, pero no en el que se realizó con ciclina B meza las dos cromátidas. La actividad de unión cruzada de y la citocinesis dependen de la actividad
mutante no degradable (véase fi g. 21-18b) indica que la se­ la cohesina depende de la segurina, que se encuentra en to­
sin oposición de una fosfatasa constitutiva
paración depende de la degradación por parte de los protea­ dos los cucariontes. Antes de la anafase, la segurina se une e
somas de una proteína diana diferente. inhibe a la separasa, una proteasa ubicua relacionada con las Citosol
Con anterioridad se explicó la manera en que la fosfori­
Como se mencionó, cada cromátida hermana de un cro­ proteasas caspasas que regulan la muerte celular programa­ lación mediada por MPF de las laminas nucleares, nucleopo­
mosoma en metafase se une a los microtúbulos por medio de da (cap. 22). Una vez que todos los cinetocoros de los cro­ rinas y proteínas de la membrana nuclear interna contribuye
su cinetocoro, un complejo de proteínas ensamblado en el mosomas se unieron a los microtúbulos del huso, el APC es a la disociación de los complejos de poro nucleares y la re­
centrómero. Los extremos opuestos de estos microtúbulos de dirigido por un factor de especificidad llamado Cdc20 para tracción de la membrana nuclear hacia el RE rugoso. Una vez
cinetocoro se asocian con uno de los polos del huso (véase generar la poliubicuitinación de la segurina, lo que produce que el MPF se inactiva en la anafase tardía por la degrada­
fig. 20-31). En la metafase, el huso está en un estado de ten­ el inicio de la anafase. (Este factor de especificidad es distin­ ción de las ciclinas mitóticas, la acción sin oposición de las Cromatina
to del Cdh1, que dirige al APC a provocar poliubicuitinación

Reclutamiento l
sión, con fuerzas que traccionan los dos cinetocoros hacia los fosfatasas revierte la acción del MPF. Se cree que las proteí­
polos opuestos del huso balanceados por fuerzas que separan en las ciclinas tipo B.) La segurina en la que se produjo la po­ na;;. de la membrana nuclear interna desfosforiladas se unen
los polos del huso. Las cromátidas hermanas no se separan liubicu itinación se degrada con rapidez por acción de los pro­ de nuevo a la cromatina. Como resultado se supone que múl­ de membranas
porque están unidas por sus centrómeros y en varios lugares teasomas, liberando así a la separasa. Libre de su inhibidor, tiples proyecciones de regiones de la membrana del RE que rr- �
../ contienen estas proteínas se asocian con la superficie de los
cromosomas en descondensación y luego se fusionan entre sí
para formar una membrana doble continua alrededor de ca­
da cromosoma (fig. 21-20). Se cree que la desfosforilación de
Ub
/ los subcomplejos de poro nuclear les permite volver a formar
Ub
/ complejos de poro nuclear que atraviesan las membranas in­
Ub terna y externa poco después de la fusión de las proyeccio­

d nes del RE (véase fig. 12-20).

t
La fusión de las proyecciones del RE representadas en la fi­
gura 21-20 tiene lugar por un mecanismo similar al descrito pa­
---+ ra la fusión de vesículas y membranas diana en la vía secreto­

c
Se u ri na
!
ria (véase fig. 17-11). Se demostró que proteínas con actividades
similares a las del NSF y a-SNAP de la vía secretoria funcionan
en la fusión de vesículas de la envoltura nuclear producidas de
manera experimental in vitro y se supone que median la fusión
de las proyecciones del RE alrededor de los cromosomas duran­
te la telofase en la célula intacta. Estas mismas proteínas tam­
bién funcionan en la fusión que vuelve a ensamblar el aparato
de Golgi. No se identificaron las proteínas SNARE asociadas
con membranas, que dirigen la fusión de las extensiones de la Á Fig. 21-20. Modelo del reensamblaje de la envoltura nuclear
envoltura nuclear del RE, pero se demostró que la sintaxina 5 durante la telofase. Las extensiones del retículo endoplasmático

funciona como la V-SNARE y la T-SNARE durante el reensam­ (RE) se asocian con cada cromosoma en descondensación y luego
se fu si onan entre sí, formando una membrana doble alrededor del
Á Fig. 21-19. Modelo del control de entrada en anafase por los cromosomas se han unido a los mic r otúbulos del huso, el blaje del Golgi. Durante la fusión de vesículas de la envoltura
cr omoso ma. Los subcomplejos de poro nuclear vuelven a formar
degradación regulada de la unión cohesina entre cromátidas factor de especificidad Cdc20 del APC dirige el APC a la nuclear in vitro, la misma Ran GTPasa que funciona en el trans­
los poros nucleares. generando mininúcleos individ uales llamados
hermanas y mediada por APC. (Izquierda) El complejo poliubicuitinación de la segurina, que luego es degradada por los
porte a través de los complejos de poro nucleares (cap. 12) fun­
pr oteas omas {no mostrado). {Derecha) La separasa liberada se cariómeros. El cromosoma incluido se descondensa aún más y la
multi p r oteico cohesina contiene SMC1 y SMC3 (violeta),
ciona de forma similar a las Rab GTPasas en la fusión de vesí­ fusión posterior de t odas las envolturas nucleares de los
proteínas diméricas que se unen al DNA de c ada cromátida une luego a Scc1, deshaciendo la unión cruzada entre cromátidas
culas de la vía secretoria. Debido a que el factor de intercambio cariómeros en cada p olo del huso forma un solo núcleo que
hermana a través de los dominios globulares de un ex t r em o. La hermanas Para la explic ac ión véase el texto. !Adaptado de F
de nucleótidos de guanosina específico de Ran (Ran-GEF) se contiene un juego completo de cromosomas. El ree nsambla¡e de
Scc1 (r ojo) y otras dos subunidades de la cohesina (no Uhlmann, 2001, Curr. Opin. Cell Biol. 13:754; y A. Tomans. Nature
Milestones,[Link] vision/milestones/full/ asocia con la cromatina, se produce una concentración local al­ la la minilla nuclear no se muest ra. !Adaptado de B. Burke y J.
mostradas) se unen a las pr otein as SMC asociadas con cada
ta de Ran-GTP alrededor de los cromosomas, que dirige las fu­ Ellen berg , 2002, Nature Rev. Mol. Cell Biol. 3:4871
cromátida, estableciendo de ese modo uniones c r uzad as entre [Link]
las c r omátidas. (Centro) U na vez que todos l os cin et oc o r os de siones de la membrana en la superficie del cromosoma. El reen-
87 4 CAPÍTULO 21 • Regula ción del ciclo celular eucarionte 21.5 • Estudio s genét icos con S. cerevisiae 875
de división de diámetro continuamente decreciente (véase fig.
19-20). Cuando la actividad del MPF aumenta al principio
Estudios genéticos con va (p. ej., cdc28); las proteínas del tipo silvestre correspondien­ cada una de las cuales puede ser sustituida por la otra: Cdc2
tes se escriben en tipo romano con una mayúscula inicial (p. ej., en S. pombe y Cdc28 en S. cerevisiae (véase cuadro 21-1).
de la mitosis, fosforila la cadena liviana reguladora de la mio­ S. cerevisiae Cdc28}, de forma similar a las proteínas de S. pombe. La diferencia en los fenotipos mutantes de las células cdc2-
sina e inhibe así la capacidad de la miosina de asociarse con El comportamiento fenotípico de las mutantes cdc28 sen­ de S. pombe y las cdc28 de S. cerevisiae puede explicarse en
En la mayor parte de las células de vertebrados la deci­
filamentos de actina. La inactivación del MPF al final de la sibles a la temperatura indica que la función de Cdc28 es crí­ términos de la fisiología de las dos levaduras. En las células
sión clave para determinar si una célula se dividirá o no es la
anafase permite que las proteinfosfatasas desfosforilen la ca­ tica para la entrada en la fase S. Cuando estas mutantes se de S. pornbe que crecen en medios de cultivo con abundan­
de entrar en fase S. En la mayoría de los casos, una vez que
dena liviana de la miosina (véase fig. 20-42). Como resulta­ pasan a la temperatura no permisiva, se comportan como cé­ tes nutrientes, el control del ciclo celular se ejerce �obre todo
una célula de vertebrado está comprometida para entrar en
do, la maquinaria contráctil se activa, el surco de división lulas del tipo silvestre privadas de nutrientes en forma súbi­ en la transición G 1 -7 M (o sea, en la entrada en la mitosis).
fase S, lo hace unas pocas horas después y avanza a través
puede formarse y la citocinesis tiene lugar. Este mecanismo ta. Esto es, las células mutantes cdc28 que crecieron hasta un En muchas mutantes cdc2-, incluidas las aisladas primero, se
del resto del ciclo celular hasta terminar la mitosis. Las célu­
regulador asegura que la citocinesis no se produzca hasta que tamaño suficiente para pasar el punto de inicio en el momen­ mantiene bastante actividad de Cdc2 a la temperarura no
las de S. cerevisiae regulan su proliferación de forma similar,
los cromosomas hijos se hayan separado lo suficiente hacia to del cambio de temperatura continúan a través del ciclo ce­ permisiva como para permitir que las células entren en faw
y gran parte de nuestro conocimiento actual de los mecanis­
los polos opuestos como para asegurar que cada célula hija lular con normalidad y sufren mitosis, en tanto que las que S, pero no la suficiente para permitir la entrada en m1ro-;i-;.
mos moleculares que controlan la entrada en fase S y del con­
reciba el número apropiado de cromosomas. son demasiado pequeüas para haber pasado el punto de ini­ Se observa que estas células mutantes son células alarg;lda-;,
trol de la replicación del DNA proviene de los estudios gené-
. ticos realizados con S. cerevisiae. cio cuando se pasan a la temperatura no permisiva no entran detenidas en G2• A la temperatura no permisiva, los cultivo.,
Las células de S. cerevisiae se reproducen por brotación (fig. en fase S aunque los nutrientes sean abundantes. Por más que de mutanres cdc2- defectuosos por completo implican algurw..
21-21). Tanto la célula madre como la hija permanecen en el las células cdc28 bloqueadas en fase G1 continúen aumen­ células detenidas en G1 y otras detenidas en G2, en función de
CONCEPTOS CLAVE DE LA SECCIÓN 21.4 tando de tamaño a la temperatura no permisiva, no pueden su situación en el ciclo celular en el momento del cambio
período G1 del ciclo celular mientras crecen, aunque las célu­
las madre, al inicio más grandes, necesitan un tiempo más bre­ pasar el punto de inicio ni entrar en la fase S. Por consiguien­ de temperatura. Por el contrario, la regulación del ciclo celular
Mecanismos moleculares de regulación ve para alcanzar un tamaño compatible con la división celular. te, aparecen como células grandes sin brotes. en S. cerevisiae se hace en primer térm ino sobre la transición
de los eventos mitóticos Cuando las células de S. cerevisiae en G1 crecieron lo suficien­ El gen de tipo salvaje CDC28 se aisló por su capacidad de G1 -7 S (o sea la entrada en la fase S). Por consiguiente, las
te, empiezan un programa de expresión genética que conduce complementar las células cdc28 mutanres a la temperatura no células cdc28 parcialmente defectuosas se detienen en Gl> pero
• Al principio de la mitosis, la fosforilación catalizada por
a la entrada en la fase S. Si las células en G1 se pasan de un permisiva (véase fig. 21-4). La determinación de la secuencia las que lo son por completo se detienen en G1 o G2• Estas ob­
MPF de las laminas A, By C, de las nucleoporinas y las pro­
medio abundante en nutrientes a otro en el que éstos escasean de CDC28 mostró que la proteína codificada es homóloga a servaciones demuestran que las CDK de S. pombe y S. cerevi­
te ínas de la envoltura nuclear internas produce la despoli­
antes de que alcancen un tamaño crítico, las células permane­ las proteincinasas conocidas, y cuando la proteína Cdc28 se siae son necesarias para la entrada en la fase S y la mitosis.
m erización de los filamentOs de lamina (véase fig. 21-16) y
cen en G1 y crecen con lentitud hasta que son lo bastante gran­ expresó en f.. coli, mostró actividad de proteincinasa. En reali­
la disociación de los poros nucleares en subcomplejos de po­
des como para entrar en la fase S. Sin embargo, una vez que dad, la Cdc28 de S. cerevisiae fue la primera proteína del ciclo
ro, lo que conduce a la fragmentación de la envoltura nu­
las células en G1 alcanzan el tamaño crítico, están destinadas celular que se demostró que es una proteincinasa. Con ul­ Tres ciclinas de G1 se asocian con la COK
clear y su retracción en el RE. de S. cerevisiae para formar factores promotores
a completar el ciclo celular, entran en fase S y continúan a tra­ terioridad, se encontró que el gen de tipo silvestre cdc2• de
• La fosforilación de los complejos de condensina por el vés de G2 y la mitosis, aun cuando se transfieran a un medio S. pombe tiene homología con el gen CDC28 de S. cerevisiae de fase S
MPF o una cinasa regulada por el MPF promueve la con­ con bajo contenido de nutrientes. El punto del final del perío­ y las dos proteínas codificadas, Cdc2 y Cdc28, eran análogas
densación de los cromosomas al principio de la mitosis. do G1 en el que las células de S. cerevisiae en crecimiento que­ desde el punto de vista funcional. Cada tipo de levadura con­ I lacia fines de la década de 1980 estaba claro que el fac­

dan determinadas irreversiblemente para ingresar en la fase S tiene una sola proteincinasa dependiente de ciclina (CDK), tor promotor de la mitosis (MPF} estaba compuesto por dos
• Las cromátidas hermanas formadas por la replicación del

u
y desarrollar el ciclo celular se llama punto de inicio (START).
DNA en la fase S están unidas por el centrómero por com­
Como se verá en la sección 21.6, en las células de mamíferos
plejos de cohesina que contienen proteínas SMC que se unen (a)

O
en división se produce un fenómeno comparable. (b)
al DNA y otras proteínas. Cél la
madre
• Al comienzo de la anafase, el APC es dirigido por Cdc20 f
a poliubicuitinar la segurina la cual, como consecuencia, es Una cinasa dependiente de ciclina (COK) Citocinesis
degradada por los proteasomas. Esto activa la separasa, que es fundamental para la entrada en fase S
divide una subunidad de cohesina y libera así las cromátidas de S. cerevisiae � (;\ Cél ula
hermanas (véase fig. 21-19).
� V
hija

ó
Todas las células de S. cerevisiae que portan una mutación
• Después que las cromátidas hermanas se desplazaron ha­ Separación de los
en un gen cdc particular se detienen en el mismo tamaño de bro­
cia los polos del huso, el APC es dirigido por el Cdhl a ge­ cromosomas;
te a la temperatura no permisiva (véase fig. 9-6b). Cada tipo de div isi n Crec imie nto
nerar poliubicuitinación en las ciclinas mitóticas, lo que
mutante tiene un fenotipo terminal con un tamaño de brote par­ nuclear
conduce a su destrucción y causa la disminución de activi­
ticular: ningún brote (cdc28), brotes de tamaño intermedio o
dad del MPF que marca el inicio de la telofase.
brotes grandes (cdc7). Nótese que en S. cerevisiae los genes de Punto
• El descenso de actividad del MPF en la telofase permite tipo silvestre se escriben con letras mayúsculas en cursiva (p. ej., de inicio

que las fosfatasas constitutivas eliminen fosfatos reguladores CDC28) y los genes mutantes recesivos en minúsculas en cursi- (START)

()
de la condensina, laminas, nucleoporinas y otras proteínas de
la membrana nuclear, lo que permite la descondensación de
los cromosomas y el reensamblaje de la membrana nuclear, ..,. Fig. 21-21. La levadura brotante S. cerevisiae.
de la laminilla nuclear y los complejos de poro nucleares. (a) Microfotografía electrónica de barrido de células de Duplicación
S. cerevisiae en diferentes estadios del ciclo celular. Cuanto más del cuerpo del
• La asociación del Ran-GEF con la cromatina produce grande es el brote. que surge al final de la fase G1, más avanzada polo del huso
Formación
una alta concentración local de Ran. GTP cerca de los cro­ está la célula en el ciclo. (b) Eventos principales del ciclo celular
�
del huso
mosomas que se descondensan, y estimulan la fusión de las de S. cerevisiae. Las células hijas nacen más pequeñas que las
extensiones de la envoltura nuclear provenientes del RE al­
rededor de cada cromosoma. Esto forma cariómeros que
madres y deben crecer hasta un tamaño mayor en G, antes de
que tengan el tamaño suficiente como para entrar en la fase S.
� Emergencia
delbrote

Como sucede en S. pombe, la envoltura nuclear no se fragmenta

luego se fusionan para generar los núcleos celulares hijos
durante la mitosis. A diferencia de los cromosomas de S. pombe,
(véase fig. 21-20}.

Migcocióo """"'c8
los pequeños cromosomas de S. cerevisiae no se condensan lo Replicaci ó n
• El descenso en la actividad MPF también elimina su inhi­ suficiente como para ser visibles por microscopia óptica. (Parte !al del DNA

bición sobre la cadena liviana de la miosina, lo que permite cortesfa de E. Schachtbach e l. Herskowitz.)
que se forme el surco de división y tenga lugar la citocinesis.
876 CAPÍTULO 21 • Regulación del ciclo celular e ucarionte 21 .5 • Estudios genét icos con S. cerevisiae 877

'---"'}
subunidades: una CDK y una cic lina de tipo B mitótica ne­ (a) 25 •e Ciclina G1 36 oc Exp r esión de alto nivel de ciclina G1
cesaria para activar la subunidad catalizadora. Por analogía, Vector de expresión de Cln3

parecía probable que S. cerevisiae contuviera un factor pro­ Células de tip o

SPF
�
s ilv estre
motor de fase S (SPF) que fosforilaba y regulaba las proteí­
nas necesarias para la síntesis de DNA. Por similitud con el Promotor Gen de la Ausencia de expresión de ciclina G1
MPF, se postuló que el SPF era un heterodímero compuesto
GAL 1 cielina G1
�
por CDK de S. cerevisiae y una c iclina, en este caso una que Se forman colonias Se forman colonias
actuaba en G1 (véase fig. 21-2, pasos [f] a 11]).
(a) Células de tipo silvestre (b) Células de tipo silvestre (e) Cé lulas cln 1-/cln2-/cln3
Para identificar esta supuesta ciclina de G1, los investiga­ + vector vacío
(b)
+vector de ciclina G1 + v ector de ciclina G1
dores buscaron genes que, cuando se expresaban en concen­
traciones altas, podían suprimir ciertas mutaciones sensibles -G ic
-Gic -Gic
a la temperatura de la CDK de S. cerevisiae. En la figura 21-
22 se ilustra la base racional de este enfoque. Los investiga­ ____
...._ co
..___... K muta nte, �
dores aislaron dos de estos genes, denominados CLN1 y debaja �
afinidad
't'
CLN2. Mediante un enfoque diferente, otros investigadores
Se forman colonias Detención en G1 - V
identificaron una mutación dominante en un tercer gen, lla­
mado CLNJ. La determinación de la secuencia de los tres ge­ i i i
nes CLN mostró que codificaban proteínas relacionadas, ca­ (/)
�
(/)
�
(/)
{e) �
da una de las cuales incluía una región de alrededor de 100 :J :J :J
:a; +Gic (135 min) :a; +Gic (135 min) :a;
residuos que mostraba homología importante con las ciclinas Células cdc281s o o o
Ql Ql Ql

A 1\
del tipo B del erizo de mar, Xenopus, el hombre y S. pombe. transformadas con "O "O "O

(\ A
Esta región codifica el dominio de la ciclina que interactúa alto número de l: e o

copias del Ql Ql Q;
con las CDK y está incluido en el dom inio de la cicl ina A hu­ E E E
plásmido ·:J •:J •:J
mana mostrado en la figura 21-15b, c. El hallazgo de que las a
de cic li n G1 z z z
tres proteínas Cln contienen esta región de homología con las
ciclinas mitóticas sugirió que eran las tan buscadas ciclinas CDK �
G, de S. cerevisiae. (Nótese que los dominios homólogos de
mutante, de \......_._../
baja a fi nid ad Equilibrio
unión a CDK encontrados en las diferentes ciclinas difieren t � alterado
en la caja de destrucción mencionada antes, que sólo se en­ G, G2 G, G2

cuentra en las ciclinas del tipo B.) Fluorescencia� Fluorescencia � Fluorescencia �

Experimentos de desactivación genética (knockout) mostra­
ron que las células de S. cerevisiae pueden crecer en un medio .6. FIGURA EXPERIMENTAL 21-23 La sobreexpresión de glucosa, las células de tipo silvestre transformadas con el vector
abundante en nutrientes si poseen cualquiera de los tres genes ciclina G1 imp ulsa en forma prematura las células de S. de expresión de ciclin a G, mostraron un porcent aje superior al
de ciclina G1• Como lo indican los datos presentados en la fi­
� t cerevisiae a la fase S. El vector de expresión de levadura usado n ormal de células en fase S y G2 porque la sobreexpresión de la
Se forman colonias Se fo rma n c oloni as
gura 21-23, la superproducción de una ciclina G1 disminuye la en estos ex perimentos (arriba) era portador de un o de los tres ciclina G, disminuyó la duración del período G, (curva superior).
genes de ciclina G1 de S. cerevisiae unido al f uerte promotor ...euando la expresión del vector de ciclina G1 se eliminó por el
fracción de células en G¡, lo que demuestra que niveles altos
GAL1, que se inhibe cuando hay glucosa presente en el medio. agregado de glucosa, la distribución celular volvió a la normalidad
de complejos ciclina-CDK G1 conducen de manera prematura .6. FIGURA EXPERIMENTAL 21-22 Se identificaron dos genes
Para determinar la pr oporci ón de células en G1 y G2 se (curva inferior). (c) Las células con mutaciones en los tres genes
a las células hacia el punto de inicio. Es más, en ausencia de que codifican ciclinas de G, de S. cerevisiae por su
expusieron las células a un colorante fluorescente que se une al de c iclina G, y transformadas con el vector de expresión de
cualquiera de las ciclinas G,, las células se detienen en G,, lo capacidad de suprimir una COK mutante sensible a la DNA y luego se pasaron a través de un clasificador de células ciclina G, también mostraron un porcentaje alto de células en
que indica que para que las células de S. cerevisiae entren en temperatura. Este rastreo genético se basa en las diferencias activadas por fluorescencta (véase fig. 5-34). Dado que el fases S y G2 en ausencia de glucosa (curva superior). Es más,
fase S es necesario un heterodímero ciclina G1-CDK, o SPF. Es­ de las interacciones entre las ciclinas G, con COK de tipo contenido de DNA de las células en G2 es el doble del de las cuando la expresión del vector de ciclina se eliminó por el
tos hallazgos recuerdan los resultados obtenidos con la ciclina silvestre y sensibles a temperatura (ts) de S. cerevisiae. (a) Las células en G,, este procedim ient o puede diferenciar las células agregado de glucosa, las células completaron el ciclo celular y se
mitótica de S. pombe (Cdc13) en lo que respecta al pasaje a células de tipo silvestre pr oduc en una COK normal que se asocia en las dos fases del ciclo celular. (a) Células de tipo silvestre detuvieron en G1 (curva in ferior). lo que indica que se necesita
través de G2 y la entrada en mitosis. La superproducción de la con las ciclinas G, formando el factor promotor de fase S (SPF) transformadas con un vector de expresión vacío mostraron una una ciclina G, para Ja entrada en fase S. !Adaptado de H. E.
cidina mitótica produjo un G2 acortado y la entrada prematu­ activo, tanto a temperatura permisiva como no permi siva (o sea, distribución normal de células en G1 y G2 en ausencia de glucosa Richardson y col., 1989, Ce//59:1127)
25 oc y 36 °C). (b) Algunas mut antes cdc28ts expre s an una CDK (Gic) y después del agregado de glucosa. (b) En ausencia de
ra en mirosis, en tanto que la inhibición de la ciclina mitótica
por mutación produjo un G2 prolongado (véase fig. 21-12). Por mutante con afinidad baja por la ciclina G, a 36 •c. Estas
mutantes producen la suficiente ciclina-CDK (SPF) de G1 com o
lo tanto, estos resultados confirmaron que las proteínas Cln de
para estimular el crec imiento y el desarrollo de colonias a 25 •c.
S. cerevisiae son ciclinas G1 que regulan el pasaje a través de la Una vez que se sintetiza suficiente Cln 3 a partir de s u
pero no a 36 •c. (e) Cuando las células cdc28.. se transformaron es Cdh1. Recordemos que este factor de especificidad dirige el
fase G1 del ciclo celular. mRNA, el complejo Cln3-CDK fosforila y activa d o s facto­ APC a poliubicuitinar las ciclinas de tipo B durante la anafa­
con una genoteca de S. cerevisiae clonada en plásmidos con
En las células de levadura de tipo salvaje, el mRNA de res de transcripción relacionados, SBF y MBF. Éstos inducen
elevado número de copias, se formaron tres tipos d e colonias a se tardía de la mitosis previa, marcando estas ciclinas para la
CLNJ se produce a un nivel casi constante a lo largo del ci­ la transcripción de los genes CLN1 y CLN2, y las proteínas protcólisis por parte de los proteasomas (véase fig. 21-1 0). El
36 °C: una conten ía un plásmido portador del gen CDC28 de
clo celular, pero su traducción se regula en respuesta a los ni­ codificadas por ellos aceleran la entrada en la fase S. Por lo
tipo silvestre; las otras dos con tenían plásmidos portadores del factor de transcripción MBF activado por el complejo Cln3-
veles de nutrientes. El mRNA de CLNJ contiene un marco gen CLN1 o CLN2. En las células transformadas port ado ras tanto, se cree que la regulación de la traducción del mRNA CDK también estimula la transcripción de CLB5 y CLB6, que
de lectura abierto corto que inhibe la iniciación de la traduc­ del gen CLN1 o CLN2, la concentración de ciclina G1 codificada de CLN3 en respuesta a la concentración de nutrientes en el codifican ciclinas de tipo B, de donde proviene su nombre. De­
ción de este mRNA. Esta inhibición disminuye cuando los nu­ es lo suficient emente alta como para compensar la baja afinidad medio es el responsable principal del control de la duración bido a que los complejos formados entre estas ciclinas de ti
trientes y, por lo tanto, los factores de iniciación de la traduc­ de la CDK mut ante por la ciclina G1 a 36 •e, por lo que se forma de G1 en S. cerevisiae. SBF y MBF también estimulan la trans­ po B y la CDK de S. cerevisiae son necesarios para la inicia
ció n se encuentran en abundancia. Dado que Cln3 es una suficiente SPF para estimular la entrada en fase S y la mi tosis cripción de otros genes necesarios para la replicación del ción de la síntesis de DNA, las proteínas Clb5 y Clb6 se 11am;H1
proteína muy inestable, su concentración fluctúa con la tasa consecuente. Las células no transformadas cdc28ts y las DNA, como los genes que codifican las subunidades de DNA ciclinas de fase S. La inactivación del APC al principio de (; 1
de traducción del mRNA de CLN3. Por consiguiente, la can­ transformadas con plásmidos portadoras de otros genes se
polimerasa, las subunidades de RPA (la proteína de unión a permite que los complejos ciclina-CDK de fase S se acumukn
tidad y la activid ad de los complejos Cln3-CDK, que depen­ detienen en G1 y no forman colonias. !Véase J. A. Hadwiger y col.,
ssDNA de los eucariontes), la ligasa de DNA y las enzimas al final de G1• El factor de especificidad Cdhl se fosfonl.t'
den de la concentración de proteína Cln3, están reguladas en 1989, Proc. Natl. Acad Sci. USA 86:62551
necesarias para la síntesis de desoxirribonucleótidos. inactiv a tanto por los complejos de final de G1 como por los
primer término por el nivel de nutrientes. Uno de los sustratos importantes de los complejos ciclina­ de ciclina tipo B-CDK, y por lo tanto permanece inhtbtdo u
CDK del final de G1 (Clnl-CDK y Cln2-CDK en S. cerevisiae) través de las fases S, G2 y M hasta la anafase tardía.
878 CAPÍTULO 21 • Reg ulación del ciclo celular eucarionte 21.5 • Es tudios genéticos con S. cerevisiae 879

La degradación del inhibidor de fase S contrario, la entrada en fase S requiere la degradación de so­ Cdhl. Sin embargo, Cdcl4 también induce la expresión de
desencadena la replicación del DNA lo una proteína, el in hibidor Sicl. Una ventaja obvia de la Sic1 al eliminar un fosfato inhibidor presente en un factor
proteólisis para controlar el pasaje por estos puntos críticos de transcripción que activa la transcripción del gen SlCl.
A medida que los heterodímeros de ciclina-CDK de fase del ciclo celular es que la degradación de las proteínas es un Sicl puede unirse e inhibir la actividad de todos los comple­
S se acumulan al final de Gt> se inactivan de inmediato por proceso irreversible, lo que asegura que las células se dirigen jos ciclina-CDK de tipo B. Así, al empezar la inhibición del
unión de un inhibidor, llamado Sicl, que se expresa al final sin retorno en una dirección a través del ciclo. MPF por Sicl al final de la mitosis permite que la fosfatasa
de la mitosis y al comienzo de G1• Debido a que Sicl inhibe Cdcl4 gane ventaja; el factor de especificidad C:dh l de APC
de manera específica los complejos ciclina-CDK de tipo B, pe­ para las ciclinas de tipo B se desfosforila y dirige la degra­
ro no tiene efecto sobre los complejos de ciclina-CDK de G1, Múltiples ciclinas dirigen la actividad cinasa dación rápida de todas las ciclinas de tipo B de S. cc>re!ltsiae.
funciona como un inhibidor de fase S. de la COK de S. cerevisiae durante diferentes En la sección 21.7 se verá cómo la actividad del prop1o Cdc14
La entrada en la fase S se define por la iniciación de la fases del ciclo celular se controla para asegurar que una célula salga de la mitmis
replicación del DNA. En las células de S. cerevisiae esto se solo cuando sus cromosomas se separaron en forma [Link].
produce cuando el inhibidor Sicl se degrada con rapidez des­ Cuando las células de una levadura de gemación progre­ Como ya se describió, Sic1 también inhibe los complejo\
san a través de la fase S, empiezan a transcribir los genes Clb3,4- ciclina-CDK de fase S a medida que se forman hacia la mi
pués de su poliubicuitinación por una determinada ligasa de
CDK
ubicuitina, llamada SCF (fig. 21-24; véase también fig. 21-2, gue codifican dos ciclinas de tipo B adicionales, Clb3 y Clb4. tad de G1 (véase fig. 21-24 ). Por lo tanto, este inhibidor dl·
paso [i] ). Una vez que Sic1 se degradó, los complejos de ci­ Estas forman complejos de ciclina-CDK heterodiméricos ciclinas de tipo B tiene una función dual en el ciclo celuhlr,
clina-CDK de fase S inducen la replicación de DNA por fosfo­ que, junto con los complejos que poseen Clb5 y Clb6, acti­ lo cual contribuye con la salida de la mitosis y con el retra
rilación de varias proteínas unidas a los orígenes de replicación. van los orígenes de replicación del DNA a lo largo del res­ so en la entrada en la fase S hasta que la célula esté lista.
Este mecanismo de activación de los complejos de ciclina­ to de la fase S. tos complejos Clb3-CDK y Clb4-CDK tam­
CDK de fase S (o es decir inhibirlos a medida que las cicli­ bién inician la formación del huso mitótico al principio de
la mitosis. Cuando las células de S. cerevisiae completan la Clb5,6-CDK La replicación en cada origen comienza
nas se sintetizan y luego degradar el inhibidor con rapidez),
permite la activación súbita de gran número de complejos, en replicación de los cromosomas y entran en G2, comienzan a solo una vez durante el ciclo celular
contraste con el aumento gradual de actividad cinasa que re­ expresar dos ciclinas más de tipo B, Clbl y Clb2. Éstas fun­
.á. Fig. 21-25. Actividad de los complejos ciclina-CDK de S. Como se explicó en el capítulo 4, los cromosomas euca­
sultaría si no hubiera inhibidor alguno presente durante la cionan como ciclinas mitóticas y se asocian con la CDK para cerevisiae a través del ciclo celular. El espesor de las bandas
formar complejos necesarios para mediar los sucesos de la riontes se replican a p artir de varios orígenes. Algunos de és­
síntesis de ciclinas de fase S. coloreadas es aproximadamente proporcional a la actividad de
mitosis. tos inician la replicación del DNA al principio de la fase S,
Ahora se puede entender que la degradación regulada por proteincinasa demostrada o propuesta de los complejos ciclina­
algunos más tarde y otros recién al final. Sin embargo, nin­
parte de los proteasomas, dirigida por dos complejos de liga­ De esta forma, cada grupo de ciclinas dirige la CDK de CDK indicados S. cerevisiae produce una sola cinasa
.

dependiente de ciclina (CDK) c uya actividad es controlada por gún origen comienza más de una vez por fase S. Es más, la
sa de ubicuitina, SCF y APC, controla tres transiciones prin­ S. cerevisiae a funciones específicas asociadas con las diver­
sas fases del ciclo celular, como se muestra en la figura 21- diversas ciclinas que se expresan durante diferentes momentos fase S continúa hasta que la replicación de todos los orígenes
cipales del ciclo celular: el inicio de la fase S a través de la
del c1clo celular. a lo largo de cada cromosoma tiene como resultado la repli­
degradación de Sicl, el principio de la anafase por la degra­ 25. Cln3-CDK induce la expresión de Cln1, Cln2 y otras pro­
teínas en la mitad y el final de G1 por fosforilación y activación cación de t do el DNA cromosómico. Estos dos factores ase­
p
dación de la segurina y la salida de la mitosis mediante la de­
guran que Sf mantiene el número correcto de copias de genes
gradación de ciclinas de tipo B. El APC se dirige a generar de los factores de transcripción SBF y MBF. Cln1-CDK y
a medida que las células proliferan.
poliubicuitinación de la segurina, que funciona como un in­ Cln2-CDK inhiben el APC, y permiten que las ciclinas tipo B
Los orígenes de replicación de las levaduras contienen una
hibidor de la anafase, por el factor de especificidad Cdc20 se acumulen; estas ciclinas-CDK de G1 también activan la de­
exclusivamente como ciclinas mitóticas, y forman complejos secuencia básica conservada de 1·1-pb a la que se une una
(véase fig. 21-19). Otro factor de especificidad, Cdh1, dirige gradación del inhibidor de fase S Sicl. A continuación los
con CDK que desencadenan la separación de los cromosomas proteína hexamérica, el complejo de reconocimiento de ori­
al APC a las ciclinas tipo B (véase fig. 21-10). El SCF se complejos de fase S de CDK que contienen Clb5, Clb6, Clb3
y la división nuclear (véase cuadro 21-1). gen (ORC), necesaria para la iniciación de la síntesis de DNA.
dirige a la poliubicuitinación del Sicl por un mecanismo di­ y Clb4 desencadenan la síntesis de DNA. Clb3 y Clb4 tam­
Los análisis mediante footprinting con DNasa 1 (fig. 11-15)
ferente, como es la fosforilación de Sicl por un complejo bién funcionan como ciclinas mitóticas, en el sentido que los
y la inmunoprecipitación de proteínas de la cromatina con
cic lina-CDK de G1 (véase fig. 21-24). Es probable que esta complejos que ellos forman con CDK desencadenan la for­
mación de husos mitóticos. Las dos ciclinas restantes de S.
La fosfatasa Cdc 14 promueve la salida uniones cruzadas a secuencias específicas de DNA (fig. 11-40)
diferencia de estrategia se produzca porque el APC tiene va­
cerevisiae, Clb1 y Clb2, cuyas concentraciones alcanzan el ni­ de la mitosis durante las diversas fases del ciclo celular indican que el ORC
rios sustratos, como la segurina y las ciclinas de tipo B, que
vel máximo a mitad del camino hacia la mitosis, funcionan permanece asociado con los orígenes durante todas las fases
deben degradarse en momentos diferentes del ciclo. Por el
Los estudios genéticos efectuados con S. cerevzsrae pro­ del ciclo. En un principio se identificaron varios factores de
porcionaron un panorama de la manera en que se inactivan inicio de la replicación necesarios para el comienzo de la
los complejos ciclina tipo B-CDK en la anafase tardía, lo que s íntesis de DNA en los estudios genéticos con S. cerevisiae.
permite que tengan lugar los diversos acontecimientos que Estos factores son Cdc6, Cdt1, Mcm 10, y el hcxámero MCM,
constituyen la telofasc y luego la citocinesis. Esros complejos un complejo de seis proteínas Mcm adicionales, estrechamen­
son el equivalente en S. cerevisiae del factor promotor de la te relacionadas; estas proteínas se asocian con los orígenes
mitosis (MPF), identificado por primera vez en los ovocitos durante G1, pero no durante G2 o M. En G1 los diversos fac­
y los embriones tempranos de Xenopus. Como se mencionó, tores de iniciación se ensamblan con el ORC y forman un
Poliubicuitinación;
� el factor de especificidad Cdhl que dirige el APC a la poliu­ complejo de prerreplicación en cada origen. Se cree que el he­
degradación por
proteasomas lReplicación
de l DNA
bicuitinación de las ciclinas tipo B es fosforilado tanto por
los complejos G1 tardíos como por ciclina tipo B-CDK, lo que
xámero MCM actúa de forma análoga a los del antígeno T
del SV40, que funcionan como una helicasa para desenrollar
fJ EJ inhibe así la actividad de Cdh1 durante el final de G1, S, G2 el DNA paterno en las horquillas de replicación (véase fig. 4-
Fase S y la mitosis antes de la anafasc tardía. 36). Cdc6, Cdt1 y McmlO se necesitan para cargar los hexá­
Fase G1 media-tardía Cuando los cromosomas hijos se separaron de manera mcros MCM opuestos en el origen.
� adecuada en la anafase tardía, la fosfatasa Cdc14 se activa
y desfosforila Cdhl, lo que permite su unión al APC. Esta
La restricción del inicio de la repliación una vez y solo
una vez por ciclo celular en S. cerevisiae se refuerza por el ci
i
.á. F g 21-24. Control de la transición G1 �fase S en S.
.

cerevisiae por proteólisis regulada del inhibidor de fase S

CDK) fosforilan a Sic1 (paso Ol. marcándolo para su
poliubicuitinación por la SCF ubicuitina ligasa y la degradación
interacción lleva con rapidez a la poliubicuitinación media­
da por APC y a la degradación por parte de los proteasomas
clo de actividad alternante de las cic lina-CDK de tipo B a lo
largo del ciclo celular: es baja en la telofase hasta G1 y alt.l
Sic1. Los complejos ciclina-CDK de fase S (Cib5-CDK y Clb6- posterior por los proteasomas (paso F,l). Los complejos ciclina­ de las ciclinas de tipo B, y por lo tanto a la inactivación de l en S, G2 y M hasta la anafase (véase fig. 21-25). Como se l'X·
CDK) empiezan a acumularse en G1, pero son inhibidos por el CDK de fase S activos desencadenan entonces la iniciación de la MPF (véase fig. 21-10). Dado que éste todavía está activo plicó recién, los complejos de ciclina-CDK de fase S se ;lUI·
Sic1. Esta inhibición impide la iniciación de la replicación del DNA síntesis de DNA (paso Dl por fosforilación de sustratos que cuando Cdc14 se activa por primera vez en la anafase tar­ van al principio de la fase S cuando su inhibidor espcuflw,
hasta que la célula está preparada por comp le to. Los complejos todavía no se identificaron. !Adaptado de R. w. King y col. 1996. día, podría competir con Cdc14 por la refosforilación de Sicl, se degrada. En el modelo actual de replicación dl' \. n •

ciclina-CDK de G1 formados en la fase G, tardía (Cin1-CDK y Cln2- Science 274:1652.1

880 CAPÍTULO 21 • Regulación d el ciclo celular eucarionte 21.6 • Control del ciclo celular en la s células de mamífero 881

revisiae, los complejos de prerreplicación se forman al prin­ al complejo de prerr eplicación. El Cdc45 es necesario para la estas pr oteínas se necesitan para la síntesis continua de la he­ ficidad que dirige el complejo promotor de la anafase (APC)
cipio de G1, cuando la actividad de la ciclina de tipo Bes ba­ unión posterior de RPA, la proteína heterotrimérica que se bra conductora y para la síntesis de la mayor parte de la hebra hacia las ciclinas tipo B, lo que permite la acumulación de
ja (fig. 21-26, paso II] ). La iniciación de la replicación del une al DNA de cadena simple generado cuando la helicasa retrasada. Una polimerasa de DNA adicional, la Poi e, tam­ ciclinas tipo B de fase S.
DNA requiere un complejo ciclina-CDK de fase S activo y MCM desenrolla el dúplex de DNA paterno. bién es necesaria para la síntesis del DNA cromosómico, pe­
una segunda proteincinasa hetcrodimérica, Dbf4-Cdc7, que Al estabilizar el DNA desenrollado, el RPA promueve la ro su función todavía no se conoce. • Los complejos ciclina-CDK de fase S son inhibidos al ini­
se expresa en G1 (paso 12] ). Por analogía con las cinasas de­ unión del complejo entre la primasa y la polimerasa de DNA A medida que las horquillas de replicación se alejan de cio por Sicl. La poliubicuitinación de Sicl por la <;CF ubi­
p endientes de ciclina (CDK) que deben unirse a una ciclina a (Poi a) que inicia la síntesis de las hebras hijas (véase fig. cuitina ligasa marca a Sicl para su degradación por parte de
cada origen, es factible que las formas fosforiladas de Cdc6,
para activar su actividad de proteincinasa, la cinasa depen­ 21-26, paso[]). Como sucede con la helicasa MCM, el Cdc45 los proteasomas, liberando complejos cidina-CDK dl' fase S
Cdt1 y Mcm10 se desplacen de la cromatina. Sin embargo,
diente de Dbf4 Cdc7 a menudo se llama DDK. Aunque el permanece asociado con las horq uillas de replicación a me­ los complejos ORC se unen de inmediato a la secuencia de activados, que desencadenan el inicio de la fase� (vt·a..e f1g.
origen del DNA hijo replicado de doble cadena y permane­
juego completo de proteínas que debe fosforilarse para acti­ dida que se extienden en ambas direcciones a partir del ori­ 21-24).
var la iniciación de la síntesis del DNA todavía no se deter­ gen. Es probable que también actúe en los ciclos de unión de cen unidos durante todo el ciclo celular (véase fig. 21-26, pa­ Las ciclinas tipo B Clb3 y Clb4, expresadas en l,1 f.¡,c S
RPA y pri m asa-Pol a necesarios para iniciar la síntesis de la
•
m inó, hay pruebas de que se necesi ta por lo menos la fosfo­ so @] ). Los orígenes sólo pueden ac tivarse una vez durante forman heterodímeros con la CDK que tambit'n pro
tardía,
rilación de una subunidad de la helicasa MCM hexamérica y hebra hija retrasada. Se cree que la unión posterior de la DNA la fase S porque los factores de iniciación fosforilados no p ue­ mu even la replicación del DNA e inician la formacion dl·l
de Cdc6. Otra consecuencia de la activación del complejo ci­ polimerasa o y sus cofactores adicionales Rfc y PCNA tiene den volver a agruparse en un complejo de prerreplicación. Por huso al comienzo de la mitosis.
clina-CDK de fase S es la unión del factor de iniciación Cdc45 lugar como en la síntesis del DNA del SV40 (véase fig. 4-34); consiguiente, la fosforilación de los componentes del comple­
jo de prerreplicación por los complejos ciclina-CDK de fase • Las ciclinas de tipo B Clbl y Clb2, expresadas en G2, (or
S y los complejos DDK en forma simultánea, activa la inicia­ man heterodímeros con la CDK, que estimulan los aconteCl
ción de la replicación del DNA en un origen e inhibe la rei­ mientos mitóticos.

� Fig. 21-26. Modelo para el ensamblaje del En la anafase tardía, el factor de especificidad Cdhl se
niciación de la replicación en ese origen. Como ya se señaló,
los complejos ciclina-CDK de tipo B permanecen activos
•

activa por desfosforilación y luego dirige al APC a poliu bi­

·� complejo de prerreplicación y su regulación por los

Ciclina de tipo B·CDK O 1 e }�

Mcm( 2-7 )
���ores de
complejos ciclina-CDK de fase S en S. cerevisiae.
Paso 0: Durante G1 temprana, los factores de inicio de
la replicación no fosforilados se ensamblan formando un
durante toda la fase S, G2 y la anafase temprana, lo que
mantiene el estado fosforilado de los factores de iniciación
de la replicación e impide el ensamblaje de complejos nuevos
cuitinar todas las ciclinas de tipo B (Clb). Su degradación
posterior por los proteasomas inactiva el MPF y permite la
salida de la mitosis (véase fig. 21-10).

Q '"""';'"
. complejo de reconocimiento del origen (ORC) que está de prerreplicación (paso 12] ).

1
unido a un origen de replicación para generar un Sólo cuando el APC desencadena la degradación de rodas La replicación del DNA se inicia a partir de complejos
complejo de prerreplicación. Paso lil: En la fase S, los
•

G, __.,..._ las ciclinas de tipo B en la anafasc tardía y la telofase, la ac­ de prerreplicación formados en los orígenes de replicación
J�1fM�..,.., Complejo de complejos ciclina-CDK de fase S y la DDK fosforilan los al principio de G1• Los complejos ciclina-CDK de fase S de­
prerreplicación ción sin oposición de la fosfatasa elimina los fosfatos de los
factores de iniciación (Cdc6, Cdtl y McmlO), lo que permi­
componentes del complejo de prerre plicación. Paso D:
Esto conduce a la unión de Cdc45, a la activación de las
sencadenan en forma simultánea la iniciación a partir de
los complejos de prerreplicación e inhiben la formación de
EJ Ciclina-CDK de fase S
te el ensamblaje nuevo de los complejos de prerreplicación
1 complejos nuevos de prerr cpl icación por fosforilación de
helicasas Mcm que desenrollan las hebras de DNA
paternas y a la liberación de los factore s de iniciación
durante G1• Como se describió antes, la inhibición de la ac­
fosforilados Cdc6 y Ctdl. El RPA se une al DNA de
DDK tivjdad del APC a lo largo de G1 establece las condiciones pa­ los componentes del complejo de prerrcplicación (véase
cadena simple resultante. Paso 0: Un complejo de DNA ra la acumulación de las ciclinas de fase S necesarias para el fig. 21-26).
polimerasa a (Poi a) y primasa comienza la síntesis de inicio de la fase S. Este mecanismo regulador tiene dos con­
hebras hijas. Paso lil: La DNA polimerasa o más sus
• La iniciación de la replicación del DNA tiene l u gar en ca­
secuencias: 1) los complejos de prerreplicación se ensamblan
factores accesorios PC N A y Rfc alargan las hebras h ijas
S da origen, pero sólo una vez, hasta que la célula atraviesa la
sólo durante G1, cuando la actividad de los complejos cicli­
in ici adas por Poi a-primasa. El ORC se une a la
anafase, cuando la activación del APC conduce a la degra­
na-CDK de tipo B es baja, y 2) cada origen inicia la replica­
secuencia de origen del DNA hijo de doble cadena, pero dación de las ciclinas tipo B. El bloqueo de la [Link]ón de
ción sólo una vez durante la fase S, cuando la actividad de
la replicación del DNA hasta que los cromosomas replica­
�
los factores de iniciación fosforilados no pueden armar
dos se hayan separado asegura que las células hijas conten­
los complejos ciclina-CDK de fase S es alta. Como resultado,
un complejo de pre rreplicación en él. Los complejos
ciclina-CDK de tipo B mantie nen los factores de iniciación
el DNA cromosómico se reproduce sólo una vez en cada ci­
gan el número apropiado de cromosomas por célula.
en un estado fosforilado a lo largo del resto de S. G2 y la clo celular.
anafase temprana (arriba). Estos factores no pueden
ensamblarse en complejos nuevos de prerreplicación
hasta que las ciclinas de tipo B se degradan después de
su poliubicuitinilación por el APC en la anafase tardía.
I'..Jr.J Control del ciclo celular
tr- e,) Poi a-primasa
Resultados recientes indican que otras proteínas, no
CONCEPTOS CLAVE DE LA SECCIÓN 21.5
en las células de mamífero
IJ ! dNTP, NTP +
mostradas. actúan en el paso D. Aunque se muestra la
fosforilación de varios componentes de los complejos de Estudios genéticos con S. cerevisiae
En los organismos multicelulares, el control preciso del ci­
prerreplicación, no se determinaron todos los
S. cerevisiae expresa una sola proteincinasa dependiente clo celular durante el desarrollo y el crecimiento es crítico pa­
ra determinar el tamaño y la forma de cada tejido. La repli­
•

de ciclina (CDK), codificada por CDC28, que interactúa

componentes críticos cuya fosforilación por un complejo
ciclina-CDK de fase S o por DDK es necesaria para la
cación celular es controlada por una red compleja de vías de

�
iniciación. con varias ciclinas diferentes durante las diversas fases del
ciclo celular (véase fig. 21-25). señalización que integran señales extracel ulares acerca de la
identidad y el número de las células vecinas, y señales intra­
RfcO • Hay tres ciclinas activas en G1: Cln1, Cln2 y Cln3. La celulares sobre el tamaño de la célula y el programa de desa­
Pena Q) 1!1 concentración de mRNA de CLNJ no varía en grado signi­ rrollo (cap. 15). Las células más diferenciadas abandonan el
ficativo a través del ciclo celular, pero su traducción se regu­ ciclo celular durante G., y entran en estado G0 (véase fig. 21-
Polo O
la por la disponibilidad de n utrientes. 1). Algunas células diferenciadas {p. ej., los fibroblastos y lo�
+ dNTP, NTP. ORC
linfocitos) pueden estimularse para que reingresen en el ciclo
y se repliquen. Sin embargo, muchas células posmitótica..,
• Una vez que los complejos Cln3-CDK activos se acumulan
hacia la mitad y el final de G1, fosforilan y activan dos facto­
diferenciadas nunca vuelven a entrar en el ciclo cel ular P<H.I
res de transcripción que estimulan la expresión de Cln1 y
Cln2, de enzimas y o tras proteínas necesarias para la replica­
reproducirse de nuevo. Como se verá en esta sección, los nw
ción del DNA, y de las ciclinas de tipo B de fase S Clb5 y Clb6.
canismos reguladores del ciclo celular descubiertos en las k·\ 1
duras y los huevos y los embriones tempranos de Xeno¡ms
• Los complejos ciclina-CDK de G1 tardío (Cln1-CDK y también operan en las cél ulas somáticas de los e u carionll' su
periores, como los seres humanos y otros mamíferos.
'

Cln2-CDK) fosforilan e inhiben a Cdhl, el factor de especi-

882 CAPiTULO 21 • Regulación del ciclo celular eucarionte 21.6 • Contro l del ciclo celular en las cé lu las de mamífero 883

El punto de restricción de los mamíferos La unión de estos factores de crecimiento a proteínas re­ cromosomas, en el período G0 del ciclo celular. Si se agregan

�
Ciclina A-CDK1
es análogo al START de las células de levadura ceptoras espe cíficas que atraviesan la membrana plasmática factores de crecimiento al medio de cul ti vo, estas células en
comienza una cascada de transducción de señales que termi­ reposo superan el punt o de rest ric ci ón despu és de 14 a 16 ho­ Go

La mayor parte de los estudios de control del ciclo celu­ na por in fluir en la t ranscrip ción y e l control del ciclo celu­ ras, entran en fase S 6 a 8 horas despué s de esto y cumplen
lar e n mamíferos se hizo con células en cultivo que requieren lar (caps. 13 a 15). el resto del ciclo celular (véase fig. 21-2). Como e l p unt o de
ciertos factores de cr ec im iento polipept ídico s (m itóge nos) pa­ Las células de mamífero cultivadas en ause n cia de facto­ i nici o de las células de levadura, el punto de restricción es e l Ciclina D-CDK4
ra estimular la proliferac ión celular. res de crecimiento se det ienen, con u na d ot ació n d ip loide de del ciclo celular e n el que las células d e mamífero s e compro­ Cíclina D CDK6
meten a entrar en fase S y completar el ciclo celular. Si se tans­

(a)

(]
Células en G0
(b)
f ieren de un medio con factores de crecimientO a otro que no
los presenta antes de que alcancen el punto de restricción, las
células no entran en fase S. No obstante una vez que las cé-
1ulas pasaron el punto de re s tr icción , están destinadas a en­
Punto de
1
trar en fase S y avanzar a través de todo el c iclo celular, lo
que insume unas 24 horas para la mayor parte de las células

// � loo���
de mamífero en cultivo.
Agr g•do • t res Cicl ina A-CDK2
�
� r
c ec1m 1 en t
Tinción
para DNA Numerosas COK y ciclinas regulan el pasaje

(;::\ 10-16 horas fJ de células de mamífero por el ciclo celular

0
M icr oin yecci ón
A diferenci a de S. pombe y S. cerevisiae, cada uno de los
de anticu erpos

l 11
l anticiclina D cuales produce una sola cinasa depen diente de ciclina (CDK)
para reg ula r el ciclo celular, las células de mamífero usan una
..._ Fig. 21-28. Actividad de los complejos ciclina-COK de

�
Agr egado de BrdU ( ) mamífero a través del ciclo celular de células en G0
pequeña familia de CDK relacionadas para regular la progre­
•

cultivadas inducidas a dividirse por tratamiento con

!
sión por e s te ciclo. En la mayoría de las células de mamíferos factores de crecimiento. El espesor de las bandas coloreadas
Determ ci ón de se exp re san cuatro CDK en niveles significativos, que tie ne n es aproximadamente propor cional a la actividad de
Ciclina D
la inc orp?r ac1ón de Brd · unida al importancia en la regulación del ciclo celular. Denominadas proteincinasa de los complejos indicados. La ciclina D en globa
despues de 16 ho ras CDKl, 2, 4 y 6, estas proteínas se identificaron por la capa­ las tres ciclinas de tip o D.
ant icuerpo
V�
y
Tinción
cidad de sus cDNA clonados para complementar ciertas mu­
para BrdU

) tantes cdc de levaduras o por su h omo logí a con otras CDK.

Como S. cerevisiae, las células de mamíferos expresan va­
Células BrdU positivas Células BrdU negativas ria-S' ciclinas. Las ci clinas A y las ciclinas B, que actúan en las t ebra dos, los diferentes complejos ciclina-CDK que forman
fases S, G1 y en la mitosis temprana, se detectaron por pr i­ pueden considerarse de manera general en términos de sus

(e) "' Con tr o l + Ant iciclin a D

mera vez en experimentos realizados con embriones tempra­
nos sincronizados en erizo de mar y almeja como proteínas
funciones en las fases G1 media y t ardía , S y M. Tod as las ci­
clinas tipo B conti en en una caja de destrucción con una se­

"'
C1)
> 100
:� cuya concentración oscilaba (véase f ig. 21-8). En tod o s los cuencia conservada reconocida por la APC ubicuitina ligasa,
o 80 ani males multicelulares examinados se encontraron proteínas en tanto que las cicl inas G1 ca recen de esta secuencia. Por lo
a.
:::> homólogas a las c icl in as A y a las cic linas B. Se aislaron tanto, el APC regula sólo la actividad de los complejos cicli­
60

"'
-e cDNA que codifican tres ciclinas relacionadas del tipo D huma­ na-CDK que implican ciclinas del tipo B.
co
40 no y ciclina E por su capacidad de comple me n tar células de
C1) Tinción para
S. cerevisiae mutantes e n los tres genes CLN que codifican
()
::J
:a;
<1)
20
anticicl i na D
las ci clinas de G1 • Las cantidades relativas de las tres ciclinas
de tipo D expresadas en los diversos tipos celulares (p. ej., fi­
La expresión regulada de dos clases de genes
hace retornar las células de mamífero en G0
"O
o 10 12 14 16 broblastos, células hematopoyéticas) s on diferentes. Aquí se al ciclo celular
�
Tiempo en que se agrega el anticuerpo y la BrdU denominan en conjunto ciclinas D. Las ciclin as D y E son las
(horas después del agregado de factores de crecimiento) G1 de los mamíferos. En los experimentos en los que células El agregado de factores de crecimiento a células de mamí­
cultivadas de mamífero se microinyectaron con anticuerpos fero detenidas en G0 induce la transcripción de varios genes,
anticiclina D en diferentes momentos después del agregado la mayor parte de los cuales pertenece a una de d os clases,
..._FIGURA EXPERIMENTAL 21-27 Los experimentos de medio. Las c élu las se tiñeron con diferentes agentes fluorescentes de factores de crecimiento se demostró que la ciclina D es de respuesta temprana o de respuesta retardada, según la ra·
microinyección con anticuerpos anticiclina O muestran que la para visualizar el DNA (arriba), la BrdU (medio) y el anticuerpo esencial para el pasaje por el punto de restricción ( fig . 21-27). pidez con la que aparecen los mRNA co dific ado s por ellos
ciclina O es necesaria para el pasaje a través del punto de ant ici cli na D (abajo). Nótese que las dos células en este campo ( f ig . 21-29a). La transcripción de los genes de respuesta tem­
En la figura 21-28 se observa u n modelo actual de los pe­
restricción. Las c élu la s de mamífero detenidas en G0 u sadas en inyectadas con el anticu erpo anticiclina D (células rojas en 1¡¡
río dos del ciclo celular en los que actúan los diferentes com­ prana se induce unos pocos m inu tos después del agregado de
estos experimentos pasan el pu nt o de restricción 14-16 horas microfotogra fía inferior) no incorporaron BrdU en el DNA nuclear,
plejos ciclina-CDK en células de m amí fe ro detenidas en G0, factores de crecimiento, por cascadas de transducción de se­
después del agre gado de factores de crecimiento y entran en fase como lo indica la ausencia de tin ción de la mi crofo tografía del
estimuladas a dividirse por el agregado de factores de creci­ i'íales que activan factores de transcripción pree xisten te s en el
S 6·8 horas después. (a) Esqu ema del pr otocolo experimental. A medio. (e) Porcentaje de células contr ol (barras azules) y células
experi mentales (barras rojas) que incorporaron BrdU. La ma yor miento. En ausencia de factores de crecimiento, las células citosol o el núcleo. La inducción de los genes de respuesta
diferentes tiempos después de 10-16 horas del agregado de
factores de crecimiento (01, algunas células se m icroinyectaron parte de las células inyectadas con anticuerpos anticiclina D 10 o cultivadas en G0 no expresan ciclinas ni CDK; l a ausencia de temprana no es bloqueada por los inhibidores de la síntesis
con anticuerpos de conejo contra ciclina D (f.J) Luego se agregó al 12 horas después del agregado de factores de crecimiento no estas proteínas críticas explica por qué las células en G0 no de proteínas (fig. 21-29b) porque los factores de transcrip
m edio bromodesoxiuridina (BrdU), un análogo de la timi dina (i), y entró en fase S, lo que se indica por el bajo nivel de incorporación progresan a través del ciclo celular ni se replican. ción necesarios t:stán presentes en las células G0 y se activan
las células control sin inyectar (izquierda) y las m icroinyectadas del de BrdU. Por el contrario, los anticu e rpos anticiclina D tuvieron En el cuadro 21-1, p resent ado antes en este c ap ítu lo , se por fosfor il ació n o eliminación de un inh ibidor en respuc�t.l
experimento (derecha) se incu baron durante 16 horas más. Cada poco efecto sobre la entrada en fase S y la síntesis de DNA resumen las diversas ciclinas y CDK que se mencionaron y a la esti rnulació n de las células por los factores de crecimiento
muestra se anal izó luego para determinar el porcentaje de células cuando se inyectaron a las 14 o 16 horas, es decir, después de que
las porciones del ciclo celular en las que actúan. Las ciclinas (cap. 14). Muchos de los ge ne s de respuesta temprana w
que habían incorporado BrdU (1)), lo que indica que entraron en las célu las habían pasado el pu nto de restricción. Estos resultados
pertenecen a dos grupos prin cip al es, las G1 y las tipo B que difican factores de transcripción, como c-Fos y c-Jun, qm
fase S. (b) Análisis de las células control y de las células indican que la cicli na D es necesaria para superar el punto de
a ct úan en S, G2 y M. Aunque no es posible establecer u na e stimu lan la transcripción de los genes de respuesta rct;Hd:l
experimentales 8 horas después del agregado de factores de r estricción , pero u na vez que las células pasaron este pun to, no
crecimiento. Las tres m icro fotograf ías muestran el mismo campo necesitan ci cli na D para entrar en la fase S 6-8 horas después. correspondencia sim ple entre las funciones de las diversas da. Los retrovirus oncogénicos expresan formas m uta ntts, no
de células teñidas 16 horas después del agregado de BrdU al !Partes (b) y (el adaptadas de V. Baldin y col., 1993, Genes & Devel. 7:812.1 cicli nas y CDK de S. pombe, de S. cerevisiae y de los ver- reguladas de c-fos y c-jun (cap. 23); el descubrimiento d�· que
884 CAPÍTULO 21 • Reg ulación d el ciclo celular eucarionte 21.6 • Control d el ciclo celular en las células de mamífero 885

(a) y CDK6 se expresan primero, seguidas por las ciclinas E y na A es de tipo B, no una ciclina de G1; véase cuadro 21-1.)
Genes de respuesta retard ad a
CDK2 (véase fig. 21-28). Si se eliminan los factores de creci­ La eliminación de la función de la ciclina A inhibe la síntesis
�
z miento antes del pasaje por el punto de restricción, cesa la de DNA en las células de mamífero, lo que sugiere que los
ex:
E expresión de estas ciclinas de G1 y CDK. Dado que estas
�� complejos ciclina A-CDK2 pueden funcionar como los com­

� í �@Y
Ql proteínas y los mRNA que las codifican son inestables, sus
"O plejos ciclina-CDK de fase S de S. cerevisiae para activar la
Q¡ concentraciones decaen con rapidez. Como consecuencia, las iniciación de l a síntesis de DNA. También hay pruebas de que
>
z células no pasan el punto de restricción y no se reproducen. el complejo ciclina E-CDK2 puede contribuir con la activa­
Además del control transcripcional del gen que codifica Mit ad de G1 G1 tardía ción de complejos de prerreplicación.
la cidina D, la concentración de esta ciclina de la mitad de Tres proteínas relacionadas inhibidoras de CDK, o CIP
G1 también se regula mediante el control de la traducción de (p27"LJ'L, p57KIP2 y p21crr), parecen compartir la función del in
Tiempo (h) Á Fig. 21-30. Regulación de las actividades de Rb y E2F en
su mRNA. En este aspecto, la cidina D es similar a la Cln3 hibidor de fase S Sicl de S. cerevisiae (véase fig. 21-24). La fos­
Agregado de suero G, media-tardía. La estimulación de cél ulas en G0 con
de S. cerevisiae. El agregado de factores de crecimiento a las mitógenos induce la expresión de CDK4, CDK6, ciclinas de tipo forilación de p27K IPI por la ciclina E-CDK2 la marca para l;l
células de mamífero en cultivo desencadena la transducción Dy la transcripción de factores E2F, todos codificados por los poliubicuitinación por el complejo SCF de mamífero (véase fig.
(b)
Genes de respuest a tempra na de señales por la vía de la cinasa PI-3 descrita en el capítulo genes de respuesta retardada. La proteína Rb inhibe al inicio la 21-2, paso [il). La subunidad de SCF que marca la p27"LI'1 se
� 14, lo que lleva a la activación del factor de traducción-ini­ actividad de E2F. Cu ando la señalización de los mitógenos es sintetiza a medida que las células se aproximan a la transición
z
ex: ciación eiF4 (cap. 4). Como resultado, se estimula la traduc­ sostenida, los co mplejos ciclina D-CDK4/6 resultantes empiezan G1 --4 S. El mecanismo de degradación de p2lcn• y p57"- 1P2 es
E a fosforilar a Rb, liberando parte de E2F, que esti mula la
Ql
ción del mRNA de la ciclina D y otros mRNA. Los agentes menos conocido. La actividad de los complejos ciclina-CDK2
"O transcripción de los genes que codifican ciclina E, CDK2 y E2F
que inhiben la activación del eiF4, como el TGF-p, inhiben de mamífero también se regula por mecanismos de fosforila­
Q¡ (autoe stimulac ión). Los complejos ciclin a E-CDK4 fosforilan más
> la traducción del·mRNA de la ciclina D y por lo tanto tam­ ción y de desfosforilación, similares a los que controlan el pro­
z Rb, produciendo ciclos de retroali mentación positiva (flechas
bién lo hacen con la proliferación celular. motor de la mitosis de S. pombe, MPF (véase fig. 21-14). La
azules). que conducen a una elevación rápida de la expresión y
activid ad de E2F y ciclina E-CDK2 a medida que la célula se fosfatasa Cdc25A, que elimina el fosfato inhibidor de la CDK2,
2 4 8 12 es un equivalente en los mamíferos de la Cdc25 de S. pombe,
aproxima a la transición G, -7 S.
. Tiempo (h) El pasaje a través del punto de restricción solo que actúa en la transición G1 � S en lugar de hacerlo en
Agregado de sue ro + inh i bido r es depende de la fosforilación de la proteína Rb la transición G1 � M. La fosfatasa de los mamíferos normal­
de la síntesis de proteínas mente se activa de manera tardía en G1, pero se degrada du­
supresora de tumores
La proteína Rb es uno de los sustratos más importantes de rante la respuesta de las células al daño del DNA, para impe­
Á Fig. 21-29. Curso temporal general de la expresión de Algunos miembros de una pequeña familia de factores de los complejos ciclina G1-CDK de los mamíferos. La fosforila­ dir que entren en fase S (véase sección 21.7).
gernes de respuesta temprana y retardada en células de transcripción relacionados, denominados en conjunto facto­ ción de la proteína Rb en varios sitios impide su asociación con Una vez que el complejo ciclina A-CDK2 es activado por
mamífero detenidas en G0 después del agregado de suero. res E2F, son codificados por los genes de respuesta retarda­ los E2F, lo que permite a los E2F activar la transcripción de Cdc25A y los inhibidores de fase S se degradaron, la replica­
(a) En ausencia de inhibidores de la síntesis de proteínas, la da. Estos factores de transcripción activan los genes que co­ los genes necesarios para la entrada en fase S. Como se mues­ ción de DNA se inicia en los complejos de prerreplicación. Se
expresión de los genes de respuesta temprana a lcanza su nivel difican muchas de las proteínas involucradas en la síntesis de cree que el mecanismo general es similar al de S. cerevisiae
tra .en la figura 21-30, la fosforilación de la proteína Rb es ini­
máximo alrededor de 1 hora después del agregado de suero que DNA y desoxirribonucleótidos. También estimulan la trans­ (véase fig. 21-26), aunque se encuentran pequeñas diferencias
ciada por las ciclinas D-CDK4 y D-CDK6 en la mitad de G1•
contiene varios mitógenos y luego declina a medida que
cripción de genes que codifian la ciclina de G1 tardía (ciclina Una vez que las ciclinas E y CDK2 son inducidas por la fosfo­ en los vertebrados. Como sucede en las levaduras, es muy
comienza l a exp re s ión de los genes de respuesta tardía. (b) Los
E), la ciclina de fase S (ciclina A) y la CDK de fase S (CDK2). rilación de algunas Rb, la ciclina resultante E-CDK2 fosforita probable que la fosforilación de ciertos factores de iniciación
inh ibidores de la síntesis de proteínas impiden el descenso de la
Por lo tanto, los E2F funcionan al final de G1, de forma si­ más Rb al final de G1• Cuando la ciclina E-CDK2 se acumula por el complejo ciclina A-CDK2 promueva la iniciación de la
expresión de los genes de respuesta temprana y bloquean por
completo la expresión de los genes de respuesta tardía. Para la
milar a los factores de transcripción SBF y MBF de S. cerevi­ hasta alcanzar un nivel umbral crítico, la fosforilación adicio­ replicación del DNA y evite el reensamblaje de los complejos
explicación véase el texto . !Adaptado de A. Murray y T. Hunt. 1993, siae. Además, los E2F autoestimulan la transcripción de sus nal de la Rb por la ciclina E-CDK2 continúa, aun cuando la de prerreplicación hasta que la célula finalice la mitosis, pa­
The Cell Cycle: An lntroduction, W. H. Freeman and Company. ) propios genes. Funcionan como represores de la transcripción actividad de la ciclina D-CDK4/6 se elimina. Éste es uno de los ra asegurar así que la replicación en cada origen sólo se pro­
cuando están unidos a la proteína Rb, que a su vez se une a principales eventos bioquímicos responsables del pasaje a tra­ duce una vez durante cada ciclo celular. En los metazoos, una
los complejos de hisrona desacetilasa. Como se explicó en el vés del punto de restricción. Llegado a este punto, la fosforila­ segunda proteína pequeña, la geminina, contribuye a inhibir
capítulo 11, la transcripción de un gen es máxima cuando las ción adicional de la Rb por la ciclina E-CDK2 se produce in­ la reiniciación en los orígenes de replicación hasta que las cé­
las formas virales de estas proteínas (v-Fos y v-jun) pueden histonas asociadas están muy acetiladas; la desacetilación de cluso cuando se eliminan los mitógenos, y los niveles de ciclina lulas completan un ciclo celular.
transformar las células normales en cancerosas llevó a la iden­ las histonas hace que la cromatina asuma una forma más con­ D y CDK4/6 caen. Dado que E2F estimula su propia expre­ La CDK principal de los mamíferos en G1 y mitosis es
tificación de las formas de regulación celular de estos facto­ densada, inactiva desde el punto de vista transcripcional. sión y la de las ciclinas E y CDK2, la regulación cruzada po­ CDKl (véase fig. 2.1-28). Esta CDK, que tiene gran homolo­
res de transcripción. sitiva de E2F y de la ciclina E-CDK2 produce una elevación gía con la Cdc2 de S. pombe, se asocia con las ciclinas A y
Después de alcanzar el nivel máximo unos 30 minutos rápida de ambas actividades al final de G1• B. Los mRNA que codifican estas dos ciclinas de mamífero
luego del agregado de factores de crecimiento, las concentra­ La proteína Rb se identificó por primera vez como A medida que se acumulan, los complejos ciclina-CDK de pueden promover la maduración meiótica cuando se inyec­
ciones de mRNA de respuesta temprana descienden a un ni­ el producto del gen supresor tumoral prototipo, fase S y los complejos ciclina-CDK mitóticos mantienen la tan en ovocitos de Xenopus detenidos en G2 (véase fig. 21-
vel menor, que se mantiene mientras los factores de crecimien­ RB. Los productos de los genes supresores de tu­ proteína Rb en estado fosforilado a lo largo de las fases S, 6), lo que demuestra que actúan como ciclinas mitóticas. Por
to estén presentes en el medio. La mayor parte de los mRNA mores actúan de varias maneras para inhibir la progresión a G 1 y M temprana. Después de que las células completan la lo tanto, los complejos ciclina A-C DK1 y ciclina B-CDK1 de
tempranos inmediatos son inestables; por consiguiente, su través del ciclo celular (cap. 23). Las mutaciones con pérdi­ anafase y entran en G1 temprano o G0, el descenso de los ni­ los mamíferos son equivalentes desde el punto de vista fun­
concentración disminuye a medida que decae su tasa de sín­ da de función de RB se asocian con la enfermedad retinoblas­ veles de los complejos ciclina-CDK conduce a la desfosfori­ cional al MPF de S. pombe (complejo ciclina-CDK mitótico).
tesis. Este descenso de la transcripción se bloquea mediante toma hereditario. Un niño con esta afección hereda un alelo lación de la Rb por fosfatasas sin oposición. Como conse­ La actividad cinasa de estos complejos de mamíferos también
inh ibidores de la síntesis de proteínas (véase fig. 21-29b), lo RB• normal de un padre y un alelo RB- mutante del otro. Si cuencia, la Rb hipofosforilada está disponible para inhibir la parece estar regulada por proteínas análogas a las que con­
que indica que depende de la producción de una o más pro­ el alelo RB• en cualquiera de los trillones de células que cons­ actividad de E2F durante la fase G1 temprana del próximo trolan la actividad del MPF de S. pombe (véase fig. 21-14).
teínas de respuesta temprana. tituyen el cuerpo humano muta a un alelo RB-, no se expre­ ciclo y en las células detenidas en G0. El fosfato inhibidor de CDK1 es eliminado por la fosfatasa
Debido a que la expn::sión de los genes de respuesta retar­ sa ninguna proteína funcional y esa célula o alguna de sus Cdc25C, que es análoga a la Cdc25 de S. pombe.
dada depende de proteínas codificadas por genes de respuesta descendientes tienen probabilidades de hacerse cancerosas. En las células de mamífero en ciclo, la ciclina B se sinteti­
temprana, los primeros no se transcriben cuando se agregan Por razones no bien comprendidas, esto suele observarse en La ciclina A es necesaria para la síntesis de DNA za primero en la fase S tardía y su concentración aumenta a
mitógenos a las células detenidas en G0 en presencia de un células de la retina, lo cual produce los tumores de retina que medida que las células progresan a través de G2, alcanza el
y la CDKl para la entrada en la mitosis
inhibidor de la síntesis de proteínas. Algunos genes de respues­ caracterizan esta enfermedad. Asimismo, en la mayor parte máximo durante la metafase y desciende después de la anaf,1
ta retardada codifican factores de transcripción adicionales de las células cancerosas humanas la f unción de Rb está i nac­ Los niveles altos de E2F activan la transcripción del gen se tardía. Esto es paralelo a la evolución de la expresión de la
(véase más adelante); otros codifican ciclinas de tipo D, cicli­ tivada, ya sea por mutaciones en ambos alelos de RB o por de ciclina A a medida que las células de mamífero se aproxi­ ciclina B en los extractos de huevos de Xenopus en ciclo (vea
na E, CDK2, CDK4 y CDK6. Las ciclinas de tipos D, CDK4 la regulación anormal de la fosforilación de Rb. 1 man a la transición G1 � S. (A pesar de su nombre, la cicli- se fig. 21-9). En células humanas la ciclina B primero �e acu
886 CAPÍTULO 21 • Regulación del cicl o celular eucarionte 21.7 • Pu ntos de control en la regulación del ciclo celular 887

mula en el citosol y luego ingresa en el núcleo justo antes que • Las células de mamífero usan varias CDK y ciclinas para Otro ejemplo es la unión de los cinetocoros a los <11111 Fig . 21-31. No
la envoltura nuclear se fragmente al comienzo de la mitosis. regular el pasaje a través del ciclo celular. El complejo cicli­ microtúbulos del huso mitótico durante la metafa­ disyunción. Esta anomalía
Así, la actividad del MPF se controla no sólo por la fosforila­ na D-CDK4/6 actúa en la fase G1 media a tardía; el comple­ se. Si la anafase se inicia antes de que ambos cine­ se produce cuando los
tocoros de un cromosoma replicado se unan a los microtú­ cromosomas se separan
ción y la desfosforilación, sino también por la regulación del jo ciclina E-CDK2 en G1 tardía y S temprana; el complejo ci­
en la anafase antes de que
transporte nuclear de ciclina B. De hecho, la ciclina B va y vie­
ne entre el núcleo y el citosol, y el cambio de su localización
clina A-CDK2 en fase S; y el complejo ciclina A/B-CDK1 en
G2 y M hasta la anafase (véase fi g. 21-28).
bulos provenientes de polos opuestos del huso, se producen
células hijas que carecen de un cromosoma o tienen uno de ¡ Anafase el cinetocoro de cada
cromátida hermana se
du rante el ciclo celular es resultado de un cambio en las tasas más (fig. 21-31). Cuando este proceso, llamado no disyunción, haya unido a los
• La proteína Rb no fosforilada se une a los E2F y los con­
relativas de importación y exportación. Como sucede en los se produce durante la división meiótica que genera los óvulos microtúbulos (líneas roJaS)
vierte en represores de la transcripción. La fosforilación de
huevos de Xenopus y en S. cerevisiae, se produce poliubicui­ humanos, puede aparecer un síndrome de Down por trisomía de los polos opuestos del
Rb por el complejo ciclina D-CDK4/6 en la porción media
tinación de las ciclinas A y B por acción del complejo promo­ del cromosoma 21, que produce anomalías de desarrollo y re­ huso. Como resultado. un<l
de G1 libera los E2F para activar la transcripción de genes

�
tor de la anafase (APC) durante la anafase tardía y luego son traso mental. 1 célula hija contiene dos
que codifican ciclina E, CDK2 y otras proteínas requeridas
degradadas por los proteasomas (véase fig. 21-2, paso � ). toci nes is copias de un cromosomJ
para la fase S. Los E2F también autoestimulan la t ranscrip­ mientras la otra carece de
Para reducir al mínimo este tipo de errores durante los
ción de sus propios genes. ese cromosoma. [Adaptado
acontecimientos del ciclo celular, el progreso de una célula a

8®
Dos tipos de inhibidores de los complejos de A Murra y y T. Hunt. 1993.
• El complejo ciclina E-CDK2 fosforita más Rb, con lo que través del ciclo se supervisa en varios puntos de control (fig.
The Cell Cycle: An lntroductiOn.
ciclina-CDK contribuyen al control del ciclo los E2F se activan aún más. Una vez que se expresa un nivel 21-32). Los mecanismos de control que operan en ellos ase­
W. H. Fre eman and Compan y.l
celular en los mamíferos crítico de complejo ciclina E-CDK2, un mecanismo de re­ guran que los cromosomas estén intactos y que cada estadio
troalimentación positiva de E2F produce una elevación rá­ del ciclo celular se complete antes de comenzar el siguiente.
Como se señaló, tres CIP relacionadas, p21 , p27K11'2 y
CIP
pida de ambas actividades, lo que impulsa el pasaje a través Nuestro conocimiento de estos mecanismos de control a nivel Cromosoma Cro mosoma
super numera r io
p5 7 K IP2, inhiben la actividad del complejo ciclina A-CDK2 y de­ del punto de restricción (véase fig. 21-30). molecular avanzó en grado considerable en los últimos años.
faltante

ben degradarse para que pueda iniciarse la replicación del DNA.

• La actividad del complejo ciclina A-CDK2, inducida por la
Estas mismas proteínas inhibidoras de CDK también pueden
elevada actividad de E2F, se mantiene inhibida al comienzo
unirse e inhibir a los otros complejos ciclina-CDK de mamífe­
por acción de los CIP, que funcionan como inhibidores de la B
ro comprometidos en el control del ciclo celular. Como se verá El Punto de control de la
fase S, y por la presencia de un fosfato inhibitorio en CDK2.
más adelante, la p21crr tiene importancia en la respuesta de las Punto de control del separación de cromosomas
A medida que las células se acercan a la transición G1 � S, la
célrulas de mamífero al daño del DNA. En los experimentos con
ratones knockout que carecen de p2 7Krrz se demostró que esta
degradación por parte de los proteasomas de los inhibidores
y la activación de la fosfatasa Cdc25A genera complejos acti­
ensamblaje del huso

Mad2
Po li ubicui ti naci ó n
por APC-Cdh1
1
+- Cdc14 -- Sic1
CTP es en particular importante en el control de la proliferación
celular generalizada poco después del nacimiento. Aunque los
vos ciclina A-CDK2. Este complejo activa los complejos de
1 de la s cic linas tipo B

knockout p2 7K1"2 son más grandes que lo habinral, la mayoría

se desarrolla con normalidad. Por el contrario, los knockout
prerreplicación para comenzar la síntesis de DNA por un me­
canismo similar al de S. cerevisiae (véase fig. 21-26). ATM/R
Poliubicuitinación por
APC-Cdc20
! ATM/ R

p57KIP2 muestran defectos en la diferenciación celular y la ma­ • El complejo ciclina A/B-CDK1 induce la mitosis hasta la
mi ! de la seg ur i na
Telofase
! m
yoría muere poco después del nacimiento debido al desarrollo anafase temprana. Las ciclinas A y B son poliubicuitinadas p 53 � p53 Punto de control
defectuoso de diversos órganos.
Una segunda clase de inhibidores de los complejos ciclina­
por acción del complejo promotor de la anafase (APC) du­
rante la anafase tardía y luego son degradadas por los pro­
Punto de control
de daño del DNA
!
Anafase
!
p21CIP
de daño del DNA

p21CIP
Ciclina D-CDK4/6 1--
CDK, llamada INK4 (inhibidores de la cinasa 4), comprende teasomas.
varias proteínas pequeñas, estrechamente relacionadas, que
sólo interactúan con CDK4 y CDK6, y por lo tanto actúan de
• La actividad de los complejos mitóticos ciclina-CDK de
1
Ciclina NB-CDK1--+
los mamíferos también se regula por la fosforilación y la
manera específica en el control de la fase media de G,. La unión
de INK4 a CDK4/6 bloquea su interacción con la ciclina D y
desfosforilación de forma ·similar al mecanismo de S. pom­ /
por lo tanto su actividad de proteincinasa. La disminución re­
be, y en este caso la fosfatasa Cdc25C es la que elimina los Cdc25C
Entrada +- Cic lina E/A-CDK2
fosfatos inhibidores (véase fig. 21-14).
T j
sultante de la fosforilación de la proteína Rb impide la activa­
ción de la transcripción por los E2F y la entrada en la fase S. • Las actividades de los complejos ciclina-CDK de los ma­ D C hk1
en fase S
T
p21CIP Cdc25A
Un INK4 llamado p16 es un supresor de tumores, como la pro­ míferos también se regulan por los inhibidores de CDK Punto de control de
i Ciclina A-CDK2

+ l
teína Rb descrita antes. La presencia de dos aletos mutantes de DNA no replicado
(CIP), que se unen e inhiben cada uno de los complejos ci­
�
p16 en gran parte de los cánceres humanos es una evidencia del
papel importante de p16 en el control del ciclo celular (cap. 23).
clina-CDK de mamífero, y por las proteínas INK4, que blo­
quean el pasaje a través de G1 al inh ibir de manera específi­
A TR
T
p21CIP
i
Cdc25A
Punto de control
de daño del DNA
ca CDK4 y CDK6.
i
l
ATM/R -- Chk1/2
m
p53
Punto de control

CONCEPTOS CLAVE DE LA SECCIÓN 21.6

I'.JitlPuntos de control
de daño del DNA
i
ATM/R -- Chk1/2
Control del ciclo celular en las células de mamífero en la regulación del ciclo celular
A Fig. 21-32. Esquema general del control del ciclo celular bloqueando de ese modo la activación del factor de especificidad
• Diversos factores de crecimiento polipeptídicos, llama­ del APC (Cdh1) necesario para la poliubicuitinación de las ciclinas
Si las células progresan a la próxima fase del ciclo celu­ mediado por los puntos de control. El punto de control del
dos mitógenos, estimulan las células de mamífero en cultivo DNA no replicado !Ol impide la activación de los complejos tipo B, así como para la inducción de Sicl. Como resultado, no
lar antes de que la anterior se complete de manera adecua­
a proliferar por inducción de la expresión de genes de res­ ciclina A-CDK1 y ciclina B-CDK1 (esto es, el factor promotor de la tiene lugar la disminución de actividad del MPF requerida para los
da, puede producirse un daño genético catastrófico. Por ejem­
puesta temprana. Muchos de estos genes codifican factores mitos is, MPF) por activación de una cascada de la proteincinasa acontecimientos de la telofase. En la fase inicial del punto de
plo, cuando células en fase S son inducidas a entrar en mitosis
de transcripción que estimulan la expresión de genes de res­ ATR-Chkl, que fosforila e inactiva Cdc25C, inhibiendo así la control de daño del DNA (!Jl se activa la proteincinasa ATM o
por fusión con una célula en mitosis, el MPF presente en la
puesta retardada, que codifican las CDK de G¡, las ciclinas entrada en la mitosis. En el punto de control de ensamblaje del ATR (ATM/R). Las cinasas activas desencadenan entonces dos
célula mitótica fuerza la condensación de los cromosomas de vías; la vía de Chk-Cdc2 5A (OJJ y Sil. que bloquea la entrada
de G1 y los factores de transcripción E2F. huso (fJ). Mad2 y otras proteínas inhiben la activación del factor
la célula en fase S. Sin embargo, debido a que los cromoso­ de especificidad del APC (Cdc20) necesario para la en fase S, y la vfa del p53-p21c1P, que produce la detención en
• Una vez que las células pasan el punto de restricción, mas en replicación se fragmentan por el proceso de conden­ poliubicuitinación de la segurina, impidiendo así la entrada en G1, S y G2 ([111 - DJJ). Para mayor explicación véase el texto
pueden entrar en fase S y completar S, G2 y la mitosis en au­ sación, esta entrada prematura en mitosis es desastrosa pa­ anafase. El punto de control de separación de los cromosomas Los símbolos rojos indican vías que inhiben la progres ión a través
sencia de factores de crecimiento. ra la célula. !Ol impide la liberación de la fosfatasa Cdc14 de los nucléolos, del ciclo celular.
888 CAPÍTULO 21 • Regu lación del ci clo c elular euc arionte 21.7 • Puntos de control en la regulación del ciclo c elular 889

la presencia de DNA no replicado impide Cdc20. La unión al microtúbulo impide esta activación de G 1 y S impide que se copien bases dañadas, que pcrpettu
la entrada en la mitosis la Mad2 . Por consiguiente, una vez que todos los comple­ rían las mutaciones en el genoma. La replicación de DN \
jos de cinetocoro se unen a un m icrotúbulo, cesa la gene­ Tem1 · GDP dañado también promueve reestructuraciones cromosonu
Las células que no replican todos sus cromosomas no en­ ración de la forma activada de Mad2, se elimina la inhibi­ (inactivo) 7� '---... cas que pueden contribuir con el inicio del cancer. Lt de­
tran en mitosis. El mecanismo del punto de control de DNA ción de Cdc20 y ésta queda libre para dirigir el APC a Tem1-GAP ' ' Protema de un1ón tención en G2 permite que los daños del DNA de dohk· \.',t•
no replicado involucra el reconocimiento del DNA no repli­ poliubicuitinar de la segurina, lo que desencadena el co­ dena se reparen antes de la mitosis. Si un dallo dt• dohlt�
Núcleo
cado y la inhibición de la activación del MPF (véase fig. 21- mienzo de la anafase. Nucléolo tt(•i: • ll ·.. Microtúbulos
cadena no se repara, la porción distal rota del crommoma
32, []). En estudios genéticos recientes con S. pombe y en­
sayos bioquímicos con extractos de huevos de Xenopus se
Cdc14 .'•••• ' de l huso
dañado no se separa en forma adecuada porque no �t· tlllt�
físicamente a un centrómero traccionado hacia un polo dd
(inactivo)
sugirió que las proteincinasas ATR y Chkl, que también fun­ la red de salida de la mitosis controla SPB huso durante la anafase.
cionan en el punto de control de daño del DNA, inhiben la la separación apropiada de los cromosomas hijos Como se explicará en detalle en el capítulo 23, la [Link]'ti
Separación adecuada Separación inadecuada
entrada en mitosis por parte de las células que no completa­ vación de los genes supresores de tumores contribuye al dt·
ron la síntesis de DNA.
Se cree que la asociación de ATR con las horquillas de
Una vez que los cromosomas se separaron de manera ade­
cuada, comienza la telofase. Los diversos acontecimientOs de
do '"'"omooom � oloo"omooom"
sarrollo del cáncer. Las proteínas codificadas por varios �t·
nes supresores de tumores, como ATM y Chk2, en condiciont·s
replicación estimula su actividad de proteincinasa, lo que la telofase y la citocinesis siguiente, llamados en conjunto sa­ normales actúan en el punto de control de daños del DNA.
conduce a la fosforilación y la activación de la cinasa Chkl. lida de la mitosis, requieren la inactivación del MPF. Como Los pacientes con mutaciones en ambas copias de ATM o
se explicó, la desfosforilación del factor de especificidad Cdhl T em1 · GTP
La Chkl activa fosforila e inactiva la fosfatasa Cdc25 Chk2 desarrollan cánceres con frecuencia mucho mayor que
(activo)
(Cdc25C en los vertebrados), que en condiciones normales del APC por la fosfatasa Cdc14 conduce a la degradación de lo normal. Ambos genes codifican proteincinasas.
elimina el fosfato inhibidor de las CDK que actúan duran­ las ciclinas mitóticas y a la pérdida de actividad del MPF en la El daño del DNA debido a la luz UV de algún modo
te la mitosis. Como resultado, los complejos ciclina NB­ anafase (véase fig. 21-1 0}. Durante la interfase y la mitosis activa la cinasa ATM, que fosforila Chk2, para estimular
CDKl permanecen inhibidos y no pueden fosforilar los ob­ temprana, Cdc14 se encuentra secuestrada e inactivada en el así su actividad cinasa. La Chk2 activada fosforila luego la
jetivos necesarios para iniciar la mitosis. El ATR continúa nucléolo. El punto de control de separación de los cromosomas, fosfatasa Cdc25A, y la marca para su poliubicuitinación
iniciando esta cascada de proteincinasas hasta que todas las que supervisa la ubicación de los cromosomas hijos sepa­ Cdc14 por una ligasa de ubicuitina todavía no determinada y su
horquillas de replicación completan la replicación del DNA rados al final de la anafasc, determina si hay Cdc14 activa (activo)
degradación posterior en los proteasomas. Se debe recor­
y se desarman. disponible para promover la salida de la mitosis (véase fig. dar que la eliminación del fosfato inhibidor de la CDK2 de
21-32, crJ). los mamíferos por la Cdc25A es necesaria para el inicio y
La operación de este punto de control en S. cerevisiae de­
pende de un conjunto de proteínas llamado red de salida de
� � el pasaje a través de la fase S mediado por los complejos
El ensamblaje inadecuado del huso mitótico Salida de la mitosis Detención al final de la mitosis ciclina E-CDK2 y ciclina A-CDK2. La degradación de Cd­
impide la iniciación de la anotase la mitosis. Un componente clave es una GTPasa pequeña (mo­ c25A, que es resultado de la activación de la vía de ATM­
nomérica), llamada Teml. Este miembro de la superfamilia Chk2 en células en fase G1 o S, conduce así a la detención
• Fig. 21-33. Funcionamiento del punto de control de la
El punto de control del ensamblaje del huso impide la en­ de las GTPasas de proteínas de intercambio controla la acti­ en G1 o S (véase fig. 21-32, ffi2) y �). Una vía similar,
seperación de cromosomas. En S. cerevisiae, la actividad de la
trada en anafase aun cuando un solo cinetocoro de una cro­ vidad de una cascada de proteincinasas de forma similar a la que consiste en las proteincinasas ATR y Chkl, lleva a la
fosfatasa Cdc14 es necesaria para la salida de la mitosis. (Arriba)
mátida no esté asociado en forma adecuada con los microtú­ manera en que Ras controla las vías de las MAP cinasas (cap. fosforilación y poliubicuitinación de Cdc25A en respuesta
Durante la interfase y el comienzo de la mitosis Cdc14 es
bulos del huso. Los indicios acerca de cómo actúa este punto 14). Durante la anafase, Tem1 se asocia con el cuerpo del po­ a la radiación y. Como se describió antes para el punto de
secuestrado e inactivado en el nucléolo. Tem1 GDP inactivo
de control provienen del aislamiento de mutantes de levadu­ lo del huso (SPB) más cercano al brote celular hijo. (El SPR, control de DNA no replicado, la Chkl también inactiva a
(violeta) se asocia con el cuerpo del polo del huso (SPB) más
ras en presencia de benomilo, un fármaco despolimerizador del que se originan los microtúbulos del huso es equivalente cercano al brote al comienzo de la anafase con la ayuda de una Cdc25C, lo que i!T1pide la activación de CDK1 y la entra­
de los microtúbulos. Las concentraciones bajas de benomilo al centrosoma de los eucariontes superiores.) En el SPB, la proteína de unión (verde) y se mantiene en estado inactivo por da en mitosis.
aumentan el tiempo necesario para que las células de levadu­ Teml se mantiene en estado inactivo unido a GDP por una una GAP (proteína aceleradora de GTPasa) específica. Si la Otra proteína supresora de tumores, p53, contribuye a
ra ensamblen el huso mitótico y unan los cinctocoros a los GAP (proteína aceleradora de GTPasa) específica. El GEF separación de los cromosomas es adecuada lOl. la extensión de la detención de células con DNA dañado. Las células con
microtúbulos. Las células de tipo silvestre expuestas a beno­ (factor de intercambio de nucleótidos de guanosina) que ac­ los microtú bulos del huso inserta el SPB hijo en el brote, p53 funcional se detienen en G1 y G2 cuando se exponen a
milo no empiezan la anafase hasta que esros procesos se com­ tiva a Tem1 se localiza en la corteza del brote y no en la haciendo que Tem1 e ntre en contacto con un GEF (factor de radiación y, en tanto que las que carecen de p53 funcional
pletan y luego sufren mitosis, lo que produce células hijas nor­ célula madre. Cuando la elongación de los microtúbulos del intercambio de guanina nucleótidol específico localizado en la no se detienen en G1• Aunque la proteína p53 es un factor
males. Por el contrario, las mutantes defectuosas en el punto huso al final de la anafase ubica de manera correcta los cro­ corteza del brote (naranjal. Este GEF convierte Tem1 GDP de transcripción, en condiciones normales es muy inestable
de control del ensamblaje del huso entran en anafase antes mosomas en separación en el brote hijo, la Teml entra en inactivo en Tem1 GTP activo, el que desencadena una cascada y por lo general n.o se acumula en niveles lo suficientemen­
que se complete el ensamblaje del huso y la unión de los ci­ contacto con su GEF y se convierte en el estado activo uni­ de proteincinasas que lleva a la liberación de Cdc14 activo y a la te altos como para estimular la transcripción. La inestabili­
netocoros; por consiguiente, sus cromosomas se separan de do a GTP. La cinasa terminal de la cascada activada po r Teml salida de la mitosis. Si el aparato del huso no inserta el SPB hijo
dad del p53 es resultado de su poliubicuitinación por una Ji­
forma inadecuada, y producen células hijas anormales que - GTP fosforila luego el ancla nucleolar que liga e inhibe a en el brote (fJ). Tem1 permanece en estado inactivo unido a
gasa de ubicuitina llamada Mdm2 y su degradación posterior
mueren. Cdc14, liberándolo hacia el citoplasma y el nucleoplasma del GDP y Cdc14 permanece asociado con los nucléolos. Como
por los proteasomas. La degradación rápida de p53 es in­
resultado, hay una detención al final de la mitosis. !Adaptado de G.
El análisis de estas mutantes permitió identificar una brote y de la célula madre (fig. 21-33, IIJ). Una vez que Cdc14 hibida por ATM y quizá por ATR, que fosforila p53 en un
Pereira y E. Schiebel. 2001, Curr. Opin. Cell Biol. 13:762.1
proteína llamada Mad2 y otras proteínas que regulan a activo está disponible, la célula puede proseguir hacia la te­ sitio que interfiere su unión con Mdm2. Ésta y otras modi­
Cdc20, el factor de especificidad requerido para dirigir al lofase y la citocinesis. Si los cromosomas hijos no se separan ficaciones de p53 en respuesta al daño del DNA aumentan
APC hacia la segurina (véase fig. 21-32, 12]). Es preciso re­ hacia d interior dd brote, Teml permanece en su estado inac­ en gran medida su capacidad de activar la transcripción de
cordar que la pol iubicuitinación de la segurina mediada por tivo, Cdc14 no se libera del nucléolo y la salida de la mito­ genes específicos que ayudan a la célula a superar el daño
APC y su degradación posterior son necesarias para la en­ sis se bloquea (fig. 21-33, [I]). del DNA. Uno de estos genes codifica p21 CJP, un CIP gene­
trada en anafase (véase fig. 21-19). Se demostró que Mad2 En la levadura de fisión S. pombe, la formación del ta­ la detención del ciclo celular en células ralizado que se une e inhibe todos los complejos ciclina-CDK
se asocia con los cinetocoros que no están unidos a micro­ bique que divide las células hijas está regulada por proteí­ de mamífero. Como resultado, las células se detienen en G 1
con DNA dañado depende de supresores
túbulos. [Link] experimentos con Mad2 unida a una proteí­ nas homólogas a las que constituyen la red de salida de la y G2 hasta que se repara el daño del DNA y descienden los
tumorales
na fluorescente verde (GfP) indican que la Mad2 unida a mitosis de S. cerevisiae. También se encontraron genes que niveles de p53 y a continuación los de p21 CIP (véase fig. 21-
cinetocoros se intercambia con rapidez con una forma so­ codifican proteínas similares en organismos superiores, 32, �a IN]).
luble de Mad2. Los modelos actuales proponen que cuan­ donde es probable que estos homólogos actúen en un pun­ El punto de control de DNA dañado bloquea la En algunas circunstancias, como cuando el daño del DNA
do la Mad2 se asocia con un complejo de cinetocoro que to de control análogo que conduce a la detención de la mi­ progresión a través del ciclo celular hasta que el es extenso, p53 también activa la expresión de genes que con
no está unido a un microtúhulo, se convierte en una forma tosis tardía cuando los cromosomas hijos no se separan en daño se repara. El daño del DNA puede ser re­ ducen a la apoptosis, el proceso de muerte celular progra
activada de vida cort a que puede interactuar e inhibir a forma adecuada. sultado de la acción de agentes químicos y de la irradia­ mada que en condiciones normales se produce en células es
ción con luz ultravioleta (UV} o rayos y. La detención en pecíficas durante el desarrollo de los animales multicelulares.
890 CAPÍTULO 21 • Reg ulac ión del ciclo celular eucarionte 21.8 • Meiosis: un tipo especial de división celular 891

En los vertebrados, la respuesta de p53 probablemente evo­

lucionó para inducir apoprosis ante el daño extenso del DNA,
f11;1 Meiosis: un tipo especial @= Homólogo
pate rno
mina les en los eucariontes superiores. Se aislaron varias
mutantes de levadura que no podían formar esporas y se
de división celular Célula
para prevenir la acumulación de mutaciones múltiples que ana�izaron las proteínas de tipo silvestre codifi cadas por
premeiótica Homólogo
podrían convertir una célula normal en cancerosa. El papel estos genes. En estos ensayos se identificaron proteínas es­
(2n) mat erno
dual de p53, tanto en la detención del ciclo celular como en En casi todos los eucariontes, la meiosis genera células pecializadas del ciclo celular que son necesarias para la
la inducción de apoptosis, puede explicar la observación de germinales haploides (óvulos y espermatozoides) que luego meiosis.
que casi todas las células cancerosas tienen mutaciones en pueden fusionarse para generar un cigoto diploide (fig. 21- a¡ En S. cervisiae, en condiciones de inanición, se reprime
ambos aletos del gen p53 o en las vías que estabilizan el p53 34). Durante la meiosis, a un solo ciclo de replicación del la expresión de ciclinas G1 (Cinl/2/3), lo que bloquea la pro­

@
en respuesta al daño del DNA (cap. 23). Las consecuen­ DNA le siguen dos ciclos de división celular, denominados gresión normal de G1 en células que completaron la mirosis.
meiosis l y ll. El entrecruzamiento (crossing over) de las cro­ Cromosomas
cias de las m utaciones en p53, ATM y Chk 1 proporcionan En cambio, se induce un conjunto de proteínas meióticas
mátidas, visible en la primera metafase meiótica, produce la replicados
ejemplos espectaculares de la importancia de los puntos de tempranas. Entre éstos se encuentra lme2, una p roteincina­
rccombinación entre los cromosomas paternos. Esto incre­
(4n)
control del ciclo celular para la salud de un organismo mul­ sa que realiza la función esencial de los complejos ciclina
ticelular. 1 menta la diversidad genética entre los individuos de una es­ G1-CDK de fosforilar al inhibidor de fase S Sicl, lo que
pecie. Durante la meiosis I, ambas cromátidas de cada cro­
mosoma homólogo se separan juntas hacia polos opuestos del o¡ conduce a la liberación de complejos ciclina-CDK de fase
S activos y al inicio de la replicación del DNA en la meio
huso, para que cada una de las células hijas resultantes con­ sis 1 (véase fig. 21-34, paso IIJ ). La ausencia de expresión

@
CONCEPTOS CLAVE DE LA SECCIÓN 21.7 tenga un cromosoma homólogo con dos cromátidas. Duran­ Sinapsis y de la Tme2 durante la meiosis JI y la represión continua de
te la meiosis JI, que se parece a una mitosis, las cromátidas entrecruzamiento la expresión de Cln son responsables de la ausencia de re­
de un cromosoma migran hacia polos opuestos del huso, Jo
' (metafase 1)
Puntos de control en lo regulación del ciclo celular plicación del DNA durante la segunda división meiótica
que genera células germinales haploides. La meiosis genera
1

(pasos 1Il y !§]).

cuatro células germinales haploides a partir de una diploide
ot
• Los puntos de control funcionan para asegurar que los
premeiótica. Cll
cromosomas están intactos y que los estadios críticos del ci­ ·¡¡;
clo celular se hayan completado antes de que comience el si­ o El entrecruzamiento y el Rec8 específico
·�
guiente. ::?! de meiosis son necesarios para la separación
La represión de las ciclinas de G1 y de la lme2
especializada de los cromosomas durante
• El punto de control del DNA no replicado actúa durante específica de meiosis impide la replicación
Anafase 1 la meiosis 1
S y G2 para prevenir la activación del MPF antes de que se del DNA en la meiosis 11
complete la síntesis del DNA e inhibe la activación de CDK 1
Se debe recordar que al comenzar la mitosis, las cromá­
por Cdc25C (véase fig. 21-32, [1). En S. cerevisiae y S. pombe el agotamiento de las fuen­ tidas hermanas replicadas durante la fase S al inicio están
tes de nitrógeno y carbono induce a las células diploides
• El punto de control de ensamblaje del huso, que impide unidas por complejos de cohesina en varios puntos a lo lar­
a sufrir meiosis y producir esporas haploides (véase fig.

�
la iniciación prematura de la anafase, utiliza Mad2 y otras go de toda su longitud (véase fig. 21-19, izquierda). A me­
1-5). Este proceso es análogo a la formación de células ger-
proteínas para regular el factor de especificidad Cdc20 del dida que los cromosomas se condensan, los complejos de
A PC, que marca la segurina para la poliubicuitinación cohesina quedan restringidos a la región del centrómero y

'.:.*.
8®
(véanse figs. 21-32, []y 21-19). Células hijas en la metafase las cromátidas hermanas que componen ca­
en metafase 11 da cromosoma (replicado) se asocian con microtúbulos que
• El punto de control de la separación de cromosomas im­ (2nl emanan de los polos opuestos del huso. Aunque las proteí­
pide la telofase y la citocinesis hasta que los cromosomas hi­ ..,. Fig. 21-34. [Link] células premeióticas tienen dos _, nas motoras traccionan las cromátidas hermanas ·hacia po­
jos se hayan separado de manera adecuada, para que las cé­ copias de cada cromosoma (2n), una derivada del padre y una de los opuestos del huso, su movimiento es resistido en princi­
lulas hijas tengan un juego completo de cromosomas (véase la madre. Para simplificar. sólo se muestra un cromosoma m¡ pio por los complejos de cohesina que las unen por el
fig. 21-32, ll]). homólogo paterno y uno materno. Paso 0: Todos los ¡ centrómero. La degradación posterior catalizada por la se­
cromosomas se replican durante la fase S a ntes de la primera
,_ parasa de la subunidad Scc1 de la cohesina permite comen­
• En el punto de control de la separación de cromosomas, división meiótica, produciendo un complemento cromosómic 4n.
= zar el movimiento de las cromátidas hacia los polos del hu­
la pequeña GTPasa Tem1 controla la disponibilidad de fos­ Los comple¡os de cohesina (no mostrados) unen las cromátidas Cll �
fatasa Cdc14, que a su vez activa el factor de especificidad hermanas que componen cada uno de los cromosomas ·¡¡; so, lo que anuncia el inicio de la anafase (fig. 21-35a;
o Anafase 11
Cdh1 del APC, que marca las ciclinas tipo B para la degra­ replicados en toda su longitud. Paso f): A medida que los ·� también véase fig., 21-19, derecha).
dación, lo que produce la inactivación del MPF (véase fig. cromosomas se condensan durante la primera profase meiótica. :¡;; En la metafase de la meiosis I, ambas cromátidas her­
21-10).
los homólogos replicados se disponen de a pares como � manas de un cromosoma (replicado) se asocian con micro­
resultado de por lo menos un entrecruzamiento entre una túbulos que provienen del mismo polo del huso, en lugar
• El punto de control del daño de DNA detiene el ciclo cromátida pat erna y una materna. Esta disposición en pares de de polos opuestos, como sucede en la mitosis. Se piensa

� �
celular en respuesta al daño del DNA hasta que la lesión los cromosomas homólogos replicados se llama sinapsis. En la
que dos uniones físicas entre los cromosomas homólogos
se repara. Tres tipos de proteínas supresoras de rumores metafase, como se muestra aquí, ambas crom átidas de un
resisten la fuerza de tracción del huso hasta la anafase: a)
cromosoma se asocian con microtúbulos que provienen de un
(ATM/ATR, Chkl/2 y p53) son fundamentales en este

é0é0é0é0
el entrecruzamiento entre cromátidas, una de cada par de
polo del huso, pero cada miembro de un par de cromosomas
punto de control. cromosomas homólogos, y b) uniones cruzadas de cohesi­
homólogos se asocia con microtúbulos que vienen de polos
opuestos. Paso tl: Durante la anafase de la meiosis 1, los na entre las cromátidas, distales al punto de entrecruza­
• La activación de las proteincinasas ATM o ATR en res­
cromosomas homólogos, cada uno de los cuales presenta dos miento.
puesta al daño del DNA debido a luz UV o radiación 'Y lle­
cromátidas, es traccionado hacia los polos opuestos del huso. Las pruebas de la importancia del entrecruzamiento du­
va a la detención en G1 y en fase S a través de una vía que 1n 1n 1n 1n
Paso D: La citocinesis produce dos células hijas (ahora 2n), que rante la meiosis de S. cerevisiae provienen de la observación
conduce a la pérdida de la actividad de la fosfatasa Cdc25A.
entran en la meiosis 11 sin sufrir replicación del DNA En la de que cuando se bloquea la recombinación, por mutación de
Una segunda vía de ATM/R activada estabiliza el p53, lo metafase de la meiosis 11, mostrada aquí, las cromátidas que las proteínas esenciales para el proceso, los cromosomas se
que estimula la expresión de p21 CJP. La inhibición pos­ componen cada uno de los cromosomas replicados se asocian
separan al azar durante la meiosis T; o sea, los cromosomas
terior de varios complejos CDK-ciclina por p21 CIP causa con microtúbulos del huso provenientes de polos opuestos,
homólogos no siempre migran a los polos opuestos del hu'>o.
una detención prolon gada en G1 y G2 (véase fig. 21-32, como lo hacen en la mitosis. Pasos lit y (il: La separación de
Esta separación hacia polos opuestos del huso por lo [Link]
(1aJa @ill). las cromátidas a polos opuestos durante la segunda anafase
meiótica, seguida de citocinesis, genera células germinales se produce porque ambas cromátidas de pares de crommo­
• En respuesta al daño extenso del DNA, p53 también ac­ haploides (1 n) que contienen una copia de cada cromosoma mas homólogos se asocian con fibras del huso que em,[Link]
tiva genes que inducen la apoptosis. (llamada cromátida con anterioridad). de polos opuestos del huso (véase fig. 21-34, paso [JJ). E�to