HDL COLESTEROL
1. OBJETIVO: Determinar la concentración de HDL Colesterol en
sangre precipitando selectivamente las lipoproteínas de baja y
muy baja densidad (LDL y VLDL) determinando HDL colesterol
en el sobrenadante con reacción de punto final.
2. DEFINICIONES:
• HDL colesterol: Es una de las lipoproteínas más ricas en
colesterol que contrarresta la acción nociva que pueda tener
la LDL, sobre nuestro organismo al evitar la arterioesclerosis
excesiva. Un valor de Colesterol-HDL bajo es un indicador
independiente y firme de enfermedad coronaria. En ATP III4,
el valor bajo de Colesterol-HDL quedó categóricamente
definido como un nivel < 40 mg/dL (1,04 mmol/L), un
cambio en relación al nivel < 35 mg/dL establecido
anteriormente en ATP II (1993). Un valor bajo de Colesterol-
HDL se emplea como un estimador de riesgo a 10 años, de
padecer la enfermedad cardíaca coronaria debiéndose ésta a
diversas causas: triglicéridos elevados, sobrepeso y
obesidad, inactividad física, tabaco, ingestas muy altas de
carbohidratos (> 60% de calorias) y ciertas drogas como los
esteroides, anabolizantes y los agentes progestionales.
3. DESARROLLO DEL PROCEDIMIENTO:
• Fundamento: Esta técnica1 emplea un método de separación
basado en la precipitación selectiva de las lipoproteinas
conteniendo apoproteinas-B (VLDL, LDL y (a)Lpa) por acción del
ácido fosfotúngstico/Cl2Mg, sedimentación del precipitado por
centrifugación y subsiguiente análisis enzimático como colesterol
residual de las lipoproteinas de alta densidad (HDL) contenidas
en el sobrenadante claro.
Después de la centrifugación, el colesterol HDL se determina en
el sobrenadante utilizando el sistema enzimático colorimétrico
colesterol medir la reacción de punto final a 505 nm.
• Muestra: Suero
3..1. Cantidad: 250 ul.
3..2. Requisitos: No hemolizado, limpio y fresco
• Equipos, materiales y reactivos:
3..1. Equipos:
• Centrifuga
• Espectrofotómetro (Stat Fax)
• Baño maría a 37ºC
• Vortex
3..2. Materiales:
• Micropipetas :100 a 1000 ul
• Tubos de hemolisis (tubos de Stat fax)
• Reloj marcador
3..3. Reactivos:
• Standard
• Reactivo precipitante
• Reactivo de Colesterol (reactivo de trabajo)
• Procedimiento:
3..1. Preparación de reactivos de trabajo:
• Estándar y reactivo precipitante listo para usar
3..2. Proceder de la siguiente forma:
3..2.1. Precipitación de las VLDL y LDL:
• Enumerar los tubos:
• Añadir 250 uL de suero + 250 uL de reactivo Precipitante.
• Agitar vigorosamente por 30 segundos
• Centrifugar a 3500 rpm por lo menos 15 min. para obtener un
sobrenadante límpido.
• Pipetear el sobrenadante inmediatamente después de la
centrifugación teniendo cuidado de no re suspender el
precipitado.
3..3. Reacción Colorimétrica:
• Enumerar los tubos de la siguiente forma:
REACTIVOS BLANCO STANDAR DESCONOCIDO
Estándar - 100 uL -
Sobrenadante - - 100 uL
Reactivo de 1 mL 1 mL 1 mL
trabajo de
colesterol
• Mezclar en el Vortex e incubar 5 minutos a Baño maría a 37ºC
o 10 minutos a temperatura ambiente.
• Realice la lectura comenzando por el blanco, estándar y muestra
• Luego leer en el STAT FAX: Nº _____
• Registrar los resultados e informar
5.4.3. Estabilidad de la mezcla de reacción final:
• El color de la reacción final es estable 30 minutos por lo que
la absorbancia debe ser leída dentro de este lapso.
• Valores de referencia:
HDL Colesterol:
• Adultos : mayor a 30 mg/dL
• Niños y Adolescentes: mayor a 35 mg/dL
LDL Colesterol:
• Adultos : menor a 120 mg/dL
• Niños y Adolescentes: menor a 110 mg/dL
VLDL Colesterol:
• Adultos : menor a 30 mg/dL
• Niños y Adolescentes: mayor a35 mg/dL
4. ANEXOS:
Anexo 1:
Sustancias interferentes conocidas:
• Suero o plasma con hemólisis visible o intensa.
• Lipemia (triglicéridos 10 g/L) no interfiere.
• Bilirrubina (> 10 mg/dL)
• hemoglobina (> 5 g/L) puede afectar los resultados.
• Otros medicamentos y sustancias pueden interferir3.
Anexo 2:
Linealidad:
• La reacción es lineal hasta 275 mg/dl
• Para valores superiores, diluir 1:2 la solución coloreada final
con el reactivo y repetir la lectura multiplicando el resultado
por 2.
Anexo 3:
Preparación de reactivos de trabajo: Estándar y reactivo
precipitante listo para usar
Estabilidad y condiciones de almacenamiento:
• Conservar el estándar y Reactivo precipitante entre (2-8°C)
hasta la fecha de vencimiento indicada en la caja.
• Una vez abiertos no deben permanecer destapados y fuera
del refrigerador durante lapsos prolongados.
• Evitar exposición a la luz solar directa, durante el manipuleo
los reactivos están sujetos a contaminaciones de naturaleza
química y microbiana que puedan provocar disminución de la
estabilidad.
Anexo 4:
Almacenamiento y estabilidad del suero:
• HDL colesterol es estable 3 días entre (2-8C).
5. CALCULOS Y RESULTADOS:
HDL Colesterol mg/dl = D x F
Como calcular la concentración del colesterol VLDL y LDL: Utilizando
la ecuación de Friedewald que es exacta para muestras cuya concentración
de triglicéridos no ultrapasen 400 mg/dl y no pertenezcan a pacientes
portadores de lipoproteinemia de tipo III.
Ecuación de Friedewald:
Colesterol VLDL= Triglicéridos / 5
Colesterol LDL = Colesterol total – (HDL + VLDL)
